전통 된장으로부터 분리한 향균물질 생산 Bacillus subtilis의 특성 Characterization of Antibacterial Substance - Producing Bacillus subtilis Isolated from Traditional Doenjang원문보기
전통 장류 발효식품의 발효도와 저장성을 증진시키기 위하여 전통 콩 발효식품으로부터 cellulase, amylase, protease 활성 및 항균활성 물질 생성이 우수한 바실러스 HS25 균주를 분리하여 그 배양학적 특성을 검토하였다. HS25 균주는 편모와 내생포자를 가지며, 다량의 점질물을 형성하는 그람양성 간균으로 catalase 양성, oxidase 음성으로 esculin을 가수분해하였고, 16S rDNA분석 등을 통하여 Bacillus subtilis로 밝혀져 B. subtilis HS25로 명명하였다. B. subtilis HS25 균주의 생육 및 항균물질 생산을 위하여 최적 배지조성은 soluble starch 1%, yeast extract 0.5%, peptone 0.5% 및 $MgCl_2{\cdot}6H_{2}O$ 0.05%이었으며, 최적 배양온도는 $25{\sim}45^{\circ}C$, 초기 pH는 $6.5{\sim}9.5$, 최적 교반속도는 $160{\sim}200$ rpm이었고, 항균활성이 가장 높게 나타나는 배양 시간 범위는 $12{\sim}36$시간째였다.
전통 장류 발효식품의 발효도와 저장성을 증진시키기 위하여 전통 콩 발효식품으로부터 cellulase, amylase, protease 활성 및 항균활성 물질 생성이 우수한 바실러스 HS25 균주를 분리하여 그 배양학적 특성을 검토하였다. HS25 균주는 편모와 내생포자를 가지며, 다량의 점질물을 형성하는 그람양성 간균으로 catalase 양성, oxidase 음성으로 esculin을 가수분해하였고, 16S rDNA분석 등을 통하여 Bacillus subtilis로 밝혀져 B. subtilis HS25로 명명하였다. B. subtilis HS25 균주의 생육 및 항균물질 생산을 위하여 최적 배지조성은 soluble starch 1%, yeast extract 0.5%, peptone 0.5% 및 $MgCl_2{\cdot}6H_{2}O$ 0.05%이었으며, 최적 배양온도는 $25{\sim}45^{\circ}C$, 초기 pH는 $6.5{\sim}9.5$, 최적 교반속도는 $160{\sim}200$ rpm이었고, 항균활성이 가장 높게 나타나는 배양 시간 범위는 $12{\sim}36$시간째였다.
A bacterium which has high enzymatic activities such as amylase, cellulase and protease was isolated from Korean traditional soybean food, doenjang. The isolated bacterium was identified to Bacillus subtilis HS25 by the test of morphological and biochemical properties according to Bergey's Manual of...
A bacterium which has high enzymatic activities such as amylase, cellulase and protease was isolated from Korean traditional soybean food, doenjang. The isolated bacterium was identified to Bacillus subtilis HS25 by the test of morphological and biochemical properties according to Bergey's Manual of Systematic Bacteriology and API 50 CHL kit, and by the 16S rDNA sequence. The isolated B. subtilis HS25 had a potent antibacterial activity against food born causative or pathogenic bacteria. B. subtilis HS25 is endospore forming cell and contained flagella and abundant viscous material at the out layer of cell wall. It was rod type bacterium $(0.5{\sim}0.8{\times}3{\sim}5{\mu}m)$ having biochemical characteristics such as gram staining(+), catalase(+), oxidase(-) and hydrolysis of esculin(+). The optimal medium compositions for production of antibacterial substance in the B. subtilis HS25 were 1% of soluble starch, 0.5% of yeast extract, 0.5% of peptone and 0.05% of MgCl$_2{\cdot}6H_{2}O$. The optimum temperature and pH of the growth of the B. subtilis HS25 was 35$^{\circ}C$ and pH 7.5, respectively. The antibacterial activity was more high in neutral to a little alkaline pH (6.5-10.5) than in acidic pH. The optimal shaking speed to grow and to produce antibacterial substance of the B. subtilis HS25 was 160${\sim}$200 rpm. The optimal culture time for antibacterial activities of the bacterium were shown to be in the range of 12-36 hr.
A bacterium which has high enzymatic activities such as amylase, cellulase and protease was isolated from Korean traditional soybean food, doenjang. The isolated bacterium was identified to Bacillus subtilis HS25 by the test of morphological and biochemical properties according to Bergey's Manual of Systematic Bacteriology and API 50 CHL kit, and by the 16S rDNA sequence. The isolated B. subtilis HS25 had a potent antibacterial activity against food born causative or pathogenic bacteria. B. subtilis HS25 is endospore forming cell and contained flagella and abundant viscous material at the out layer of cell wall. It was rod type bacterium $(0.5{\sim}0.8{\times}3{\sim}5{\mu}m)$ having biochemical characteristics such as gram staining(+), catalase(+), oxidase(-) and hydrolysis of esculin(+). The optimal medium compositions for production of antibacterial substance in the B. subtilis HS25 were 1% of soluble starch, 0.5% of yeast extract, 0.5% of peptone and 0.05% of MgCl$_2{\cdot}6H_{2}O$. The optimum temperature and pH of the growth of the B. subtilis HS25 was 35$^{\circ}C$ and pH 7.5, respectively. The antibacterial activity was more high in neutral to a little alkaline pH (6.5-10.5) than in acidic pH. The optimal shaking speed to grow and to produce antibacterial substance of the B. subtilis HS25 was 160${\sim}$200 rpm. The optimal culture time for antibacterial activities of the bacterium were shown to be in the range of 12-36 hr.
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문제 정의
가능할 것으로 생각되었다. 본 연구에서는 전통 콩 된장으로부터 단백 질 및 전분분해력 이 높으면서 항균물질 생 산성 이 우수한 미생물을 순수분리하여 그 미생물의 특성을 밝히고 항균물질 대량생산을 위한 배양조건 등을 검토하였다.
가설 설정
1)Growth rate: + slow, ++ medium, +++ fast. 2)Size of clsr zone on SM 3) containing skim milk for protease, AM 4) containing soluble starch for amylase and CM 5) media containing carboxy methyl cellulose for cellulase activity.
3)Control medium was GY medium with 1% soluble starch.
제안 방법
탄소원의 영향. 각종 배지성분은 항균물질 생산에 중요한 것으로 알려져 있기 때문에 탄소원의 종류가 미생물의 생육에 미치는 영향을 조사하여 Fig. 3에 나타내었으며, 대조구는 GY배지에서 탄소원을 제외시킨 배지를 사용하였다. B.
공시균주. 공시균주는 각 가정에서 채취한 된장시료로부터 protease와 amylase 등의 효소활성 및 항균활성이 우수한 미생물을 순수 분리하여 사용하였다. 항균활성 검토를 위한 유해 미생물로는 Bacillus cereus KCCM 11204, Staphylococcus aureus KCTC 1927 등의 Gram(+)균과 Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis KCCM 1202, Klebsiella pneumoniae KCCM 11319, Proteus mirabilis KCTC 2433, Vibrio parahaemofyticus 등의 Gram(-)균을 한국종균협회로부터 분양받아 사용하였다.
최종 분리균주의 형태학적 및 생화학적 검토를 행하여 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology25* 및 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology26)에 따라 i 차 동정하였다. 그리고 당 발효실험은 API 50 CHL carbohydrate test kit(Bio Merieux, France)를 사용하여 nutrient broth 배지에 24 시간 배양하면서 배양액의 색도변화 결과를 ATB identification computer system(Bio Merieux, France)에 입력하여 조사하였고, 16S rDNA 유전자 분석을 행하여 동정하였다.
6% soft agar가 함유된 Meller Hinton 배지에 각 유해미생물의 액체배양액 50 p/ 씩을 접종하여 잘 혼합한 후 미리 준비해둔 Meller Hinton 평판배지에 중층하여 응고시켰다. 그리고 항균활성 측정시료 120 씩을 흡착시켜 건조시켜 둔 paper disc(Toyo Rhosi kaisha, Ltd., 8 mm)를 중층배지 위에 얹어 35°C 항온기에서 배양하면서 유해미생물의 생육저해를 나타내는 clear zone의 직경 (mm) 을 측정하였다.
무기염의 영향. 무기염의 영향은 1% soluble starch와 0.5% 의 yeast extract 및 peptone을 각각 첨가한 후 각종 무기염을 0.05% 농도로 첨가하여 검토하였다(Fig. 6). MgCl2-6H2O 및 MgSO4-7H2O 등을 첨가한 시험구에서는 균주의 생육이 약간 양호하였으나 HgCL, CoC12-6H2O, ZnSO4-7H2O 및 ZnCI 등을 첨가했을 때는 생육이 크게 억제되었으며, 항균활성도 전혀 나타나지 않았다.
사용배지. 미생물의 분리용 배지는 sodium chloride 1%, yeast extract 0.5%, peptone 1%, skim milk 2%로 구성된 SM배지와 SM배지에서 skim milk 대신 2% soluble starch가 함유된 AM배지 및 1% carboxy methyl cellulose(CMC)가 함유된 CM배지를 사용하였다. 항균 spectrum 조사는 Meller Hinton 평판배지를, 분리균주의 형태학적 및 생화학적 특성 등의 동정을 위한 배지는 Nutrient broth배지를 사용하였으며, 최적 배지 성분의 검토는 glucose 0.
최적 배지조성. 분리 균주의 최적배지는 GY배지에 탄소 원으로 glucose, sorbitol, mannitol, soluble starch, xylose, maltose, lactose, fructose, arabinose, cellobiose, raffinose, rhamnose, mannose, sucrose 및 galactose 등을 각각 1%씩 첨가하여 35°C, 180rpm으로 24시간 배양 한 후 유해미생물에 대한 항균 활성 및 배양액의 탁도를 660nm에서 측정하였다. 질소원은 NH4C1, (NH4)2SO4, NH4NO3, NaNO3, (NHQzCzO, , malt extract, yeast extract, asparagine 및 peptone을 각각 0.
따른 항균물질의 생산. 분리균주의 배양시간이 항균물질의 생산에 미치는 영향은 500 ml 삼각플라스크에 최적 배지 200 m/를 넣고 12VC에서 15분간 멸균한 후, 분리균주의 전 배양액을 1% 접종한 다음 35°C, 180rpm의 최적배양조건으로 96시간 동안 배양하면서 12시간 간격으로 시료를 채취하여 여러 종류의 유해미생물에 대한 항균활성을 측정하였다.
cereus를 비롯한 모든 유해미생물에 대하여 비교적 높은 항균 활성을 나타내었다. 이상의 결과로 3종류의 평판배지 상에서 clear zone이 뚜렷하며 다양한 유해미생물에 대한 항균 활성이 우수한 HS25균주를 최종 분리균주로 선정하였고, 이 분리 균주의 형태학적, 생화학적 및 유전학적 특성 등을 검토하였다. 분리한 HS25균주는 편모를 가지며, 세포벽 외부에 다량의 점질 물을 형성하는 간균으로 관찰되었다(Fig.
5%씩 혼합하여 첨가한 시험구에서 균의 생육 및 항균활성이 양호한 것으로 나타났다(Table 3). 이상의 결과로 B. subtilis HS25 균주를 배양할 때 질소원으로서는 yeast extract와 peptone을 각각 0.5%씩 혼합하여 첨가하였다.
미생물의 분리 및 선정. 전통장류 발효식품의 저장성과 발효 도를 증진시킬 우수한 균주를 분리할 목적으로 균원시료로부터약 150여종의 균주를 1차 선별한 후, 성장속도가 빠르면서 SM, AM 및 CM의 평판배지 상에서 clear zone이 뚜렷한 균주를 2 차 분리하여 여러 종류의 유해미생물에 대한 항균활성을 측정한 결과는 Table 1에 나타내었다. SM 및 AM배지 상에서는 HS2, HS18, 및 HS25, CM배지 상에서는 HS9, HS25 및 HS32 분리균주의 clear zone이 비교적 크게 나타났다.
5TL5의 범위로 조절하여 121°C, 15분 동안 멸균하였다. 제조한 액체배지에 최종 선정 균주의 전배양액을 1%씩 접종하고 35°C, 180rpm에서 24시간 배양한 후 660nm에서 흡광도 및 항균활성을 검토하였다. 최적배양온도는 15~5(TC의 온도범위에서, 진탕속도의 영향은 80-240 rpm의 범위에서 pH 영향과 동일하게 검토하였다.
분리 균주의 최적배지는 GY배지에 탄소 원으로 glucose, sorbitol, mannitol, soluble starch, xylose, maltose, lactose, fructose, arabinose, cellobiose, raffinose, rhamnose, mannose, sucrose 및 galactose 등을 각각 1%씩 첨가하여 35°C, 180rpm으로 24시간 배양 한 후 유해미생물에 대한 항균 활성 및 배양액의 탁도를 660nm에서 측정하였다. 질소원은 NH4C1, (NH4)2SO4, NH4NO3, NaNO3, (NHQzCzO, , malt extract, yeast extract, asparagine 및 peptone을 각각 0.5%씩 첨가하고, 무기염은 CoC12-6H2O, CaCl2, NaCl, ZnCl2, FeSO4-7H2O, AgNQ, HgCl2, MgCl2-6H2O, K2HPO4, ZnSO4 - 7H2O, MgSO4 - 7H2O 등을 각각 0.05%씩 첨가하여 탄소원의 영향과 동일한 방법으로 검토하였다.
미생물의 분리 및 동정. 채취한 각 균원시료 1 g씩을 멸균된 생리식염수 9m/에 잘 희석한 후 SM, AM 및 CM 평판배지에 각각 도말하여 생육속도가 빠르고 clear zone이 뚜렷한 균주를 선별한 후 유해미생물에 대한 항균활성이 높은 균주를 최종적으로 선정하였다. 최종 분리균주의 형태학적 및 생화학적 검토를 행하여 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology25* 및 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology26)에 따라 i 차 동정하였다.
제조한 액체배지에 최종 선정 균주의 전배양액을 1%씩 접종하고 35°C, 180rpm에서 24시간 배양한 후 660nm에서 흡광도 및 항균활성을 검토하였다. 최적배양온도는 15~5(TC의 온도범위에서, 진탕속도의 영향은 80-240 rpm의 범위에서 pH 영향과 동일하게 검토하였다.
2(im membrane filter로 여과하여 항균 활성 측정시료로 사용하였다. 측정법은 0.6% soft agar가 함유된 Meller Hinton 배지에 각 유해미생물의 액체배양액 50 p/ 씩을 접종하여 잘 혼합한 후 미리 준비해둔 Meller Hinton 평판배지에 중층하여 응고시켰다. 그리고 항균활성 측정시료 120 씩을 흡착시켜 건조시켜 둔 paper disc(Toyo Rhosi kaisha, Ltd.
5%, peptone 1%, skim milk 2%로 구성된 SM배지와 SM배지에서 skim milk 대신 2% soluble starch가 함유된 AM배지 및 1% carboxy methyl cellulose(CMC)가 함유된 CM배지를 사용하였다. 항균 spectrum 조사는 Meller Hinton 평판배지를, 분리균주의 형태학적 및 생화학적 특성 등의 동정을 위한 배지는 Nutrient broth배지를 사용하였으며, 최적 배지 성분의 검토는 glucose 0.5%, yeast extract 0.1%, MgSO47H2O 0.02%를 함유한 GY배지를 사용하였다.
대상 데이터
5에 나타내었다. 대조구는 GY배지에 1%의 soluble starch를 첨가하고 질소원을 제외한 배지를 사용하였다. 무기질소원을 첨가하는 것보다 yeast extract 및 peptone과 같은 유기질소원을 첨가한 시험구에서 생육이 양호하였고, E.
subtilis와 유사한 것으로 판명되어, 최종 분리 . 선정한 항균물질 생성의 미생물을 B. subtilis HS25로 명명하였다.
공시균주는 각 가정에서 채취한 된장시료로부터 protease와 amylase 등의 효소활성 및 항균활성이 우수한 미생물을 순수 분리하여 사용하였다. 항균활성 검토를 위한 유해 미생물로는 Bacillus cereus KCCM 11204, Staphylococcus aureus KCTC 1927 등의 Gram(+)균과 Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis KCCM 1202, Klebsiella pneumoniae KCCM 11319, Proteus mirabilis KCTC 2433, Vibrio parahaemofyticus 등의 Gram(-)균을 한국종균협회로부터 분양받아 사용하였다.
이론/모형
측정. 유해미생물에 대한 항균활성은 agar diffusion 법27)에 준하여 측정하였다. 500 m/의 삼각플라스크에 200 의 액체배지를 넣고 살균한 후, 전배양액을 1% 접종하여 35°C, 180 rpm, 24시간 배양하였다.
채취한 각 균원시료 1 g씩을 멸균된 생리식염수 9m/에 잘 희석한 후 SM, AM 및 CM 평판배지에 각각 도말하여 생육속도가 빠르고 clear zone이 뚜렷한 균주를 선별한 후 유해미생물에 대한 항균활성이 높은 균주를 최종적으로 선정하였다. 최종 분리균주의 형태학적 및 생화학적 검토를 행하여 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology25* 및 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology26)에 따라 i 차 동정하였다. 그리고 당 발효실험은 API 50 CHL carbohydrate test kit(Bio Merieux, France)를 사용하여 nutrient broth 배지에 24 시간 배양하면서 배양액의 색도변화 결과를 ATB identification computer system(Bio Merieux, France)에 입력하여 조사하였고, 16S rDNA 유전자 분석을 행하여 동정하였다.
성능/효과
생화학적 특성으로는 catalase 양성 및 oxidase 음성이었으며, esculin을 가수분해하였다(Table 2). 이상의 결과를 토대로 Betsey's Manual of Systematic Bacteriology2' 및 Bergey, s Manual of Determinative Bacteriology2"에 준하여 동정한 결과 Bac속인 것으로 추정되었다. 또한 Table 2의 API kit(API, France)를 사용한 당 발효성 실험 결과를 ATB indentification program에 입력하여 분석하고 그리고 16S rDNA 분석(Fig.
3에 나타내었으며, 대조구는 GY배지에서 탄소원을 제외시킨 배지를 사용하였다. B. subtilis HS25 는 탄소원 중에서 soluble starch, cellobiose 및 raffinose 등의 첨가 순으로 잘 이용하였으나, sorbitol, mannitol 및 xylose 등은 생육에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 그리고 E.
B. subtilis HS25의 생육 및 항균활성에 가장 효과적인 soluble staeh의 최적 첨가 농도를 검토한 결과(Fig. 4), 1% 첨가까지는 균의 생육 및 항균활성이 급격하게 증가하였으나, 그 이상의 농도에서는 아주 완만하게 감소하는 현상을 나타내어 최적 첨가농도를 1%로 선정하였다. Johim 등은 탄소원으로 glucose가 첨가되었을 때 streptococcin A-FF22 생산이 증대되는 반면, streptococcin B-74628의 경우에는 감소하는 것으로 보고하면서 항균물질은 미생물의 종류에 따라 최적 탄소원의 종류 또한 다양한 것으로 보고하였다.
6). MgCl2-6H2O 및 MgSO4-7H2O 등을 첨가한 시험구에서는 균주의 생육이 약간 양호하였으나 HgCL, CoC12-6H2O, ZnSO4-7H2O 및 ZnCI 등을 첨가했을 때는 생육이 크게 억제되었으며, 항균활성도 전혀 나타나지 않았다. 이상의 결과로 B.
전통장류 발효식품의 저장성과 발효 도를 증진시킬 우수한 균주를 분리할 목적으로 균원시료로부터약 150여종의 균주를 1차 선별한 후, 성장속도가 빠르면서 SM, AM 및 CM의 평판배지 상에서 clear zone이 뚜렷한 균주를 2 차 분리하여 여러 종류의 유해미생물에 대한 항균활성을 측정한 결과는 Table 1에 나타내었다. SM 및 AM배지 상에서는 HS2, HS18, 및 HS25, CM배지 상에서는 HS9, HS25 및 HS32 분리균주의 clear zone이 비교적 크게 나타났다. 그리고 항균 활성을 검토한 결과, HS2 분리균주는 E.
aureus 및 Pro. mirabilis에 대한 항균활성도 균의 생육이 왕성한 soluble starch, cellobiose 및 raffinose 등을 첨가한 시험구에서 높게 나타났다. 이상의 결과로 B.
coli 및 Pro. mirabilis의 유해미생물에 대해서는 배양 84시간째에도 약 30%의 항균활성을 나타내었다(Fig. 10, 사진 A 및 E). 이상의 결과로 B.
parahaemolyticns 등에 항균활성을 나타내었다. 그리고 HS25 분리균주는 B. cereus를 비롯한 모든 유해미생물에 대하여 비교적 높은 항균 활성을 나타내었다. 이상의 결과로 3종류의 평판배지 상에서 clear zone이 뚜렷하며 다양한 유해미생물에 대한 항균 활성이 우수한 HS25균주를 최종 분리균주로 선정하였고, 이 분리 균주의 형태학적, 생화학적 및 유전학적 특성 등을 검토하였다.
subtilis HS25 균주의 항균활성은 균의 생육과 깊은 관계가 있는 것으로 판단되었으며, 최종 탄소원으로 soluble starch를 결정하였다. 또한 B. subtilis HS25는 raffinose를, 첨가한 시험구에서도 잘 생육하는 것으로 보아 대두 중에 비 소화성당으로 존재하는 raffinose 를 분해할 수 있는 galactosidase 및 invertease의 분비력이 우수할 것으로 예측된다.
배양온도를 15~50℃의 범위로 변화시키면서 배양한 결과 25~45°C 범위에서 미생물의 생육이 매우 왕성하였고 유해 미생물에 대한 항균활성도 높게 나타났다. 이상의 결과로 B.
이상의 결과로 3종류의 평판배지 상에서 clear zone이 뚜렷하며 다양한 유해미생물에 대한 항균 활성이 우수한 HS25균주를 최종 분리균주로 선정하였고, 이 분리 균주의 형태학적, 생화학적 및 유전학적 특성 등을 검토하였다. 분리한 HS25균주는 편모를 가지며, 세포벽 외부에 다량의 점질 물을 형성하는 간균으로 관찰되었다(Fig. 1). 그리고 내생포자를 형성하며 세포의 크기는 0.
MgCl2-6H2O 및 MgSO4-7H2O 등을 첨가한 시험구에서는 균주의 생육이 약간 양호하였으나 HgCL, CoC12-6H2O, ZnSO4-7H2O 및 ZnCI 등을 첨가했을 때는 생육이 크게 억제되었으며, 항균활성도 전혀 나타나지 않았다. 이상의 결과로 B. subtilis HS25 균주의 배양 및 항균물질 생산을 위한 무기염은 0.05%의 MgClrGHQ로선 정 하였다. Chun 등29)은 B.
5의 범위에서 높게 나타났다. 이상의 결과로 B. subtilis HS25 균주의 생육 및 항균물질 생산을 위한 초기 pH는 배지를 제조할 때 pH 조정이 필요가 없는 pH 7.5로 결정하였다. Barehoot 등33)은lactacin B의 경우 pH 6.
대한 항균활성도 높게 나타났다. 이상의 결과로 B. subtilis HS25 균주의 최적 배양온도는 350C로 결정하였다. Berridge 등功 은 Streptococcus lactis의 경우 배양온도에 따라 생성되는 물질의 패턴이 변화되는 것을 발견하였으며, nisin생성의 최적 온도는 28~30℃로 보고된 바 있어 분리한 B.
mirabilis에 대한 항균활성도 균의 생육이 왕성한 soluble starch, cellobiose 및 raffinose 등을 첨가한 시험구에서 높게 나타났다. 이상의 결과로 B. subtilis HS25 균주의 항균활성은 균의 생육과 깊은 관계가 있는 것으로 판단되었으며, 최종 탄소원으로 soluble starch를 결정하였다. 또한 B.
교반속도가 240 rpm까지 증가함에 따라 균의 생육 및 항균물질의 활성이 서서히 증가하여 120rpm 이상에서는 완만한 곡선을 나타내었다. 이상의 결과로 B. subtilis HS25균주를 배양할 때 교반속도는 균 체증식 및 항균물질 생산을 고려하여 180 rpm 정도가 적당한 것으로 판단되었다.
10, 사진 A 및 E). 이상의 결과로 B. subtilis HS25의 항균물질 생산을 위한 배양시간은 12〜36시간 정도가 적당한 것으로 생각되었다. Daba 등34)이 Leuconostoc 로부터 mesenterocin 5를 생산할 때 배양 8시간에서 최대 활성을 나타내었으나, 배양 24시간에서는 90% 이상의 활성이 소실되었다고 보고한 내용과 비교하면 B.
질소원의 최적 첨가농도를 조사한 결과 yeast extract 및 peptone^- 단독으로 첨가하는 것 보다 2종류의 성분을 0.5%씩 혼합하여 첨가한 시험구에서 균의 생육 및 항균활성이 양호한 것으로 나타났다(Table 3). 이상의 결과로 B.
후속연구
본 연구자들은 항균물질 및 효소의 분비력 이 우수한 발효 미생물을 순수분리하여 전통메주를 발효시킬 때 이용한다면 전통 메주의 여러가지 위생적인 문제점 등거)이 해결됨과 동시에 장류 발효식품의 생리활성 및 저장성이 증진된 기능성된장의 개발이 가능할 것으로 생각되었다. 본 연구에서는 전통 콩 된장으로부터 단백 질 및 전분분해력 이 높으면서 항균물질 생 산성 이 우수한 미생물을 순수분리하여 그 미생물의 특성을 밝히고 항균물질 대량생산을 위한 배양조건 등을 검토하였다.
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