선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구는 두유와 전두유의 효소적 가수분해에 따른 단백질의 변화를 조사하였다. 총 유리아미노산 함량을 조사한 결과 두유(SM)과 전두유(WSM)에 비해서 저분자 두유(LSM)와 저분자 전두유(LWSM)에서 높게 나타났다.
제안 방법
- 2-DE를 한 후 2% phosphoric acid, 10% ammonium sulphate와 20% methanol을 포함한 0.1% Colloidial Coomassie Briliant Blue G-250(Bio-Rad, USA)을 이용하여 spot을 염색하였다. Staining이 끝난 각 polyacrylamide gel들은 Densitometer로 scanning하여 PDQuest v7.
- 5% IPG buffer, bromophenol blue trace)을 섞은 후, IPG (Immobilized pH gradients) holder에서 로딩하였다. 24 cm linear gradient pH 4-10 nonlinear strip를 사용해 focusing하였으며, focusing은 IPG phore strip(Genomine drystripTM)를 사용하였다. IEF(First-dimension Isoelectric focusing)가 끝난 IPG strip을 equilibration buffer I [6 M urea, 30%(w/v) glycerol, 2%(w/v) SDS, 0.
- 3)을 사용하였다. Gel의 염색은 Coomasie blue R-250로 상온에서 30분간 교반하면서 염색하였고, 탈색시약(100 mL methanol, 100 mL glacial acetic acid, 800 mL H2O)으로 gel을 18시간 이상 탈색시켜 가용성 단백질의 전기영동 패턴을 조사하였다.
- 24 cm linear gradient pH 4-10 nonlinear strip를 사용해 focusing하였으며, focusing은 IPG phore strip(Genomine drystripTM)를 사용하였다. IEF(First-dimension Isoelectric focusing)가 끝난 IPG strip을 equilibration buffer I [6 M urea, 30%(w/v) glycerol, 2%(w/v) SDS, 0.05 M tris-HCl buffer, bromophenol blue trace, 1% DTT]과 equilibration buffer II(equilibration buffer I + 2.5% iodoacetamide)에 평형화 시킨 후 16% gradient polyacrylamide gel을 사용해 second dimension을 실시하였다(Fig. 1).
- 1% Colloidial Coomassie Briliant Blue G-250(Bio-Rad, USA)을 이용하여 spot을 염색하였다. Staining이 끝난 각 polyacrylamide gel들은 Densitometer로 scanning하여 PDQuest v7.0(Bio-Rad, USA)로 이미지를 분석하였다(Fig 1).
- 따라서 본 연구는 유리아미노산, SDS-PAGE 전기영동과 2-DE 방법을 이용하여 효소적 가수분해에 따른 두유와 전두유의 단백질의 특성 변화를 조사하였다.
- 수용액층을 40℃에서 감압농축 시켜 0.2 N lithium citrate buffer(pH 2.2) 10 mL로 용해하고 membrane filter(pore size 0.2 μm, Advantec MFS, Japan)로 여과한 후 아미노산 자동분석기(Biochem 20, Pharmacia Biotech. Ltd., England)로 분석하였다.
- 대두 마쇄액의 가용성 고형분 함량을 10%(w/v)로 조정한 것을 전두유 (Whole soymilk, WSM)로 사용하였고, 전두유를 부직포로 여과하여 비지를 제거한 것을 두유(Soymilk, SM)로 사용하였다. 제조한 두유와 전두유에 KMF-G 0.2%(w/w)를 각각 첨가하여 50℃에서 1시간동안 가수분해한 후 100℃에서 10분간 효소를 불활성화하여 저분자 두유(Low molecule soymilk, LSM)와 저분자 전두유(Low molecule whole soymilk, LWSM)을 제조하였다. 제조한 모든 시료는 동결 건조(SFD SM24L, Samwon, Korea)한 후 100 mesh 이상으로 분쇄하여 사용하였다.
대상 데이터
- 침지한 대두를 100℃의 끓는 물에 20분간 가열한 후 탈피하여 건조 대두 중량의 7배량의 물을 넣고 homogenizer(HF-93, SMT company, Japan)로 15,000 rpm에서 10분간 마쇄하였다. 대두 마쇄액의 가용성 고형분 함량을 10%(w/v)로 조정한 것을 전두유 (Whole soymilk, WSM)로 사용하였고, 전두유를 부직포로 여과하여 비지를 제거한 것을 두유(Soymilk, SM)로 사용하였다. 제조한 두유와 전두유에 KMF-G 0.
- 본 실험에 사용한 대두는 2007년도 경북 상주지방에서 재배한 메주콩을 구입하여 사용하였으며, 저분자화 효소제 (KMF-G, 70,000 PU/g)는 (주)계명푸덱스(KMFoodex. Co., Ltd. Korea)에서 제공 받아 사용하였다.
- 2%(w/w)를 각각 첨가하여 50℃에서 1시간동안 가수분해한 후 100℃에서 10분간 효소를 불활성화하여 저분자 두유(Low molecule soymilk, LSM)와 저분자 전두유(Low molecule whole soymilk, LWSM)을 제조하였다. 제조한 모든 시료는 동결 건조(SFD SM24L, Samwon, Korea)한 후 100 mesh 이상으로 분쇄하여 사용하였다.
이론/모형
- 2-DE는 Kim 등(22)의 방법으로 실시하였다. 시료에 rehydration buffer(8 M urea, 2% CHAPS, 20 mM DTT, 0.
- 대두 100 g을 Jang 등(11)의 방법에 준하여 3회 수세한 후 수돗물에 7～8시간 침지하였다. 침지한 대두를 100℃의 끓는 물에 20분간 가열한 후 탈피하여 건조 대두 중량의 7배량의 물을 넣고 homogenizer(HF-93, SMT company, Japan)로 15,000 rpm에서 10분간 마쇄하였다.
성능/효과
- 두유(SM), 저분자 두유(LSM), 전두유(WSM), 저분자 전두유(LWSM)의 유리아미노산 함량과 조성을 분석한 결과를 Table 1에 나타내었다. LSM의 총 유리아미노산 함량은 69.09 mg%로 SM의 52.47 mg%보다 높았으나 필수 아미노산의 함량은 비슷하게 나타났다. LWSM의 경우 총 유리아미노산은 98.
- 47 mg%보다 높았으나 필수 아미노산의 함량은 비슷하게 나타났다. LWSM의 경우 총 유리아미노산은 98.87 mg%, 필수아미노산은 41.11 mg%로, 총 유리아미노산 80.07 mg%, 필수아미노산 27.47 mg%인 WSM에 비해서 높게 나타나 대두단백질이 가수분해 되면서 유리아미노산의 함량이 증가된 것으로 생각된다. SM과 LSM에 비해 WSM와 LWSM에서 필수아미노산과 총 유리아미노산 함량은 높게 나타났으며, 이것은 WSM과 LWSM 제조과정에서 비지를 제거하지 않아 유리아미노산이 높게 나타난 것으로 생각된다.
- 필수아미노산 함량은 SM과 LSM에서 비슷하였으나 LWSM은 WSM보다 높게 나타났다. SDS-PAGE 전기영동 패턴 분석 결과 SM과 WSM에서는 33～72 kDa의 고분자가 존재하였으나 LSM와 LWSM에서는 17 kDa 이하의 저분자 단백질만 나타났다. 또한 이차원 전기영동한 결과 SM과 LSM에서의 고분자 단백질 spot이 WSM와 LWSM에서는 다양한 크기의 저분자 단백질 spot으로 변환되어 효소가수분해에 의해 고분자 단백질이 저분자화 되는 것으로 나타났으며, 향후 단백질 spot의 분리 및 특성에 관한 연구가 필요하다.
- 47 mg%인 WSM에 비해서 높게 나타나 대두단백질이 가수분해 되면서 유리아미노산의 함량이 증가된 것으로 생각된다. SM과 LSM에 비해 WSM와 LWSM에서 필수아미노산과 총 유리아미노산 함량은 높게 나타났으며, 이것은 WSM과 LWSM 제조과정에서 비지를 제거하지 않아 유리아미노산이 높게 나타난 것으로 생각된다. 이러한 결과는 Jang 등(11)과 Gu 등(23)이 대두단백질과 녹두 단백질이 효소적 가수분해를 통해 유리아미노산이 증가되며, Shin(24)이 분리대두단백이 효소처리에 의해 유리아미노산의 함량이 증가된다고 보고한 것과 비슷한 결과를 나타내었다.
- 2에 나타내었다. SM의 단백질의 분자량은 33, 40 및 72 kDa의 고분자와 12 kDa 이하의 저분자로 나타났으며, WSM의경우 분자량 40～70 kDa 사이의 고분자 단백질이 분포하는 것으로 나타내었다. An 등(25)은 삶은 대두의 수용성 단백질의 주된 분자량은 66 kDa이라고 보고한 바 있어 WSM의 단백질 분자량과 비슷하였으며, SM은 비지 제거로 인하여 수용성 단백질이 대부분 빠져나가서 간 것으로 생각된다.
- 유리아미노산의 조성을 조사한 결과 모든 시료에서 valine, leucine, phenylalanine, γ-aminobytyric acid(GABA), arginine의 함량이 높은 것으로 나타났다. Valine, leucine, phenylalanine, arginine은 저분자화 시킨 LSM, LWSM에서 함량이 더 높게 나타났으나 기타 아미노산의 함량은 큰 변화가 없었다.
- 유리아미노산의 조성을 조사한 결과 모든 시료에서 valine, leucine, phenylalanine, γ-aminobytyric acid(GABA), arginine의 함량이 높은 것으로 나타났다.
- 본 연구는 두유와 전두유의 효소적 가수분해에 따른 단백질의 변화를 조사하였다. 총 유리아미노산 함량을 조사한 결과 두유(SM)과 전두유(WSM)에 비해서 저분자 두유(LSM)와 저분자 전두유(LWSM)에서 높게 나타났다. 필수아미노산 함량은 SM과 LSM에서 비슷하였으나 LWSM은 WSM보다 높게 나타났다.
- 총 유리아미노산 함량을 조사한 결과 두유(SM)과 전두유(WSM)에 비해서 저분자 두유(LSM)와 저분자 전두유(LWSM)에서 높게 나타났다. 필수아미노산 함량은 SM과 LSM에서 비슷하였으나 LWSM은 WSM보다 높게 나타났다. SDS-PAGE 전기영동 패턴 분석 결과 SM과 WSM에서는 33～72 kDa의 고분자가 존재하였으나 LSM와 LWSM에서는 17 kDa 이하의 저분자 단백질만 나타났다.
후속연구
- SDS-PAGE 전기영동 패턴 분석 결과 SM과 WSM에서는 33～72 kDa의 고분자가 존재하였으나 LSM와 LWSM에서는 17 kDa 이하의 저분자 단백질만 나타났다. 또한 이차원 전기영동한 결과 SM과 LSM에서의 고분자 단백질 spot이 WSM와 LWSM에서는 다양한 크기의 저분자 단백질 spot으로 변환되어 효소가수분해에 의해 고분자 단백질이 저분자화 되는 것으로 나타났으며, 향후 단백질 spot의 분리 및 특성에 관한 연구가 필요하다.
- 1～20 kDa 범위의 단백질은 SM과 WSM에서 나타나지 않았으나 LSM과 LWSM에서 나타났다. 이것은 SM과 WSM의 고분자 단백질 spot들이 가수분해 되어 LSM과 LWSM에서는 다양한 크기로 전환이 되어 단백질 spot을 형성한 것으로 효소적 가수분해에 의해 단백질이 저분자화 되는 것으로 나타났으며, 향후 단백질 표준지도 작성, peptide 분리 및 기능성과 같은 연구가 수반되어야 할 것으로 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.