[논문]황촉규 추출물의 Nitric Oxide 생성 저해활성

박은영; 양기숙

황촉규 추출물의 Nitric Oxide 생성 저해활성
Inhibition of Nitric Oxide Production by the Extracts of Hibiscus manihot 원문보기

약학회지 = Yakhak hoeji, v.52 no.4, 2008년, pp.259 - 263

Abstract ▼ AI-Helper

Anti-inflammatory activity of the extracts of Hibiscus manihot was investigated through the evaluation of its inhibitory effect on the production of inflammatory biomarkers (i-NOS, COX-2) in RAW264.7 murine macrophage cells. Among the sequential solvent fractions (hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol and water), the fractions of dichloromethane (1 ${\mu}g/ml$) and ethyl acetate (5 ${\mu}g/ml$) showed potential inhibitory activities on i-NOS and COX-2 activity in RAW264.7 cells. These results suggest that Hibiscus manihot might have an anti-inflammatory activity through the suppression of inflammatory markers.

주제어

AI 본문요약
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제안 방법

5X105 cells/m/)를 18시간 전 배양하고 시험 약물과 LPS(1 μg/mZ)를 동시 처리하여 24시간 배양한 후, 3-(4, 5-dimethylthiazol)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide(MTT, Sigma) 100 μg을 첨가하고 4시간 동안 더 배양하였다. Dimethylsulfoxide (DMSO, Sigma) 150时를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 formazan 침전물을 용해시킨 후 micro-plate reader를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포독성을 조사하였다.
동속식물로 알려진 히비스커스(H漏cms sdbdariJM느 염증 점막조직에 보호막을 형성하는 것으로 알려져 있다.I。LPS의 단독투여와 LPS와 시료의 혼합 투여에 의하여 활성화된 RAW 264.7 세포의 배양액 중에 존재하는 nitrite(NC)2)의 양을 Griess 시약을 사용하여 측정하였다.
RAW 264.7 세포에 LPSQ μ以m/)를 사용하여 i-NOS의 생성을 유도한 후 시료의 단백질 발현에 대한 억제정도를 immunoblotting을 이용하여 측정하였다. 그 결과 단백질 수준에서도 dichloro methane 분획 물 및 ethylacetate 분획 물이 5 gg/m/ 농도에서 LPS 단독처리군에 비해 강한 억제효과를 나타내었다.
Dimethylsulfoxide (DMSO, Sigma) 150时를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 formazan 침전물을 용해시킨 후 micro-plate reader를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포독성을 조사하였다.
Membrane의 blockinge 5% skim milk가 함유된 TBS 용액에서 상온에서 2시간 동안 실시하였다. 단백질의 발현 정도를 측정하기 위해 1차 항체로서 anti-mouse i-NOS(BD Transduction), anti-mouse COX-2(BD), beta-actin antibody(cell signaling)를 TBS용액에서 희석 (1:2000)하여 상온에서 2시간 반응시킨 후 TBS로 3회 세정하였다. 2차 항체로서 HRP(horse radish peroxidase)가 결합된 anti-rabbit IgG(cell signalingX 1:2000으로 희석하여 상온에서 2시간 반응시킨 후, TBS로 4회 세정하여 ECL(Amersham Co.
")표준 농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO₂)를 단계적으로 희석하여 얻었다. 또한, 현재 알려진 NO 생성을 억제하는 물질로 L-arginine의구조 유사체인 N-monomethyl-L-arginine(L-NMMA) 와 비교하여 i-NOS 유도후 단계에 미치는 영향을 비교조사하였다.
생성된 NO 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NOa의 형태로 분석하였다. 동속식물로 알려진 히비스커스(H漏cms sdbdariJM느 염증 점막조직에 보호막을 형성하는 것으로 알려져 있다.
5X10⁵ cells/m;로 조절한 후 48 well plate에 접종하고, 시료와 LPS(1 |i以m/)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양 상등액 100以와 Griess 시약[l%(w/v) sulfenilamide, 0.1%(w/v) naphtylethylenediamine in 2.5%(v/v) phosphoric acid] 100 를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.")표준 농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO₂)를 단계적으로 희석하여 얻었다.
9 g). 이 MeOH 추출물을 계통적 추출방법에 의하여 hexane 분획물(1.7 g), dichloromethane 분획물(1.8 g), ethylacetate 분획물(1.0 g), butanol 분획물(L6g) 및 물분획물(2.0 g)로 한 것을 시료로 하였다.
자원이 풍부함에도 불구하고 연구된 바 없다. 이에 지상부를 hexane, dichloromethane, ethyl acetate, butanol 및 물 분획물로 나누어 RAW264.7 cell을 이용한 항염활성을 평가하였다.
분획물의 LPS에 의해 유도된 NO 생성 저해활성

활성산소 중 하나이며, 최근 염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 nitric oxide(NO) 생성에 대한 시료의 효과를 측정하였다. 생성된 NO 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NOa의 형태로 분석하였다.

대상 데이터

Murine macrophage cell line인 RAW 264.7 세포를 KCLB (Korean Cell Line Bank)로부터 분양받아 배양하였고, 100 units/ m/ penicillin-streptomycin 과 10% fetal bovine serum(FBS) 이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 항온기에서 배양하였으며, 3~4일에 한번씩 계대 배양을 시행하였다. Lipopoly-saccharide(LPS, E.
본교 약초원에서 황촉규의 지상부(220 g)를 채취하여 건조한 다음 분쇄기로 갈아 세말로 하였다. 세말화한 재료를 100% MeOH로 70。(3에서 4회 환류냉각 추출 후 여과하고 감압 농축하여 MeOH 추출물을 얻었다(18.
coli serotype 0111:B4)> Sigma로.부터 구입하여 사용하였다.

데이터처리

모든 실험결과는 mean士SD로 나타내었으며 자료분석은 student's t-test를 이용하여 유의성을 검정하였다.

성능/효과

NO 생성에 미치는 영향을 측정한 결과 대부분의 분획에서 억제 작용을 나타내었으며 특히 dichloromethance 1μg/mZ에서 ethylacetate 분획은 5 μg/m/ 농도에서 대조군인 LPS 단독처리 군에 비해 50% 이상의 현저한 NO 생성 억제효과를 나타내었다16) (Fig. 2, 3). 또한, L-NMMA와 비교한 기질적 저해효과도 5 μ以 m/ 농도에서 di사iloromethane과 ethylacetate 분획이 현저한 NO 생성 억제효과를 나타냈다(Fig.
RAW 264.7 세포(1.5X105cells/mZ)에 시료와 LPSQug/mZ)를 동시처리하여 24시간 배양한 후, MTT assay 방법을 이용하여 세포생존율을 확인한 결과, 모든 분획물에서 독성이 나타나지 않았다 (Fig. 1).
2。, 21)따라서 C0X-2에 의한 prostaglandins] 합성은 염증 반응을 매개하는 것으로 여겨진다. RAW 264.7 세포에 LPSQ 问 m/)로 자극을 주고 시료를 처리하여 확인한 결과 5 gg/m/ 농도에서 dichloromethane 분획물이 가장 강한 억제 효과를 나타내어 우수한 항염활성이 있음을 확인하였다.
7 세포에 LPSQ μ以m/)를 사용하여 i-NOS의 생성을 유도한 후 시료의 단백질 발현에 대한 억제정도를 immunoblotting을 이용하여 측정하였다. 그 결과 단백질 수준에서도 dichloro methane 분획 물 및 ethylacetate 분획 물이 5 gg/m/ 농도에서 LPS 단독처리군에 비해 강한 억제효과를 나타내었다. 이러한 결과는 NO의 생성억제가 i-NOS 발현억제를 통한 것으로 사료된다(Fig.
2, 3). 또한, L-NMMA와 비교한 기질적 저해효과도 5 μ以 m/ 농도에서 di사iloromethane과 ethylacetate 분획이 현저한 NO 생성 억제효과를 나타냈다(Fig. 4).
또한 dichloromethane, ethylacetate 분획물들은 i-NOS 유도가 완료된 후 기질에 작용하여 NO를 생성하는 단계에서도 NO 생성 저해효과를 나타내었다. 또한, 단백질 발현에 대한 억제 정도를 측정한 결과, 5 姒m/ 농도에서 LNOS와 COX-2에서 강한 억제효과를 나타내어 항염증제로서의 개발 가능성이 있는 것으로 사료된다.
황촉규 지상부 메탄올 엑스의 hexane, dichloromethane, ethylacetate, butanol, 물 분획물을 시료로 하여, 세포독성 및 NO 생성저해활성을 이용한 항염활성을 측정한 결과 세포생존율에는 영향을 미치지 않았고 dichloromethane, ethylacetate분획물에서 유의성 있는 억제 작용을 나타내었으며 특히 dichloromethane 분획물은 농도가 증가함에 따라 농도의존적으로 NO 생성 저해 활성을 나타내었다. 또한 dichloromethane, ethylacetate 분획물들은 i-NOS 유도가 완료된 후 기질에 작용하여 NO를 생성하는 단계에서도 NO 생성 저해효과를 나타내었다.

참고문헌 (21)

배기환 : 한국의 약용식물, (주)교학사, 서울 p. 333 (2003)
한국 약용식물학 연구회 : 종합 약용식물학, 학창사, 서울 p. 231 (2004)
Qiu, Y. : Extraction and determination of total flavones content in Hibiscus manihot flower. J. Herbal Nornal University Natural Science 30, 713 (2006)
Ignarro, L. J., Buga, G. M., Wood, K. S., Byrns, R. E. and Chaudhuri, G. : Endotherium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9265 (1987)
Angus, J. A. and Cocks, T. M. : Endotherium derived relaxing factor. Pharmacol. Ther. 41, 303 (1989)

상세보기
Knowles, R. G., Salter, M., Brooks, S. L. and Moncada. S. : Anti-inflammatory glucocorticoids induction by endotoxin of nitric oxide synthase in the lung. Liver and aorta of the rat. Biochem. Biophys. Res. Commun. 172, 1042 (1990)

상세보기
Rees, D. D., Cellek, S., Palmer, R. M. J. and Moncada, S. : Dexamethasone prevents the induction by endotoxin of a nitric oxide synthase and the associated effect on vascular tone : an insight into endotoxic shock. Biochem. Biophys. Res. Commun. 173, 541 (1990)

상세보기
Nathan, C. : Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB J. 6, 3051 (1992)

상세보기
Aeberhard, E. E., Henderson, S. A., Arabolos, N. S., Griscavage, J. M., Castro, F. E., Barrett, C. T. and Ignarro, L. J. : Nonsteroidal anti-inflammatory drugs inhibit expression of the inducible nitric oxide synthase gene. Biochem. Biophys. Res. Commun. 208, 1053 (1995)

상세보기
Salvemini, D., Milko, T. P., Masferrer, J. L., Seibert, K., Currie, M. G. and Needleman, P. : Nitric oxide activates cyclooxygenase enzymes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 7240 (1993)
McCartney-Francis, N., Allen, J. E., Xie, Q. W., Nathan, C. F. and Wal, S. M. : Suppression of arthritis by an inhibitor of nitric oxide synthase. J. Exp. Med. 178, 749 (1993)

상세보기
Pellat-Deceunynck, C., Wietzerbin, J. and Drapier, J. C. : Nicotinamide inhibits nitric oxide synthase mRNA induction in activated macrophage. Biochem. J. 297, 53 (1994)

상세보기
Yu, S. M. : Thaloporphine selectively inhibits expression of the inducible, but not the constitutive, nitric oxide synthase. Biochem. J. 303, 289 (1994)

상세보기
Ffeelisch, M. and Stamler, J. : Methods in nitric oxide research. John Wiley and Sons, p. 492 (1955)
Ben-Erik, W. and Michael, W. : Medicinal plants of the world. Briza Publication, p. 170 (2007)
Jang, M. J., Rhee, S. J., Cho, S. H., Woo, M. H. and Choi, J. H. : A Study on the anti-oxidative, anti-inflammatory and anti-thrombogenic effects of Zanthoxylum piperitum DC. Extract 35, 21 (2006)
Dorman, H. J., Bachmayer, O., Kosar, M. and Hiltunen, R. : Antioxidant properties of aqueous extracts from selected lamiaceae species grown in Turkey. J. Agric. Food Chem. 25, 762 (2004)
Santos-Gomes, P. C., Seabra, R. M., Andrade, P. B. and Fernandes-Ferreira. M. : Determination of phenolic antioxidant compounds produced by calli and cell suspensions of sage (Salvia officinalis L.). J. Plant Physiol. 160, 1025 (2003)

상세보기
Tesuka, Y., Irikawa, S., Kaneko, T., Bankota, A. H., Nagaoka, T., Xiong, Q., Hase, K. and Kadota, S. : Screening of Chinese herbal drug extracts for inhibitory activity on nitric oxide production and identification of an active compound of Zanthoxylum bugeanum. J. Ethnopharmacol. 77, 209 (2001)

상세보기
Masferrer, J., Zweifel, B. S., Manning, P. T., Hauser, S. D., Leahy, K. M., Smith, W. G., Isakson, P. C. and Seibert, K. : Selective inhibition of inducible cyclooxygenase 2 in vivo is anti-inflammatory and nonulcerogenic. Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 3228 (1994)
Hyun, E. A., Lee, H. J., Yoon, W. J., Park, S. Y., Kang, H. K., Kim, S. J. and Yoo, E. S. : Inhibitory effect of Salvia officinalis on the inflammatory cytokines and inducible nitric oxide synthesis in murine macrophage RAW264.7. Yakhak Hoeji 48, 159 (2004)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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