본 연구는 현행 식품공전상 제시되어 있는 식중독균 분리배지의 평가를 위해 Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus의 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 Broth와 Food에서 시험하였다. Food는 닭고기, 쌀, 돼지고기, 고등어를 대상으로 5가지 식중독균을 접종후 균주의 recovery를 확인하였고. Broth는 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 사용하였다. Broth에서는 각 세정균에 대한 분리배지들 간에 유의적인 차이가 없었으나(P<0.05), Food에서는 그 차가 크지는 않았으나, 분리선택배지간의 분리능에 통계적 유의차가 존재하였다. 식품공전에 등재된 전통적인 분리 선택배지에서 분리된 균수가 Chromogenic 배지 등 새로운 선택배지에서 분리된 균수보다 많았다. 국제적으로 등재된 배지간의 선택성의 차이가 존재하였으며, 추후 다양한 배지가 식품공전에 등재되기 위해서는 추가 연구가 필요하다.
본 연구는 현행 식품공전상 제시되어 있는 식중독균 분리배지의 평가를 위해 Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus의 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 Broth와 Food에서 시험하였다. Food는 닭고기, 쌀, 돼지고기, 고등어를 대상으로 5가지 식중독균을 접종후 균주의 recovery를 확인하였고. Broth는 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 사용하였다. Broth에서는 각 세정균에 대한 분리배지들 간에 유의적인 차이가 없었으나(P<0.05), Food에서는 그 차가 크지는 않았으나, 분리선택배지간의 분리능에 통계적 유의차가 존재하였다. 식품공전에 등재된 전통적인 분리 선택배지에서 분리된 균수가 Chromogenic 배지 등 새로운 선택배지에서 분리된 균수보다 많았다. 국제적으로 등재된 배지간의 선택성의 차이가 존재하였으며, 추후 다양한 배지가 식품공전에 등재되기 위해서는 추가 연구가 필요하다.
This study was conducted to evaluate the selective media listed in currently available Food Code in Korea. The 29 different types of media of five different types of foodborne bacteria including Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus ...
This study was conducted to evaluate the selective media listed in currently available Food Code in Korea. The 29 different types of media of five different types of foodborne bacteria including Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus were tested in the broth and food. The recovery test for five different types of foodborne bacteria was performed in the artificially inoculated into chicken, rice, pork and mackerel. There was no significant differences in isolation capabilities among twenty nine different types of isolation selective media for five different types of foodborne bacteria in broth condition, while there was significantly a little differences in isolation capabilities among those on foods (P<0.05). The higher number of foodborne pathogens were isolated from conventional selective media approved in Food Code than newly developed selective media such as chromogenic media. This results suggest that there was differences of selectivities among currently available isolation selective media in many countries and further studies are needed to be approved by Korean Food and Drug Administration.
This study was conducted to evaluate the selective media listed in currently available Food Code in Korea. The 29 different types of media of five different types of foodborne bacteria including Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus were tested in the broth and food. The recovery test for five different types of foodborne bacteria was performed in the artificially inoculated into chicken, rice, pork and mackerel. There was no significant differences in isolation capabilities among twenty nine different types of isolation selective media for five different types of foodborne bacteria in broth condition, while there was significantly a little differences in isolation capabilities among those on foods (P<0.05). The higher number of foodborne pathogens were isolated from conventional selective media approved in Food Code than newly developed selective media such as chromogenic media. This results suggest that there was differences of selectivities among currently available isolation selective media in many countries and further studies are needed to be approved by Korean Food and Drug Administration.
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문제 정의
따라서 본 연구에서는 현행 식품공전상 제시되어 있는 주요 5대 식중독균 분리배지의 평가를 위해 broth와 food 에서 분리배지의 분리능을 비교하여 식품공전법 개정을 위한 기초 자료로 활용하고자 하였다.
제안 방법
본 연구는 현행 식품공전상 제시되어 있는 식중독균 분리 배지 의 평가를 위해 Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus Qureus의 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 Broth와 Food에서 시험하였다. Food는 닭고기, 쌀, 돼지고기, 고등어를 대상으로 5가지 식중독균을 접종 후 균주의 recovery를 확인하였고.
Broth와 마찬가지로 각각의 균주를 3회 순수배양하여 원심분리기로 2회 세척한 후 다. 균주는 식품시료에 103~104 CFU/g의 수준으로 오염되도록 멸균 인산완충희석액으로 희석 및 현탁하여 각 시료를 40분간 침지한 후 외관의 물기가 마를 때까지 자연건조시켰으며 건조가 끝난 시료는 stomacher (BagMixer 400, Interscience, france)를 이용하여 균질화하고 멸균 인산 완충 희석액으로 희석한 후 각각의 분리배지에 0.1 mL씩 무균적으로 분주하여 균일하게 도말하였다. MYP agar는 30±2℃에서 24시간 배양하였으며 나머지 분리배지는 35±2℃ 에서 24시간 배양하며 집락이 관찰되지 않을 경우 추가적으로 12시간 배양하여 계수하였다.
, USA)에서 2회 세척하였다(1500xg for 15 min at 4℃). 멸균 인산완충희석액을 사용하여 각각의 혼합 균주를 102, 103, 104 CFU/mL로 희석하였으며 희석된 균주들은 미리 준비된 각각의 분리배지에 O.lmL씩 무균적으로 분주하여 균일하게 도말하였다. Mannitol-Egg YolkPolymyxin(MYP) agar는 30±2℃에서 24시간 배양하였으며 나머지 분리배지는 35±2℃에서 24시간 배양하며 집락이 관찰되지 않을 경우 추가적으로 12시간 배양하여 계수하였다.
평가한 분리배지는 우리나라를 포함하여 각국의 식품, 의약품 관리국과 국제적인 공인기관에 등록되어 있으며, 시중에서 판매중인 분리배지를 우선적으로 선정 하였으며 Table 1에 나타내었다.
대상 데이터
최근 개발되어 시판되고 있는 분리 배지들의 특징은 신속하고 간편하게 미생물을 검출하기 위한 목적으로 개발되어지고 있다. 본 연구에 사용된 분리배지 중 CHROMagar Salmonella와 SM ID2 agar가 chromogenic gene의 특성을 이용한 신기술의 분리배지다. 분리배지간의 분리능은 유의적인 차이를 보이지 않았으나 연구 결과 Maddocks 등의 연구에 따르면 CHROMagar Salmonella를 사용하면 Salmonella spp.
분리배지의 분리능을 검증하기 위하여 사용한 미생물은 S. Typhimurium, S. Enteritidis, B. cereus, L. monocytogenes, V. parahaemolyticus, S. 이며 각 균주는 중앙대학교와 경상대학교 식품공학과에서 각각 분양받아 사용하였다. V.
데이터처리
본 실험은 3회 반복 실시하였고 그 값을 SPSS Ver. 10.0 package program"을 이용하여 각 시험구의 평균과 표준편차를 산출한 후 각 시험구간의 차이 유무를 ANOVA로 분석한 뒤 a=0.05에서 유의적 차이를 Turkey법으로 검증하였다⑹.
성능/효과
특히 Salmonella spp., Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Bacillus cereus, Campylobacter jejuni 등과 같은 세균성 미생물이 전체 보고된 식중독 발생의 약 90%를 차지하고 있다는 조사D를 보더라도 급성식중독의 대부분이 세균성이라는 사실을 알 수 있다. 살모넬라증은 식중독 집단 발생의 가장 큰 비중을 차지하며, 주로 오염된 달걀과 가금류가 포함된 식품을 통해 전파되는 S.
B. cereus에 대한 분리배지의 분리능은 국내 식품 공전 상 미생물시험법에 등록되어 있는 분리배지인 MYP agar7]- B. cereus selective agar base와 함께 Chromogenic Bacillus cereus agar보다 통계적으로 높은 분리를 보였다. 분리배지간의 분리능 차이는 크지 않았지만 통계적 유의차를 나타내었다(Pv0.
laterosporuse. B. cerez/s만을 선택적으로 분리하기에는 한계가 있는 것으로 나타났으며 chromogenic 배지에서는 선택성이 커 다른 유사균을 제외시켜 더 낮은 수의 균이 분리된 것으로 판단된다.
L. monocytogenese 대한 분리배지의 분리능은 분리 배지 간의 차이는 크지 않았지만 통계적 유의적인 차를 보였으며 (Pv0.05), LPM agar는 다른 분리배지보다 가장 낮은 분리율을 나타내었고, 다른 네 가지 배지는 통계적인 유의차가 없이 분리능이 비슷한 것으로 나타났다. 그러나 Gasanov 등26)과 Gracieux 등은 L.
. MacCokey agar와 SM ID2 agar에서 가장 높은 균수가 분리되었으며 CHROMagar Salmonella는 가장 낮은 균 수가 분리되었다. Martin%과 Herbert 등의 보고에 따르면 가장 높은 균수를 분리해 낸 MacCokey agar와 같은 대부분의 전통배지들에서 Citrobacter spp와 Proteus spp.
S.aureus에 대한 분리배지의 분리능을 나타낸 결과 분리 배지 간의 차이는 크지 않았지만 통계적 유의차를 나타내었다(Pv0.05). Mannitol Salt agar with Egg Yolk, Staphylococcus Medium 110은 상대적으로 많은 균이 분리되었으나 이들 배지 간에는 유의적 차이가 없었다.
Mannitol Salt agar with Egg Yolk, Staphylococcus Medium 110은 상대적으로 많은 균이 분리되었으나 이들 배지 간에는 유의적 차이가 없었다. 그 다음으로 Vogel and Jamson(VJ) agai였으며, Baird-Paker agar, Baird Paker RPF agar(RPFA), CHROMagar Staph aureus는 상대적으로 적은 균수가 분리되었으며, 이들 배지 간에는 유의적 차이가 없었다(P<0.05). landolo 등2", Hurst 등29), Gray 등, Smolka 등, Idziak 등의 연구 결과에 따르면 고농도(i.
05), Food에서는 그 차가 크지는 않았으나, 분리 선택 배지 간의 분리능에 통계적 유의차가 존재하였다. 식품공전에 등재된 전통적인 분리 선택배지에서 분리된 균수가 Chromogenic 배지 등 새로운 선택배지에서 분리된균수보다 많았다. 국제적으로 등재된 배지간의 선택성의 차이가 존재하였으며, 추후 다양한 배지가 식품공전에 등재되기 위해서는 추가 연구가 필요하다.
ivanovii를 명확하게 구분해 주는 배지는 거의 없는 것으로 나타났으며 정확한 L monocytogenese} 검줄을 위해서는 이후 생화학적 검증과 같은 확인시험이 더 필요하다고 보고하였다. 한편, Vibrio parahaemolyticus에 대한 분리배지의 분리 능은 분리배지간에 유의적인 차이를 보이지 않았다(P<0.05).
후속연구
식품공전에 등재된 전통적인 분리 선택배지에서 분리된 균수가 Chromogenic 배지 등 새로운 선택배지에서 분리된균수보다 많았다. 국제적으로 등재된 배지간의 선택성의 차이가 존재하였으며, 추후 다양한 배지가 식품공전에 등재되기 위해서는 추가 연구가 필요하다.
또한 이러한 선택배지들은 정량적인 결과도 중요하지만 식품산업의 적용시 경제성 뿐만 아니라 많은 시간을 필요로 하여 현재 식품공전법에 있는 배지들로는 식품으로부터 식중독균을 분리하는데 한계가 있어 식품산업에서의 불만이 그간 제기되어 왔었다. 따라서 전통적인 식중독세균의 검출방법의 개발 방향은 선택배지에서 분리 후 수행해야 될 확인시험에 소요되는 시간을 줄일 수 있는 specificity 가 높은 선택배지의 개발에 집중될 것으로 예측할 수 있다. 33).
전통적인 선택배지와 Chromogenic media 사이에서의 분리 균수가 큰 차이는 없었지만 유의적 차를 보인 것은 향후 정량 규격으로 전환 될 때를 대비하여 선택 배지들 간의 균 분리능 차이를 극복해야만 한다. 분리배지의 분리능은 true-positive와 true-negative가 높고 false-positive와 false-negative가 낮을수록 우수한데, 전통배지에서 false- positive가 발생하여 분리능이 떨어진다고 볼 수도 있어 추후 식품공전에 등재된 기초 배지들의 선택성에 대한 추가연구가 필요할 것이다.
33). 이에 chromogenic 배지와 petrifilm 등과 같이 현재 시장에서 각광받고 있고, 그 신뢰도와 편리성 면에서 인정받았던 많은 신제품들을 현행 제도권 내에서 흡수하여 공인법 화 한다면 관련 산업의 개발 의욕을 고취하고 산업을 활성화하여 경제적 파급효과가 클 것으로 기대된다.
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