장미과 식물(에탄을 추출)의 항산화력을 측정하기 위하여 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)자유 라디칼 생성 시스템을 이용하여 하였다. 또한 산화 환원 과정을 통하여 피부의 과잉 색소 생성에 관련된 멜라닌 생합성 과정의 조절 가능성을 조사하였다. 장미과 식물중에서 Prunus sargentii, Rubus coreanus, Chaenomeles sinensis, Photinia glabra와 Pyrus pyrifolia은 생합성 과정에서 dopa [3-(3,4-dihydroxyphenyl) alanine]를 도파크롬으로 변환시켜 주는 tyrosinase 저해 효과를 나타내었다. MTT 실험법은 장미과 에탄올 추출물의 사람 섬유아세포에 미치는 독성정도를 실험하기 위해 사용되었다. 장미과 식물중 특히 Prunus sargentii의 껍질, Phorinia glabra의 껍질과 나무 그리고 Chaenomeles sinenis의 잎, 껍질, 나무 모든 부분에서 mushroom tyrosinase에 대해 $100{\;}{\mu}g/mL$에서 50\%$ 이상의 저해 활성을 보였으며, $10{\;}{\mu}g/mL$ 농도에서 강한 라디칼 소거 효과를 나타내었다. 또한 이들 추출물은 사람 섬유아 세포에 대해 높은 생존율을 나타냄으로써 멜라닌 형성 과정을 조절할 수 있을 것으로 기대한다.
장미과 식물(에탄을 추출)의 항산화력을 측정하기 위하여 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 자유 라디칼 생성 시스템을 이용하여 하였다. 또한 산화 환원 과정을 통하여 피부의 과잉 색소 생성에 관련된 멜라닌 생합성 과정의 조절 가능성을 조사하였다. 장미과 식물중에서 Prunus sargentii, Rubus coreanus, Chaenomeles sinensis, Photinia glabra와 Pyrus pyrifolia은 생합성 과정에서 dopa [3-(3,4-dihydroxyphenyl) alanine]를 도파크롬으로 변환시켜 주는 tyrosinase 저해 효과를 나타내었다. MTT 실험법은 장미과 에탄올 추출물의 사람 섬유아세포에 미치는 독성정도를 실험하기 위해 사용되었다. 장미과 식물중 특히 Prunus sargentii의 껍질, Phorinia glabra의 껍질과 나무 그리고 Chaenomeles sinenis의 잎, 껍질, 나무 모든 부분에서 mushroom tyrosinase에 대해 $100{\;}{\mu}g/mL$에서 50\%$ 이상의 저해 활성을 보였으며, $10{\;}{\mu}g/mL$ 농도에서 강한 라디칼 소거 효과를 나타내었다. 또한 이들 추출물은 사람 섬유아 세포에 대해 높은 생존율을 나타냄으로써 멜라닌 형성 과정을 조절할 수 있을 것으로 기대한다.
DPPH radical-generating system was used to evaluate the antioxidant properties of the Rosaceae. The inhibitory effects of ethanolic extracts from Rosaceae plants were investigated on melanin biosynthesis which is closely related to hyperpigmentation. Of the Rosaceae extracts, Prunus sargentii, Rubus...
DPPH radical-generating system was used to evaluate the antioxidant properties of the Rosaceae. The inhibitory effects of ethanolic extracts from Rosaceae plants were investigated on melanin biosynthesis which is closely related to hyperpigmentation. Of the Rosaceae extracts, Prunus sargentii, Rubus coreanus, Chaenomeles sinensis, Photinia glabra and Pyrus pyrifolia showed a potent inhibition of tyrosinase, the enzyme which converts 3-(3,4-dihydroxyphenyl) alanine (dopa) to dopachrome in the melanin biosynthetic process. Furthermore, MMT assay was used to check the cytotoxicity of extracts on the human foreskin fibroblast cell line, Hs68. Among the Rosaceae, bark of Prunus sargentii, bark wood of Photinia glabra and all parts or Chaenomeles sinensis showed more than $50\%$ inhibition of mushroom tyrosinase activity at 100 ug/mL and more than $80\%$ of strong DPPH radical-scavenging activity at 10 ug/mL. In audition to, they had no cytotoxic activity on Hs68. These results suggest that these extracts might be except a controler in pigmentation.
DPPH radical-generating system was used to evaluate the antioxidant properties of the Rosaceae. The inhibitory effects of ethanolic extracts from Rosaceae plants were investigated on melanin biosynthesis which is closely related to hyperpigmentation. Of the Rosaceae extracts, Prunus sargentii, Rubus coreanus, Chaenomeles sinensis, Photinia glabra and Pyrus pyrifolia showed a potent inhibition of tyrosinase, the enzyme which converts 3-(3,4-dihydroxyphenyl) alanine (dopa) to dopachrome in the melanin biosynthetic process. Furthermore, MMT assay was used to check the cytotoxicity of extracts on the human foreskin fibroblast cell line, Hs68. Among the Rosaceae, bark of Prunus sargentii, bark wood of Photinia glabra and all parts or Chaenomeles sinensis showed more than $50\%$ inhibition of mushroom tyrosinase activity at 100 ug/mL and more than $80\%$ of strong DPPH radical-scavenging activity at 10 ug/mL. In audition to, they had no cytotoxic activity on Hs68. These results suggest that these extracts might be except a controler in pigmentation.
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문제 정의
본 연구에서는 항산화성을 가진 장미과 식물로부터 에탄올 추출을 하여 얻어진 물질이 멜라닌 생성에 있어서 주효소인 tyrosinase에 저해 활성 정도를 실험하였으며 또한 이들의 세포에 대한 독성정도를 조사하였다.
제안 방법
배양 후 MTT 용액(5 mg/mL)을 각 well에 첨가한 뒤 2 h 동안 추가 배양하고, MTT가 첨가된 배지를 버린 후, 각 well당 isopropanol을 500 μL씩 가하여 교 반하여 ELISA plate reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료를 처리하지 않고 배지만으로 배양하여 설정한 후 흡광도를 비교하였다.
또한 세포의 증식이나 독성 실험을 위해 MTT를 사용하여 장미과의 에탄올 추출물을 사람 섬유아 세포에 처리하여 실험을 수행하였다. 대부분이 100 μg/mL 농도를 제외하고는 독성을 나타내지 않았다(Table 3).
여기에 시료를 농도에 따라 40μL 를 첨가하여 37℃ 에서 30 min간 효소반응을 진행시켰다. 반응생성물인 도파크롬의 흡수파장인 490 nm에서 흡광도를 측정하여 시료의 효소 저해 활성을 위의 식에 따라 구했다.
항산화 활성은 DPPH (Sigma)를 이용하여 시료의 라디칼 소거효과를 측정하였다. 0.
이론/모형
사람 섬유아 세포(human normal fibroblast, Hs68, ATCC, CRL-1635)를 이용하여 MTT [3-(4, 5-dimethy- lthiazo-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide, Sigma] 시험법을 수행하였다. 섬유아 세포주 Hs68을 24 well- plate에 5 x 104 cells/well씩 분주하여 10% 우태아혈청 /DMEM (GIBCO) 배지로 24 h 배양시킨 다음, 새로운 배지와 적정 농도 범위(10~100 ”g/mL)에서 단계적으로 희 석한 시료를 가하고 다시 48 h 동안 CO2 incubator에서 배양하였다.
성능/효과
그 중 Prunus sargentii의 껍질과 나무, Chaenomeles sinensise} 껍질과 잎, Photinia glabra와 Pyms pyrifolia의 껍질은 10 飓/mL에서 a-tocopherol에 비해 다소 우수한 DPPH 라디칼 소거제로서 나타났다. 사용된 식물 부위 중 특히 bark에서 80% 이상(10 μg/mL)의 소거능을 나타내었으며, Prunus sargentii의 껍질은 ascorbic acid와 비슷한 정도의 효과를 나타내었다.
장미과의 에탄올 추출물이 멜라닌 생성에 미치는 영향을 검토하기 위해 tyrosinase 효소에 의한 dopa의 산화에 대한 영향을 조사한 대부분의 시료 1000 μg/mL에서 kojic acid나 ascorbic acid보다 높지 않으나 resveratrol보다는 높은 억제 작용을 하는 것이 다소 나타났다(Table 2). 그러나 100 μg/mL에서 Prunus sar-gentii는 kojic acid보다 높은 저해활성을 나타내었으며 Photinia glabra, Rubus coreanus, Chaenomeles sinensis의 잎, Pyrus pyrifolia의 나무는 ascorbic acid와 비슷하거나 높은 저해 작용을 하는 것이 관찰되었다. 10 μg/mL의 농도에서는 대부분의 시료가 kojic acid나 ascorbic acid 보다 dopa의 자동 산화를 저해하였다.
이 라디칼은 환원되어 hydrazine의 형태로 되면서 탈색되어 흡광도 감소로 이를 측정할 수 있다. 본 연구에서는 시료에 의해서 라디칼에 대한 소거 능력을 측정하는 DPPH를 사용하여 천연물들을 검색한 결과 장미과 식물에서 높은 항산화 능력을 나타내었다. Table 1에 장미과 식물의 에탄올 추출물에 대한 DPPH 소거 활성 정도를 정리하였다.
그 중 Prunus sargentii의 껍질과 나무, Chaenomeles sinensise} 껍질과 잎, Photinia glabra와 Pyms pyrifolia의 껍질은 10 飓/mL에서 a-tocopherol에 비해 다소 우수한 DPPH 라디칼 소거제로서 나타났다. 사용된 식물 부위 중 특히 bark에서 80% 이상(10 μg/mL)의 소거능을 나타내었으며, Prunus sargentii의 껍질은 ascorbic acid와 비슷한 정도의 효과를 나타내었다. 이 결과는 Cho et al.
이상의 결과로부터 장미과 중 Prunus sargentii의 껍질, Chaenomeles sinensis의 모든 부분, Photinia glabra의 껍질과 나무는 높은 항산화력과 tyrosinase 활성 저해능을 가지며 또한 사람 섬유아 세포에서 독성을 나타내지 않아 멜라닌 색소의 과잉 생성에 의해 진행되는 여러 단계를 조절할 수 있을 것이라고 사료된다. 특히 Photinia glabra의 경우 생물학적인 연구보고가 미흡하여 앞으로의 연구가 주목된다.
따라서 이 tyrosinase 효소를 저해하거나 그 중간체들의 산화 반응을 억제함으로써 멜라닌 생성을 감소시킬 수 있을 것으로 보여지고 있다. 장미과의 에탄올 추출물이 멜라닌 생성에 미치는 영향을 검토하기 위해 tyrosinase 효소에 의한 dopa의 산화에 대한 영향을 조사한 대부분의 시료 1000 μg/mL에서 kojic acid나 ascorbic acid보다 높지 않으나 resveratrol보다는 높은 억제 작용을 하는 것이 다소 나타났다(Table 2). 그러나 100 μg/mL에서 Prunus sar-gentii는 kojic acid보다 높은 저해활성을 나타내었으며 Photinia glabra, Rubus coreanus, Chaenomeles sinensis의 잎, Pyrus pyrifolia의 나무는 ascorbic acid와 비슷하거나 높은 저해 작용을 하는 것이 관찰되었다.
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