[논문]쥐방울과 한약의 수치에 따른 aristolochic acid 함량변화

김민석; 이정복; 박시형; 김동욱; 민오진; 류동영

쥐방울과 한약의 수치에 따른 aristolochic acid 함량변화
Quantitative Change of Aristolochic Acid Contents by Processing Methods on the Plants of Aristolochiaceae 원문보기

생약학회지, v.38 no.2 = no.149, 2007년, pp.123 - 127

김민석 (목포대학교 생명과학부 생약자원전공) , 이정복 (새롬제약 수치법제연구소) , 박시형 (목포대학교 생명과학부 생약자원전공) , 김동욱 (목포대학교 생명과학부 생약자원전공) , 민오진 (목포대학교 생명과학부 생약자원전공) , 류동영 (목포대학교 생명과학부 생약자원전공)

Abstract ▼ AI-Helper

Aristolochic acid (AA) included in the plants Aristolochiaceae have been well known to be nephrotoxic and carcinogenic inducer and to cause renal disease such as Chinese Herb Nephropathy (CHN). In this study, we used a high performance liquid chromatopaphy-mass spectrometry (HPLC-MS) under the positive ion detection mode for the quantitative change of aristolochic acid-I and-II (AA-I and AA-II) in Aristolochiaceae (Aristolochia contorta Bunge, Aristolochia debilis Sieb. et Zucc., Aristolochia fangchi Wu), some related plants (Cocculus trilobus De candolle, Inula helenium Linne, Saussurea lappa Clarke), and its prescriptions (防己茯笭湯, 定喘散) with or without processing. Here, the processing methods and prescriptions in oriental medicine were generally used to alleviate toxicity or alter property of herbal medicines. However, the concentrations of AA-I and AA-II were highly determined in processed material extracts rather than unprocessed those, not measured in some related plants. Also, the concentrations of AA-I and AA-II even at the prescriptions mixed the plants of Aristolochiaceae were detected to range from 0.73 to 2.53 ppm. Thus, the present results suggest that the content of AA-I and AA-II contained to plants of Aristolochiaceae was not reduced by the processing methods or prescriptions which can induce the physico-chemical change and pharmacological transformation in traditional herbal medicines.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

더불어 한의학에서는 단미 한약재보다 치료효과를 더욱 증강시키거나 독성을 완화시키는방법으로 한약재를 서로 혼합하는 한방방제를 이용하기도한다.23)따라서 본 연구에서는 한약의 수치와 혼합 한방방제가 쥐방울과 한약재에 함유된 신장독성 유발물질인 아리스톨로크산 성분의 함량변화에 어떠한 영향을 미치는지 확인하기 위하여 high performance liquid chromatographymass spectrometry(HPLC-MS)의 기기분석과 MS/MS 분석법을 통하여 아리스톨로크산 성분의 함량 변화를 비교 분석하고자 한다.
수치에 따른 AA-I과 AA-II 성분의 함량변화 분석 - 본연구는 쥐방울과 한약재에 함유된 신장독성 유발물질인 아리스톨로크산 성분의 독성을 완화시키고자 한의학에서 전통적으로 활용하고 있는 한약의 수치법과 약물을 혼합하는 한방방제 제형 방법을 이용하였다. 마두령 .

제안 방법

1. 강僵)마두령과 강북마두령 - 마두령 100 g과 북마두령 75 皆1] 생강즙 각각 1000, 800 ml를 첨가하여 19시간 동안 침한 후에 한약재를 건져내어 220℃에서 20분 동안 건조하였다.
2. 밀鑑)마두령과 밀북마두령 - 벌꿀(동서벌꿀) 30 g을 중탕하여 연밀을 제조한 후에 뜨거운 증류수를 첨가한 연밀을 각각 800, 700 ml에 마두령 100 g과 북마두령 75 g을 첨가하여 19시간 동안 침하고 한약재를 건져내어 220℃에서 20분 동안 건조하였다.
HPLC와 질량분석기의 조건 - HPLC 분석방법은 Waters 사의 SymmetiyR CI8(3.5 pm, 2.1 x 100mm) 컬럼을 사용하였고, 이동상은 0.2% acetic acid가 함유된 MeOH:H₂O(5:95, v/v) 용매를 0.2mL/min의 유속으로 용출시켰으며, UV-VIS 검출기의 254nm 파장으로 검출하였다. 질량분석은 전기분무 이온화법으로 nebulizer gas는 40 psi, dry gas의 유량은 91/min, dry gas의 온도는 175℃, capillary voltage 4000 V, mass range 100-1000 m/z, positive ion modeS.
밀마두령과 주.강광방기를 첨가하여 AA-I과 AA-H 성분의 함량을 비교 분석 하였다 (Table I)- 그 결과, 마두령이 포함된 정천산 한방방제 추출물에서는 마두령 추출물에 비하여 AA-H 성분의 함량에는 변화가 없었으나, 수치한 강.밀마두령이 혼합된 정천산 추출물에서 AA-I 성분이 1.
강광방기(거피 강광방기) - 광방기 50 g에 생강즙 200ml를 첨가하여 19시간 동안 침한 후에 광방기를 건져내어 220℃에서 30분 동안 건조하였다. 거피 광방기는 외피를 0.5~ 1.0 mm 흰 부분이 보일 정도로 껍질을 제거한 후강광방기와 같은 방법으로 수치가공 하였다.
북마두령 .광 방기의 수치는 생강즙, 꿀, 알코올(술)과 같은 보료에 약물을 침하고 고온에서 건조시키는 방법을 이용하였다. Table I의 결과를 보면, 밀북마두령을 제외하고는 모든 수치 단미 한약재의 추출물들에서 AA-I과 AA-n 성분의 함량이 오히려 증가하는 경향을 나타냈다.
시료용액의 조제 - 모든 시료는 임상적 복용을 위한 한약재 추출법에 준하여 증류수와 함께 추출용기에 넣고 60 분간 추출하고 여과한 후, 45℃ 이하의 수욕상에서 감압 농축하여 동결건조기에서 건조하였다. LC/MS/MS 분석을 위한 시료용액은 분말시료 1 mg을 MeOH 1 ml에 녹여 PTEF syringe filters.
표준용액의 조제와 검량곡선 - 아리스톨로크산 성분은1 mg/mi로 표준용액을 제조하여 0.2 μmx 13 mm PTEF syringe filter(Whatman, UK)를 사용하여 여과한 후에 실제분석을 위해서는 단계적으로 희석하여 0~50ppm범위의 표준액으로 만들어 LC/MS/MS로 분석하고 AA-I과 AA-II 성분에 대한 피크면적과 농도와의 상관관계를 표시하는 표준 검량 곡선을 작성하였다.

대상 데이터

시약 및 기기 - AA-I과 AA-n 성분이 함께 함유된 아리스톨로크산 성분은 AppliChem사(Germany)의 제품을 구입하였고, HPLC용 이동상 용매와 기타 용매는 덕산과학의 제품을사용하였다. 각 시료에 함유된 아리스톨로크산 성분의 함량분석에 사용된 분석기기는 Agilent 1100 series HPLC (MO, USA) 와 Bruker Esquire HCT mass spectrometer (Bruker,Germany)를 연결시킨 HPLC-MS를 사용하였으며, 질량분석기의 이온화 빙식은 전기분무 이온화 (electrospray ionization, ESI)법을 이용하여 역상 HPLC system으로 분석하였다.
실험재료 - 실험에 사용한 한약재 중 마두령, 북마두령, 광 방기, 목향은 중국 광동성 청평시장에서 구입하여 광주 중의 대학교에서 동정을 받았으며, 토목향과 목방기는 대구 약령시장에서 구입하였으며, 중국산 청목향은 광주 한약재 시장에서 2004년도에 구입하였다. 정천산(定喘散)은 향약집성방거세 의거하여 마두령, 지골피, 상백피 각각 12g, 방기복령탕(防己茯零湯)은 동의치료경험집성방에 의거하여 방기 .

이론/모형

각 시료에 함유된 아리스톨로크산 성분의 함량분석에 사용된 분석기기는 Agilent 1100 series HPLC (MO, USA) 와 Bruker Esquire HCT mass spectrometer (Bruker,Germany)를 연결시킨 HPLC-MS를 사용하였으며, 질량분석기의 이온화 빙식은 전기분무 이온화 (electrospray ionization, ESI)법을 이용하여 역상 HPLC system으로 분석하였다.

성능/효과

밀 .강마두령 추출물에서는 마두령 추출물보다 AA-I 성분의 함량이 약 5배 또는 18배, AA- II 성분의 함량이 2배 또는 6배까지 증가되었으며, 북마두령의 경우에서도 강북마두령 추출물에서 AA-I과 AA-II 성분의 함량이 8.44 ppm에서 11.32 ppm, 0.98 ppm에서 2.51 ppm으로 함량이 증가하였으나 밀북마두령 추출물에서는 1.96ppm(4.3배)과 0.86ppm(0.8배)으로 함량이 감소하였다. 광방기의 수치 한약재에서는 거피 과정에 상관없이 주.
북마두령 .광방기 추출물에서는 신장손상과 발암성을 갖는 아리스톨로크산 AA-I 과 AA-II 성분이 모두 검출되었으며, 수치하거나 혼합 한방방제 추출물에서는 이들 성분의 함량이 오히려 증가하였다. 물론, 한약재 중에 함유된 아리스톨로크산 AA-I과 AA-II 성분이 수치에 의해 용출률이 증가할 수도 있지만 부자의 경우에는 열을 가하면 오히려 독성이 감소하므로 구체적인 이유에 대해서는 아직까지 알 수가 없다.
20 ppm으로 조금 증가하였으나 AA-n 성분의 농도는 크게변화가 없었다. 이처럼 본 연구결과를 토대로 강력한 신장독성을 일으키는 아리스톨로크산 AA-I과 AA-n 성분이 한약재의 수치나 혼합 한방방제에 의해 전혀 감소되지 않고 오히려 증가하는 경향을 나타내므로 한약의 약물가공법에 의한 독성의 변화와 관련하여 쥐방울과 한약재의 독성 감소 또는 제거에는 아무런 상관관계가 없음이 밝혀졌다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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