차조기의 30, 50, 70, 95% 에탄올 추출물과 물추출물의 식품 관련 미생물에 대한 항균 활성과 이들 추출물의 분획물에 대한 항균 활성을 살펴보았다. 본 실험에 사용한 차조기의 무기질은 Ca와 Mg 함량이 각각 595.75 mg%와 467.0 mg%으로 가장 많았다. 에탄올 혼합 추출물과 물추출물의 추출 수율은 에탄올 농도가 낮을수록 증가하여 95%에탄올 추출물은 9.3%, 70% 추출물은 16.5%, 50% 추출물은 18.9%, 30% 추출물은 19.4%, 물추출물(0%)에서는 20.8%이었다. 추출용매의 에탄올 농도가 낮아질수록 hexane 층으로 용출되어 나오는 성분은 감소하고 ethyl acetate 층 분획성분은 점차 증가하는 것으로 나타났다. 에탄올 추출물과 물 추출물의 항균력은 95%, 70%와 50% 에탄올 추출물이 Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis 및 Pseudomonas areuginosa에 대하여 clear zone을 나타내었다. 추출물을 단계별 계통 분획하여 얻은 분획물의 항균력 실험에서는 ethyl acetate층이 실험 대상 미생물 모두에 대하여 항균 활성을 나타내었으며 에탄올 혼합율이 낮을수록 즉, 30% 에탄올과 물추출물의 ethyl acetate분획물의 저해환이 가장 크게 나타났다. 물 추출물의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 액체배양에서 500 ppm의 농도에서는 S. aureus, B. subtilis와 P. aeruginosa에 대하여 대조구의 뚜렷한 증가와 대조적으로 낮은 생균수를 보였으며, 1,000 ppm의 농도에서는 실험 균주 모두에 대하여 배양 24시간 내내 생육이 저해되는 것으로 나타났다. 물 추출과 에탄올 추출의 농도와 항균 활성, 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량이 비례적인 상관관계에 있는 것으로 나타나지는 않으나 30% 에탄올 추출물과 물 추출물의 ethyl acetate분획물이 폴리페놀 함량이 높고 항균력이 가장 강한 것으로 나타났다.
차조기의 30, 50, 70, 95% 에탄올 추출물과 물추출물의 식품 관련 미생물에 대한 항균 활성과 이들 추출물의 분획물에 대한 항균 활성을 살펴보았다. 본 실험에 사용한 차조기의 무기질은 Ca와 Mg 함량이 각각 595.75 mg%와 467.0 mg%으로 가장 많았다. 에탄올 혼합 추출물과 물추출물의 추출 수율은 에탄올 농도가 낮을수록 증가하여 95%에탄올 추출물은 9.3%, 70% 추출물은 16.5%, 50% 추출물은 18.9%, 30% 추출물은 19.4%, 물추출물(0%)에서는 20.8%이었다. 추출용매의 에탄올 농도가 낮아질수록 hexane 층으로 용출되어 나오는 성분은 감소하고 ethyl acetate 층 분획성분은 점차 증가하는 것으로 나타났다. 에탄올 추출물과 물 추출물의 항균력은 95%, 70%와 50% 에탄올 추출물이 Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis 및 Pseudomonas areuginosa에 대하여 clear zone을 나타내었다. 추출물을 단계별 계통 분획하여 얻은 분획물의 항균력 실험에서는 ethyl acetate층이 실험 대상 미생물 모두에 대하여 항균 활성을 나타내었으며 에탄올 혼합율이 낮을수록 즉, 30% 에탄올과 물추출물의 ethyl acetate분획물의 저해환이 가장 크게 나타났다. 물 추출물의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 액체배양에서 500 ppm의 농도에서는 S. aureus, B. subtilis와 P. aeruginosa에 대하여 대조구의 뚜렷한 증가와 대조적으로 낮은 생균수를 보였으며, 1,000 ppm의 농도에서는 실험 균주 모두에 대하여 배양 24시간 내내 생육이 저해되는 것으로 나타났다. 물 추출과 에탄올 추출의 농도와 항균 활성, 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량이 비례적인 상관관계에 있는 것으로 나타나지는 않으나 30% 에탄올 추출물과 물 추출물의 ethyl acetate분획물이 폴리페놀 함량이 높고 항균력이 가장 강한 것으로 나타났다.
This study was conducted to examine the antimicrobial activity of Perilla frutescens var. acuta leaf fractions extracted with a mixture of ethanol and water. The Ca and Mg contents of the leaf were 595.75 mg% and 467.0 mg%, respectively, and they were the highest among all of the test minerals. The ...
This study was conducted to examine the antimicrobial activity of Perilla frutescens var. acuta leaf fractions extracted with a mixture of ethanol and water. The Ca and Mg contents of the leaf were 595.75 mg% and 467.0 mg%, respectively, and they were the highest among all of the test minerals. The extract yield increased w e content of water in e extraction solvent. Antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa was found in the 50,70 and 95% ethanol extracts. Of the various fractions extracted from the mixture of ethanol and water, the ethyl acetate fraction showed antibacterial activity against all microorganisms tested in this experiment, and the antibacterial activity of ethyl acetate fraction from the water extract was the strongest. The phenol and flavonoid content in the ethyl acetate fraction showed no correlation with the concentration of ethanol in the extract solvent; however, their contents were higher in the 30% ethanol and water extraction which the antimicrobial activity of the extract was the strongest.
This study was conducted to examine the antimicrobial activity of Perilla frutescens var. acuta leaf fractions extracted with a mixture of ethanol and water. The Ca and Mg contents of the leaf were 595.75 mg% and 467.0 mg%, respectively, and they were the highest among all of the test minerals. The extract yield increased w e content of water in e extraction solvent. Antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa was found in the 50,70 and 95% ethanol extracts. Of the various fractions extracted from the mixture of ethanol and water, the ethyl acetate fraction showed antibacterial activity against all microorganisms tested in this experiment, and the antibacterial activity of ethyl acetate fraction from the water extract was the strongest. The phenol and flavonoid content in the ethyl acetate fraction showed no correlation with the concentration of ethanol in the extract solvent; however, their contents were higher in the 30% ethanol and water extraction which the antimicrobial activity of the extract was the strongest.
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제안 방법
본 연구에서는 식품 소재로서 차조기의 보다 효과적인 이용과 추출물 제조를 위해 에탄올 농도를 95%, 70%, 50% 및 30%로 달리하여 얻어진 추출물과 물추출물의 식품 관련 미생물에 대한 항균 활성을 측정하고 이들 추출물의 분획물에 대한 항균 활성을 확인하였다.
이때 disc에 흡수시킨 추출물과 분획물의 농도는 100 ㎍으로 하였다. 액체배양법은 추출물을 첨가한 액체배지에 균을 접종하고 24시간 배양 후 colony 계측으로 생균수를 측정하였다. 즉, 차조기 에탄올 추출물과 분획물은 각각 증류수와 DMSO(dimethyl sulfoxide) 에 용해시켜 농도를 조정하여 준비한 다음 계대 배양하여 활성화된 미생물 배양액에 500 ppm과 1,000 ppm 농도가 되게 추출물과 분획물을 첨가하고 37℃에서 24시간 동안 진탕배양하면서 3시간 간격으로 생균수를 측정하였다.
이때 물 추출은 삼각 플라스크에 차조기 분말 100 g에 대하여 10배의 증류수를 가하고 냉각기를 연결하여 hot plate 상에서 5시간 동안 진탕하면서 가열 추출하였다. 이 과정을 3회 반복하여 여과한 여액을 모두 합하여여과지 (Whatman No. 2)로 감압여과하고 감압 농축기를 이용하여 농축한 것으로 하였다. 각각의 추출물은 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol 순으로 다시 계통 분획하였다.
95%로 변화시켜 추출하였다. 즉 차조기 분말 100g에 각각의 물과 에탄올 혼합용액을 10배가 되게 가하여 실온의 진탕 항온기에서 24시간 추출한 후 감압여과 하였으며 이 과정을 3회 반복하여 모아진 여액을 합하여 감압 농축기 (Rotary evaporator, EYELA N-1000, Japan)로 농축하였다. 이때 물 추출은 삼각 플라스크에 차조기 분말 100 g에 대하여 10배의 증류수를 가하고 냉각기를 연결하여 hot plate 상에서 5시간 동안 진탕하면서 가열 추출하였다.
각각의 추출물은 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol 순으로 다시 계통 분획하였다. 즉, 각 농도의 에탄올 추출물을 각각 감압농축기를 이용하여 용매를 휘발시킨 후 증류수를 가하여 분산시키고 분액여두를 이용하여 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol 순으로 분획하고 그 나머지 잔사를 물 분획으로 하였다. 이때 추출물과 분획물은 모두 감압 농축하여 필요한 농도로 희석하여 실험에 사용하였다.
액체배양법은 추출물을 첨가한 액체배지에 균을 접종하고 24시간 배양 후 colony 계측으로 생균수를 측정하였다. 즉, 차조기 에탄올 추출물과 분획물은 각각 증류수와 DMSO(dimethyl sulfoxide) 에 용해시켜 농도를 조정하여 준비한 다음 계대 배양하여 활성화된 미생물 배양액에 500 ppm과 1,000 ppm 농도가 되게 추출물과 분획물을 첨가하고 37℃에서 24시간 동안 진탕배양하면서 3시간 간격으로 생균수를 측정하였다.
차조기의 30, 50, 70, 95% 에탄올 추출물과 물 추출물의 식품 관련 미생물에 대한 항균 활성과 이들 추출물의 분획물에 대한 항균 활성을 살펴보았다. 본 실험에 사용한 차조기의 무기질은 Ca와 Mg 함량이 각각 595.
차조기의 에탄올 추출은 에탄올 농도를 0, 30, 50, 70 및 95%로 변화시켜 추출하였다. 즉 차조기 분말 100g에 각각의 물과 에탄올 혼합용액을 10배가 되게 가하여 실온의 진탕 항온기에서 24시간 추출한 후 감압여과 하였으며 이 과정을 3회 반복하여 모아진 여액을 합하여 감압 농축기 (Rotary evaporator, EYELA N-1000, Japan)로 농축하였다.
대상 데이터
2004, Salmonella enteritidis KCCM 12021, Salmonella typhimurium KCTC 2515, Escherichia coli O157:H7 ATCC 43888, Escherichia, coli O157(Human isolated in PSA)와 Escherichia coli ATCC 8739 등 그람 음성균 6종으로 총 8종을 냉장고에 보관하면서 계대 배양하여 사용하였다. 실험에 사용한 배지로는 nutrient broth (Difco, USA)와 nutrient agar (Difco, USA) 배지를 사용하였다.
본 실험에 사용한 차조기는 2005년 5월에 경북 칠곡에서 수확한 것을 여러 차례 흐르는 물에 세척하고 음건한 후 분쇄기(DA282-2, Daesung, Korea)로 분말화하여 4℃ 에서 냉장 보관하면서 사용하였다.
실험에 사용한 균주는 Staphylococcus aureus ATCC 6538와 Bacillus subtilis KCCM 11316 등 그람 양성균 2종과 Pseudomonas aeruginosa KCTC . 2004, Salmonella enteritidis KCCM 12021, Salmonella typhimurium KCTC 2515, Escherichia coli O157:H7 ATCC 43888, Escherichia, coli O157(Human isolated in PSA)와 Escherichia coli ATCC 8739 등 그람 음성균 6종으로 총 8종을 냉장고에 보관하면서 계대 배양하여 사용하였다.
2004, Salmonella enteritidis KCCM 12021, Salmonella typhimurium KCTC 2515, Escherichia coli O157:H7 ATCC 43888, Escherichia, coli O157(Human isolated in PSA)와 Escherichia coli ATCC 8739 등 그람 음성균 6종으로 총 8종을 냉장고에 보관하면서 계대 배양하여 사용하였다. 실험에 사용한 배지로는 nutrient broth (Difco, USA)와 nutrient agar (Difco, USA) 배지를 사용하였다.
데이터처리
모든 실험은 3회 반복 실시하여 평균치와 표준편차로 나타내었으며, 유의성은 version 12의 SPSS(statistical Pack-age for Social Sciences, Chicago, IL, USA) soft-ware package를 이용하여 Duncan's multiple test를 행하였다.
이론/모형
8종의 균주에 대한 항균 활성은 disc agar diffusion 법(Bauer; 1966, Piddok; 1990)과 액체 배양법(KFDA 2003)으로 측정하였다. Disc agar diffusion 법은 에탄올 추출물과 분획물을 각각의 추출용매와 분획 용매로 적정농도로 제조하여 각각 8 mm의 paper disc에 60 를 흡수시키고 용매는 휘발시켜 준비하였으며, 대조구는 각 용매를 동일하게 올린 후 휘발시켰다.
총 phenol 함량은 Folin-Danis 법(Singleton 1965) 으로 정량하였다. 시료 0.
이때 표준물질은 chlorogenic acid 표준곡선으로 환산하였다. 총 플라보노이드 함량은 diethylene glycol 비색법(NFRI 1990) 으로 측정하였다. 시료 1 mL에 diethylene glycol 10 mL과 IN NaOH 1 mL를 첨가하여 37P에서 1시간 반응시킨 후 420 nm에서 흡광도를 측정하였다.
성능/효과
1 mg/g 으로 가장 낮았다. (Table 2>의 항균활성 결과와 비교해서 살펴보면 polyphenol 함량이 가장 높은 물추출물의 ethyl acetate 분획물이 실험 균주 8종에 대하여 저해환의 크기가 가장 크게 나타났다. 에탄올 추출 시에는 95% 에탄올 추출물의 ethyl acetate 분획의 폴리페놀 함량은 높으나 Salmonella 속 2종과 E.
57%로 95% 에탄올추출 시보다 감소한 반면 chloroform층, ethyl acetate 층, butanol 층 및 물 분획은 모두 2배 이상 증가한 때문으로 나타났다. 50% 에탄올 추출물에서도 물층의 수율이 가장 높아 9.5%로 전체 수율의 50.4%를 차지하였고, 70% 에탄올 추출에 비하여 hexane층, chloroform증과 butanol층은 오히려 감소하고 ethyl acetate증은 증가하였다. 이러한 현상은 30%와 물 추출에서도 유사한 경향을 보였다.
2 mm로 가장 강한 넓게 형성되었다. Chloroform 분획물은 농도별 에탄올 추출물 모두와 물 추출의 chloroform 층에서 S. aureus와 P. aeruginosa에 대해서 항균력을 나타내었다. 이때 에탄올 혼합율이 낮을수록 저해환의 크기도 점차적으로 크게 나타났는데 95% 에탄올 추출물의 chloroform층이 11.
17%로 매우 적었다. Chloroform층은 70% 에탄올 추출 한 것이 2.72%로 가장 많았으며, ethyl acetate 층은 물 추출물에서 가장 많아서 에탄올 혼합율이 낮아질수록 점차적으로 증가하는 경향을 보였다. butanol층은 70% 에탄올 추출한 것이 2.
typimuriume 배양 3시간째에는 다소 억제 되는 듯하나 배양이 지속될수록 대조 구와 큰 차이를 보이지 않고 미비하였다. E. coli 0157 3종도 ethyl acetate 무첨가의 대조구보다 생육이 저해되는 것으로 나타났으며, 농도 의존적으로 500 ppm에서보다 1, 000 ppm에서 생육 억제 효과는 더 높게 나타났다. 안 등(An et al.
6 mm로 항균력이 가장 컸다. Ethyl acetate 분획물은 실험 대상으로 한 8종의 균종에 대하여 모든 추출물에서 강한 항균력을 보였는데 특히 S. aureus, B. subtilis와 P. aeruginosa에 대한 항균력이강했으며 에탄올 농도가 낮을수록 저해환도 점차적으로 커지는 경향을 보였다. 또 2종의 Salmonella sp.
차조기 물 추출물로부터 얻은 ethyl acetate 분획물이 그람 음성균 6종의 성장에 미치는 영향을 살펴본 결과는 (Figure 4>에 나타내었다. P. aeruginosa는 ethyl acetate 분획물 첨가시 S. aureus와 유사한 생육 곡선 양상으로 500 ppm와 1,000 ppm에서 농도 의존적으로 성장이 억제되는 것으로 나타났다. Salmonella 속 2 종 모두 저해환의 형성 결과에서와 같이 생육억제를 보였으나 S.
aureus와 유사한 생육 곡선 양상으로 500 ppm와 1,000 ppm에서 농도 의존적으로 성장이 억제되는 것으로 나타났다. Salmonella 속 2 종 모두 저해환의 형성 결과에서와 같이 생육억제를 보였으나 S. enteritidis는 1,000 ppm 농도에서 배양 초기에 강한 억제를 보이다가 이후 급격한 균수 증가를 보여 지속적인 생육저해 효과를 얻기 위해서는 이보다 높은 농도를 요구하는 것으로 보인다. S.
aureus에 대해서도 95% 에탄올 추출물과 물 추출물의 butanol층에서 약한 항균력을 보였다. 물 분획물의 경우, P.
또 1,000 ppm 농도에서는 배양 3시간까지는 균수가 약간의 증가를 보이나 배양 6시간 이후 에는 오히려 생균수가 줄어들어 초기 접종 균수와 비슷한 수준을 보이는 등의 강한 항균력을 보여 농도 의존적으로 강력한 생육 억제 능을 가지는 것으로 나타났다. 결과적으로 물추출물의 ethyl acetate 가용성 성분에 그람양성균 2종의 성장을 강력하게 억제하는 물질이 존재하는 것으로 추정된다. 차조기 물 추출물로부터 얻은 ethyl acetate 분획물이 그람 음성균 6종의 성장에 미치는 영향을 살펴본 결과는 (Figure 4>에 나타내었다.
플라보노이드 함량은 폴리페놀 함량의 변화와 유사한 결과를 보였는데 30%에탄올 추출과 물추출의 ethyl acetate 분획이 가장 높은 것으로 나타났고 70%와 50% 에탄올 추출에서 오히려 함량이 줄어든 것으로 나타났다. 결과적으로 실험 대상 미생물에 비교적 강한 항균력을 보이는 30% 에탄올 추출물과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물에 폴리페놀과 플라보노이드의 함량이 가장 높은 것으로 나타났다.
5 mm로 강한 높은 항균력을 나타내었다. 결과적으로 에탄올 추출물의 항균력이 낮은 것으로 보아 단순 에탄올 추출물이나 물추출물 만으로 미생물에 대한 강한 항균활성을 기대하기는 어려우나 이들 분획물들이 강한 항균력을 나타내는 것으로 미루어 볼 때 이들 추출물에 존재하는 강한 항균활성 성분을 분리하여 이들을 이용할 경우 항균력의 상승효과를 얻을 수 있을 것으로 판단된다.
결과적으로 차조기의 에탄올 농도를 달리한 추출에서는 물 혼합율이 증가할수록 추출물의 전체 수율은 증가하였고, 물 추출한 것이 가장 높은 수율을 보였다. 이는 단계적 분획에서 남는 물층의 수율 증가가 가장 주요한 원인인 것으로 판단된다.
subtilise 생육 초기부터 강한 억제를 보였는데 500 ppm 농도에서는 배양 6시간까지 강한 억제를 보이다가 그 이후 급격히 생균 수가 증가하였다. 또 1,000 ppm 농도에서는 배양 3시간까지는 균수가 약간의 증가를 보이나 배양 6시간 이후 에는 오히려 생균수가 줄어들어 초기 접종 균수와 비슷한 수준을 보이는 등의 강한 항균력을 보여 농도 의존적으로 강력한 생육 억제 능을 가지는 것으로 나타났다. 결과적으로 물추출물의 ethyl acetate 가용성 성분에 그람양성균 2종의 성장을 강력하게 억제하는 물질이 존재하는 것으로 추정된다.
추출용매의 에탄올 농도와 항균력이 폴리페놀 함량과 비례적인 상관관계를 갖는 것으로 나타나지는 않았으나 에탄올 추출 시 에도 에탄올 함량이 높고 물 혼합 비율이 적은 95%와 70% 에탄올 추출의 경우보다 50% 에탄올 농도에서 점차적으로 항균력이 증가하였다. 또 에탄올 함량이 낮고 상대적으로 물 혼합이 많은 30% 에탄올 추출물의 ethyl acetate 분획에서 항균력이 가장 높게 나타나는 것으로 볼 때 차조기의 항균 성분은 에탄올에 용출되는 폴리페놀 보다는 수용성 폴리페놀 성분이 더 강력한 항균력을 갖는 것으로 추측된다. 플라보노이드 함량은 폴리페놀 함량의 변화와 유사한 결과를 보였는데 30%에탄올 추출과 물추출의 ethyl acetate 분획이 가장 높은 것으로 나타났고 70%와 50% 에탄올 추출에서 오히려 함량이 줄어든 것으로 나타났다.
aeruginosa에 대하여 대조구의 뚜렷한 증가와 대조적으로 낮은 생균수를 보였으며, 1,000 ppm의 농도에서는 실험 균주 모두에 대하여 배양 24시간 내내 생육이 저해되는 것으로 나타났다. 물 추출과 에탄올 추출의 농도와 항균 활성, 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량이 비례적인 상관관계에 있는 것으로 나타나지는 않으나 30% 에탄올 추출물과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물이 폴리페놀 함량이 높고 항균력이 가장 강한 것으로 나타났다.
에탄올 추출물과 물 추출물의 항균력은 95%, 70%와 50% 에탄올 추출물이 Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis 및 Pseudomonas aeruginosa에 대하여 clear zone을 나타내었다, 추출물을 단계별 계통 분획하여 얻은 분획물의 항균력 실험에서는 ethyl acetate 층이 실험 대상 미생물 모두에 대하여 항균 활성을 나타내었으며 에탄올 혼합율이 낮을수록 즉, 30% 에탄올과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물의 저해환이 가장 크게 나타났다. 물 추출물의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 액체배양에서 500 ppm의 농도에서는 S. aureuse B. subtilis와 P. aeruginosa에 대하여 대조구의 뚜렷한 증가와 대조적으로 낮은 생균수를 보였으며, 1,000 ppm의 농도에서는 실험 균주 모두에 대하여 배양 24시간 내내 생육이 저해되는 것으로 나타났다. 물 추출과 에탄올 추출의 농도와 항균 활성, 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량이 비례적인 상관관계에 있는 것으로 나타나지는 않으나 30% 에탄올 추출물과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물이 폴리페놀 함량이 높고 항균력이 가장 강한 것으로 나타났다.
1>에 나타내었다. 물 추출물의 수율이 20.8%로 가장 많았고 에탄올 추출에서는 30%>50%>70>95% 순으로 에탄올 농도가 높아질수록 전체 수율은 낮아졌다. 95% 에탄올 추출물은 전체 수율이 9.
대한 항균 활성을 살펴보았다. 본 실험에 사용한 차조기의 무기질은 Ca와 Mg 함량이 각각 595.75 mg%와 467.0 mg%으로 가장 많았다. 에탄올 혼합 추출물과 물 추출물의 추출 수율은 에탄올 농도가 낮을수록 증가하여 95% 에탄올 추출물은 9.
이는 단계적 분획에서 남는 물층의 수율 증가가 가장 주요한 원인인 것으로 판단된다. 분획물의 수율은 hexane층은 95% 에탄올 추출물에, chloroform과 butanol 층 분획은 70% 에탄올 추출물에, ethyl acetate 분획은 물 추출물에 가장 잘 용출되어 나오는 것으로 판단되며, 특히 ethyl acetate 분획은 에탄올 혼합율이 낮을수록 수율이 많아지며 에탄올 추출에서 보다는 물 추출에서 수율이 높은 것으로 나타났다.
이러한 현상은 30%와 물 추출에서도 유사한 경향을 보였다. 분획물의 수율을 살펴보면 hexane층은 95%와 70% 에탄올에 가장 잘 추출되어 3.02%와 2.57%로 가장 높고, 50% 이하의 에탄올 농도에서는 그 양이 0.76~0.17%로 매우 적었다. Chloroform층은 70% 에탄올 추출 한 것이 2.
이러한 결과로 볼때 항균력이 있는 ethyl acetate 가용성 물질은 수용성 성분일 것으로 추측된다. 비교적 강한 극성의 butanol 분획물은 B, subtilis와 P. aeruginosa에 대하여 모든 농도의 에탄올 추출물과 물 추출의 butanol층에서 항균력을 보였는데 95% 에탄올 추출물과 물 추출물의 butanol층이 14.5-18.3 mm로 가장 큰 저해환을 나타내었다. S.
aureus에 대하여 500 ppm 농도에서는 배양 6시간까지 대조구와 큰 차이를 보이지 않으나 그 이후 생육이 억제된 것으로 나타났고, 1,000 ppm에서는 배양 초기부터 억제되어 배양 24시간에는 대조구보다 생균수가 1 log cycle이 적었다. 비병원성 균이나 발효공업에서 잡균 오염의 원인이 되는 균으로 알려진 B. subtilise 생육 초기부터 강한 억제를 보였는데 500 ppm 농도에서는 배양 6시간까지 강한 억제를 보이다가 그 이후 급격히 생균 수가 증가하였다. 또 1,000 ppm 농도에서는 배양 3시간까지는 균수가 약간의 증가를 보이나 배양 6시간 이후 에는 오히려 생균수가 줄어들어 초기 접종 균수와 비슷한 수준을 보이는 등의 강한 항균력을 보여 농도 의존적으로 강력한 생육 억제 능을 가지는 것으로 나타났다.
실험에 사용된 차조기의 무기질을 분석한 결과 Ca (595.75 mg%)과 Mg (467.0 mg%) 함량이 가장 높았으며, Fe (99.58 mg%), Mn (10.01 mg%), Zn (5.21 mg%), Cu (1.80 mg%)의 순으로 나타났다 (data not shown).
8%이었다, 추출용매의 에탄올 농도가 낮아질수록 hexane 층으로 용출되어 나오는 성분은 감소하고 ethyl acetate 층 분획성분은 점차 증가하는 것으로 나타났다. 에탄올 추출물과 물 추출물의 항균력은 95%, 70%와 50% 에탄올 추출물이 Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis 및 Pseudomonas aeruginosa에 대하여 clear zone을 나타내었다, 추출물을 단계별 계통 분획하여 얻은 분획물의 항균력 실험에서는 ethyl acetate 층이 실험 대상 미생물 모두에 대하여 항균 활성을 나타내었으며 에탄올 혼합율이 낮을수록 즉, 30% 에탄올과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물의 저해환이 가장 크게 나타났다. 물 추출물의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 액체배양에서 500 ppm의 농도에서는 S.
4 mg/g 으로 가장 높게 나타났다. 에탄올 추출에서는 30% 에탄올 추출물의 ethyl acetate 분획 폴리페놀 함량이 169.0 mg/g 으로 에탄올 추출물의 ethyl acetate 분획이 가장 높았으며, 95% 에탄올 추출물이 147.8 mg/g, 50% 에탄올 추출이 89.3 mg/g 으로 나타났고 70% 에탄올 추출물 ethyl acetate 층의 polyphenol 함량이 64.1 mg/g 으로 가장 낮았다. (Table 2>의 항균활성 결과와 비교해서 살펴보면 polyphenol 함량이 가장 높은 물추출물의 ethyl acetate 분획물이 실험 균주 8종에 대하여 저해환의 크기가 가장 크게 나타났다.
0 mg%으로 가장 많았다. 에탄올 혼합 추출물과 물 추출물의 추출 수율은 에탄올 농도가 낮을수록 증가하여 95% 에탄올 추출물은 9.3%, 70% 추출물은 16.5%, 50% 추출물은 18.9%, 30% 추출물은 19.4%, 물 추출물(0%)에서는 20.8%이었다, 추출용매의 에탄올 농도가 낮아질수록 hexane 층으로 용출되어 나오는 성분은 감소하고 ethyl acetate 층 분획성분은 점차 증가하는 것으로 나타났다. 에탄올 추출물과 물 추출물의 항균력은 95%, 70%와 50% 에탄올 추출물이 Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis 및 Pseudomonas aeruginosa에 대하여 clear zone을 나타내었다, 추출물을 단계별 계통 분획하여 얻은 분획물의 항균력 실험에서는 ethyl acetate 층이 실험 대상 미생물 모두에 대하여 항균 활성을 나타내었으며 에탄올 혼합율이 낮을수록 즉, 30% 에탄올과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물의 저해환이 가장 크게 나타났다.
30% 에탄올추출물과 물추출물(0%에서는 실험 대상 미생물 모두에 clear zone을 나타나지 않았다. 에탄올 혼합율을 달리한 에탄올 추출물과 물 추출물의 분획물의 저해 환 형성 여부를 살펴본 결과 hexane 분획물은 S. aureus와 P. aeruginosa 2종에 대하여 에탄올 혼합 추출물의 hexane 층에서 항균력을 보였으며 70% 에탄올 추출물의 hexane층에서는 P. aeruginosa에 대하여 15.2 mm로 가장 강한 넓게 형성되었다. Chloroform 분획물은 농도별 에탄올 추출물 모두와 물 추출의 chloroform 층에서 S.
또 2종의 Salmonella sp. 와 3종의 E. coli 에 대하여도 항균력을 보였는데 에탄올 농도가 높은 추출물의 ethyl acetate층에서는 항균력이 약하였으나 30% 에탄올과 물추출물의 ethyl acetate층에서는 14 mm이상의 비교적 큰 저해환을 보였다. 이러한 결과로 볼때 항균력이 있는 ethyl acetate 가용성 물질은 수용성 성분일 것으로 추측된다.
것이다.<Figure 3>은 그람양성균 2종에 대한 생육 곡선으로 S. aureus에 대하여 500 ppm 농도에서는 배양 6시간까지 대조구와 큰 차이를 보이지 않으나 그 이후 생육이 억제된 것으로 나타났고, 1,000 ppm에서는 배양 초기부터 억제되어 배양 24시간에는 대조구보다 생균수가 1 log cycle이 적었다. 비병원성 균이나 발효공업에서 잡균 오염의 원인이 되는 균으로 알려진 B.
coli 에 대하여도 항균력을 보였는데 에탄올 농도가 높은 추출물의 ethyl acetate층에서는 항균력이 약하였으나 30% 에탄올과 물추출물의 ethyl acetate층에서는 14 mm이상의 비교적 큰 저해환을 보였다. 이러한 결과로 볼때 항균력이 있는 ethyl acetate 가용성 물질은 수용성 성분일 것으로 추측된다. 비교적 강한 극성의 butanol 분획물은 B, subtilis와 P.
결과는 <Table 2>와 같다. 차조기의 95% 에탄올 추출물은 S. aureus, B. subtilis 및 P. aeruginosa에 대하여, 70%와 50% 에탄올 추출물은 B. subtilis와 P. aeruginosa에 대하여 각각 항균력을 나타내었다. 이때 에탄올 혼합율이 높을수록 항균력이 높게 나타나서 P.
coli 3종에 대해서는 저해 환을 나타내지 않았다. 추출용매의 에탄올 농도와 항균력이 폴리페놀 함량과 비례적인 상관관계를 갖는 것으로 나타나지는 않았으나 에탄올 추출 시 에도 에탄올 함량이 높고 물 혼합 비율이 적은 95%와 70% 에탄올 추출의 경우보다 50% 에탄올 농도에서 점차적으로 항균력이 증가하였다. 또 에탄올 함량이 낮고 상대적으로 물 혼합이 많은 30% 에탄올 추출물의 ethyl acetate 분획에서 항균력이 가장 높게 나타나는 것으로 볼 때 차조기의 항균 성분은 에탄올에 용출되는 폴리페놀 보다는 수용성 폴리페놀 성분이 더 강력한 항균력을 갖는 것으로 추측된다.
또 에탄올 함량이 낮고 상대적으로 물 혼합이 많은 30% 에탄올 추출물의 ethyl acetate 분획에서 항균력이 가장 높게 나타나는 것으로 볼 때 차조기의 항균 성분은 에탄올에 용출되는 폴리페놀 보다는 수용성 폴리페놀 성분이 더 강력한 항균력을 갖는 것으로 추측된다. 플라보노이드 함량은 폴리페놀 함량의 변화와 유사한 결과를 보였는데 30%에탄올 추출과 물추출의 ethyl acetate 분획이 가장 높은 것으로 나타났고 70%와 50% 에탄올 추출에서 오히려 함량이 줄어든 것으로 나타났다. 결과적으로 실험 대상 미생물에 비교적 강한 항균력을 보이는 30% 에탄올 추출물과 물 추출물의 ethyl acetate 분획물에 폴리페놀과 플라보노이드의 함량이 가장 높은 것으로 나타났다.
참고문헌 (37)
Aritomi, M. Kumori, T. Kawasaki, T. 1985. Cyanogenic glycosides in leaves of Perilla frutescens var. acuta. Phytochemistry. 24(10): 2438-2439
Bauer AW, Kibby MM, Sherria JC, Turck M. 1966. Antibiotic susceptibility testing y a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45(4): 493-496
Choi KE, Kwag JS, Kim YO, Baek SH and Han DS 1997 Development of anthicancer agents from korean medicinal plants(part 4). Korean J. Texicol., 13(4): 311-316
Do JR, Heo IS, Back SY, Yoon HS, Jo JH, Kim YM, Kim KJ, Kim SK. 2006 Antihypertensive, Antimicrobial and Antifungal Activities of Buckwheat Hydrolysate. Korean Society. of food Sci. & Tech., 38(2): 268-272
Fuiiwara, H. Tanaka, Y. Fukui, Y. Ashikaki, T. Yamaguchi M., Kusumi, T. 1998. Purification and characterization of anthocyanin 3-aromatic acyltransferase from Perilla frutescens. Plant science. 137(1): 87-94
Ha MH, Park WP, Lee SC, Choi SG, Cho SH. 2006. Antimicrobial Characteristic of Prunus mune extract. Korean Society of Food Preservation, 13(2): 198- 203
Hwang JH, Jang MS. 2001. Physicochemical properties of Dongchimi added with Jasoja ( Perillae semen). Korean Society of Food & Cookery Science, 17(6): 555-564
Hwang JH, Jang MS. 2003. Free Sugar, Free Amino Acid, Non- Volatile Organic Acid and Volatile Compounds of Dongchimi added with Jasoja(Perillae semen).Korean Society of Food & Cookery Science, 19(1): 1-10
Ishikura, N.. 1981. Anthocyanins and flavones in leaves and seeds of Perilla plant. Agricultural and Biological Chemistry, 45(8): 1855-1860
Joe WA, Choi EY, Jeung SH, Kang BY, Son JH, An BJ, Lee CE, Choi KI, Son AR and Lee JT. 2005. Studies on the application for cosmetrics natural materials of folium perillae. Kor. J. Herbology, 20(3): 1-7
Kang YS, Lee SC, Shin HD, Shin MK, Kim JH and Song HJ. 2004. Studies on the allergy asthma effect of Folium Perillae. Korean Association of herbology,.19(3): 25-34
Kawaguchi K., Mizuno T. Aida, K and Uchino K 1997 Hesperidine as an inhibitor of lipases from porcine pacreas and pseudomonas. Biosci. Biotchnol. Biochem. 61, 102-104
KFDA. 2003. Code DH. Code Food, Korea Food and Drug Association. Seoul, korea
Kim CK, Kim YJ, Kwon YJ. 1998. Amino Acid and Fatty Acid Compositions of Perilla semen. Korean Soci. of Food Science and Nutrition, 27(3): 381-385
Kim JG. 1997. Natural medicines dictionary. Namsandang. Seoul. p.172
Kim YJ, Kim CK and YJ Kwon. 1997. Isolation of Antioxidative Components of Perilla semen. Korean Society. of food Sci. & Tech, 29(1): 38-48
Lee JJ, Kim SH, Chang BS, Lee JB, Huh CS, Kim TJ, BAEK YJ. 1999. The antimicrobials activity of medicinal plants extracts against Helicobacter Pylori. Korean J. Food Sci. Technol. 31(4): 764-770
Lee ES. Seo BI. 2005. Growth inhibition of Perilla frutescens var. acuta extract. Korean J. Herbology. 20(2): 83-89
Lee OH. Lee HB, Son JY. 2004. Antimicrobial activities and nitritescavenging abiliyh of olive leaf fractions. Korean J. Soc. Food Cookery Sci. 20(2): 204-210
Moon GS. 1999. Medicinal herbs component and utilization. Ilwealsaegak, seoul. pp 517-518
Moon HI, Zee OP and Shin KH. 1998. Effect of Perilla (Perilla frutescens Britton) Extract on Serum Ethanol Level and Hepatic Alcohol Dehydrogenase Activity. Korean Medical Crop Science, 6(2): 126-130
NFRI. 1990. Manuals of Quality Characteristic Analysis for Food Quality Evalution(2). National Food Reserch Institute, Tsukuba, Japan. p 61
Oh DH, Hum SS, Park BK, Ahn C, Yu JY. 1998. Antimiceobial activityes of natural medicinal herbs on the food spoilage or foodborne disease microorganism. Korean J. Food Sci. Techol. 30: 957-963
Park HO, Kim CM, Woo GJ, Park SH, Lee DH, 2001. Chang EJ, Park KH. Monitoring and trends analysis of food poisning outbreaks occurrened in recent years in Korea. J. Food Hyg. safety, 16(2): 280-294
Piddok, L. J. V. 1990. Techniques used for the determination of antibacterial resistance and sensitivity in bacteria. J. Appl. Bacteriol. 68(2): 307-318
Povilaityte, V.; Venskutonis, P. R. 2000. Antioxidative activity of purple peril (Perilla frutescens L.), Moldavian dragonhead (Dracocephalum moldavica L.), and Roman chamomile (Anthemis nobilis L.) extracts in rapeseed oil. Journal of the American Oil Chemists' Society, 77(9): 951-956
Seo HH, Jeong SH and Kim DW. 2003. Research of natural dyeing development using plum - around match dyeing of plum and perilla plant-. Korea Soci. of craft, 6(2): 125-146
Sohn J.S. and Kim M.K. 1988 Effects of hesperidin and naringin on antioxidative capacity in the rat. Korean Nutr. Soc. 31(3): 687-696
Swo DH and Han DS. 1998. Antitumor Effects of the Chloroform Soluble Fraction of Perilla frutescens against Human Skin Melanoma Cells. Wonkwang univ. dental medical 1.8(2): 55-66
Takeda, H. Tsuii, M, Matsumiya, T. Kubo, M. 2002. Identification of Rosmarinic Acid as a Novel Antidepressive Substance in the Leaves of Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo (Perillae Herba). Japanese Journal of Neuropsycho pharmacology-Tokyo-. 22(2): 15-22
Ueda S., Yamashita H, Nakajima M and Kuwabara Y. Inhibition of microorganisms by spice extracts and flavoring compounds. Niippon Shokuhin Kogyo Gakkaishi, 29(3): 389-392
Yamamoto, H.; Ogawa, T. 2002. Antimicrobial activity of perilla seed polyphenols against oral pathogenic bacteria. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 66(4): 921-924
Yonekura-Sakakibara, K. Tanaka Y. Fukuchi-Mizutani, M. Fuiiwara, H., Fukui, Y. Ashikari, T. Murakami Y. Yamaguchi, M. Kusumi, T. 2000. Molecular and Biochemical Characterization of a Novel Hydroxycinnamoyl-CoA:Anthocyanin 3-OGlucoside- 6'-O-Acyltransferase from Perilla frutescens. Plant & cell physiology. 41(4): 495-502
Zheng, Z., pinkham, J. P. and Shetty, K. 1998: Identification of polymeric dye-tolerant oregano(Oreganum vulgare) colonal lines by quantifying total phenolics and peroxideasse activity. J. Agric. Food Chem. 46: 4441-4446
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