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문제 정의
- 또한 국내 경기 침체로 버섯 가격은 2000년 4, 406원/kg에서 2006년에는 2, 558원/ kg으로 하락 추세이고, 느타리버섯 감소에 따른 대체 품목으로 팽이, 큰느타리버섯 등이 증가되고 있는 실정이다. 이에 느타리버섯 재배 농가의 새로운 소득원을 개발하고 소비자의 다양한 요구에 부응하기 위해 충남농업기술원에서 2005년 병재배에 적합한 신품종 느타리버섯을 개발하였기에 주요 특성을 소개하고자 한다.
제안 방법
- 이 배지를 고압 살균기로 121℃에서 20분간 살균하여 무균상에서 petri dish(직경 9 cm)에 30ml씩 분주하여 접종원을 접종하였으며, 25℃로 조절된 항온기에서 3, 6, 10일간 배양 후 균총의 직경을 측정하였다.
- 후 20, 25, 28。(2로 각각 온도를 달리한 항온기에서 3, 6, 10일간 배양 후 균총 직경을 측정하였다.
- 시험 균주의 적정 pH를 조사하기 위하여 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에 0.1 N HCI과 NaOH를 사용하여, 배지의 pH를 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0으로 조절 후 250ml 삼각플라스크에 50씩 분주, 살균하고 균을 접종하여 25℃ 에서 15일간 배양 후 whatman No.2 여과지로 여과시킨 후 균체 량을 건조평량(Sartorious Electronic Balances 1712 MP8)하여 균사의 건물중을 조사하였다.
- 법(1995)에 따라 수분은 105℃ 상압건조법, 회분은 550℃에서 직접회화법 , 조단백은 Kjeldahl법으로 그 함량을 측정하였으며 무기이온 분석은 습식법으로 전처리하여 분석하였다. 즉 건조시료 1 g을 질산, 과염소산과 질산액의 혼합액 및 염산을 순차적으로 이용하여 분해시킨후 일정량으로 희석, 여과한 후 ICP analyzer(GBC integra XMP, Australia)# 사용하여 원자흡광광도법으로 정량하였다.
- Genomic DNA 1 ug을 각각 제한효소 瓦EcoRI와 Msel 로 절단하고, T4 DNA ligase와 EcoRI와 Msel adapter* 첨가한 후 16℃에서 12시간 ligation시켰다.
- Pre-amplificatione 0.5 pmol의 E00과 M00 primer, 250 mM dNTP, 10 mM Tris-HCl(pH 9.0), 40 mM KC1, 1.5 mM MgCl2, Teq-DNA paymerase(Bioneer, Korea) 2 unit, adapter가 붙어진 DNA 4 ul에 HQ를 첨가하여 최종 volume을 50 以로 하였다. pgheating을 94℃ 5분하고, 94℃ 30초, 56℃ 1분, 72℃ 1분을 한 주기로 20회 반복하고 72℃에서 7분간 final extension을 실시하였다.
- 5 mM MgCl2, Teq-DNA paymerase(Bioneer, Korea) 2 unit, adapter가 붙어진 DNA 4 ul에 HQ를 첨가하여 최종 volume을 50 以로 하였다. pgheating을 94℃ 5분하고, 94℃ 30초, 56℃ 1분, 72℃ 1분을 한 주기로 20회 반복하고 72℃에서 7분간 final extension을 실시하였다. 2 차 선택증폭은 o.
- pgheating을 94℃ 5분하고, 94℃ 30초, 56℃ 1분, 72℃ 1분을 한 주기로 20회 반복하고 72℃에서 7분간 final extension을 실시하였다. 2 차 선택증폭은 o.5pmol E134/M13와 E13/M03 primer set(Table 9), 250 mM dNTP, 10 mM Tris-HCl(pH 9.0), 40 mM KC1, 1.5 mM MgCl2, 72q-DNA polymerase (Bioneer, Korea) 2 unit, 1차 Pieamplification된 산물은 1:10으로 희석된 DNA 1ul에 H2CX 첨가하여 최종 volume을 250ul로 하였다. pre-heatinge 94℃ 5분하고 94℃에서 30초 67℃에서 30초, 72℃에서 1분간 반응시킨 후 annealing 온도를 0.
- 5 mM MgCl2, 72q-DNA polymerase (Bioneer, Korea) 2 unit, 1차 Pieamplification된 산물은 1:10으로 희석된 DNA 1ul에 H2CX 첨가하여 최종 volume을 250ul로 하였다. pre-heatinge 94℃ 5분하고 94℃에서 30초 67℃에서 30초, 72℃에서 1분간 반응시킨 후 annealing 온도를 0.7℃씩 감소시키면서 11주기를 반복한 뒤, 마지막으로 94℃에서 30초, 57℃에서 20초, 72℃에서 1분간을 23회 반복하고 72℃에서 7분간 final extension을 실시하였다. PCR 산물을 6% long ranger gel 에 1800 V 80W에서 3시간 loading한 다음 silver staining 하고 GelCompar Version 2.
- , 2000)., 미소, 의 분자 생물학적 특징을 조사하기 위하여 E134와 M13, E13와 M03의 2개의 primer set을 이용하여 AFLP를 실시하여 UPGMA 분석을 하였다., 미소와 원형 호, 3호, 수한 2호・3호, 균협 1호, 흑평은 84%의 유사도 수준에서 2개의 그룹으로 나누어졌다.
대상 데이터
- 균주는 200!년도에 충남 부여군 홍산면의 원형 1호 느타리버섯재배 균상에서 변이 자실체를 채취 하였으며, 균배양적 특성 조사결과 기존의 원형느타리버섯과 비교하여 미소 느타리버섯(CM 000123) 균주가 우수한 특성을 나타내어 2002년부터 2005년까지 균배양적특성, 재배적 특성, 균상 재배의 생산력을 시험하여 선발 되었다. 2005년 12월 농촌진흥청 ‘05농작물 직무육성 신품종 선정 위원회 심의 결과 신품종으로 선정되어 “미백”으로 명명되었으나 품종등록 시 품종명칭이 “미소(Miso)”로 명명 되었다.
- 2005년 12월 농촌진흥청 ‘05농작물 직무육성 신품종 선정 위원회 심의 결과 신품종으로 선정되어 “미백”으로 명명되었으나 품종등록 시 품종명칭이 “미소(Miso)”로 명명 되었다. 시험 균주는 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에 계대 배양하여 4℃의 항온기에 보존한 후 PDA에 접종하여 25℃의 항온기에 6일간 배양하여 사용하였다.
- 배지별 균사 생장을 측정하기 위하여 PDA(Potato Dextrose Agar), MCM(Mushroom Complete Medium, MEA(Malt Extrat Agar), YMA(Yeast Malt Agar) 배지를 사용하였다. 이 배지를 고압 살균기로 121℃에서 20분간 살균하여 무균상에서 petri dish(직경 9 cm)에 30ml씩 분주하여 접종원을 접종하였으며, 25℃로 조절된 항온기에서 3, 6, 10일간 배양 후 균총의 직경을 측정하였다.
- 미소느타리버섯 균주(CM000123) 및 유사 느타리버섯 균주들을 PDA 배지에 전접종하여 25℃에서 3~4일간 배양 후 PDB에 접종, 25℃에서 3~4일간 진탕배양을 한 균사체를 genomic DNA 추출용 시료로 사용하였다. 균사체는 동결건조 후 소량을 1.
- , 미소, 갓의 직경은 28 mm로 원형 호(29 mm) 과비슷하였지만, 장안 5호(31 mm)에 비해 작았다. 대의 길이는 54 mm로 원형 호(52 mm)과 비슷하였지만, 장안 5 호(48 mm)에 비해 길었다. 대의 굵기는 9로 원형 1호(11 mm)와 장안 5호(12 mm)에 비해 가늘었다.
데이터처리
- 7℃씩 감소시키면서 11주기를 반복한 뒤, 마지막으로 94℃에서 30초, 57℃에서 20초, 72℃에서 1분간을 23회 반복하고 72℃에서 7분간 final extension을 실시하였다. PCR 산물을 6% long ranger gel 에 1800 V 80W에서 3시간 loading한 다음 silver staining 하고 GelCompar Version 2.5 Pattern analysis software (Applied-Maths, Belgium)을 사용하여 Pearson corelation 으로 유사도를 구하고, UPGMA(unweighted pair group method with arithmetic average)에 의한 집괴분석을 실시하였다.
이론/모형
- 재배에 사용한 배지는 소나무 톱밥과 첨가제인 밀기울과 8:2의 부피비로 각각 혼합하고, 수분함량을 65%로 조절한 후 850 polypropylene 병에 넣어 살균, 접종하고 21℃ 배양실에서 20일간 배양 후 온도는 13~17℃, 상대습도(RH)는 85~95% 로 조절한 생육실에서 발이 후, 생육 특성 및 수량을 조사 하였으며 조사 방법은 농사시험연구조사 기준(농촌진흥청, 1995)에 준하였으며 그 외 관리는 관행에 준하였다.
- 원료콩, 균사체를 증식시킨 콩 및 두부의 일반성분은 A.O.A.C.법(1995)에 따라 수분은 105℃ 상압건조법, 회분은 550℃에서 직접회화법 , 조단백은 Kjeldahl법으로 그 함량을 측정하였으며 무기이온 분석은 습식법으로 전처리하여 분석하였다. 즉 건조시료 1 g을 질산, 과염소산과 질산액의 혼합액 및 염산을 순차적으로 이용하여 분해시킨후 일정량으로 희석, 여과한 후 ICP analyzer(GBC integra XMP, Australia)# 사용하여 원자흡광광도법으로 정량하였다.
- AFLP 분석은 Vos 등(1995)의 방법에 준하여 실시하였다. Genomic DNA 1 ug을 각각 제한효소 瓦EcoRI와 Msel 로 절단하고, T4 DNA ligase와 EcoRI와 Msel adapter* 첨가한 후 16℃에서 12시간 ligation시켰다.
성능/효과
- 시험 균주의 배지별 균사생장을 측정하기 위하여 4종의 배지를 공시하여 균사 생육을 조사한 결과 신품종 느타리버섯, 미소, 의 균사생장은 버섯완전배지(MCM)와 YMA 배지에서 균사생장이 가장 양호하였고, 감자추출배지 (PDA)에서도 양호하였으나, MEA배지에서는 균사 생장이 불량하였다(Table 1). 자실체가 백색인 변이체의 모 균주로 추정되는 원형 1호의 배양적 특성을 비교한 결과 백색 변이체들은 대체적으로 느리고, 균총은 다소 불규칙하였다고 보고하였는데 '미소, 도 비슷한 경향이었다(이 등, 2007).
- 자실체가 백색인 변이체의 모 균주로 추정되는 원형 1호의 배양적 특성을 비교한 결과 백색 변이체들은 대체적으로 느리고, 균총은 다소 불규칙하였다고 보고하였는데 '미소, 도 비슷한 경향이었다(이 등, 2007)., 미소, 의 균사배양 최적온도를 조사하기 위하여 배양 온도를 달리하여 균사 생육을 조사한 결과 25~28℃에서 균사 생육이 빠르고 균사 밀도가 높았고, 2SC에서는 균사 생육이 느렸고(Table 2), 본 시험에서도 원형 1호의 균사 생장은 성 등(1999)이 기 보고한 바와 같이 최적 균사 생육 적온은 25~28℃이었고 28“C에서 균사의 생육이 가장 양호하였지만, 청풍은 25℃에서 균사생장이 양호하였다(유 등, 1993; 이 둥 2000).
- 균사 생육에 적합한 최적 pH를 구명하기 위하여 배지의 pH를 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0으로 달리하여 PD broth에서 균사 생장을 조사한 결과 pH 5.0에서 237 mg/50 mH 15일로 가장 잘 자랐으며 pH 6.0 이상이나 pH 5.0 이하에서는 균사 생육이 다소 억제되는 경향이었다(Table 3). 성 둥(1999)은 균사체 생육에 미치는 초기 pH의 영향을 조사한 결과, 원형 [호는 pH 6.
- 대의 굵기는 9로 원형 1호(11 mm)와 장안 5호(12 mm)에 비해 가늘었다. 병당 유효 경수는 18개로 원형 호 (23개)와 장안 5호(1L2개)보다많았고 병당 수량은 115.7 g으로 원형 1호(96.4 g)보다 20% 높았고, 장안 5호(82.4 g)보다 40% 높았다.
- , 미소, 의 화학성분을 분석한 결과 대조 느타리버섯인 장안 5호와 원형 1호보다 수분함량이 낮았으며 단백질, 당 및 회분함량이 높게 나타났고, 버섯의 아린맛을 띄는 주된 물질인 Tannin산을 분석한 결과, 미소, 는 L54%로 원형 1호 L72%와 장안 5호 1.64%보다 그 함량이 낮게 나타났다(Table 7). 또한 무기이온의 함량에 있어 다량원소인 K는 '미소'가 원형 호와 장안 5호 보다 낮았으며 미량원소인 Ca, Fe 등은 다소 높게 나타났다(Table 8).
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