선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 이에 본 연구에서는 가시오가피와 더덕의 협동작용으로 효과를 높이고 약제의 섭취시에 느끼는 쓴맛을 줄이고자 식품 영약 학적으로 우수한 요구르트에 이들 약제를 농도별로 첨가한 발효유를 제조하여 면역증강 효능을 가지고 복용에도 편리한 가시오가피 첨가 발효유를 개발할 목적으로 실험을 수행하였다.
가설 설정
- 1)Values are mean 土 SD (n = 6).
- 1)Values are mean 土 SD (n = 6).
제안 방법
- 8×108개의 SRBC/mL 부유액 0.5 mL를 마우스 복강에 주사하고 4일 후에 무균적으로 비장을 적출한 다음 IX 107개 spleen cell/mL 부유액 200u]와 항원성 15% 양적 혈구액 250㎕를 top agar medium(2배 MEM medium과 1.4% agarose 1 mL 혼합액) 시험관에 넣고 잘 혼합하였다. 이 혼합액을 2배 MEMmedium과 2.
- 가시오가피의 면역활성 중진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 가시오가피와 더덕 열수추출건조물을 8:2의 비율로 혼합하여 각각 lmg/mL(A), 3 mg/ mL (B), 9mg/mL(C)의 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3mL/kg body weight 씩 위내로직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다.
- 저장된 혈청은 양적혈구(SRBC)에 대한 적혈구 응집소가측정에 이용하였다. 각 장기는 적출하여 칭량하였고, 비장의 조직검사는 적출한 비장을 대상으로 세포조직학적 검사(histological test: HIS test)를 실시하였다.
- 선택하여 발효유를 각각 3mL/kg body weight 씩 위내로직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 시료 용량은 시판되고 있는 드링크 발효유 150mL/성인 체중 60kg을 1일 기준으로 결정하였다.
- 모든 동물에 대하여 투여개시 전, 투여개시 후, 시험 종료시까지 매주 1회 측정하였다.
- 검사하였다. 모든 시험동물은 비장과 흉선을 포함하여 간장, 신장(좌우), 폐장, 심장, 고환(수컷: 좌우) 등의 절대장기 중량 및 체중에 대한 상대장기 중량을 측정하였다.
- 백혈구 백분율계산은 Wright's stain을 이용하였고 각각의 식이군에서 비장의 여포변연부의 크기 및 배중심의 형성정도를 비교하기 위해 절제된 비장 조직을 10% formalin 용액에 1주 이상 충분히 고정시킨 후 파라핀 포매기 (Leica, Vaccum Infiltration Pro- cessor)에 포매하고, 초박절편기(Microtom, Leica)로 2-3 |im 절편을 만들어 Hematoxylin & Eosin stain으로 염색하여 광학현미경 (Light Microscope)으로 검경하였다(30).
- 사육실의 온도는 20±2℃, 상대습도 50±5%, 환기 횟수 10-12회/hr, 조명시간은 오전 7시부터 오후 7시까지, 조도는 150-200 Lg 조절하였고, 물과 식이는 자유급여(ad libitum)시켰다.
- 85%를 첨가하고 65℃ 에서 배합하여 완전히 녹인 후 90℃에서 30분간 살균하고, 40℃로 냉각.시킨 다음 ABT-C(Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Streptococcus thermophilus로 구성된 혼합균주, Groupe Rhone-poulenc) 상업균주를 0.2%(w/w)접종하고, 최종 pH4.3으로 감소할 때까지 배양한 다음 가시오가피 건조추출물을 첨가하여 발효유를 제조하였다.
- 시험기간 중 폐사한 동물이나 시험종료 후 모든 생존동물에 대하여 ether 마취후 채혈하고 안락사 시킨 다음 육안적으로 모든 장기를 검사하였다. 모든 시험동물은 비장과 흉선을 포함하여 간장, 신장(좌우), 폐장, 심장, 고환(수컷: 좌우) 등의 절대장기 중량 및 체중에 대한 상대장기 중량을 측정하였다.
- 채혈 즉시 백혈구 백분율 계산을 위해 혈액도말 표본을 만들고 나머지는 혈청을 분리하여 -20℃에 저장하였다. 저장된 혈청은 양적혈구(SRBC)에 대한 적혈구 응집소가측정에 이용하였다. 각 장기는 적출하여 칭량하였고, 비장의 조직검사는 적출한 비장을 대상으로 세포조직학적 검사(histological test: HIS test)를 실시하였다.
- 방법에 의하여 적혈구 응집소가를 측정 하였다(26, 27). 즉, 총 항체가를 측정하기 위해서 microtitration tray의 각혈(各穴)에 56℃에서 30분간 비동화 시킨 혈청에 동량의 0.5% 양적혈구 부유액을 혼합하여 3TC에서 1시간 방치한 다음 응집을 일으킨 혈청의 최고 희석도를 항체가로 판독하였다.
- 체액성 면역기능을 알아보기 위한 항체 생산세포 측정은 양적혈구에 대한 Jem's plaque assay method(24, 25)를 다소 수정하여 실시하였다. 8×108개의 SRBC/mL 부유액 0.
- 추출액은 감압농축 과정을 거쳐 동결건조하였다.
- 혈중 면역글로불린 검사는 채취한 혈액의 일부를 실온에 30분간 방치하여 응고시킨 후 원심분리(3, 000 rpm, 30 min)하여 얻은 혈청에 대해서 albumin, globulin, total protein치를 측정하였다<28, 29).
대상 데이터
- 실시하였다. 모든 검사시 심장천자(heart puncture)로 혈액을 채취하였다. 채혈 즉시 백혈구 백분율 계산을 위해 혈액도말 표본을 만들고 나머지는 혈청을 분리하여 -20℃에 저장하였다.
- 본 실험에 사용한 더덕과 가시오가피 줄기(북한산)는 서울 경동시장에서 구입하였고, 가시오가피(줄기)와 더덕은 각각 잘게 썰은 다음 5배의 물을 넣고 uxrc에서 2시간 동안 열탕 추출하였다. 추출액은 감압농축 과정을 거쳐 동결건조하였다.
- 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 시료 용량은 시판되고 있는 드링크 발효유 150mL/성인 체중 60kg을 1일 기준으로 결정하였다.
- 실험동물은 한림실험동물에서 생후 5주령 평균체중 20 g인 SPF ICR 마우스 수컷 60마리를 구입하여 실험실에서 1주간 순화시킨 후 순화기간동안 일반증상을 관찰하여 정상인 동물을 선발하여 무작위로 12마리씩 5군으로 나누어 10주간 실험식이(Table 1)를급여하였다. 사육실의 온도는 20±2℃, 상대습도 50±5%, 환기 횟수 10-12회/hr, 조명시간은 오전 7시부터 오후 7시까지, 조도는 150-200 Lg 조절하였고, 물과 식이는 자유급여(ad libitum)시켰다.
데이터처리
- 실험결과는 SAS package를 이용하여 실험군당 Mean±SD로 표시하였고, 실험군간 통계적인 유의성은 t-testS. 검정하였다.
이론/모형
- 양적혈구에 대한 총 항체가를 알아보기 위해 항체생산 세포 측정 시 채혈한 마우스의 혈청을 분리하여 Ha 등과 lee 등이 기술한 방법에 의하여 적혈구 응집소가를 측정 하였다(26, 27). 즉, 총 항체가를 측정하기 위해서 microtitration tray의 각혈(各穴)에 56℃에서 30분간 비동화 시킨 혈청에 동량의 0.
- 항체생산 세포수 측정은 Doherty(23)의 방법에 따라 7주, 10주에 실시하였다. 모든 검사시 심장천자(heart puncture)로 혈액을 채취하였다.
성능/효과
- 05). 10주차에는 7주 차에 비하여 다소 낮은 항체 생성량을 보였으나 용량의존적으로 증가하는 경향을 보였고 C군에서는 유의성 있는 증가가 관찰되어 가시오가피와 더덕 함유가 체액성 면역을 증강시킬 수 있음을 시사하였다.
- 그룹별로는 C군의 체중이 젖산균만 섭취한 군에 비해서 증가한 것으로 나타났으나, 이는 식염수만 섭취한 그룹에서도 유사한 체중증가를 보여 유의할 만한 변화로 인정되지 않았다. 한편, 다른 두 그룹의 체중과 체중 변화량이 매주 거의 유사하게 나타났는데 이는 각 군에서 식이 섭취량에서 경미한 차이를 보였으나 열량 소비량은 비슷하였기 때문으로 여겨진다.
- 3). 다량의 가시오가피와 더덕 첨가 발효유를 공급한 C식이군은 7주차에 비하여 10주차에서 더욱 뚜렷한 증가를 보이는 것이 주목되었다.
- 즉 식이의 급여기간이 길어질수록 모든 군에서 현저하게 감소되었는데 이는 주령이 증가할수록 생체내 T helper cell과 B-cell이 감소되어 체액성면역이 떨어진다는 보고(36, 37, 38)와 일치하는 것으로 사료된다. 또한 7주차에는 A, B, C 식이군 모두 대조군에 비해 항체 생산 세포수가 증가하였고 특히, B와 C군에서는 유의성 있는 증가를 보였다0<0.05). 10주차에는 7주 차에 비하여 다소 낮은 항체 생성량을 보였으나 용량의존적으로 증가하는 경향을 보였고 C군에서는 유의성 있는 증가가 관찰되어 가시오가피와 더덕 함유가 체액성 면역을 증강시킬 수 있음을 시사하였다.
- 비장 무게는 7주령에서는 큰 차이를 보이지 않았으나, 10주령 C군에서 유의성 있게 증가하여 비장 계수(spleen index)의 유의성 있는 증가가 관찰되었다(p <0.05) (Table 3). 이 결과는 다량의 가시오가피와 더덕 첨가 발효유 식이는 마우스의 면역활성에 영향을 미칠 수 있음을 보여주는 것이다.
- 보이지 않았다. 생체내에서 면역반응에 주요한 역할을 하는 것으로 알려진 림프구는 B와 C군이 대조군에 비해 증가하는 결과를 보였다(Table 4). 식이의 양과 종류에 따라 비장 조직의 B cell과 T cell의 증식에 차이를 보인다는 Maiy 등(39)의 보고가 있으나 본 실험에서는 비장 조직을 광학 현미경으로 관찰한 결과실험 기간 중 C군에서 백색수(白色髓, white pulp)가 가장 심하게 증식되어 활발한 면역반응을 예상할 수 있었고 B군에서도 약간의 white pulp 증식 소견이 관찰되었으며, B와 C군에서는 종중심에서의 림프구의 유리가 관찰되었다(Fig.
- 생체내에서 면역반응에 주요한 역할을 하는 것으로 알려진 림프구는 B와 C군이 대조군에 비해 증가하는 결과를 보였다(Table 4). 식이의 양과 종류에 따라 비장 조직의 B cell과 T cell의 증식에 차이를 보인다는 Maiy 등(39)의 보고가 있으나 본 실험에서는 비장 조직을 광학 현미경으로 관찰한 결과실험 기간 중 C군에서 백색수(白色髓, white pulp)가 가장 심하게 증식되어 활발한 면역반응을 예상할 수 있었고 B군에서도 약간의 white pulp 증식 소견이 관찰되었으며, B와 C군에서는 종중심에서의 림프구의 유리가 관찰되었다(Fig. 5). 흉선 조직검사에서는 B군에서 육안적으로 심하게 종대된 마우스의 경우 림프소절의 심한 종대가 관찰되었고 B와 C군에서는 림프소절의 종대와 소절의 증대소견이 관찰되었다(Fig.
- 실험 기간에 따른 체중 변화를 보면 동일 기간 내에 실험군의 평균 체중은 유의성 있는 차이를 보이지 않아 실험에 사용한 가시오가피와 더덕 함유 발효유가 마우스의 체중에 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 보여주었다(Fig. 1).
- 실험 식이 마우스의 전반적인 면역기능 상태를 확인하기 위하여 양적혈구 항원에 대한 적혈구 응집소가를 측정한 결과 실험식이 투여군 모두 대조군에 비하여 높은 응집소가를 보였고, 7주 차에는 A, B, C군에서 유의성 있는 증가가 관찰되었다. 특히, 10주차에서는 B와 C 군에서 유의성이 인정되었고 실험 식이 투여량에 따른 농도의존적 증가가 관찰되었다(Fig.
- 혈중 면역글로불린(IgG)의 수치는 7주에서는 C군이, 10주에서는 B와 C군이 유의성이 있었으며, 실험식이 투여량에 따라 농도 의존적으로 증가하는 소견을 보여 가시오가피와 더덕의 함유가 면역글로불린의 형성에도 도움을 주는 것으로 사료되었다(Fig. 4).
후속연구
- 이 결과는 다량의 가시오가피와 더덕 첨가 발효유 식이는 마우스의 면역활성에 영향을 미칠 수 있음을 보여주는 것이다. 또한 식이 지속 기간이 길어질수록 비장 계수가 증가하여 지속적인 급여는 면역중강에 효과와 관계가 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.