[국내논문]흰털오가피와 더덕 추출물을 첨가한 발효유 급여가 마우스의 면역기능에 미치는 영향 Effects of Fermented Milk Containing Herb Extract from Acanthopanax divaricatus var. albeofructus and Codonopsis Ianceolata on the Immune Status of Mouse원문보기
흰털오가피의 면역활성 증진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 흰털오가피 (뿌리 : 잎 : 줄기)와 더덕 열수추출건조물을 (5 : 2 : 1.5) : 1.5 비율로 혼합하여 투여한 그룹 1 mg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9 mg/mL(C) 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 흰털오가피의 함량이 ICR계 수컷 마우스의 면역기능에 미치는 영향에 대해 알아본 결과 모든 그룹에서 마우스의 증체량과 체중 증가는 유의성 있는 차이를 보이지 않았고, 7주와 10주령에 안락사 시킨 마우스의 각 장기 무게에서도 간, 신장, 심장, 폐, 고환의 무게에서는 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 비장계수는 7주령 C군과 10주령 B군에서 유의성(p<0.05)있는 증가가 있었으며, 식이 지속기간이 길어질수록 증가된 반면, 흉선계수는 모든 군에서 유의성 있는 증가가 관찰되지 않았다. 항체생산 세포수는 흰털오가피 투여군이 대조군에 비해 증가하였으며, 7주령에 비해 10주령이 감소하는 경향을 보였다. 항원에 대한 항체 생성량을 알아보기 위하여 혈구응집반응을 실시한 결과 흰털오가피 투여군이 대조군에 비하여 증가하는 경향을 보였고 10주령 C군에서 유의성 있는 차이를 보였다. 면역글로블린 농도는 흰털오가피 투여군에서 증가하였고, 7 및 10주령 C군에서 유의성이 있었다.
흰털오가피의 면역활성 증진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 흰털오가피 (뿌리 : 잎 : 줄기)와 더덕 열수추출건조물을 (5 : 2 : 1.5) : 1.5 비율로 혼합하여 투여한 그룹 1 mg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9 mg/mL(C) 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 흰털오가피의 함량이 ICR계 수컷 마우스의 면역기능에 미치는 영향에 대해 알아본 결과 모든 그룹에서 마우스의 증체량과 체중 증가는 유의성 있는 차이를 보이지 않았고, 7주와 10주령에 안락사 시킨 마우스의 각 장기 무게에서도 간, 신장, 심장, 폐, 고환의 무게에서는 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 비장계수는 7주령 C군과 10주령 B군에서 유의성(p<0.05)있는 증가가 있었으며, 식이 지속기간이 길어질수록 증가된 반면, 흉선계수는 모든 군에서 유의성 있는 증가가 관찰되지 않았다. 항체생산 세포수는 흰털오가피 투여군이 대조군에 비해 증가하였으며, 7주령에 비해 10주령이 감소하는 경향을 보였다. 항원에 대한 항체 생성량을 알아보기 위하여 혈구응집반응을 실시한 결과 흰털오가피 투여군이 대조군에 비하여 증가하는 경향을 보였고 10주령 C군에서 유의성 있는 차이를 보였다. 면역글로블린 농도는 흰털오가피 투여군에서 증가하였고, 7 및 10주령 C군에서 유의성이 있었다.
We have investigated the immunomodulatory activity of water extracts of Acanthopanax divaricatus var. alveofructus in male ICR mice. Mice were administrated with fermented milk containing freeze-dried extract 3 mg/Kg (A), 9 mg/kg (B), 27 mg/Kg (C) per body weight with A. divaricatus var. alveofructu...
We have investigated the immunomodulatory activity of water extracts of Acanthopanax divaricatus var. alveofructus in male ICR mice. Mice were administrated with fermented milk containing freeze-dried extract 3 mg/Kg (A), 9 mg/kg (B), 27 mg/Kg (C) per body weight with A. divaricatus var. alveofructus (loots : leaves : stem) : Codonopsis lanceolata = (5 : 2 : 1.5) : 1.5 for 7 and 10 weeks, respectively. Body weight, relative organ weight, cellularity of lymphoid organs, plaque- forming cell (PFC) assay, agglutination (AGG) test and lymphoproliferation were examined in various groups of animals. Any significant differences of body weight gain were not recorded in the tested ICR mice. There was significant different (p<0.05) in the spleen index in B group of 10 weeks and C group of 7 weeks fed mouse. The thymus gain weight was increased during administration of the extract, but there was no significant increase on other organs gain. Humoral immunity as measured by PFC showed more decreased PFC level in 10 weeks than in 7 weeks. In the HT, A. divaricatus var. albeofructus extract also showed a significant increase (p<0.05) in C group of 10 weeks. Administration of extracts from A. divaricatus var. albeofructus increased significantly in the production of IgG antibodies on the mice immunized with SRBC in B group of 7 and 10 weeks (p<0.05).
We have investigated the immunomodulatory activity of water extracts of Acanthopanax divaricatus var. alveofructus in male ICR mice. Mice were administrated with fermented milk containing freeze-dried extract 3 mg/Kg (A), 9 mg/kg (B), 27 mg/Kg (C) per body weight with A. divaricatus var. alveofructus (loots : leaves : stem) : Codonopsis lanceolata = (5 : 2 : 1.5) : 1.5 for 7 and 10 weeks, respectively. Body weight, relative organ weight, cellularity of lymphoid organs, plaque- forming cell (PFC) assay, agglutination (AGG) test and lymphoproliferation were examined in various groups of animals. Any significant differences of body weight gain were not recorded in the tested ICR mice. There was significant different (p<0.05) in the spleen index in B group of 10 weeks and C group of 7 weeks fed mouse. The thymus gain weight was increased during administration of the extract, but there was no significant increase on other organs gain. Humoral immunity as measured by PFC showed more decreased PFC level in 10 weeks than in 7 weeks. In the HT, A. divaricatus var. albeofructus extract also showed a significant increase (p<0.05) in C group of 10 weeks. Administration of extracts from A. divaricatus var. albeofructus increased significantly in the production of IgG antibodies on the mice immunized with SRBC in B group of 7 and 10 weeks (p<0.05).
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문제 정의
이에 본 연구에서는 흰털오가피와 더덕을 첨가한 발효유에 대한 면역활성 효능을 검증하고자 동물실험을 실시하였다.
제안 방법
15%와 탈지분유 3.85%를 첨가하고 65。(2에서 배합하여 완전히 녹인 후 9VC에서 30분간 살균하고, 40。(3로 냉각시킨 다음 ABT-C(Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Lactococcus thermophilus 로 구성된 혼합균주, Groupe Rhone-Poulenc) 상업균주를 0.2%(w/w)접종하고, 최종 pH 4.3으로 감소할때까지 배양한 다음 흰털오가피 건조추출물을 첨가하여 발효유를 제조하였다.
저장된 혈청은 양적혈구(SRBC)에 대한 적혈구응집소가 측정 (AGG test)에 이용하였다. 각 장기는 적출하여 칭량하였고, 비장의 조직검사는 적출한 비장을 대상으로 세포조직 학적 검사(HIS test)를 실시하였다.
5 비율로 혼합하여 투여한 그룹 1 mg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9 mg/mL(C) 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 시료 용량은 시판되고 있는 드링크발효유(150 mL/성인 체중 60 kg)를 1일 기준으로 결정하였다.
모든 동물에 대하여 투여개시 전, 투여개시 후, 시험 종료 시까지 매주 1회 측정하였다.
모든 장기를 검사하였다. 모든 시험동물은 비장과 흉선을 포함하여 간장, 신장(좌우), 폐장, 심장, 고환 (수컷좌우) 등의 절대 장기중량 및 체중에 대한 상대 장기중량을 측정하였다.
백혈구 백분율계산은 wright' stain-i- 이용하였고 각각의식이군에서 비장의 여포변연부의 크기 및 배중심의 형성정도를' 비교하기 위해 절제된 비장 조직을 10% formalin 용액에 1주 이상 충분히 고정시킨후 파라핀 포매기(vaccum infiltration Processor, Leica) 에 포매하여 초박절편기 (Microtom, Leica, Germany)로 2~3 μm절편을 만들어 Hematoxylin과 Eosin stain으로 염색하여 광학현미경하에서 검경하였다.
시험기간 중 폐사한 동물이나 시험종료 후 모든 생존 동물에 대하여 에테르 마취후 채혈하고 안락사 시킨 다음육안적으로 모든 장기를 검사하였다. 모든 시험동물은 비장과 흉선을 포함하여 간장, 신장(좌우), 폐장, 심장, 고환 (수컷좌우) 등의 절대 장기중량 및 체중에 대한 상대 장기중량을 측정하였다.
검사와 항체생산 세포 측정시 채혈한 마우스의 혈청을 분리하여 Ha 등(1974)과 Lee와 Ha(1989)가 기술한 방법에 의하여 적혈구 응집소가를 측정하였다. 약술하면 총 항체가를 즉정하기 위해서 microtitration tray의 각혈에 56°C 에서 30분간 비동화시킨 혈청에 동량의 0.5% SRBC 부유액을 혼합하여 37°C에서 1시간 방치한 다음 응집을 일으킨 혈청의 최고 희석도를 항체가로 판독하였다.
모든 검사 시 심장천자(heart puncture)로 혈액을 채취하였다. 채혈 즉시 백혈구 백분율 계산(DIF test)을 위해 혈액도말 표본을 만들고 나머지는 혈청을 분리하여 -20℃에 저장하였다. 저장된 혈청은 양적혈구(SRBC)에 대한 적혈구응집소가 측정 (AGG test)에 이용하였다.
흰털오가피(잎, 줄기, 뿌리)와 더덕은 각각 잘게 썰은 다음 가수량을 무게비 1 : 5 의 비율로 넣고 lOfTC에서 2시간 동안 열탕 추출하였다. 추출액은 감압농축 과정을 거쳐 동결건조하였다.
항체생산 세포수 측정은 7주, 10주에 실시하였다. 모든 검사 시 심장천자(heart puncture)로 혈액을 채취하였다.
혈중 면역글로불린 검사는 채취한 혈액의 일부를 실온에 30분간 방치하여 응고 후 원심분리 (3, 000 rpm, 30 min)하여 얻은 혈청에 대해서 albumin, 이obulin, total protein치를 측정하였다.
제공하여 사용하였다. 흰털오가피(잎, 줄기, 뿌리)와 더덕은 각각 잘게 썰은 다음 가수량을 무게비 1 : 5 의 비율로 넣고 lOfTC에서 2시간 동안 열탕 추출하였다. 추출액은 감압농축 과정을 거쳐 동결건조하였다.
흰털오가피의 면역활성 증진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 흰털오가피 (뿌리 : 잎 : 줄기)와 더덕 열수추출건조물을 (5:2: 1.5) : 1.5 비율로 혼합하여 투여한 그룹 lmg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9mg/mL(C) 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다.
흰털오가피의 면역활성 증진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 흰털오가피 (뿌리 : 잎 : 줄기)와 더덕 열수추출건조물을 (5:2: 1.5): 1.5 비율로 혼합하여 투여한 그룹 1 mg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9 mg/mL(C) 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다.
대상 데이터
모든 검사 시 심장천자(heart puncture)로 혈액을 채취하였다. 채혈 즉시 백혈구 백분율 계산(DIF test)을 위해 혈액도말 표본을 만들고 나머지는 혈청을 분리하여 -20℃에 저장하였다.
본 실험에 사용한 더덕은 서울 경동시장에서 구입하였고, 국산 흰털오가피(5년생) 잎, 줄기, 뿌리는 수신 오가피농장에서 제공하여 사용하였다. 흰털오가피(잎, 줄기, 뿌리)와 더덕은 각각 잘게 썰은 다음 가수량을 무게비 1 : 5 의 비율로 넣고 lOfTC에서 2시간 동안 열탕 추출하였다.
대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 시료 용량은 시판되고 있는 드링크발효유(150 mL/성인 체중 60 kg)를 1일 기준으로 결정하였다.
실험동물은 한림실험동물에서 생후 35일령 평균체중 20 g 인 SPF ICR 마우스 수컷 60마리를 공시하여 무작위로 12 마리씩 5군으로 나누어 10주간 실험식이(Table 1)를 급여하였다. 사육실의 온도는 20±2。(2, 상대습도 50±5%, 환기횟수 10-12회/hr, 조명시간은 오전 7시부터 오후 7시까지, 조도는 150-200 LuxS.
데이터처리
실험결과는 SAS package를 이용하여 실험군당 Mean士SD 로 표시하였고, 실험군간 통계적인 유의성은 t-test로 검정하였다.
이론/모형
양적혈구에 대한 총 항체가를 알기위해 지연성 과민반응 검사와 항체생산 세포 측정시 채혈한 마우스의 혈청을 분리하여 Ha 등(1974)과 Lee와 Ha(1989)가 기술한 방법에 의하여 적혈구 응집소가를 측정하였다. 약술하면 총 항체가를 즉정하기 위해서 microtitration tray의 각혈에 56°C 에서 30분간 비동화시킨 혈청에 동량의 0.
채혈 즉시 백혈구 백분율 계산(DIF test)을 위해 혈액도말 표본을 만들고 나머지는 혈청을 분리하여 -20℃에 저장하였다. 저장된 혈청은 양적혈구(SRBC)에 대한 적혈구응집소가 측정 (AGG test)에 이용하였다. 각 장기는 적출하여 칭량하였고, 비장의 조직검사는 적출한 비장을 대상으로 세포조직 학적 검사(HIS test)를 실시하였다.
체액성 면역기능을 알아보기 위한 항체 생산세포 측정은 양적혈구에 대한 JernE plaque assay method를 다소수정하여 실시하였다(Gilbert and Partrical, 1983; Richard et al., 1978). 8x108개의 SRBC/mL 부유액을 0.
성능/효과
낮았다(Table 2). 그러나 전체적으로 대조군에 비하여유의성 있는 변화를 보이지는 않았고 C군에서는 다른심장과 폐, 고환의 무게에서 증가하는 경향을 보였으나, 상대 장기무게에서 유의성이 인정되지 않았다. 따라서 흰털 오가피와 더덕 첨가 발효유의 급여는 체중이나 장기의 무게에 유의할만한 변화를 유발하지 않는 것으로 생각된다.
그룹별로는 A군의 체중이 젖산균만 섭취한 군에 비해서 증가한 것으로 나타났으나, 이는 식염수만 섭취한 그룹에서도 유사한 체중증가를 보여 유의할 만한 변화로 인정되지 않았다. 한편, 다른 두 그룹의 체중과 체중 변화량이 매주 거의 유사하게 나타났는데 이는 각 군에서 식이섭취량에서 경미한 차이를 보였으나 열량 소비량은 비슷하였기 때문으로 여겨진다.
3). 다량의 흰털오가피와 더덕 첨가발효유를 공급한 C식이군은 7주령에 비하여 10주령에서더욱 뚜렷한 증가를 보이는 것이 주목되었다.
, 1985). 또한 7주령에서는 A, B, C 식이군 모두 대조군에 비해 항체 생산 세포수가증가하였고, 10주령은 7주령에 비하여 다소 낮은 항체 생성량을 보였으나 용량의존적으로 증가하는 경향을 보였으며, 특히 C군에서는 유의성 있는 증가가 관찰되어 흰털오가피와 더덕 함유가 체액성 면역을 증강시킬 수 있음을시사하였다.
Suh(1996) 는 더덕 물 추출물이 면역세포에 미치는 영향에 관한 연구보고에서 마우스에 경구투여한 경우 흉선세포의 증식을 촉진하였으나, 흉선세포에 직접 처리한 경우는 그다지 영향을 주지 않았다고 하였다. 또한 Tjj세포가 활성화되었으며 복강 마크로파지의 Nitric oxide(NO) 생성이 억제되었고, 사람 다형핵(多形核)백혈구(polymorphonuclear leukocytes : PMN)세포의 식작용을 증가시켜 생체 내에서 면역작용을 증강시킬 수 있음을 시사하였다.
비장 무게는 7주령에서는 큰 차이를 보이지 않았으나, 10주령에서는 B군에서 유의성 있게 증가하여 비장 계수(spleen index)의 유의성 있는 증가가 관찰되었다(P<0.05) (Table 3). 이 결과는 다량의 오가피와 더덕 첨가 발효 유식이는 마우스의 면역활성에 영향을 미칠 수 있음을 보여주는 것이다.
흰털오가피의 함량이 ICR계 수컷 마우스의 면역기능에 미치는 영향에 대해 알아본 결과 모든그룹에서 마우스의 증체량과 체중 증가는 유의성 있는 차이를 보이지 않았고, 7주와 10주령에 안락사 시킨 마우스의 각 장기 무게에서도 간, 신장, 심장, 폐, 고환의 무게에서는 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 비장계수는 7주령 C군과 10주령 B군에서 유의성(P<0.05)있는 증가가 있었으며, 식이 지속기간이 길어질수록 증가된 반면, 흉선계수는 모든 군에서 유의성 있는 증가가 관찰되지 않았다. 항체생산 세포수는 흰털오가피 투여군이 대조군에 비해 증가하였으며, 7주령에 비해 10주령이 감소하는 경향을 보였다.
보이지 않았다. 생체 내에서 면역반응에 주요한 역할을 하는 것으로 알려진 림프구는 B군에서 대조군보다 증가하는 결과를 보였다(Table 4). 식이의 양과 종류에 따라 비장 조직이 B 세포 부분과 T 세포 부분의 증식 도가 차이를 보인다는 Mary 등(1983)의 보고가 있으나, 본 실험에서는 비장 조직을 광학 현미경으로 관찰한 결과 실험 기간 중 C군에서도 약간의 백색수(white pulp) 증식 소견이 관찰되었으며, B군에서는 종중심에서의 림프구의 유리가 관찰되었다(Fig.
생체 내에서 면역반응에 주요한 역할을 하는 것으로 알려진 림프구는 B군에서 대조군보다 증가하는 결과를 보였다(Table 4). 식이의 양과 종류에 따라 비장 조직이 B 세포 부분과 T 세포 부분의 증식 도가 차이를 보인다는 Mary 등(1983)의 보고가 있으나, 본 실험에서는 비장 조직을 광학 현미경으로 관찰한 결과 실험 기간 중 C군에서도 약간의 백색수(white pulp) 증식 소견이 관찰되었으며, B군에서는 종중심에서의 림프구의 유리가 관찰되었다(Fig. 5).
실험 기간에 따른 체중 변화를 보면 동일 기간 내에 실험군의 평균 체중은 유의성 있는 차이를 보이지 않아 실험에 사용한 흰털오가피와 더덕 함유 발효유가 마우스의 체중에 큰 영향을 미치지 않았다(Fig. 1).
실험 식이 마우스의 전반적인 면역기능 상태를 확인하기 위하여 양적혈구 항원에 대한 적혈구 응집소가를 측정한 결과 실험식이 투여군인 A, B, C군 모두 대조군에 비하여 높은 응집소가를 보였고, 특히 10주령 C군에서 유의성이 인정되었고 실험식이 투여량에 따른 농도 의존적 증가가 관찰되었다(Fig. 3). 다량의 흰털오가피와 더덕 첨가발효유를 공급한 C식이군은 7주령에 비하여 10주령에서더욱 뚜렷한 증가를 보이는 것이 주목되었다.
전체 실험 기간 중 간 무게는 대조군에 비해서 A, C 식이군에서 다소 높게 나타났으며, B군에서는 상대적으로 낮았다(Table 2). 그러나 전체적으로 대조군에 비하여유의성 있는 변화를 보이지는 않았고 C군에서는 다른심장과 폐, 고환의 무게에서 증가하는 경향을 보였으나, 상대 장기무게에서 유의성이 인정되지 않았다.
항체생산 세포수는 흰털오가피 투여군이 대조군에 비해 증가하였으며, 7주령에 비해 10주령이 감소하는 경향을 보였다. 항원에 대한 항체 생성량을 알아보기 위하여혈구응집반응을 실시한 결과 흰털오가피 투여군이 대조군에 비하여 증가하는 경향을 보였고 10주령 C군에서 유의성 있는 차이를 보였다. 면역글로블린 농도는 흰털오가피투여군에서 증가하였고, 7 및 10주령 C군에서 유의성이있었다.
05)있는 증가가 있었으며, 식이 지속기간이 길어질수록 증가된 반면, 흉선계수는 모든 군에서 유의성 있는 증가가 관찰되지 않았다. 항체생산 세포수는 흰털오가피 투여군이 대조군에 비해 증가하였으며, 7주령에 비해 10주령이 감소하는 경향을 보였다. 항원에 대한 항체 생성량을 알아보기 위하여혈구응집반응을 실시한 결과 흰털오가피 투여군이 대조군에 비하여 증가하는 경향을 보였고 10주령 C군에서 유의성 있는 차이를 보였다.
혈중 면역글로불린의 수치는 7주령에서 A, B, C 식이군 모두 대조군에 비해 증가하였고 특히 C군에서는 유의성이 있었으며, 10주령에서도 농도 의존적으로 증가하는소견을 보여 흰털오가피와 더덕이 면역글로불린의 형성에도움을 주는 것으로 사료되었다(Fig. 4).
대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 흰털오가피의 함량이 ICR계 수컷 마우스의 면역기능에 미치는 영향에 대해 알아본 결과 모든그룹에서 마우스의 증체량과 체중 증가는 유의성 있는 차이를 보이지 않았고, 7주와 10주령에 안락사 시킨 마우스의 각 장기 무게에서도 간, 신장, 심장, 폐, 고환의 무게에서는 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 비장계수는 7주령 C군과 10주령 B군에서 유의성(P<0.
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