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문제 정의
- 대부분의 수박 형질전환의 연구는 자엽 절편체를 대상으로 제한적으로 이루어졌으며 낮은 효율을 나타내었기 때문에 이를 극복하고자 뿌리를 절편체로 사용하고자 하였다. 뿌리 절편 체로부터 캘러스를 유도하기 위한 최적조건을 확립하고자 0.
- 반면 수박의 형질전환은 자엽에서 직접적으로 신초를 유도하여 형질전환체를 얻는 방법이 대부분이었으며 캘러스 유도를 거쳐 신초를 유도하여 형질전환체를 얻는 방법은 시도되지 앓았다. 따라서 본 연구는 수박의 자엽과 뿌리 절편체에서 캘러스를 유도하여 신초를 재분화시키는 방법을 통해 안정적인 형질전환 시스템 구축하고자 하였다. GFP 유전자를 형 질전환한 뒤 그 발현을 관찰함으로서 유도된 캘러스가 형질전환 되었는지를 monitoring 한 뒤 같은 방법으로 WMV-CP 유전자를 형질전환하여 수박 캘러스에 도입됨을 확인하였다.
- 9 kb의 약한 band를 관찰하였고 C2에서는 11, 9 kb의 band를 확인하였다 (Figure 9). 따라서 본 연구를 통하여 수박의 뿌리와 자엽에서 캘러스를 유도하면서 형질전환 하는 시스템을 확보하였다고 사려 된다. 현재 신초를 신장, 순화할 수 있는 조건을 완성하고자 연구 중이며 이를 통하여 수박 형질전환 시스템이 완벽하게 구축될 것으로 기대한다.
- 수박은 형질전환이 매우 어렵고 직접적인 신초 유도 방법으로는 안정된 형질전환을 기대할 수 없어서, 다른 여러 작물에서 높은 효율을 보였던 캘러스 유래 신초 유도 방법을 도입하고자 하였다. 수박의 최적 캘러스 유도조건은 자엽 절편체의 경우 2.
제안 방법
- 8% agarose gel에 전기 영동 하였다. Agarose gel 상의 DNA 밴드를 Zeta^-Pr사)e nylon membrane (Bio-Rad)에 전이시 켜 32p-dCTP로 표지된 약 850 bp WMV-CP probe를 이용하여 Southern 분석하였다 (Southern 1975).
- 1 mg/L 2, 4-D이었다. Nptll 유전자의 선발 항생제는 kanamycin보다는 paromomycin 빠르고 효과적이었으며, 수박의 절편체에 Agrobacterium을 접종 한 후 paromomycin을 125 mg/L 첨가한 배지에서 선발하였다. pmGFP5-ER vector로 형질전환한 후 캘러스 상태에서 형광현미경을 통해 GFP 유전자의 도입을 확인하였으며, 딱딱한 초록색의 캘러스에서 강한 GFP 발현을 관찰하였고, 자엽 유래 캘러스의 경우 WM8에서 9.
- 8% agarose gel로 전기영동 후 band 유무를 관찰하였다. PCR 분석 시 WMV-CP 유전자 도입이 확 인된 캘러스를•대상으로 Southern 분석을 실시하였다 기내에 서 증식 중인 캘러스 조직을 이용하여 genomic DNA를 분리 하였으며 분리한 DNA (60 ㎍)를 BamH I 제한효소로 각각 절 단하여 0.8% agarose gel에 전기 영동 하였다. Agarose gel 상의 DNA 밴드를 Zeta^-Pr사)e nylon membrane (Bio-Rad)에 전이시 켜 32p-dCTP로 표지된 약 850 bp WMV-CP probe를 이용하여 Southern 분석하였다 (Southern 1975).
- GFP 유 전자가 도입된 식물체는 형광현미경 하에서 UV (360-400 nm)나 청색광 (440-480 nm)을 조사하면 녹색 형광을 발현한 다. WMV-CP 유전자로 형질전환 된 캘러스에 대한 PCR 분 석을 실시하였다. Genomic DNA isolation은 Dellaporta 등 (1983)의 방법에서 약간 변형된 방법으로 수행하였다 Primer 는 35*S primer (5'-ATGACGCACAATCCCACTAT-3‘)와 WMV -CP reverse primer (5'-TTACTGCGGGGGACCCAT ACC-3')를 이용하였다.
- 선발된 식물체에서 GFP 유전자 삽입여부를 확인하기 위 하여 GFP 분석은 형광 현미경 (BX51 OLYMPUS, Japan)을 이용하였다. WU는 330-385/420 excitation/emissiori을, UMN1BA는 470-490/515-550 exitation/emission filter set을 사용 하여 기내에서 배양 중인 캘러스를 직접 관찰하였다. GFP 유 전자가 도입된 식물체는 형광현미경 하에서 UV (360-400 nm)나 청색광 (440-480 nm)을 조사하면 녹색 형광을 발현한 다.
- 1-10 |1M TDZ를 처리하는 것이 기관 분화능을 감소하게 함을 보고하였다. 그러나 본 연구에서는 zeatin이 BA를 처리할 때보다 다수 의신초는 얻지는 못하지만, 정상적인 캘러스와 신초 유도에 효과적이였음을 확인하고 zeatin과 IAA를 사용하여 재분화 실험을 수행하기로 결정하였다.
- 0 mg/L BA 처리구에서 노란색의 단단한 캘러스 유도가 가장 우수하였다 (Figure 2). 따라서 수박 뿌리 절편체의 배양 시 0.1 mg/L 2, 4-D와 2.0 mg/L BA가 첨가된 공동배양배지에서 캘러스를 유도하였고, 이후 0.01 mg/L 2, 4-D와 2.0 mg/L BA가 첨가된 선발배지에서 신초를 유도하였다. Franklin과 Sita (2003)는 가지의 형질전환 시 하 배축, 자엽, 본엽을 절편체를 사용했을 때 낮은 효율을 보이는 반면 뿌리를 절편체로 사용하였을 때 Agrobacterium에 높은 susceptibility를 보이고 선발배지에서 빠른 재분화능을 나타내며 genotype-independent하여 형질전환에 효율적임을 보고하였다.
- 없었다. 따라서 캘러스를 통한 형 질전환방법을 구축하고자 하였으며, 먼저 캘러스 유도에 효과적인 생장조절제 농도를 구명하기 위해 선행된 연구들의 모든 호르몬조합을 재검증하였다. 먼저 발표된 수박 재분화 조건을 위하여 호르몬 조합을 다음과같이 답습하였다: 0.
- 0 mg/L만 처리할 경우도 growth potency가 높게 나타났지만 신초를 형성하는데 어려움이 있었다. 분열이 왕성한 캘러스는 이후의 재분화에도 적합할 것으로 예상되어 이후의 캘러스 유도조건으로 zeatin 2.0 mg/L 과 IAA 0.1 mg/L으로 정하고 공동배양배지에 첨가하였으며 캘러스가 유도되면 IAA를 제외한 zeatin 2.0 mg/L만이 첨가된 선발배지에 절편체를 계대 배양하여 신초을 유도하였다.
- 각 처리구당 3개 페트리디쉬로 3반복 하였으며 25 °C 에서 일주일간 암배양한 후 약 40 nmol • m'2• sec，의 16시간 광주기 조건에서 3주간 배양하였다. 뿌리 절 편의 캘러스 유도에 미치는 영향을 알아보기 위하여 30 g/L sucrose, 0.5 g/L MES 그리고 8 g/L agar가 첨가된 MS 기본배 지에 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L BA와 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 mg/L 2,4-D를 조합 처리하여 15 절편체/plate 치상하였으며 각 처리 구당 3개 페트리디쉬로 3반복하여 25°C 에서 4주간 암배양하 였다.
- 뿌리 절편체의 형질전환 방법은 자엽 절편체의 조건과 동 일하였고 공동배양배지(MS + 30 g/L sucrose + 0.5 g/L MES + 2,0 mg/L BA + 0.1 mg/L 2,4-D + 8 g/L phyto agar, pH 5.8) 에 치상하여 25°C, 암상태에서 3일간 배양한 후 캘러스 유도 배지 (MS + 30 g/L sucrose + 0.5 g/L MES + 2.0 mg/L BA + 0.1 mg/L 2,4-D + 8g/L phyto agar, pH 5,8)에서 25°C, 2주간 암배 양하였으며, 신초유도배 지 (MS + 30 g/L sucrose + 0.5 g/L MES + 2.0 mg/L BA + 0.01 mg/L 2,4-D + 500 mg/L lilacillin + 125 mg/L paromomycin + 8 g/L phyto agar, pH 5.8) 로 계대하여 약 40 |imol - m'2 • sec'의 16시간 광주기 조건에 서 배양한 후 3주마다 동일한 신초유도배지에 계대하였다.
- 선발된 식물체에서 GFP 유전자 삽입여부를 확인하기 위 하여 GFP 분석은 형광 현미경 (BX51 OLYMPUS, Japan)을 이용하였다. WU는 330-385/420 excitation/emissiori을, UMN1BA는 470-490/515-550 exitation/emission filter set을 사용 하여 기내에서 배양 중인 캘러스를 직접 관찰하였다.
- ) 계통인 WM1, WM2, WM3, WM6, WM7 및 WM8 [(주)농우바이오]을 이용하였다. 수박 종자의 종피를 인위적 으로 제거하고, 70% (v/v) ethanol에서 40초간 침지한 후 멸균 수로 세척하고 25% (v/v) 락스 용액 (Yuhan-Clorox, Korea)에 서 20분간 침지 하면서 표면 살균한 후 멸균수로 3회 세척 하였다. 10 g/L sucrose, 8 g/L agar 를 첨가한 1/2 MS 배지 (Murashige and Skoog 1962)에 살균된 종자를 파종하여 25 °C 에서 암배양 하였으며 파종 후 5일째 된 유식물체의 자엽과 주근을 실험 재료로 사용하였다.
- 자엽절편으로부터 캘러스 유도에 대한 생장조절제의 영향 을 알아보기 위하여 30 g/L sucrose, 0.5 g/L MES 그리고 8 g/L agar가 첨가된 MS 기본배지에 zeatin 1, 2, 3 mg/L와 IAA 0, 0.1, 0.2, 0.3 mg/L로 12개 조합 처리하여 페트리디쉬 당 7 절편체를 치상하였다. 각 처리구당 3개 페트리디쉬로 3반복 하였으며 25 °C 에서 일주일간 암배양한 후 약 40 nmol • m'2• sec，의 16시간 광주기 조건에서 3주간 배양하였다.
- 캘러스 유도와 캘러스에 발현된 GEP의 관찰을 통하여 캘러스 유도 형질전환 조건이 구축됨으로서 WMV-CP 유전자를 수박 자엽 절편체에 동일한 방법으로 형질전환하였다. 약 81.
- PCR 조건은 pre-mix (Accupower®, Bioneer)를 이 용하였으며 pTe-denatwation은 94°C 에서 5분간, denaturation 은 94 °C 에서 1분 annealing은 60 °C 에서 1분, extension은 7 2°C 에서 1분간으로 35 cycle을 하였으며 last extension은 7 2C 에서 5분간 반응하였다 (CORBETT RESEARCH, Australia). 합성된 DNA는 0.8% agarose gel로 전기영동 후 band 유무를 관찰하였다. PCR 분석 시 WMV-CP 유전자 도입이 확 인된 캘러스를•대상으로 Southern 분석을 실시하였다 기내에 서 증식 중인 캘러스 조직을 이용하여 genomic DNA를 분리 하였으며 분리한 DNA (60 ㎍)를 BamH I 제한효소로 각각 절 단하여 0.
- 형질전환에 사용할 식물체의 적정 paromomycin 선발농도를 조사하고자 캘러스 유도배지 (MS + 30 g/L sucrose + 2.0 mg/L zeatin + 0.1 mg/L IAA + 0.5 g/L MES, pH 5.8)에 paromomycin을 0, 25, 75, 125, 225, 375, 625 mg/L로 처리하여 7 자엽 절편체/plate를 치상하였다 각 처리구당 plate 3개로 3반복하였으며 25°C에서 일주일간 암배양한 후 약 40 U mol . m2 .
대상 데이터
- 수박 종자의 종피를 인위적 으로 제거하고, 70% (v/v) ethanol에서 40초간 침지한 후 멸균 수로 세척하고 25% (v/v) 락스 용액 (Yuhan-Clorox, Korea)에 서 20분간 침지 하면서 표면 살균한 후 멸균수로 3회 세척 하였다. 10 g/L sucrose, 8 g/L agar 를 첨가한 1/2 MS 배지 (Murashige and Skoog 1962)에 살균된 종자를 파종하여 25 °C 에서 암배양 하였으며 파종 후 5일째 된 유식물체의 자엽과 주근을 실험 재료로 사용하였다. 자엽 절편은 주맥을 포함하 고 생장점이 포함되지 않게 scarpel을 이용하여 절단하였다.
- WMV-CP 유전자는 CaMV 35S promoter, kanamycin 저항성 neomycin phosphotransferase (nptll) 유전자와 함께 pCAMBIA2300 벡터 안에 sub cloning 되었고 (pWMV-CP2300 vector) EHA105에 도입되었다 (Figure 1). 50 mg/L kanamycin과 50 mg/L rifampicin가 첨가된 YEP 액체 배지에 접종한 후 28°C에서 약 18시간 동안 180 rpm으로 진탕배양한 후 대수기 증식기 (OD66o = 0.5-1.0)의 균을 사용하였다.
- 2005b). 따라서 kanamycin을 대신하여 여러 작물에서도 효율적인 선발 마커로 확인된 paromomycin을 선발을 위한 항생제로 사용하였다.
- 연구에 이용된 식물체 재료는 수박 (Citrullus vulgaris Schard.) 계통인 WM1, WM2, WM3, WM6, WM7 및 WM8 [(주)농우바이오]을 이용하였다. 수박 종자의 종피를 인위적 으로 제거하고, 70% (v/v) ethanol에서 40초간 침지한 후 멸균 수로 세척하고 25% (v/v) 락스 용액 (Yuhan-Clorox, Korea)에 서 20분간 침지 하면서 표면 살균한 후 멸균수로 3회 세척 하였다.
이론/모형
- WMV-CP 유전자로 형질전환 된 캘러스에 대한 PCR 분 석을 실시하였다. Genomic DNA isolation은 Dellaporta 등 (1983)의 방법에서 약간 변형된 방법으로 수행하였다 Primer 는 35*S primer (5'-ATGACGCACAATCCCACTAT-3‘)와 WMV -CP reverse primer (5'-TTACTGCGGGGGACCCAT ACC-3')를 이용하였다. PCR 조건은 pre-mix (Accupower®, Bioneer)를 이 용하였으며 pTe-denatwation은 94°C 에서 5분간, denaturation 은 94 °C 에서 1분 annealing은 60 °C 에서 1분, extension은 7 2°C 에서 1분간으로 35 cycle을 하였으며 last extension은 7 2C 에서 5분간 반응하였다 (CORBETT RESEARCH, Australia).
성능/효과
- Agrobacterium과 3일간 공동배양한 후 캘러스 유도 배지에 자엽을 치상하고 2주 경과 후부터 절단면에서 캘러스가 형성되기 시작하였고 (Figure 4A), 3주 후에는 paromomycin 저항성을 지니지 않은 절편체는 노란색으로 변하거나 갈색으로고사되었으며 유도된 캘러스 주변부를 제외하고 갈색을 띄며 고사하는 것을 관찰하였다. 자엽 절편체로부터 유도된 캘러스는 신초유도배지에 옮겨 배양하였고 3주마다 계대하였다 (Figure 4B).
- 따라서 본 연구는 수박의 자엽과 뿌리 절편체에서 캘러스를 유도하여 신초를 재분화시키는 방법을 통해 안정적인 형질전환 시스템 구축하고자 하였다. GFP 유전자를 형 질전환한 뒤 그 발현을 관찰함으로서 유도된 캘러스가 형질전환 되었는지를 monitoring 한 뒤 같은 방법으로 WMV-CP 유전자를 형질전환하여 수박 캘러스에 도입됨을 확인하였다.
- Nptll 유전자의 선발 항생제는 kanamycin보다는 paromomycin 빠르고 효과적이었으며, 수박의 절편체에 Agrobacterium을 접종 한 후 paromomycin을 125 mg/L 첨가한 배지에서 선발하였다. pmGFP5-ER vector로 형질전환한 후 캘러스 상태에서 형광현미경을 통해 GFP 유전자의 도입을 확인하였으며, 딱딱한 초록색의 캘러스에서 강한 GFP 발현을 관찰하였고, 자엽 유래 캘러스의 경우 WM8에서 9.0%, 뿌리유래 캘러스의 경우 WM6에서 8.3%의 가장 높은 GFP 발현 효율을 보였다.
- 발현하였다 (Figure 6-II, III). 강하게 형광을 보이는 캘러스는 단단한 연두색 캘러스가 대부분이었고 (Figure 5A) friable한 노란색캘러스, 단단한 흰색캘러스 그리고 liable 한 연두색 캘러스 (Figure 5B, C, D)는 약하게 형광을 보였으며, 육안으로는 연두색 캘러스로 관찰되었지만 형광을 발현하지 않는 캘러스도 관찰할 수 있었다.
- 0 mg/L zeatin (Kim and Lee 1997). 결론적으로 BA 단독처 리가 신초 형성에는 효과적이었으나 비정상적인 캘러스를 형성하여 전혀 증식이 되지 않거나, multi-shoot0] 발생했고 또는 nodule의 형태로 뭉쳐져서 정상적 신초로 전환하는데 어려움이 있었다 (자료 미제시). 또한 Compton 등 (2004)은 BA를 4.
- 내생 cytokinin인 zeatin을 1.0, 2.0, 3.0 mg/L의 농도로, 내생 auxin 인 IAA를 0, 0.1, 0.2, 0.3 mg/L 농도로 조합 처 리하여 캘러스 유도조건을 조사하였던 바, zeatin 3.0 mg/L와 IAA 0.3 mg/L 조합이 71.4 %로 신초 재분화에 가장 효과적이었으며 캘러스 유도에는 zeatin 1.0 mg/L와 IAA 0.3 mg/L 조합이 42.9%로 가장 효과적이었다. 형성된 캘러스가 잘 자라는 growth potency는 zeatin 2.
- 이는 선행된 GFP 발현 실험을 통해 분류된 캘러스 타입에 근거하여 유전자 삽입여부를 육안으로 어느 정도 식별할 수 있음을 확인한 결과라 할 수 있다. 두 점의 캘러스 내 WMV-CP 유전자가 유전체내 안정적으로 삽입되었는지를 확인하기 위해 Southern 분석 결과, 형질전환하지 않은 대조구에서는 band를 확인할 수 없었던 반면 형질전환체 C1 에서는 11, 8 kb 의 밴드와 0.9 kb의 약한 band를 관찰하였고 C2에서는 11, 9 kb의 band를 확인하였다 (Figure 9). 따라서 본 연구를 통하여 수박의 뿌리와 자엽에서 캘러스를 유도하면서 형질전환 하는 시스템을 확보하였다고 사려 된다.
- 따라서 수박의 형질전환 시 kanamycin 대신 paromomycin을 사용하기로 하고 선발배지 내 paromomycin의 효과적인 처리조건을 확립하고자 0, 25, 75, 125, 225, 375, 625 mg/L의 농도로 paromomycin이 첨가된 배지에 4개의 genotype 별로 4주간 배양한 결과, paromomycin 무처리구에서는 절편체가 팽창하면서 연두색 캘러스를 형성하는 반면 4개의 genotype 모두 125 mg/L이상의 처리구에서 절편체가 갈색 또는 흰색으로 고사되면서 절단면에서 캘러스가 유도되지 않았다 (Figure 3).
- 따라서 신초를 genomic Southern 분석에 이용하기에는 어려움이 있었다. 따라서 신초 대신에 단단한 연두색의 증식이 우수하였던 독립적인 두개의 캘러스에서 DNA를 분리하여 PCR 분석을 수행하였던 바, 두 점 모두 WMV-CP 유전자를 함유하고 있음을 확인하였다 (Figure 8). 이는 선행된 GFP 발현 실험을 통해 분류된 캘러스 타입에 근거하여 유전자 삽입여부를 육안으로 어느 정도 식별할 수 있음을 확인한 결과라 할 수 있다.
- 본연구의 초기에는 100 mg/L kanamycin에서 선발을 해왔었으나 비형질전환된 세포를 느리게 괴사시키고 캘러스로부터 비 형질전환체가 재분화 되었으며 심지어 300 mg/L 이상 고농도의 kanamyciii을 배지에 첨가하여도 배양 초기에 생성된 신초는 비형질전환체 임에도 불구하고 잘 자라는 등 형 질전환체자체가 선발되지 않았다. 또한 kanamycin을 선발배지에 첨가하였을 때 세포를 완전히 괴사시키는데 약 6주가 소요되는 반면 동일한 농도의 paromomycin은 4주정도 소요되어 보다 빠른 선발효과를 보였다.
- C58, ACH5)의 감염성이 작물의 품종과 ngrobacteriiim의 종류에 따라 다르게 나타날 수 있다고 하였으며 Lee 등 (1999)은 벼의 형질전환 시 품종 간 LBA4404 균주의 감염성이 달라짐을 보고하였다. 마찬가지로 수박 또한 계통에 따라 Agrobac terium EHA105 strain의 감수성이 달라 형질전환 효율에 영향을 미치고 있음을 확인하였다.
- 뿌리 절편 체로부터 캘러스를 유도하기 위한 최적조건을 확립하고자 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L BA와 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 mg/L 2, 4-D를 조합 처리하여 4주간 암배양한 결과, 0.1 mg/L 2, 4-D 와 BA 조합 처리구에서 전반적으로 캘러스 형성이 우수하였고 특히 0.1 mg/L 2, 4-D와 2.0 mg/L BA 처리구에서 노란색의 단단한 캘러스 유도가 가장 우수하였다 (Figure 2). 따라서 수박 뿌리 절편체의 배양 시 0.
- 6%로 WM2과 WM8이 캘러스 유도에 더 효과적인 line임을 확인하였다 (Table 2). 뿌리 절편체를 4주 동안 선발 배지에서 배양한 결과 캘러스 유도 효율은 WM1 이 97.5%, WM6 97.2%, WM7 96.5% 그리고 WM8 97.1%로 4개의 inbred line이 거의 유사하였다 (Table 2).
- 선발배지에서 4주 배양 후 genotype에 따른 GFP의 발현효율을 조사해본 바, 자엽절편체에서 유도된 캘러스의 경우 WM8 이 9.0%, WM1 이 5.2%, WM2이 2.2%, WM6 이 1.6% 그리고 WM7이 1.3%로 WM8에서 유도된 캘러스에서 가장 높은 GEP발현을 나타내었고 뿌리 절편체에서 유도된 캘러스의 경우 WM1 이 4.2%, WM6이 8.3%, WM7이 7.0% 그리고 WM8 이 3.6%로 WM6에서 가장 높은 GFP 발현을 나타내었다 (Table 2). 이는 수박의 genotype과 절편체 부위에 따라 Agrobacterium의 감수성이 다름을 보여주는 결과로 자엽 절편체의 경우는 WM8이, 뿌리를 절편체로 이용할 경우 WM6이 형질전환 효율을 높이는데 효과적임을 확인하였다.
- 6%로 WM6에서 가장 높은 GFP 발현을 나타내었다 (Table 2). 이는 수박의 genotype과 절편체 부위에 따라 Agrobacterium의 감수성이 다름을 보여주는 결과로 자엽 절편체의 경우는 WM8이, 뿌리를 절편체로 이용할 경우 WM6이 형질전환 효율을 높이는데 효과적임을 확인하였다. Simmonds과 Donaldson (2000)은 Agrobacterium 균주 (A281.
- 캘러스 (Figure 5C), friable한 연두색 캘러스 (Figure 5D)등의 형태로 증식되었다. 자엽 절편체의 캘러스 유도 효율은 WM1 69.6%, WM2 89.9%, WM6 60.2%, WM7 51.6% 그리고 WM8 75.6%로 WM2과 WM8이 캘러스 유도에 더 효과적인 line임을 확인하였다 (Table 2). 뿌리 절편체를 4주 동안 선발 배지에서 배양한 결과 캘러스 유도 효율은 WM1 이 97.
- 9%로 가장 효과적이었다. 형성된 캘러스가 잘 자라는 growth potency는 zeatin 2.0 mg/L과 IAA 0.1 mg/L의 조합에서 가장 효과적이었으며 이 조건에서 신초 재분화도 비교적 우수하였다 (Table 1). Zeatin 3.
후속연구
- 2004), 안정적인 형질전환 시스템이 구축되지 않아서재현성이 없었다. 특히 형질전환이 이루어지지 않는 이유를 명쾌히 설명할 수 있는 연구가 진행되지 않아서 향후 수박 형질전환의 실험도 과거의 답습이 될 수 있다.
- 따라서 본 연구를 통하여 수박의 뿌리와 자엽에서 캘러스를 유도하면서 형질전환 하는 시스템을 확보하였다고 사려 된다. 현재 신초를 신장, 순화할 수 있는 조건을 완성하고자 연구 중이며 이를 통하여 수박 형질전환 시스템이 완벽하게 구축될 것으로 기대한다.
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