국내에서 새로 육성된 장미의 부가가치를 향상시키고 천연 식품소재로서 기능성을 탐색하는 기초연구의 일환으로 5개 장미 품종을 대상으로 유기용매 추출물을 제조하고 장미꽃 추출물이 CHO 세포의 생육에 미치는 영향을 MTT법으로 조사하였다. 장미 추출물들은 추출용매의 종류와 첨가농도에 따라 CHO 세포의 증식을 촉진하거나 생육을 억제하였으며 품종에 따른 차이는 없었다. Ether로 추출한 장미꽃 추출물을 5 ${\mu}$g/ml 농도로 첨가한 경우 대조군에 비하여 CHO 세포의 증식촉진효과가 가장 높았다. 이러한 결과는 장미꽃은 CHO 세포의 증식을 조절하는 생리활성을 나타내며, 신 기능성 식품소재로서 활용하는 가능성을 시사한다.
국내에서 새로 육성된 장미의 부가가치를 향상시키고 천연 식품소재로서 기능성을 탐색하는 기초연구의 일환으로 5개 장미 품종을 대상으로 유기용매 추출물을 제조하고 장미꽃 추출물이 CHO 세포의 생육에 미치는 영향을 MTT법으로 조사하였다. 장미 추출물들은 추출용매의 종류와 첨가농도에 따라 CHO 세포의 증식을 촉진하거나 생육을 억제하였으며 품종에 따른 차이는 없었다. Ether로 추출한 장미꽃 추출물을 5 ${\mu}$g/ml 농도로 첨가한 경우 대조군에 비하여 CHO 세포의 증식촉진효과가 가장 높았다. 이러한 결과는 장미꽃은 CHO 세포의 증식을 조절하는 생리활성을 나타내며, 신 기능성 식품소재로서 활용하는 가능성을 시사한다.
The effects of rose flower extracts on the growth of CHO cells were examined. Rose flower extracts were prepared by solvent extraction with hexane, ethylacetate and ether from five domestic rose cultivar, Rosa hybrida L. cv. Mihyang, Noeul, Redqueen, Whitelady and Pinklady, respectively. The effects...
The effects of rose flower extracts on the growth of CHO cells were examined. Rose flower extracts were prepared by solvent extraction with hexane, ethylacetate and ether from five domestic rose cultivar, Rosa hybrida L. cv. Mihyang, Noeul, Redqueen, Whitelady and Pinklady, respectively. The effects of rose flower extracts on the growth of CHO cells were measured using MTT colormeteric assay and compared with control. Extracts of rose flowers showed stimulative effect or inhibitory effect on the growth of CHO cells depending on the kinds of solvent and concentration of extracts. Ether extracts of rose flower showed a more effective stimulative effect on the growth of CHO cells at the concentration of 5 ${\mu}g{\cdot}ml^{-1}$. These results suggest that rose flower has the simulating activity on the growth of CHO cells and a potential as new functional food source.
The effects of rose flower extracts on the growth of CHO cells were examined. Rose flower extracts were prepared by solvent extraction with hexane, ethylacetate and ether from five domestic rose cultivar, Rosa hybrida L. cv. Mihyang, Noeul, Redqueen, Whitelady and Pinklady, respectively. The effects of rose flower extracts on the growth of CHO cells were measured using MTT colormeteric assay and compared with control. Extracts of rose flowers showed stimulative effect or inhibitory effect on the growth of CHO cells depending on the kinds of solvent and concentration of extracts. Ether extracts of rose flower showed a more effective stimulative effect on the growth of CHO cells at the concentration of 5 ${\mu}g{\cdot}ml^{-1}$. These results suggest that rose flower has the simulating activity on the growth of CHO cells and a potential as new functional food source.
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문제 정의
특히, 수입된 장미품종을 대체할 목적으로 최근 국내에서 새로 육종된 장미의 생리활성 탐색에 관한 연구는 매우 미진한 실정이다. 본 연구는 국내에서 육종된 국산장미의 부가가치 향상과 천연식품소재로서 가능성을 탐색하는 기초연구의 일환으로 Chinese Hamster Ovary(CHO) 세포를 이용하여 장미꽃 주줄물이 동물 세포의 증식에 미치는 영향을 조사하였다.
제안 방법
세포 성장률의 측정. CHO 세포(DMEM media in 10% FBS» 이용하여 P-100 dish에서 5 x 105 cells/m/을 loading 한 후 2일 동안 배양한 다음 2 X 106 cells/m/(viability 90% 이상) 으로 하여 3-[4, 5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay⑹로 세포 성장률을 측정하였다. 기하급수적으로 성장하는 CHO 세포의 농도를 7 X 105 cells/mZ로 조정한 다음 96 well microplate0!] 7x 105celE/lOOMwell로 loading 하여 CO, incubator(5% CO2.
동물세포의 증식에 미치는 장미꽃 추출물의 직접적인 영향을 검토하고자 새로 육종된 장미 5개 품종(미향, 노을, 레드퀸, 화이트 레이디 및 핑크레이디)으로부터 꽃잎만을 채취한 후 다른 연구 m에서 생리활성 효과가 높은 것으로 나타난 hexane, ether, ethylacetate를 사용하여 추출물을 제조하고 CHO 세포를 이용하여 장미꽃 추출물이 동물세포의 증식에 미치는 영향을 MTT 를 이용한 colormetric assay 방법으로 측정하였다.
37℃)에서 24시간 동안 배양하였다. 배양액에 추출 용매별로 5, 50, 500 pg/mZ 농도의 장미꽃추출물을 10 ㎕씩 첨가하고 CO2 incubator(5% CO2. 37℃)에서 24시간 동안 배양한 후 흡인기로 상등액을 조심스럽게 제거하고 fresh medium으로 1회 세척한 후 5 μg/nU의 MTT가 포함된 medium을 100 ㎕씩 첨 가하고 CO2 incubator(5% CO2. 37。(3)에서 4시간 동안 더 배양한 다음 각 well에 form azan이 형성되면 isopropanol 혼합액 200 ㎕를(isopropanol 9.
실험에 사용된 세포주는 Chinese Hamster Ovaiy(CHO) 세포를 사용하였다. 세포의 배양액은 DMEM(GIBCO Lab., Grand Island, NY) 에 10% Fetal bovine serum(FBS)을 첨가하고, 페니실린(lOOunits/me과 스트렙토마이신(100 Hg/mZ)을 보충하여 만들었다. 세포는 5% CQ로 조정된 배양기에서 370(C로 배양하였으며, 장미꽃 추출물을 첨가하기 전에 2일 동안 배양된 세포를 실험에 사용하였다.
장미꽃 분말 10g 내외를 원통여지에 넣고 둥근 플라스크에 hexane, ether, ethyl acetate를 200-300 ml 정도 채운 다음 8(TC의 항온 수조 속에서 48시간 동안 환류 추출하였다. 얻어진 추출물은 감압농축흐}고 동결건조한 후 Dimethysulphoxide (DMSO, Sigma Co. St. Louis, MO)로 다시 용해한 다음 CHO 세포에 첨가하기 직전에 DMEM 배지를 이용하여 5, 50, 500 pg/m/ 농도로 희석하였으며, DMSO에 의한 효과를 최소화하기 위하여 DMSCO의 최종농도가 0.1%를 넘지 않도록 하였다.
장미꽃 추출물은 soxhlet장치를 이용하여 제조하였다. 장미꽃 분말 10g 내외를 원통여지에 넣고 둥근 플라스크에 hexane, ether, ethyl acetate를 200-300 ml 정도 채운 다음 8(TC의 항온 수조 속에서 48시간 동안 환류 추출하였다. 얻어진 추출물은 감압농축흐}고 동결건조한 후 Dimethysulphoxide (DMSO, Sigma Co.
대상 데이터
시험재료. 국내에서 새로 육종된 5개의 장미 품종 미향, 노을, 레드퀸, 화이트레이디 및 핑크레이디는 농촌진흥청 원예연구소 포장에서 채취하여 꽃잎만을 분리하고 동결건조한 후 -20 ℃ 냉동고에 분말을 저장하면서 실험에 사용하였다.
세포 및 배양방법. 실험에 사용된 세포주는 Chinese Hamster Ovaiy(CHO) 세포를 사용하였다. 세포의 배양액은 DMEM(GIBCO Lab.
추출물의 제조. 장미꽃 추출물은 soxhlet장치를 이용하여 제조하였다. 장미꽃 분말 10g 내외를 원통여지에 넣고 둥근 플라스크에 hexane, ether, ethyl acetate를 200-300 ml 정도 채운 다음 8(TC의 항온 수조 속에서 48시간 동안 환류 추출하였다.
성능/효과
4와 같다. 5 μg/mZ의 농도로 추출물을 첨가하였을 때 CHO 세포수는 ether, hexane, ethylacetate의 순으로 많았고 ether 추출물의 경우 대조군에 비하여 세포수가 12% 증가한 반면 50 ng/mZ 이상의 농도에서는 추출용매의 종류에 관계없이 대조군 보다 세포수가 감소하였다. 다른 장미꽃과는 달리 핑크레이디의 경우 CHO 세포의 생육은 추출용매에 따라 큰 차이를 보였는데, 5|ig/mZ 농도에서 ether 추출물에서만 세포수가 8% 증가하였고 hexane과 ethylacetate 추출물은 시험된 모든 농도에서 대조군에 비하여 CHO 세포수가 감소하였다(Fig.
1과 같다. Ether와 ethylacetate 추출물을 5 μg/m/와 50 |ig/m/ 농도로 첨가한 경우 추출물을 첨가하지 않은 대조군에 비하여 세포 수가 2T%가 증가하였고, hexane 추출물과 500 μg/m/의 고농도로 추출물을 처리한 경우 대조군에 비하여 세포수가 95% 이하 수준으로 감소하였다. Fig 2는 장미꽃 노을추출물이 CHO 세포의 증식에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
국산 장미 추출물은 추출물의 첨가농도와 추출용매의 종류에 따라 CHO 세포의 생육에 영향을 주어 CHO 세포의 증식을 촉진하거나 생육을 억제하였으며, 품종에 따른 차이는 없었다. 식물에 함유된 화합물의 세포보호 작용은 생약연구의 경향으로 주로 항산화 작용과 관련이 있는 것으로 인식되고 있다17) 따라서 장미꽃 추출물이 동물세포의 증식을 촉진하는 생리활성은 장미꽃이 가지는 항산화력과 깊은 관련이 있을 것으로 생각된다.
5 μg/mZ의 농도로 추출물을 첨가하였을 때 CHO 세포수는 ether, hexane, ethylacetate의 순으로 많았고 ether 추출물의 경우 대조군에 비하여 세포수가 12% 증가한 반면 50 ng/mZ 이상의 농도에서는 추출용매의 종류에 관계없이 대조군 보다 세포수가 감소하였다. 다른 장미꽃과는 달리 핑크레이디의 경우 CHO 세포의 생육은 추출용매에 따라 큰 차이를 보였는데, 5|ig/mZ 농도에서 ether 추출물에서만 세포수가 8% 증가하였고 hexane과 ethylacetate 추출물은 시험된 모든 농도에서 대조군에 비하여 CHO 세포수가 감소하였다(Fig. 5).
이와 관련하여 이 등19)은 암세포에 쑥 추출물을 첨가한 경우 세포의 모양이 변형, 위축되고, 암세포의 크기와 분포가 현저하게 감소하는 세포 조직학적 해석을 제시한 바 있으며 Perez 등30)도 Calendula officinalis 주줄물은 일정농도 이상에서 rat liver cell의 생육을 저해한다고 하였다. 또한 장미꽃 추출물은 추출 용매의 종류에 따라 CHO 세포의 생육에 차이를 보였으며, CHO 세포의 증식 촉진효과는 ether 추출물이 가장 효과적이었다. 이것은 국산장미의 꽃 속에 함유된 CHO 세포증식 촉진인자가 ether층으로 이행되었음을 의미하며, 이러한 결과는 ether 로 추출한 장미꽃 추출물이 3T3-L1 fibroblast cell의 성장을 촉진하는 효과가 가장 높았다는 전 등11)의 보고와도 잘 일치한다.
참고문헌 (20)
Cai, Y. J., L.P. Ma, L. F. Hou, B. Zhou, L.Yang, and Z. L. Liu. (2002) Antioxidant effects of green tea polyphenols on free radical initiated peroxidation of rat liver microsomes. Chemistry and Physics of Lipids. 120, 109-117
Chung, W. T., Lee, S. H., Cha, M. S., Sung, N. S., Hwang, B. and Lee, H. Y. (2001) Biological activities in roots of Glycyrrhiza uralensis Fisch. Korean J. Medicinal Crop Sci. 9, 45-54
HwangBo, H. S. and S. S. Ham. (2000) Antimutagenic and cytotoxic effects of Aster scaber root ethanol extract. Korean J. Food Sci. Technol. 31, 1065-1070
Kim, T. J. (1986) In Korean resources plant, Vol. ${\delta}$ , p.232. Seoul National University, Seoul
Park, H. J., Park, J. H., Moon, J. O., Lee, K. T. and Jung, W. T. (1999) Isoflavone glycosides from the flower of Pueraria lobata. Phytochemistry 51, 147-151
Kinjo, J., Aoki, K., Okawa, M., Shu, Y., aw Nohara, T., Nakajima, Y., Yamazaki, T., Nuho, Y. and Kurashige, T. (1999) HPLC profile analysis of hepato protective oleaneneglucuronides in Pucranae Flos. Chem Pham Bull. 47, 708-710
Lee, J. S., Kim, N. Y., Lee, K. H., Kim, G S., Park, H. J., Choi. J. W. and Kim, S. H. (2000) Effects of flower of Pueraria lobata on lipid peroxidation and activities of alcohol metabolic enzymes in alcohol-treated rats. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 29, 935-942
Chung, T. Y., Kim, M. A. and Jones, A. D. (1996) Antioxidative activity of phenolic acids isolated from jindalrae flower (Rhododendron mucronulatum turzaninow). J. Korean Soc. Agric. Chem. Biotechnol. 39, 506-511
Nam, S. H., Yang, M. S. (1995) Antibacterial activities of extracts from Chrysanthemum boreale. J .Korean Soc. Agric. Chem Biotechnol., 38, 269-272
Chun, H. K., Choi, N. S., Park, S. Y. and Yoo B. S. (2004) Effect of edible flower extracts on antioxidative and biological activities. Korean J. Community Living Science, 15, 67-76
Lee, J. S. (2002) Measures to raise the competitiveness of Korean floricultural products, In Proceedings of Agricultural Science Symposium, p. 205, Seoul
Kim, Jin Ki, Kim, Jeong Bu, Kim, Zhoo Hyeon (2002) Breeding of rose 'sabrina' with vigorous growth and pink color. Kor. J. Hart. Sci. Technol., 20, 360-362
Bang, C. S., Song, C. Y., Lee, J. S., Huh, K. Y. and Song, J. S. (1999) Effects of pretreatment and storage conditions on quality and vase life of cut 'Red Sandra' rose. Kor. J. Hart. Sci Technol. 17, 762-764
Kim, H. J., K. Kim, N. S. kim, and D. S. Lee. 2000. Determination of floral fragrances of Rosa Hybrida using solid phase trapping-solvent extraction and gas chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 902, 389-404
cudiero, D. A., Shoemarker, R. H., Paull K. D., Monks, A., Tierney, S., Nofziger, T. H., Currens, M. J., Seniff, D. and Boyd, M. R. (1988) Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines. Cancer Res. 48, 4827-4833
Lee, K. T., Sohn, I. C., ng, E. A., Kim, D. H., Choi, S. K., Choi, J. W. and Park, H. J. (1999) Antioxidative and cytoprotective effects of isoflavones isolated from Pueraria thunbergiana flowers. Yakhak Hoeji, 43, 736-742
Vander Jagt, T. J., Ghattas, R., Vander Jagt, D. J., Crossey, M. and Glew, R. H. (2002) Comparison of the total antioxidant content of 30 widely used medicinal plants of New Mexico. Life sciences, 70, 1035-1040
Hwang, Y. K., Kim, D. C., Hwang, W. I. and Han, Y. B. (1998) Inhibitory effect of Artemisia princeps Pampan. extract on growth of cancer cell lines. Korean J. Nutr. 31, 799-808
Perez, C. J. I., Cruz, J. G., Lciea, V. J. A., Arce P. E, Fattel, F. S., Villa, T. S. (2002) Genotoxic and anti-genotoxic properties of Calendula officinalis extracts in rat liver cell cultures treated with diethylnitrosamine. Toxieol. in Vitro. 16, 253-258
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