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황색포도상 구균 분리배지의 원리 및 특성
Principles and Characteristics of isolation media for Staphylococcus aureus 원문보기

Safe food, v.3 no.4, 2008년, pp.26 - 34  

오민희 (한국식품연구원 안전성연구단) ,  김윤지 (한국식품연구원 안전성연구단) ,  구민선 (한국식품연구원 안전성연구단) ,  오세욱 (한국식품연구원 안전성연구단)

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제안 방법

  • Citrate 또는 EDTA 토끼 혈장(Bacto rabbit plasma EDTA; Difco) 한 방울 첨가한다. 10초 내에 응집이 있는지를 관찰한다. 너무 섞으며 응집 물이 작아진다.
  • 순차적으로 희석한 시료액을 이용하여 처 리구를 구 성하며 가장 희석이 많이 된 경우 negative endpoint로한다. 35℃에서 48±2시간 배양한 후 배양액을 BairdParker medium에 strecking 하여 특징적인 colony를 선발하여 적어도 1개의 presumptive colony를 BHI broth에 옮긴 후 확인실험을 실시한다. 결과는 최확수법 계 산법에 따라 한다.
  • S. aureus 확인을 위해서 coagulase test를 실시하며 이외에도 catalase test, glucose 혐기배양 가능여부, mannitol 혐 기 배 양 가 능 여 부 , Lysostaphin sensitivity와 thermostable nuclease production을 조사한다(표 1).
  • schleiferi subsp. coagulanser S. lugdunensise clumping factor 를 생성할 수 있기 때문에 표준방법은 전통적 시험관 법이 다 전통적 슬라이드법은 간단하고 빠른 장점이 있는 반면 10~15%까지 위음성이 있으므로 음성 결과를 보이면 시험 관 법으로 확인해야 하고 시험관법은 시험술식을 정확히 지 키면 정확한 결과를 얻을 수 있지만 시간이 오래 걸리고 술 식이 번거로운 단점이 있으며 이 방법 또한 2~5%의 위음성 이 있기 때문에 보통DNase와 6.5% mannitol salt 시험 을 병행하여 시험한다. 더욱이 methicillin 내성 S.
  • 3 씩 총 접종액이 1 ㎖이 되게 도말한 후 35 ℃에서 45~48시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다. 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종 하고 37P에서 18~24시간 배양한 후 S. aureus 법의 확인시험을 실시한다.
  • Coagulase test는 식품공전에서도 8 aureus의 확인 시험 방법으로 고시되어 있다. 만니톨 식염한천배지와 Baird-Parker 한천평판배지에서 분리된 균을 대상으로 보 통한천배지에 옮겨 배양한 후 그람염색을 실시하여 포도상 배열을 갖는 그람양성균을 확인한 후 coagulase test를 실 시한다. 실험 결과 응고되거나 섬유(fibrin)가 석출된 것을 모두 coagulase 양성으로 하고 이를 S.
  • 35~37℃에서 24시간까지 배양한다. 배양 4시간 후에 가볍게 시험관을 흔들어 풀어지지 않는 gel이나 clot이 형성되었는지를관찰한다. 4시간째에 응고가 없으면 배양 24시간째에 다시 관찰한다.
  • aureus에 대한 정량시험법이 고시 되었다. 실험법은 증균 과정 없이 멸균 인산 완충 희석액으 로 10배 희석하여 균질화한후Baird-Parker 한천평판배 지 3장에 0.3 ㎖ 0.4 ㎖ 0.3 씩 총 접종액이 1 ㎖이 되게 도말한 후 35 ℃에서 45~48시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다. 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종 하고 37P에서 18~24시간 배양한 후 S.
  • Fibrinogen을 첨가하여 proteoljbis를측정할 수 있으며 이외에 S aureus의 대표적인 특성인 coagulase#생산하는성질을rabbit plasma# 이용하여 측정하는 원리를가지고 있어 선택성(specificity)이 개선 되었다고할 수 있다. 첨가된fibrinogen의 분해를방지하기 위하여 trypsin inhibitor를 첨가하였으며 tellurite도 첨가하여 grey-black 아liny colony를생성한다. 전체적으로 배지는투 명하며 grey-black 아liny colony 주위에 coagulase0]] 의한 뿌연환이 형성된다(표 3).
  • 4 ㎖로나 누어서 시료액을분주한다. 특징적인 S. aureus를 나타내는 colony가 20~200개 존재하는 plate를 선발하여 계수한다.

이론/모형

  • Bacteriological Analytical Manual(BAM) 의한 검출법은 g당 100 cells 이상의 S. aureus가존재할 경우 direct plate count method를 시용한다. Baird-Parker agar를 분리배지로 사용하며 3 plates를 이용하여 1의 시 료를분산하여 접종한다.
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