삼백초근의 타크린으로 유발한 간 세포독성 보호 성분 Hepatoprotective Constituents of Saururus chinensis Roots Against Tacrine-induced Cytotoxicity in Human Liver-derived Hep G2 Cells원문보기
Five liglans, sauchinone (1), di-0-methyltetrahydrofuriguaiacin B (2), manassantin A (3), manassantin B (4) and saucerneol B (5), have been isolated from the MeOH extract of Saururus chinesis roots. The evaluation for protective effect of compounds 1-5 against tacrine-induced cytotoxicity in human l...
Five liglans, sauchinone (1), di-0-methyltetrahydrofuriguaiacin B (2), manassantin A (3), manassantin B (4) and saucerneol B (5), have been isolated from the MeOH extract of Saururus chinesis roots. The evaluation for protective effect of compounds 1-5 against tacrine-induced cytotoxicity in human liver-derived Hep G2 cells was conducted. Compounds 1,2, and 5 showed significant protective effects with the EC$_{50}$ values of74.2${\pm}$0.9, 111.3${\pm}$0.8,64.3${\pm}$0.8 ${\mu}$M, respectively. Silybin, one of the well-known hepatoprotective agents, used as a positive control, and also showed protective effect with an EC$_{50}$ value of 86.2${\pm}$0.5 ${\mu}$M.
Five liglans, sauchinone (1), di-0-methyltetrahydrofuriguaiacin B (2), manassantin A (3), manassantin B (4) and saucerneol B (5), have been isolated from the MeOH extract of Saururus chinesis roots. The evaluation for protective effect of compounds 1-5 against tacrine-induced cytotoxicity in human liver-derived Hep G2 cells was conducted. Compounds 1,2, and 5 showed significant protective effects with the EC$_{50}$ values of74.2${\pm}$0.9, 111.3${\pm}$0.8,64.3${\pm}$0.8 ${\mu}$M, respectively. Silybin, one of the well-known hepatoprotective agents, used as a positive control, and also showed protective effect with an EC$_{50}$ value of 86.2${\pm}$0.5 ${\mu}$M.
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문제 정의
2)따라서, 천연물로부터 타크린의 간 독성을 감소시킬 수 있는 화합물을 발견하는 것은 중요하다고 생각된다. 본 연구에서는 타크린으로 독성을 유발한 사람 간암 세포 유래의 Hep G2 세포주를 대상으로 천연물 유래 화합물이 세포생존율에 대한 증가 여부를 관찰하여 간 세포보호 활성을 평가하였다. Hep G2 세포주는 많은 간 세포 기능을 가지고 있으며, 3)타크린으로 유발한 흰쥐 초대 배양 간세포에 상응하는 결과를 가지는 것으로 보고되어 있다.
제안 방법
Fr. 1(7.69 g) 은다시 n-hexane-CH2Cl2(l: 1) 혼합용매를 용출용매로 하는 Sephadex LH-20 CC에 의하여 5개의 소분획 (Fr. 11~15)으로 나누었다. Fr.
이 추출물을 증류수 (11)에 현탁하고 n-hexane, CH2C12, w-BuOH 순으로 극성에 따라 분획하였다. CH2C12 가용부 (9.25 g)를 Sephadex LH-20 column chromatography(CC)에 의하여 CH2Cl2-MeOH(18:1) 용출부 (Fr. 1)와 MeOH 용출부 (Fr. 2)로 나누었다. Fr.
실시하였다. 간략하게 설명하면, Hep G2 세포(2x 105 cells/well)를 10% heat-inactivated FBS, penicillin G (lOOIU/ml)와 streptomycin(100 μg/ml)을 함유한 RPMI 1640 배지에 분주하고 5% CO2 배양기 내에서 37℃에서 24 시간 배양한 다음, 분리된 화합물(1-5)의 시료 용액(5, 10, 20, 40(iM)과 1.2mM tacrine을 처리한 후 2시간 동안 5% CO2 배양기 내에서 배양하였으며, 세포생존율은 MTT법을활용하여 측정하였고 50%의 세포보호 효과를 나타내는 농도를 E* C치로 나타냈다. 또한, 모든 실험치는 대조군에 대한 세포보호율을 mean土S.
2mM tacrine을 처리한 후 2시간 동안 5% CO2 배양기 내에서 배양하였으며, 세포생존율은 MTT법을활용하여 측정하였고 50%의 세포보호 효과를 나타내는 농도를 E* C치로 나타냈다. 또한, 모든 실험치는 대조군에 대한 세포보호율을 mean土S.D로 표시하였으며, 각각 3회 반복 실험치를 이용하여 계산하였다. 통계처리는 one-way ANOMI test를 적용하여 수행하였고, p값이 0.
발견할. 목적으로간 독성이 알려진 타크린을 사람 간암 세포 유래의 Hep G2 세포주에 처리한 후 세포생존율을 증가시키는 천연물 추출물을 검색하였다. 삼백초근의 메탄올 추출물이 유의한 보호 효과(EC50치 = 183.
목적으로간 독성이 알려진 타크린을 사람 간암 세포 유래의 Hep G2 세포주에 처리한 후 세포생존율을 증가시키는 천연물 추출물을 검색하였다. 삼백초근의 메탄올 추출물이 유의한 보호 효과(EC50치 = 183.4ng/ml)를 나타내어 함유 성분의 분리를 수행하였으며, CI&CL 가용부로부터 5종의 화합물(1-5)을 분리 정제하였다. 화합물 1-5의 구조는 문헌에 기재되어 있는 선광도, 1H-NMR과 “C-NMR의 data와 비교하여, 각각sauchinone, 'odi-O-methyltetrahydrofuriguaiacin B, 12) manassantin A, 13) manassantin B와 saucemeol B')로 동정하였다(Fig.
8 g)을 얻었다. 이 추출물을 증류수 (11)에 현탁하고 n-hexane, CH2C12, w-BuOH 순으로 극성에 따라 분획하였다. CH2C12 가용부 (9.
' 삼백초근의 생리활성 성분연구로는 콜레스테롤 저하 효과, ° cell aggregation 억제활성, " 항* 염활성, low-density lipoprotein-antioxidant 활성을 가지는 리그난류이 등이 보고되어 있다. 천연물로부터 간 세포 보호활성 물질을 탐색하는 과정에서 삼백 초근의 메탄올 추출물이 타크린으로 유발한 Hep G2 세포주 사멸에 대하여 유의한 보호효과 (EQ。치 = 183.4 μg/ml)를 나타냈기 때문에 함유 성분의 분리를 수행하여 얻어진 5종의 화합물에 대한 간 세포 보호활성을 검토하였다.
천연물로부터 간 세포 보호활성 물질의 탐색을 목적으로 삼백 초근의 MeOH 추출물을 각종 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 5종의 리그난계 화합물을 분리하였으며, 각각의구^를' sauchinone (1), di-(?-methyltetrahydrofuriguaiacin B (2), manassantin A (3), manassantin B (4), saucemeol B(5)로 동정하였다. 이 화합물 중 화합물 1, 2, 5가 타크린으로 유발한 Hep G2 세포주에 대하여 유의한 보호활성을 나타냈다.
대상 데이터
Tacrine, silybin과 3'-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5- diphenyltetrazolium bromide(MTT)는 Sigma사에서 구입하였다. 96-Well tissue culture plates 와 기타 tissue culture dishes는 Nunc사 제품을 이용하였다.
Hep G2 세포배양 및 간세포 보호활성 측정 - 사람 간암 세포 유래 Hep G2 세포주는 American Type Culture Collection에서 분양하여 사용하였으며, 타크린으로 독성을 유발한 세포주에 대한 보호활성 측정은 송 등의 방법에따라 실시하였다. 간략하게 설명하면, Hep G2 세포(2x 105 cells/well)를 10% heat-inactivated FBS, penicillin G (lOOIU/ml)와 streptomycin(100 μg/ml)을 함유한 RPMI 1640 배지에 분주하고 5% CO2 배양기 내에서 37℃에서 24 시간 배양한 다음, 분리된 화합물(1-5)의 시료 용액(5, 10, 20, 40(iM)과 1.
RPMI 1640 배지와 trypsin-ethylene diaminetetraacetic acid (EDTA)는 Gibco Laboratories사에서 구입 하였으며, fetal bovine serum(FBS)는 Hyclone Laboratories사에서 구입하였다. Tacrine, silybin과 3'-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5- diphenyltetrazolium bromide(MTT)는 Sigma사에서 구입하였다. 96-Well tissue culture plates 와 기타 tissue culture dishes는 Nunc사 제품을 이용하였다.
선광도는 JASCO P1020을 사용하여 측정하였다. NMR spectrume JEOL JNM-ECP 500(1H, 500 MHz; 13C, 125 MHz)을, ESI-MS는 API-2000 spectrometer를 사용하여 측정하였다.
시약 및 기기 - Column chromatography용 담체는 Kiesel gel 60(70-230 mesh, Merck), RP-18 Lichroprep(Merck),Sephadex LH-20(Sigma)을 각각 사용하였다. 선광도는 JASCO P1020을 사용하여 측정하였다.
실험재료 - 본 실험에 사용한 삼백초근은 2005년 10월 서울시 소재 경동시장 제성약업사에서 구입하였으며, 시료의 일부는 표준품 (WK05-65)으로 보관하고 있다.
데이터처리
D로 표시하였으며, 각각 3회 반복 실험치를 이용하여 계산하였다. 통계처리는 one-way ANOMI test를 적용하여 수행하였고, p값이 0.01 미만을 통계학적으로 의미 있다고 간주하였다.
성능/효과
1). 분리된 5종의 화합물 중 화합물 1, 2와 5 가 유의한 간 세포보호 활성을 보였으며, 각각 74.2±0.9, Ⅲ.3±0.8, 64.3±0.8 μM의 ECe치를 나타냈다(Fig. 2). 이들 3종의 화합물은 본 실험에서 사용한 5-40 uM의 범위에서는 세포독성을 나타내지 않았다.
후속연구
일부 밝혀져 있다. 따라서, 본 연구에서 간 세포보호 활성이 인정된 3종의 화합물에 대해서는 항산화작용을 포함한 추가 기전연구가 필요할 것으로 생각된다. 화합물 1 (sauchinone)에 대한 연구로는 사염화탄소로 독성을 유발한 간 독성에 대하여 보호활성을 나타내는 보고가 있으나,16)화합물 2(di-methyltetrahydrofuriguaiacin B)와 5(saucemeol B)에 대한 간 보호활성은 아직 보고되지 않은 것으로 판단된다.
참고문헌 (16)
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