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문제 정의
- 또한 민들레 성분으로 알려진 플라보노이드류, 이눌린과 프룩토올리고당은 인체내소화효소에 의해 가수분해 되지 않고 소화되지 못한 것은 대장의유익한 장내 미생물인 Bifidobacterium에 의해 일차적으로 이용되어 장내 세균총을 개선시키는 것으로 보고 되었으며 flavonoid 성분이 streptozotocin 유발 당뇨 흰쥐에서 유의성 있는 혈당강하효과를 보였다는 실험 결과가 보고 된 바 있다, ). 또한 최;긇의 보고에 의하면 70%에탄올 추출물의 경우, 활성산쏘 제거 및 혈관신생 억제효늖을 보였고 세포수준에서의 NO생성 억제 및 동물 모델에서의 제한적 진통 효능 등이 실험적으로 입증된 바 있다% 본 연구에서는 마우스 귀에서 TPA (12-0- tetradecanoylphobol-acetate)” 또쁨 croton oil10) 로 염증을 유발시킨 후, 귀 부종 억제 측정방법 (ear edema test)11)을 이용하여포공영의 부종에 대한 억제능력을 초사함으로써 포공영의 염증조절 효과를 실험적으로 검증하고자 하였다. 부종유발에 사용된 TPA와 croton oile 국소적으로 작용하는 염증유발 물질로 스테로이드와 비스테로이드성 약품의 염증 억제 효과분석 이외에 edema, cell infiltration, cell proliferation 등의 염증반응과정을주도하는 조절자 (regulator)들의 효능을 스크리닝 하는데 주로사용되어 왔다12.
제안 방법
- 5㎍ 을 정량하여 20 ㎕ 의 acetone에 녹여 사용하였으며 귀의 양면에 각각 10 ㎕씩 발라주었다. TPA (혹은 croton oil) 처리 후 5분경과 시점에 TPA(혹은 croton oil)를 처리한 왼쪽 귀에 포공영을 처리하였다. 먼저 일정량의 포공영 분말을 W00 mg/ml의 농도로 acetone에 각각 녹인 후, 20 ㎕를 mouse 왼쪽 귀의 양면에 각각 10 ㎕씩 도포하였다.
- 본 실험에서는 부작용 없이 탁월한 약리작용을 보이는 포공영의 한약리학적 효능에 착안하여 TPA와 croton oil 로 마우스귀에 염증을 유발하고 포공영 열수 추출물을 직접 처리하여 대조군인 indomethacin을 처리한 군과 비교함으로서 항염증 효능을 알아보았다. Indomethacine cyclooxygenase-2 (COX-2)S를비특이적으로 매우 강력하게 억제하는 항염, 해열, 진통효과를지닌 indoleacetic acid 계 non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAID)로서 류마티스성 관절염, 골관절염(퇴행성관절질환), 견관절주위염, 외상에 의한 염증에 사용되고 있다%
- 시료는 이물을 제거하고 깨끗이 세척한 후 열풍건조하여 분쇄한 후 사용하였다. 분쇄한 민들레 잎을 환류냉각관이부착된 flask에 넣고 시료 중량의 15배량의 증류수를 가하여 9 0℃에서 1시간 30분 동안 2회 반복추출하여 감압여과장치로 Whatman No. 1의 여과지를 사용하여 여과한 후 여액을 감압농축하고 이를 동결 건조하여 제조하였다. 상기 방법으로 제조된민들레 열수 추출물 분말을 본 실험에서는 각각 100, 50, 10, 1 mg /ml의 농도로 아세톤에 녹여 각각 20 ㎕씩 처리하였다.
- 5 mg을 20㎕의 acetone에 녹여 포공영 처리방법과 마찬가지로 염증 유발 5분 후 mouse 왼쪽 귀 양면에 각각 10 ㎕/site 로 발라주었다. 비처치군 (CONT, n=13) 은 왼쪽 귀에 TPA만 처리한 군으로 하였다. 실험 대조군으로는 acetone만을 mouse 왼쪽 귀의 양면에각각 10 ㎕씩 도포해 준 mouse를 사용하였다.
- 1의 여과지를 사용하여 여과한 후 여액을 감압농축하고 이를 동결 건조하여 제조하였다. 상기 방법으로 제조된민들레 열수 추출물 분말을 본 실험에서는 각각 100, 50, 10, 1 mg /ml의 농도로 아세톤에 녹여 각각 20 ㎕씩 처리하였다.
- 먼저 일정량의 포공영 분말을 W00 mg/ml의 농도로 acetone에 각각 녹인 후, 20 ㎕를 mouse 왼쪽 귀의 양면에 각각 10 ㎕씩 도포하였다. 실험군은 포공영의 처리 농도에 따라 포공영을 100 mg/皿의농도로 사용한 DA-100 group (n=13), 50 mg/ 皿의 농도로 사용한 DA-50 group (n=13), 10 mg/ml의 농도로 사용한 DA-10 group (n=13) 그리고 1 mg/ml 의 농도로 사용한 DA-1 group (n=13) 등, 총 4개의 군으로 나누었다. 대조군 (INDO, n=12) 으로는 indomethacin (Sigma-Aldrich Co, USA) 을 사용했으며 0.
- 염증 유발 및 포공영 처리 7시간 경과 후 양쪽 귀의 두께를측정하여 염증을 유발시킨 귀와 유발 시키지 않은 귀의 두께를비교하였다.
대상 데이터
- 69 ㎛ 정도의 두께 증가량을 나타내었다. DA-100 실험군은 23.92 µm DA-50 실험군은 33.23 ㎛의 두께를보였다 (Table 1).
- 실험군은 포공영의 처리 농도에 따라 포공영을 100 mg/皿의농도로 사용한 DA-100 group (n=13), 50 mg/ 皿의 농도로 사용한 DA-50 group (n=13), 10 mg/ml의 농도로 사용한 DA-10 group (n=13) 그리고 1 mg/ml 의 농도로 사용한 DA-1 group (n=13) 등, 총 4개의 군으로 나누었다. 대조군 (INDO, n=12) 으로는 indomethacin (Sigma-Aldrich Co, USA) 을 사용했으며 0.5 mg을 20㎕의 acetone에 녹여 포공영 처리방법과 마찬가지로 염증 유발 5분 후 mouse 왼쪽 귀 양면에 각각 10 ㎕/site 로 발라주었다. 비처치군 (CONT, n=13) 은 왼쪽 귀에 TPA만 처리한 군으로 하였다.
- 07 ㎛ 정도로 두께가 증가하였다. 대조군인 INDO 군이 25.00 ㎛/ DA-100과 DA-50 치료군이 27.86 ㎛ 34.29 ㎛ 의귀 두께를 나타내었다(Table 2).
- BALB/c mice를 사용하였다. 동물은 일정한 온도 (23±1℃)와규칙적인 조명 (12시간 명/암)이 자동적으로 조절되는 동물실에서사육되었고 사료와 음수가 자유롭게 공급되었으며, 일주일간의 적응기간을 거친 후 본 실험에 사용 되었다. 동물 실험에 사용된 모든 실험방법은 동물실험 윤리 규정에 입각하여 수행되었다.
- 본 연구에 사용한 포공영 (민들레)는 경남 의령군의 (주)민들레식품에서 재배한 길이 20 cm 내외의 잎을 채취하여 실험에사용하였다. 시료는 이물을 제거하고 깨끗이 세척한 후 열풍건조하여 분쇄한 후 사용하였다.
- 시료는 이물을 제거하고 깨끗이 세척한 후 열풍건조하여 분쇄한 후 사용하였다. 분쇄한 민들레 잎을 환류냉각관이부착된 flask에 넣고 시료 중량의 15배량의 증류수를 가하여 9 0℃에서 1시간 30분 동안 2회 반복추출하여 감압여과장치로 Whatman No.
- 비처치군 (CONT, n=13) 은 왼쪽 귀에 TPA만 처리한 군으로 하였다. 실험 대조군으로는 acetone만을 mouse 왼쪽 귀의 양면에각각 10 ㎕씩 도포해 준 mouse를 사용하였다.
-
1. 실험동물
실험동물은(쥐샘타코 (오산, 경기도)로부터 구입한 25~30 g의웅성 BALB/c mice를 사용하였다. 동물은 일정한 온도 (23±1℃)와규칙적인 조명 (12시간 명/암)이 자동적으로 조절되는 동물실에서사육되었고 사료와 음수가 자유롭게 공급되었으며, 일주일간의 적응기간을 거친 후 본 실험에 사용 되었다.
데이터처리
- Indomethacin (INDO) was used as a positive control. The date for ear inhibition were calculated and analyzed by repeated one-way ANOVA, followed by the Tukey HSD post hoc test for further confirmation. ***P<0.
- Indomethacin (INDO) was used as a positive control. The date for ear thickness were calculated and analyzed by repeated one-way ANOVA, Allowed by the Tukey HSD post hoc test for further confirmation. *P*<*0.
- Indomethacin (INDO) was used as a positive control. The date for ear thickness were calculated and analyzed by repeated one-way ANOVA, followed by the Tukey HSD post hoc test for further confirmation. ***P<0.
- 05 로하였다. 보다 정확한 검증을 위해 사후검증은 Tukey post hoc test를 사용하였다.
- 실험결과는 평균土표준편차로 표시하였고 실험 데이터는 one-way ANOVA를 사용하여 분석하였고 유의수준은 P<0.05 로하였다. 보다 정확한 검증을 위해 사후검증은 Tukey post hoc test를 사용하였다.
성능/효과
- Croton oil로 유발한 염증에서 귀 두께의 증가량을 측정하였을 때 DA-100 치료군이 27.86 ㎛의 증가량을 보임으로서 타른치료군에 비해 귀 두께의 증가폭이 현저히 작았다. 대조 실험군인 INDO군이 25.
- 6%로 TPA로 유발한 염증모델에서 염증억제 능력을 보였다. 각 군별로 DA-1, DA-10, DA-50, DA-100 실험군 순으로 염증억제 능력이 증가하는 것으로 보아 dandelion의 농도가 증가할수록 염증 억제능력이 있고 100 mg/ml의 농도로 처리한 군에서 가장 뛰어남을 볼 수 있었다(Fig. 2).
- 6%로 croton oil로 유발한 염증모델에서 염증억제 능력을 나타내었다. 각 군을 비교하였을 때 대체적으로 농도가 증가할수록 염증억제 능력이 증가함을 볼 수 있었고 100 mg/ml의 농도에서 가장 뛰어남을 확인할 수 있었다(Fig. 4).
- 각 군의 귀 두께 증가량을 측정하였을 때 대조군인 INDO군이 25.00 ㎛ 의 증가량을 보임으로서 이와 유사하게 귀 두께가 27.86 ㎛ 로 증가한 DA-100군이 croton oil 로 유발한 마우스 귀 염증모델에서 염증억제 효과를 가진다는 것을 알 수 있었다(Fig. 3).
- 1). 각 군의 염증억제 능렴을 나타내었을 때는 대조군인 INDO군이 66.8%의 억제능력을 보였고 DA-100군이 47.6%로 TPA로 유발한 염증모델에서 염증억제 능력을 나타내었다. 이번 염증 모델에서 또한 DA4, DA-10, DA-50, DA-100 순으로 염증억 제 능력 이 증가하였고 이로 인해 포공영 열수 추출물의 농도가 증가할수록 염증 억제능력이 있고 DA-100의 농도에서 가장 뛰어남을 확인할 수 있었다(Fig.
- 귀 두께의 증가량을 측정하였을 때 DA-100 치료군의 경우 23.92 ㎛ 정도의 두께 증가량을 보임으로서 DA-10이나 DA-1 치료군에 비해 귀 두께의 증가폭이 작았다. 대조군인 INDO군이 15.
- 86 ㎛의 증가량을 보임으로서 타른치료군에 비해 귀 두께의 증가폭이 현저히 작았다. 대조 실험군인 INDO군이 25.00 ㎛의 증가량을 보임으로서 27.86 ㎛ 증가한 DA100군이: 염증모델에서 indomethacin의 염증억제 효과와 가장 비슷한 것으로 나타났다(Fig. 3). 드한 croton oil만 처'리 한 군을 기준으로 각 군의 염증억제 능력을 나타냈을 때 INDO군이 42.
- 92 ㎛ 정도의 두께 증가량을 보임으로서 DA-10이나 DA-1 치료군에 비해 귀 두께의 증가폭이 작았다. 대조군인 INDO군이 15.17 ㎛ 의 증가량을 보임 으로서 23.92㎛ 증가한 DA-100 그룹이 TPA 로 유발한 마우스 염증모델에서 염증억제 효과를 가진다는 것을 알 수 있었다(Fig. 1).
- 3). 드한 croton oil만 처'리 한 군을 기준으로 각 군의 염증억제 능력을 나타냈을 때 INDO군이 42.0%의 억제능력을 보였고 DA100군이 34.6%로 유의성 있게 염증억 제 효능을 보였다. 전체적으로 DA-10, DA-50, DA-100 순으로 농도가 증가할수록 염증억제 능력이 증가하는 경향을 보였고 DA-100 농도에서 가장 뛰어난 것을 볼 수 있었다(Fig.
- 또한 비처치군을 기준으로 각 군의 염증억제 능력을 나타내었을 때 대조군인 INDO군이 66.8%의 억제능력을 나타내었고 DA-100군이 47.6%로 TPA로 유발한 염증모델에서 염증억제 능력을 보였다. 각 군별로 DA-1, DA-10, DA-50, DA-100 실험군 순으로 염증억제 능력이 증가하는 것으로 보아 dandelion의 농도가 증가할수록 염증 억제능력이 있고 100 mg/ml의 농도로 처리한 군에서 가장 뛰어남을 볼 수 있었다(Fig.
- 또한 비처치군을 기준으로 각 군의 염증억제 능력을 나타냈을 때 대조군인 INDO군이 42.0%의 억제능력을 보였고 DA-100 군이 34.6%로 croton oil로 유발한 염증모델에서 염증억제 능력을 나타내었다. 각 군을 비교하였을 때 대체적으로 농도가 증가할수록 염증억제 능력이 증가함을 볼 수 있었고 100 mg/ml의 농도에서 가장 뛰어남을 확인할 수 있었다(Fig.
- 6%로 TPA로 유발한 염증모델에서 염증억제 능력을 나타내었다. 이번 염증 모델에서 또한 DA4, DA-10, DA-50, DA-100 순으로 염증억 제 능력 이 증가하였고 이로 인해 포공영 열수 추출물의 농도가 증가할수록 염증 억제능력이 있고 DA-100의 농도에서 가장 뛰어남을 확인할 수 있었다(Fig. 2).
- 이상의 실험 결과는 포공영 열수 추출물이 마우스 귀에서 TPA와 croton oil로 유발한 급성 염증모델에서 염증을 억 제하여 부종을 완화시키는 효과가 있다는 것을 보여 주었다. 이는 각종급성 피부 염증 환자 치료에 포공영 추출물을 의학적 외용제로이용할 수 있다는 사실을 시사하는 것으로서 앞으로도 다양한동물 모델이나 임상실험을 통해 포공영의 소염 효능을 재검증하고 의학적 기능성소재로서 개발하기 위한 다각적인 시각의 연구가 지속되어야 할 것으로 사료된다.
- 6%로 유의성 있게 염증억 제 효능을 보였다. 전체적으로 DA-10, DA-50, DA-100 순으로 농도가 증가할수록 염증억제 능력이 증가하는 경향을 보였고 DA-100 농도에서 가장 뛰어난 것을 볼 수 있었다(Fig. 4).
- 정상군은 귀의 두께 변화가 거의 나타나지 않았으며 유발후 비처치군의 경우 45.69 ㎛ 정도의 두께 증가량을 나타내었다. DA-100 실험군은 23.
- 정상군은 귀의 두께 변화가 거의 없었으며 유발 후 비처치군의 경우 43.07 ㎛ 정도로 두께가 증가하였다. 대조군인 INDO 군이 25.
- 포공영 열수 추출물의 항염 효능을 확인하기 위해 TPA로마우스 귀에 염증을 유발하여 포공영 열수 추출물의 농도별로각 군의 귀 두께 증가량을 확인해본 결과 정상군은 귀의 두께 변화가 거의 없었으며 대조군인 INDO군이 15.17 ㎛ 의 증가량을보임으로서 이와 유사하게 귀 두께가 23.92 ㎛ 로 가장 쩍게 증가한 DA-100군이 TPA로 유발한 마우스 귀 염증모델에서 염증억제 효과를 가진다는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 1). 각 군의 염증억제 능렴을 나타내었을 때는 대조군인 INDO군이 66.
후속연구
- 완화시키는 효과가 있다는 것을 보여 주었다. 이는 각종급성 피부 염증 환자 치료에 포공영 추출물을 의학적 외용제로이용할 수 있다는 사실을 시사하는 것으로서 앞으로도 다양한동물 모델이나 임상실험을 통해 포공영의 소염 효능을 재검증하고 의학적 기능성소재로서 개발하기 위한 다각적인 시각의 연구가 지속되어야 할 것으로 사료된다.
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