[논문]오가피 분획 추출물의 항산화효과

임경란; 김미진; 정택규; 윤경섭

오가피 분획 추출물의 항산화효과
Antioxidant activity of partially purified extracts isolated from Acanthopanax sessiliflorum Seeman 원문보기

한국생물공학회지 = Korean journal of biotechnology and bioengineering, v.23 no.4, 2008년, pp.329 - 334

임경란 ((주)사임당화장품 기술연구소) , 김미진 ((주)사임당화장품 기술연구소) , 정택규 ((주)사임당화장품 기술연구소) , 윤경섭 ((주)사임당화장품 기술연구소)

초록
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오가피는 건강보조식품, 식품이나 화장품 등의 첨가제로 좋은 약재로 평가되고 있다. 그러나 오가피의 연구의 대부분은 가온 용매추출이나 열수추출을 통한 유효성분의 추출과 생리활성 연구에 치중되어 있다. 따라서 온도 및 추출용매를 조절하여 추출하고 Diaion HP2O 분획을 통한 유효성분의 함량 및 항산화활성에 대하여 연구하였다. 오가피추출물은 열에 불안정하여 갈변현상을 보이므로 상온추출 및 냉온추출하는 것of 좋으며, 에탄올 함량별로 추출시 주 활성성분인 chlorogenic acid의 함량을 보면 100% 정제수 및 100% 에탄올의 단일 용매 추출보다 에탄올수용액을 사용하여 추출시 chlorogenic acid의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 에탄올수용액에서의 chlorogenic acid의 함량은 유사하므로 농축시간을 고려하여 70$\sim$85% 에탄올수용액으로 추출하는 것이 바람직할 것으로 사료된다. 최적화된 조건에서 추출된 오가피추출물은 Diaion HP2O column chromatography를 이용하여 10%, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액으로 분획 후, 각 분획층의 주 활성성분 합량과 항산화효과를 확인하였다. 10% 및 20% 에탄올 수용액층은 chlorogenic acid가 주 구성성분이었으며, 40% 에탄올 수용액층은 caffeic acid 및 eleutheroside E가 주 구성성분임을 알 수 있었다. Chlorogenic acid와 caffeic acid 함량이 높은 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층에서 우수한 DPPH와 superoxide radical에 대한 소거효과를 나타내었다. DPPH radical 소거효과에서 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층은 각각 $IC_{50}$ 값이 $1.748{\pm}0.098{\mu}g/ml$, $11.487{\pm}1.768{\mu}g/ml$을 나타내었으며, Superoxide radical 소거효과에서는 $131.491{\pm}2.235{\mu}g/ml$, $200.681{\pm}2.444{\mu}g/ml$로 양성 대조군으로 사용한 ascorbic acid와 동등하거나 dl-$\alpha$-tocopherol보다 우수한 항산화효과를 보였다. 각 분획층의 항산화효과를 미루어 볼 때, 20% 및 40%의 주 구성성분을 조합하여 오가피추출물을 제조하면 더욱 우수한 소재로 개발할 수 있을 것으로 사료된다. 본 기술연구소에서는 최적화된 조건에서 추출된 오가피추출물 및 Diaion HP2O 분획물을 이용하여 B16 melanoma 세포에서의 멜라닌 생성저해 효과를 연구하여 새로운 미백제를 개발 중에 있으며, 건강보조식품, 기능성 향장품소재 등으로의 활용 가치가 높을 것으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper

The antioxidant activity and the qualitative analysis of Acanthopanax sessiliflorum Seeman were studied by partially purified extract using various methods: extraction by using ethanol solutions and temperatures, and absorption to Diaion HP20 column chromatography using 10%, 20%, 40%, 60% ethanol solutions. Major constituents, chlorogenic acid, caffeic acid, eleutheroside E, was determinated by HPLC method in Acanthopanax sessiliflorum S. 10% and 20% ethanol solutions contain chlorogenic acid (3.020$\pm$0.080%, 20.500$\pm$1.150%, respectively). 40% ethanol solution contains caffeic acid and eleutheroside E (12.270$\pm$0.360%, 1.670$\pm$0.140%, respectively). Diaion HP20 fractions (10%, 20%, 40%, 60% ethanol solutions) showed the scavenging activity of radicals and reactive oxygen species with the $IC_{50}$ values of $81.534{\pm}0.992{\mu}g/ml$, $1.748{\pm}0.098{\mu}g/ml$, $11.487{\pm}1.768{\mu}g/ml$, $21.960{\pm}0.547{\mu}g/ml$ against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazly radical and $1713.548{\pm}34.565{\mu}g/ml$, $131.419{\pm}2.235{\mu}g/ml$, $200.681{\pm}2.444{\mu}g/ml$, $757.897{\pm}6.868{\mu}g/ml$ against superoxide radicals in the xanthine/xanthine oxidase system, respectively. Especially, 20% and 40% ethanol fractions showed more antioxidant activity than dl-$\alpha$-tocopherol. These results suggest that Acanthopanax sessiliflorum S. extract and Diaion HP20 fractions may be useful as a potential source of nutraceutical and cosmetic products.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

그러나 오가피의 연구의 대부분은 가온용매추출이나 열수추출을 통한 유효성분의 추출과 생리활성연구에 치중되어 있다. 따라서 온도 및 추출용매를 조절하여추출하고 Diaion HP20 분획을 통한 유효성분의 함량 및 항산화활성에 대하여 연구하였다.

제안 방법

이 중 Fr. 1 (250 mg)을 40% 에탄올을 용출 용매로 ODS-A를 실시하여 2개의 소분획으로 나누었다. 다시 Fr.
2차 ODS-A column chromatography 에서 분리된 Fr. 3 (150 mg)은 40% 에탄올을 용출 용매로 사용하여 ODS-A column chromatography를 실시하여 2개의 소분획으로 나누었다. 이 중 Fr.
MTT [3-(4, 5-dimethythiazol-2-yl)-2, 5-diphenytetrazolium bromide, Sigma] 정량은 Mosmann (25)의 방법을 변형하여 실시하였다. 사람 섬유아세포를 1시0, cells/well 농도로 96-well plate에분주하여 15시간 정도 배양한 후, 각 well에 적당한 농도로오가피추출물을 처리하여 COj 배양기에서 24시간 더 배양하였다.
Superoxide radical 소거활성 평가는 xanthine/xanthine oxidase 효소반응에 의한 활성산소 발생계를 이용하여 활성산소에 의한 NBT의 산화에 의한 흡광도 변화를 측정하였다
다음, 추출물 전량을 미리 10% 에탄올수용액으로 평형화시켜 놓은 Diaion HP20으로 충진시킨 직경 40 cm, 길이 2 m의 columm에 충진 후 순차적으로 10%, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액으로 350 L씩 용출하여 4개의 분획으로 분리하였다. 감압 농축한 20% 에탄올 용출분획 중 일부분 (300 mg)을 취하여 ODS-A (2.5 cm><20 cm) column chromatography 를 실시하였다. 30% 에탄올로 용출하여 5개의 소분획으로 나눈후, 이 중 Fr.
고형분 측정은 휘발분측정기를 이용하여 1 g, H0℃, 3 h의조건에서 측정하였다 pH는 pH meter를 이용하여 50% 에탄올수용액을 100배 희석한 후 측정하였으며, 오가피추출물의 색상은 색차계를 사용하여 측정하였다
2는 LH-20 column chromatography 로 80% 에탄올을 용출 용매로 사용하여 성분을 분리하여 chlorogenic acid (A)를 분리하였다. 다시 Diaion HP20 column chromatography의 감압 농축한 40% 에탄올 용출 분획 중 일부분을(1 g) CHCh : MeOH : H₂O=65 : 35 : 10을 용출 용매로 2차 silica gel column chromatography를 실시하여 7개의 소분획으로 나누었다. 이 중 Fr.
32 kg)을 얻었다. 다음, 추출물 전량을 미리 10% 에탄올수용액으로 평형화시켜 놓은 Diaion HP20으로 충진시킨 직경 40 cm, 길이 2 m의 columm에 충진 후 순차적으로 10%, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액으로 350 L씩 용출하여 4개의 분획으로 분리하였다. 감압 농축한 20% 에탄올 용출분획 중 일부분 (300 mg)을 취하여 ODS-A (2.
치중되어 있다. 따라서 본 연구에서는 온도 및 추출용매를 조절하여 최적 추출조건을 검색하였으며, 오가피의 분리, 정제를 통하여 주 유효성분을 확인하였다. 또한, 오가피의성분들 중에 다양한 생리활성 작용을 하는 chlorogenic acid 를 유효성분으로 함유하는 정제된 오가피추출물을 제조함과동시에 그들의 항산화효과를 기존의 잘 알려진 성분들과 비교평가하였다.
따라서 본 연구에서는 온도 및 추출용매를 조절하여 최적 추출조건을 검색하였으며, 오가피의 분리, 정제를 통하여 주 유효성분을 확인하였다. 또한, 오가피의성분들 중에 다양한 생리활성 작용을 하는 chlorogenic acid 를 유효성분으로 함유하는 정제된 오가피추출물을 제조함과동시에 그들의 항산화효과를 기존의 잘 알려진 성분들과 비교평가하였다.
시험 시료들의 세포독성과 더불어 시험에 사용될 농도 범위결정을 위해서 MTT assay를 시행하였다. Chlorogenic acid의단일 성분은 1000 ug/ml의 농도에서는 급격하게 생존력 저하를보였으며, chlorogenic acid 등의 항산화물질을 함유한 오가피추출물 1000 “g/ml 농도에서도 80% 이상의 생존력을 보였다.
48시간이 지난 후 첩포를 제거하였다. 약 60분간 안정을취하도록 한 후 첫 판독을 시행하였고, 첩포 부착 후 96시간이 경과한 후 2차 판독을 시행하였다. 판정기준은 Table 2에나타내었다.
항산화효과를 측정하였다. 양성 대조군으로는 항산화효과가 알려진 ascorbic acid와 dl-a-tocopherol (1000 IU/g, Sigma)을 이용하여 오가피추출물의 Diaion HP20 분획층과항산화효과를 비교하였다. 그 결과 free radical을 50% 소거할수 있는 농도 (电。)가 20% 에탄올 분획층 1.
오가피의 줄기, 줄기피, 뿌리 각각 50 g를 정량하여 추출기에넣은 후, 75% 에탄올수용액으로 4시간씩 2회 반복 환류 냉각추출하였다. 추출여액을 와트만 2번 여과지로 여과하고 회전식증발 건조기로 감압 농축하여 오가피 분말을 얻어, 추출수율및 지표성분의 함량을 측정하였다.
추출용매를 선정하기 위해서는 25%, 50%, 75%, 100% 의 에탄올수용액 및 정제수를 사용하여 환류 냉각 추출하였다. 오가피의 추출방법을 선정하기 위해서는 75% 에탄올수용액을 이용하여 환류 냉각 추출 (80℃ 이상), 상온교반 (25℃) 및초음파 추출 (50℃) 하여 비교하였다.
오가피추출물에 대한 피부 안전성, 즉 피부반응의 관찰을통해서 자극 혹은 알레르기성 반응의 발생 여부를 알아보기위하여 한국식품의약품안전청 기준 피부안전성 검사법에 따라인체 첩포시 험을 실시하였다.
오가피추출물은 추출용매와 추출방법으로 구분하여 제조하였다. 추출용매를 선정하기 위해서는 25%, 50%, 75%, 100% 의 에탄올수용액 및 정제수를 사용하여 환류 냉각 추출하였다.
오가피추출물의 물리적 성질로 고형분, pH, 색상을 측정하였다. 고형분 측정은 휘발분측정기를 이용하여 1 g, H0℃, 3 h의조건에서 측정하였다 pH는 pH meter를 이용하여 50% 에탄올수용액을 100배 희석한 후 측정하였으며, 오가피추출물의 색상은 색차계를 사용하여 측정하였다
오가피추출물의 항산화효과를 알아보기 위해 DPPH를 이용하여 항산화효과를 측정하였다. 양성 대조군으로는 항산화효과가 알려진 ascorbic acid와 dl-a-tocopherol (1000 IU/g, Sigma)을 이용하여 오가피추출물의 Diaion HP20 분획층과항산화효과를 비교하였다.
용매별 추출물 및 Diaion HP20 분획층은 오가피 지표성분인 chlorogenic acid, caffeic acid, eleutheroside E 의 고속액체크로마토그래피 (HPLC) 분석을 행하였다.
부위별로 지료성분의 함량 차이를 보였고, 전반적으로 줄기 兰 뿌리 > 줄기피의 순으로 지표성분이 고르게 함유되어 있었으며, 전체 고형분의 양은 뿌리>줄기피 > 줄기임을 알 수 있었다. 지표성분의 함량 및 고형분의 양을 고려한다면 줄기나뿌리를 사용하는 것이 좋을 것으로 사료되며, 본 연구소에서는약재의 시중가를 고려하여 줄기부위로 연구를 진행하였다.
에탄올수용액에서의 chlorogenic acid의 함량은 유사하므로 농축시간을 고려하여 70-85% 에탄올수용액으로 추출하는 것이 바람직할 것으로 사료된다. 최적화된 조건에서 추줄된 오가피추출물은 Diaion HP20 column chromatography 를이용하여 10%, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액으로 분획 후 각분획층의 주 활성성분 함량과 항산화효과를 확인하였다. 10% 및 20% 에탄올 수용액층은 chlorogenic acid가 주 구성성분이었으며, 40% 에탄올 수용액층은 caffeic acid 및 eleutheroside E가 주 구성성분임을 알 수 있었다.
추출여액을 와트만 2번 여과지로 여과하고 회전식증발 건조기로 감압 농축하여 오가피 분말을 얻어, 추출수율및 지표성분의 함량을 측정하였다.
추출용매를 선정하기 위해서는 25%, 50%, 75%, 100% 의 에탄올수용액 및 정제수를 사용하여 환류 냉각 추출하였다. 오가피의 추출방법을 선정하기 위해서는 75% 에탄올수용액을 이용하여 환류 냉각 추출 (80℃ 이상), 상온교반 (25℃) 및초음파 추출 (50℃) 하여 비교하였다.

대상 데이터

측정하는 방법을 활용하였다(23). 0.2 mM DPPH 메탄올용액에 시료를 각각의 농도로 메탄올에 희석하여 혼합하고, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다 시료는 Diaion HP20의 용매별 분획시료를 사용하였다. 대조구은 시료액 대신 메탄올을 넣으며, DPPH 용액 대신 메탄올을 넣어 보정값을 얻었다.
오가피의 추출과정 및 분획에사용된 용매들은 시약급을 구입하여 그대로 사용하였고, HPLC 분석용 용매로는 acetonitrile (ACN)과 water를 HPLC grade로 Fisher사에서 구입하여 사용하였다. Diaion HP20 (Mitsubishi. Kasei Kogyo Co., Ltd. Japan), silica gel 60 (Merk, 70-230 mesh), ODS-A (YMC-GEL, 12 nm, Germany), sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech., Uppsala)을 resin으로 사용하였으며, 오가피추출물에 포함된 생리활성 성분 중 지표성분인 cMorogenic acid (Sigma, approx. 95%), caffeic acid (Fluka, approx. 95%) 및 eleutheroside E (International Laboratory USA, approx. 95%) 는 초저온 냉장고 -40℃ 에서 보관하여 사용하였다. 기기로는 HPLC (Agilent Technologies 1200 series, UV detector), rotary evaporator (Eyela, Buchi), UV-Visible Spectrophotometer (Shitnadzu, UV-1601), pH Meter (Thermo Electron Co.
HPLC 분석 조건으로 칼럼은 YMC-Pack Pro C₁₈ (5 ㈣, 4.6 mmx250 mm), 검출기는 자외부흡광광도계로 측정파장은 330 nm로 하였다. 유속은 1.
95%) 는 초저온 냉장고 -40℃ 에서 보관하여 사용하였다. 기기로는 HPLC (Agilent Technologies 1200 series, UV detector), rotary evaporator (Eyela, Buchi), UV-Visible Spectrophotometer (Shitnadzu, UV-1601), pH Meter (Thermo Electron Co., Orion 420 A+), 휘발분즉정기 (Infrared Moisture Determination Balance, Kett Electric Lab., FD-240)가 사용되었다.
본 실험에 사용한 오가피는 충북 제천에서 재배하고 있는오가피 (Acanthopanax sessiliflorum S.)를 절단된 상태로 제천시장에서 구입하여 사용하였다. 오가피의 추출과정 및 분획에사용된 용매들은 시약급을 구입하여 그대로 사용하였고, HPLC 분석용 용매로는 acetonitrile (ACN)과 water를 HPLC grade로 Fisher사에서 구입하여 사용하였다.
양성 대조군으로 dl-a-tocopherol (1000 IU/g, Sigma)을 이용하였다. 그 결과 superoxide를 50% 소거할 수 있는 농도 (ICso)는 20% 에탄올 분획층 131.
나타내었다. 오가피의 주 활성성분 중에서 chlorogenic acid는 UV 흡광광도계에 대하여 400 및 200 nm에서 흡수피크를 나타내기 때문에 UV detector가 장착된 HPLC를 이용하여 쉽게 정성 및 정량분석이 가능하며, 오가피의 가장 풍부한 성분이므로 최적 추출조건을 검색 시 지표성분으로 선정하였다. 정제수의 함량이증가할수록 전체 고형분의 양이 증가하였으며, 100% 정제수 및 100% 에탄올의 단일 용매로의 추출보다 에탄올수용액을 사용하여 추출시 chlorogenic acid의 함량이 증가함을 알 수 있었다.
)를 절단된 상태로 제천시장에서 구입하여 사용하였다. 오가피의 추출과정 및 분획에사용된 용매들은 시약급을 구입하여 그대로 사용하였고, HPLC 분석용 용매로는 acetonitrile (ACN)과 water를 HPLC grade로 Fisher사에서 구입하여 사용하였다. Diaion HP20 (Mitsubishi.
피험자로 20세 이상 50세 이하의 건강한 성인 남, 여 30명을선정하였고, 첩포시험은 대상자 상박 내측에 첩포를 부착하였으며, 48시간이 지난 후 첩포를 제거하였다. 약 60분간 안정을취하도록 한 후 첫 판독을 시행하였고, 첩포 부착 후 96시간이 경과한 후 2차 판독을 시행하였다.

이론/모형

Xanthine/xanthine oxidase 반응에서 형성된 superoxide radical 소거효과는 nitroblue tetrazolium (NBT, Sigma) 빙법에 의해측정하였다(24). 50 mM Na2CO₃ buffer (pH 10.
항산화활성은 DPPH (Sigma)를 이용하여 시료의 라디칼 소거효과를 측정하는 방법을 활용하였다(23). 0.

성능/효과

양성 대조군으로는 항산화효과가 알려진 ascorbic acid와 dl-a-tocopherol (1000 IU/g, Sigma)을 이용하여 오가피추출물의 Diaion HP20 분획층과항산화효과를 비교하였다. 그 결과 free radical을 50% 소거할수 있는 농도 (电。)가 20% 에탄올 분획층 1.748 ±0.098 俸 /ml, ascorbic acid 3.018 ±0.167 /zg/ml, 40% 에탄올 분획층 11.487 ± 1.768 "g/ml 그리고 dl-a-tocopherol 18.316 ± 0.030 /zg/ml, 60% 에탄올 분획층 21.960 + 0, 547 陽/ml, 10% 에탄올 분획층 81.534 ±0.992 阁ml의 순으로 측정되었으며, 20% 에탄올 분획층은 ascorbic acid보다 약 2배 이상의 free radical 소거효과를 나타내었다(Table 9).
그 결과 superoxide를 50% 소거할 수 있는 농도 (ICso)는 20% 에탄올 분획층 131.419 ±2.235 fig/ml, 40% 에탄올 분획층 200.681 ± 2.444 /zg/ml, ascorbic acid 225.327 ± 4.278 "g/ml 그리고 60% 에탄올 분획층 757.897 ± 6.868 曜 /ml, 10% 에탄올 분획층 1713.548 + 34.565 "g/ml의 순으로측정되었으며, 20% 및 40% 에탄올 분획층은 dl-a-tocopherol 보다도 높은 superoxide radical 소거활성을 나타내었다(Table 9). DPPH radical 소거활성과 같이 종합해 볼 때, 오가피에 다량으로함유되어 있는 chlorogenic acid와 caffeic acid의 함량에 의존적으로 항산화효과가 있음을 알 수 있었다.
최적화된 조건에서 추줄된 오가피추출물은 Diaion HP20 column chromatography 를이용하여 10%, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액으로 분획 후 각분획층의 주 활성성분 함량과 항산화효과를 확인하였다. 10% 및 20% 에탄올 수용액층은 chlorogenic acid가 주 구성성분이었으며, 40% 에탄올 수용액층은 caffeic acid 및 eleutheroside E가 주 구성성분임을 알 수 있었다. Chlorogenic acid와 caffeic acid 함량이 높은 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층에서 우수한 DPPH와 superoxide radical에 대한 소거효과를 나타내었다.
Table 7과 8에 나타내었다. 10% 및 20% 에탄올수용액 층은 chlorogenic acid가 각각 3.020 ±0.080%, 20.500 ± 1.150% 로 주 구성성분이었으며, 40% 에탄올수용액 층은 caffeic acid 및 eleutheroside E가 12.270 + 0.360%, 1.670 + 0.140%로 주구성성분임을 확인하였다. chlorogenic acid 및 오가피에 포함된주요 화합물의 화학구조를 Fig.
10% 및 20% 에탄올 수용액층은 chlorogenic acid가 주 구성성분이었으며, 40% 에탄올 수용액층은 caffeic acid 및 eleutheroside E가 주 구성성분임을 알 수 있었다. Chlorogenic acid와 caffeic acid 함량이 높은 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층에서 우수한 DPPH와 superoxide radical에 대한 소거효과를 나타내었다. DPPH radical 소거효과에서 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층은 각각 IC₅₀ 값이 1.
위해서 MTT assay를 시행하였다. Chlorogenic acid의단일 성분은 1000 ug/ml의 농도에서는 급격하게 생존력 저하를보였으며, chlorogenic acid 등의 항산화물질을 함유한 오가피추출물 1000 “g/ml 농도에서도 80% 이상의 생존력을 보였다.
565 "g/ml의 순으로측정되었으며, 20% 및 40% 에탄올 분획층은 dl-a-tocopherol 보다도 높은 superoxide radical 소거활성을 나타내었다(Table 9). DPPH radical 소거활성과 같이 종합해 볼 때, 오가피에 다량으로함유되어 있는 chlorogenic acid와 caffeic acid의 함량에 의존적으로 항산화효과가 있음을 알 수 있었다. 특히, 20% 및 40% 에탄올 분획층은 지질 radical과 반응하는 primary 항산화제로서매우 효과적임을 알 수 있었다.
Chlorogenic acid와 caffeic acid 함량이 높은 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층에서 우수한 DPPH와 superoxide radical에 대한 소거효과를 나타내었다. DPPH radical 소거효과에서 20% 및 40% 에탄올수용액 분획층은 각각 IC₅₀ 값이 1.748 + 0.098 /闾ml, 11.487 ± 1.768 /闾ml 을 나타내었으며, superoxide radical 소거효과에서는 131.491 + 2.235 “g/ml, 200.681 ±2.444 俸/ml로 양성 대조군으로 사용한 ascorbic acid와 동등하거나 dl-a-tocopherol보다 우수한 항산화효과를 보였다. 각 분획층의 항산화효과를 미루어 볼 때, 20% 및 40%의 주 구성성분을 조합하여 오가피추출물을 제조하면더욱 우수한 소재로 개발할 수 있을 것으로 사료된다.
3% 로 소량 함유되어 있음을 알 수 있었다. 부위별로 지료성분의 함량 차이를 보였고, 전반적으로 줄기 兰 뿌리 > 줄기피의 순으로 지표성분이 고르게 함유되어 있었으며, 전체 고형분의 양은 뿌리>줄기피 > 줄기임을 알 수 있었다. 지표성분의 함량 및 고형분의 양을 고려한다면 줄기나뿌리를 사용하는 것이 좋을 것으로 사료되며, 본 연구소에서는약재의 시중가를 고려하여 줄기부위로 연구를 진행하였다.
시험결과 cNorogenic acid를 함유한 오가피추출물 1%에 대한 피부반응도는 0으로 Table 10의 피부반응도 판정기준에 의하여 대조군과마찬가지로 무자극으로 판정되었다. 세포독성과 같이 종합해 볼때, 독성이 거의 존재하지 않는 안정한 소재임을 알 수 있다.
정제수의 함량이증가할수록 전체 고형분의 양이 증가하였으며, 100% 정제수 및 100% 에탄올의 단일 용매로의 추출보다 에탄올수용액을 사용하여 추출시 chlorogenic acid의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 에탄올수용액에서의 chlorogenic acid의 함량과 전체 고형분의 양은 큰 차이가 없으므로 농축시간 고려하여 70-85% 에탄올수용액으로 추출하는 것이 바람직할 것으로 사료된다.
에탄올수용액에서의 chlorogenic acid의 함량은 유사하므로 농축시간을 고려하여 70-85% 에탄올수용액으로 추출하는 것이 바람직할 것으로 사료된다. 최적화된 조건에서 추줄된 오가피추출물은 Diaion HP20 column chromatography 를이용하여 10%, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액으로 분획 후 각분획층의 주 활성성분 함량과 항산화효과를 확인하였다.
3에 나타내었다. 오가피 Diaion HP 분획층의 pH는 4.5~6.5 사이의 값을 나타내었으며, 색상은 에탄올의 함량이 높을수록 상대적으로 진한 색상을 보였다
4에 나타내었다. 오가피의 대부분의 부위에서 chlorogenic acid 및 eleutheroside E가 1% 이상 다량 함유되어 있었으며, caffeic acid는 약 0.3% 로 소량 함유되어 있음을 알 수 있었다. 부위별로 지료성분의 함량 차이를 보였고, 전반적으로 줄기 兰 뿌리 > 줄기피의 순으로 지표성분이 고르게 함유되어 있었으며, 전체 고형분의 양은 뿌리>줄기피 > 줄기임을 알 수 있었다.
오가피추출물은 열에 불안정하여 갈변현상을 보이므로 상온추출 및 냉온추출하는 것이 좋으며, 에탄올 함량별로 추출시 주 활성성분인 chlorogenic acid의 함량을 보면 100% 정제수 및 100% 에탄올의 단일 용매 추출보다 에탄올수용액을사용하여 추출시 chlorogenic acid의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 에탄올수용액에서의 chlorogenic acid의 함량은 유사하므로 농축시간을 고려하여 70-85% 에탄올수용액으로 추출하는 것이 바람직할 것으로 사료된다.
오가피의 주 활성성분 중에서 chlorogenic acid는 UV 흡광광도계에 대하여 400 및 200 nm에서 흡수피크를 나타내기 때문에 UV detector가 장착된 HPLC를 이용하여 쉽게 정성 및 정량분석이 가능하며, 오가피의 가장 풍부한 성분이므로 최적 추출조건을 검색 시 지표성분으로 선정하였다. 정제수의 함량이증가할수록 전체 고형분의 양이 증가하였으며, 100% 정제수 및 100% 에탄올의 단일 용매로의 추출보다 에탄올수용액을 사용하여 추출시 chlorogenic acid의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 에탄올수용액에서의 chlorogenic acid의 함량과 전체 고형분의 양은 큰 차이가 없으므로 농축시간 고려하여 70-85% 에탄올수용액으로 추출하는 것이 바람직할 것으로 사료된다.
DPPH radical 소거활성과 같이 종합해 볼 때, 오가피에 다량으로함유되어 있는 chlorogenic acid와 caffeic acid의 함량에 의존적으로 항산화효과가 있음을 알 수 있었다. 특히, 20% 및 40% 에탄올 분획층은 지질 radical과 반응하는 primary 항산화제로서매우 효과적임을 알 수 있었다.

후속연구

444 俸/ml로 양성 대조군으로 사용한 ascorbic acid와 동등하거나 dl-a-tocopherol보다 우수한 항산화효과를 보였다. 각 분획층의 항산화효과를 미루어 볼 때, 20% 및 40%의 주 구성성분을 조합하여 오가피추출물을 제조하면더욱 우수한 소재로 개발할 수 있을 것으로 사료된다.
본 기술연구소에서는 최적화된 조건에서 추출된 오가피추출물 및 Diaion HP20 분획물을 이용하여 B16 melanoma 세포에서의 멜라닌 생성저해 효과를 연구하여 새로운 미백제를 개발중에 있으며, 건강보조식품, 기능성 향장품소재 등으로의 활용가치가 높을 것으로 사료된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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