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문제 정의
- 이에 본 연구는 오메가 3 계열의 불포화 지방산이 나타내는 세포독성은 세포에 따라 다른 것으로 밝혀지고 있어, LNA, DHA 및 EPA가 피부와 구강암 세포주에 나타내는 세포독성을 확인할 목적으로, 정상세포인 NIH3T3 섬유모 세포주와 암세포인 인체 피부흑색종 세포주 및 인체 구강유상피암종 세포주에 LNA, DHA 및 EPA를 농도별로 처리하고 48시간이 경과한 후, 세포 생존율을 알아보기 위하여 MTT 정량분석법을, 세포 부착능을 알아보기 위하여 XTT 정량분석법을 실시하고, DPPH의 항산화능을 측정하였으며, 실험과정의 모든 세포의 광학 현미경적 관찰을 실시하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- Mosmann의 방법⑵에 의하여, NIH3T3 섬유모 세포와 인체 피부흑색종 세포 및 인체 구강유상피암 세포를 각 배양용기에 5 xi04cells/m/ 세포수를 넣고 24시간 배양 후, LNA, DHA 및 EPA의 세포독성을 측정하기 위하여, LNA, DHA 및 EPA를 각각 농도별(1, 25, 50 및 100 卩M)로 첨가하고 48"간 배양한 후, 분석 당일 조제한 MTT(Sigma Chemical Co.) 50 卩g/mZ가 포함된 배양액을 첨가하고 "간 배양 후 배양액을 버리고, dimethyl- sulfoxide(DMSO)를 2m//well 씩 넣어 5분간 실온에 방치하여 MTT formazan을 용해하고, 흡광도는 ELISA reader로 MTT의흡광도를 측정하여 대조군과 비교 조사하였다.
- LNA, DHA 및 EPA의 1(為 결정은 배양 중인 NIH3T3 섬유 모세포와 인체 피부흑색종 세포 및 인체 구강유상피암 세포를 각 배양 용기 당 5xl04cells/m/^ 넣고 24시간 배양 후, 1, 25, 50, 100 pM의 LNA, DHA 및 E啓를 첨가하여 48시간 배양한 후, MTT 정량을 하여 이들 각각에 대한 50% 억제농도인 ICm을 회귀 직선식15)에 의해 구하였다.
- 암세포의 퇴행성 변화와 세포 수의 감소는 불포화 지방산에 따라 다르게 나타나, LNA는 KB어〕, DHA와 EPA는 SK-MEL-3에서 심하였다. 각 50 皿 불포화 지방산의 농도에서는 세포 사멸체(apoptotic body)가 관찰되었으1), EPA의 NIH3T3, SK-MEL-3 및 KB에 대하여 광학 현미경적으로 관찰된 사진을 제시하였다(Photos 2, 4, 6).
- 배양된 NIH3T3 섬유모 세포와 인체 피부흑색종 세포 및 인체 구강유상피암 세포 5xio4cells/m/ 세포수를 laminin으로 coating한 배양용기에 넣고 24시간 배양한 후, MTT 정량분석법과 같은 방법으로, LNA, DHA 및 EPA을 넣고, 다시 48时간 배양한 후, 배지는 조심스럽게 제거하고 PBS로 두 번 세척하였다. 여 기 에 XTT(2, 3-bis-[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2If- tetr形olium-Acaboxanilide)와 혼합하여, 각 well에 200 讨씩 주입하고, 4~6시간 동안 배양한 후 450 nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다.
- 세포의 광학 현미경적 관찰을 위하여, NIH3T3 섬유모 세포와 인체 피부 흑색종 세포 및 인체 구강유상피암 세포는 각각 세포 분주 후 LNA, DHA 및 ES를 처리하여 MTT를 처리하기 전에, 도립 현미경 (Inverted Microscope, Olympus, Japarm로 관찰하였다.
- )를 사용하였다. 실험을 위하여 일차 배양한 flask의 세포를 0.25% trypsin-EDTA로 처리하여 세포를 분리한 후, TUrk형 혈구계산기를 이용하여 세포수가 5X 104cells/m/7} 되도록 세포 부유액을 만들었다.
- 이후 spectrophotometer를 이용하여 515nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조 약물로는 L-ascorbic acid를 25, 50, 100, 200 ppm (99.5% eMol)의 4가지 농도로 조제하여 측정하였다. 각 시료의 항산화작용은 DPPH에 대한 전자공여 능(EleWon donating ability EDA%)")과 ICaj치 (DPPH radical 형성을 50% 억제하는데 필요한 \d 농도)로 나타내었다.
- 오메가 3 계열의 불포화 지방 신인 LNA, DHA 및 EPA의 정상 세포인 NIH3T3 섬유모 세포주와 암세포인 인체 피부흑색종 세포 및 인체 구강유상피암종 세포에 나타내는 세포독성과 항산화 능을 알아 보기 위하여, 비색 분석법인 MTT 정량분석법과 XTT 정량분석법을 이용하여 세포독성과 DPPH법에 의한 항산화 능을 측정하였으며, 세포의 형태학적 관찰을 위하여, 도립 현미경을 이용하여 광학 현미경적으로 관찰하였다. LNA, DHA 및 EPA의 NTH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포、생존율과 세포 부착능은 농도 의존적으로 감소시켰으며, 1()() "iM LNA 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다.
- 따라 성장억제 효과에 차이가 있는데. 이는 불포화 지방산의 탄소원자 수와 이중결합의 증가에 의하여 나타나는 결과로 보고6) 되고 있어, 본 연구에서는 오메가3 불포화 지방산 중 탄소 원자 수와 이중결합 수가 각각 다른 LNA, DHA 및 E啟를 선정하여, 정상세포인 NIH3T3 섬유모 세포주와 암세포인 인체 피부흑색종 세포주 및 인체 구강유상피암종 세포주에 처리한 후, 세포 생존율, 세포 부착능, 세포의 형태학적 관찰 및 항산화 작용을 측정하였다. 세포 생존율은 정상 세포주와 암세포주에서 농도 의존적으로 감소하였으나, 암세포 주보다 정상 세포주에서 IC50 가 높아 세포독성이 약하게 나타났으며, 세포 부착능에서도 세포 생존율에서와 유사한 활성검색이 나타났다.
대상 데이터
- LNA, DHA 및 EPA의 정상 세포에 대한 세포독성과 암세포에 대한 세포독성을 측정하기 위하여, 원광대학교 의과대학 해부학 교실에서 분양받은 NIH3T3 섬유모 세포(NIH3T3)는 MEM 배지어】, 서울대학교 암연구소에서 분양받은 인체 피부흑색종 세포 (SK-MEL-3) 와 인체 구강유상피암 세포(KB)는 RPMI 1640 배지에 10% fetal bovine serum, penicillin(25unit/m/) 및 fungizone을 첨가하여 사용하였다. 세포의 배양은 온도 37°C, 습도 95%, 탄산가스 농도 5%의 배양기 (CO? incubator, Vision Scientific Co.
- 첨가하여 사용하였다. 세포의 배양은 온도 37°C, 습도 95%, 탄산가스 농도 5%의 배양기 (CO? incubator, Vision Scientific Co., Buchean, Korea.)를 사용하였다. 실험을 위하여 일차 배양한 flask의 세포를 0.
데이터처리
- 실험 결과의 통계처리는 Students, t-test에 준하였으며, 유 의성검정은 one way ANOVA t-test와 비교하였으며, p-vahie가 0.05 미만일 경우 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다.
이론/모형
- DPPH에 의한 항산화 능은 Hatano 등의 방법卩)에 의하여, 각 fraction을 25, 50, 100, 200, 500 ppm(99.5% ethanol)의 5가지 농도로 조제한 용액 0.1 m/(control: 99.5% ethanol)에 0.1 mM DPPH 용액(99.5% ethanol) 1.9 가하였다. Vbrtex mixei로 10초간 진탕한 후, 37°C에서 30분 동안 incubation 시켰다.
- 4 - The cytotoxic activity of LNA, DHA, ERA. by the MTT method on SK-MEL-3. Significantly different from the control value: *p<0.
성능/효과
- 광학 현미경적으로 관찰하였다. LNA, DHA 및 EPA의 NTH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포、생존율과 세포 부착능은 농도 의존적으로 감소시켰으며, 1()() "iM LNA 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다. LNA, DHA 및 EPA의 인체 피부흑색종 세포주와 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 세포 생존율과 세포부착 능은 농도 의존적으로 감소시켰으며, 50, uM LNA 농도 이상, 100 卩M DHA 농도와 25 ERY 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다.
- 9의 강한 세포독성이 관찰되었다. DHA의 세포 부착 능의 검색 결과에 의하면, 인체 구강유상피암종세포주에 대한 최소억제 농도(487.6 |iM)는 인체 피부흑색종 세포의 최소억제 농도(310.1(JVI) 보다 1.6배의 약한 세포 부착 능을 나타냈으며, NIH3T3 섬유모 세포주에 최소억제 농도(833.4 gM)보다 약 1.7의 강한 세포 부착 능이 관찰되었다. DHA의 세포의 활성검색에 의하면, NIH3T3 섬유모 세포주와는 다르게, 인체 피부흑색종 세포주가 세포독성이 강하며, 인체 구강유상피암종 세포주와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다.
- LNA의 세포의 활성검색에 의하면, 인체 구강유상피암종 세포주가 세포독성이 강하며, 인체 피부흑색종 세포와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다. DHA의 세포 생존율에 대한 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(442.9 pM) 는인체 피부흑색종 세포의 최소억제 농도(361.8 nM) 보다 1.2배의 약한 세포독성을 나타냈으며, NIH3T3 섬유모 세포주에 최소억제 농도(855.8 gM)보다 약 1.9의 강한 세포독성이 관찰되었다. DHA의 세포 부착 능의 검색 결과에 의하면, 인체 구강유상피암종세포주에 대한 최소억제 농도(487.
- 7의 강한 세포 부착 능이 관찰되었다. DHA의 세포의 활성검색에 의하면, NIH3T3 섬유모 세포주와는 다르게, 인체 피부흑색종 세포주가 세포독성이 강하며, 인체 구강유상피암종 세포주와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다. EPA의 세포의 활성검색에 의하면, DHA 의 세포독성처럼 인체 피부흑색종 세포주의 세포독성이 강하며, 인체 구강유상피종 세포와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다.
- 1 pM)에서 가장 강한 세포독성이 나타났다. EPA의 세포 생존율은 LNA(249.2 pM)보다 L2 배의 강한 세포독성이 관찰되었으며, DHA(36L8卩M)의세포 생존율보다는 L7 배의 강한 세포독성이 측정되었다. 세포 생존율에 의하면, 100 pM LNA 농도에서 통계적으로 높은 유의성이 있었으며0<0.
- EPA의 세포의 활성검색에 의하면, DHA 의 세포독성처럼 인체 피부흑색종 세포주의 세포독성이 강하며, 인체 구강유상피종 세포와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다. ERk의 세포 생존율에 대한 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(331.3 pM) 는 인체 피부흑색종 세포의 최소억제 농도(216.1 卩M) 보다 1.5 배의 약힌同 세포독성을 나타냈으며, NIH3T3 섬유모 세포주에 최소억제 농도(1138.3 卩M)보다 약 3.4의 강한 세포독성이 관찰되었다. NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 생존율과 세포 부착 능의 민감성은 EPA>DHA>LNA 순서로 감소되어 관찰되었으며, 인체 피부흑색종 세포에 대한 세포 생존율과 세포 부착 능의 민감성은 DHA>LNA>EPA의 순서로 감소되었으며, 인체 구강유상피암종 세포에 대한 세포 생존율과 세포 부착능의 민감성은 DHA>EPA>LNA의 순서로 감소되어 관찰되었다.
- 농도에서 부터통계적으로 유의성이 있었으나, 50 gM DHA와 100 pM EEA 농도에서는 LNA보다 세포 부착 능의 활성이 높게 관찰되었다. LNA 의 최소억제 농도(245.4 gM)는 DHA의 최소억제 농도(487.6 gM) 보다 약 2배의 강한 활성이 관찰되었으며, EI查의 최소억제 농도 (362.2 pM)에 비하면 약 1.5배의 세포 부착 능의 활성 차이에 대한 생물검색이 관찰되었다. 인체 구강유상피암 세포에 대한 세포 부착능의 민감성은 DHA>EPA>LNA의 순서로 감소되어 관찰되었다(Fig.
- O5). LNA 의 최소억제 농도(504.5 pM)는 DHA의 최소억제 농도(8558 pM) 의 1.7배 활성이 관찰되었으며, EPA의 최소억제 농도(1, 138.3 pM) 에 비하여 23배로 활성이 높게 관찰되었다. 이와 같은 세포 생존율의 감소가 증가하는 것은 LNA의 NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포독성이 높은 원인에 기인한다고 생각된다.
- LNA, DHA 및 EPA의 NTH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포、생존율과 세포 부착능은 농도 의존적으로 감소시켰으며, 1()() "iM LNA 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다. LNA, DHA 및 EPA의 인체 피부흑색종 세포주와 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 세포 생존율과 세포부착 능은 농도 의존적으로 감소시켰으며, 50, uM LNA 농도 이상, 100 卩M DHA 농도와 25 ERY 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다. 그러나 인체 구강유상피암종 세포주에서는 25 pM LNA와 25 DHA 농도 이상, 25 pM EPA 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다.
- 8에서 보는 바와 같이, LNA, DHA와 ERA의 자유기 라디칼 소거능은 농도에 따라 의존성이 미약하게 관찰됨을 알 수가 있었다. LNA가 다른 불포화 지방산보다 세포독성이 강하게 관찰되었으나, 자유기 라디칼의 소거 능은 비교적2로 낮은 라디칼 소거능이 측정되었으며, 불포화 지방산의 자유기 라디칼의 소거 능은 46.1-54.8% 범위에서 관찰되었다(Fig. 8).
- 5 의 강한 세포독성이 관찰되었으며, 다른 불포화 지방산보다 세포 생존율이 가장 낮은 연구 결과를 얻게 되었다. LNA의 세포 부착 능의 검색결과에 의하면, 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(245.4 gM)는 인체 피부흑색종 세포의 최소억제농도(398.1 厕 보다 1.6배의 강한 세포 부착능을 나타냈으며, NIH3T3 섬유모 세포주에 최소억제 농도(755.4 pM)보다 약 3.1 의 강한 세포 부착 능이 관찰되었다. LNA의 세포의 활성검색에 의하면, 인체 구강유상피암종 세포주가 세포독성이 강하며, 인체 피부흑색종 세포와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다.
- 1 pM)에서 가장 강한 세포독성이 나타났다. LNA의 세포 생존율은 DHA(442.9 gM)보다 DIR 4배의 강한 세포독성이 관찰되었으며, EPA(331.3 pM)의 세포 생존율보다는 약 3배의 강한 세포독성이 측정되었다. 세포 생존율에 의하면, DHA는 50 jiM 농도와 100 pM 농도에서 통계적으로 유의성이 있었으나, 25 pM EPA 농도에서부터 통계적으로 유의 성이 관찰되었다© <0.
- 1 의 강한 세포 부착 능이 관찰되었다. LNA의 세포의 활성검색에 의하면, 인체 구강유상피암종 세포주가 세포독성이 강하며, 인체 피부흑색종 세포와 NIH3T3 섬유모 세포주의 순서로 세포독성에 감소하는 현상이 관찰되었다. DHA의 세포 생존율에 대한 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(442.
- 이와 같은 세포 생존율의 감소가 증가하는 것은 LNA의 NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포독성이 높은 원인에 기인한다고 생각된다. NIH3T3 섬 유모 세포주는 세포독성에 대한 민감성이 EPA>DHA>LNA 순서로 감소되어 관찰되었다(Fig. 2).
- 세포들이 층을 이룬다(Photos 1, 3, 5). NIH3T3 섬유 모세포 주에 LNA, DHA 및 ER\를 농도별로 증가하면서, 배양하면 농도의 증가에 따라 세포 수에 변화가 거의 없었으나, 인체 피부흑색종 세포주와 인체 구강유상피암종 세쏘주에 LNA, DHA 및 E啟를 첨가하여, 배양하면 농도의 증가에 따라 세포의 퇴행성 변화와 세포 수의 감소가 심하였다. 암세포의 퇴행성 변화와 세포 수의 감소는 불포화 지방산에 따라 다르게 나타나, LNA는 KB어〕, DHA와 EPA는 SK-MEL-3에서 심하였다.
- 4배로 활성이 높게 관찰되었다* 세포 부착 능의 활성은 세포 생존율의 활성과 같이 LNA의 NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 유사한 생물검색이 관찰되었다. NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 부착 능의 민감성은 EPA>DHA>LNA의 순서로 감소되어 관찰되었다(Fig. 3).
- 4의 강한 세포독성이 관찰되었다. NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 생존율과 세포 부착 능의 민감성은 EPA>DHA>LNA 순서로 감소되어 관찰되었으며, 인체 피부흑색종 세포에 대한 세포 생존율과 세포 부착 능의 민감성은 DHA>LNA>EPA의 순서로 감소되었으며, 인체 구강유상피암종 세포에 대한 세포 생존율과 세포 부착능의 민감성은 DHA>EPA>LNA의 순서로 감소되어 관찰되었다. 탄소수와 이중결합수가 가장 낮은 LNA의 세포에 대한 활성검색은 세포 생존율과 세포 부착 능의 민감성으로 측정한 결과에 의하면, 1.
- 25 皿 DHA와 25 pM EPA. 농도에서 부터통계적으로 유의성이 있었으나, 50 gM DHA와 100 pM EEA 농도에서는 LNA보다 세포 부착 능의 활성이 높게 관찰되었다. LNA 의 최소억제 농도(245.
- 6~4.5 배의 효능이 검색되어, 다른 불포화 지방산보다 비교적。로 높은 활성효과가 관찰되었다, 그러나 EPA의 세포 활성에 대한 연구 결과를 검토하여보면, NIH3T3 섬유모 세포주에 대하여, 다른 불포화 지방산의 세포 활성보다 세포독성이 낮으나, 암세포 주에 대한 세포독성은 비교적으로 높게 관찰되었으며, 세포 부착 능의 검색에서도 다른 불포화 지방산에 비하여 높은 활성이 관찰되었다(Eble I). 불포화 지방산은 세포주에 따라 세포 생존율과 세포부착 능의 민감성에 차이가 있으므로, 앞으로 불포화 지방산과 세포주에 따른 생리활성 검색이 분자구조에 어떤 영향을 연구할 필요가 있다.
- 불포화 지방산 LNA, DHA 및 EPA의 인체 피부흑색종 세포에 대한 세포 부착 능을 XTT 정량분석법으로 측정한 결과에 의하면, 불포화 지방산은 농도 의존적으로 감소하였다. 인체 피부흑색종 세포의 세포 부착 능은 NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 부착능보다 농도 의존성이 크게 관찰되었다.
- 불포화 지방산 LNA, DHA 및 EPA의 인체 피부흑색종 세포에 대한 세포 생존율은 NIH3T3 섬유모 세포와는 달리 ' 농도에 대한 의존성이 크게 관찰되었다. 인체 피부흑생종 세포에 대한 최소억제 농도의 결과에 의하면, EW16.
- 불포화 지방산 LNA, DHA 및 EPA의 정상 세포인 NIH3T3 섬 유모 세포주와 암세포인 인체 피부흑색종 세포주 및 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 세포독성을 비교하면, Table I에서 보는 바와 같이, 각 불포화 지방산의 1(為은 암세포주보다 정상 세포에서 높아 세포독성이 약한 것으로 관찰되었다. 암세포주에 나타내는 세포독성은 불포화 지방산에 따라 다르게 나타나, LNA 의 세포 생존율에 대한 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(112.
- 불포화 지방산 LNA, DHA 및 ERA의 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 세포 독성은 NIH3T3 섬유모 세포와는 달리, 세포독성이 높게 관찰되었으며, 특히 LNA의 세포독성은 인체 피부암 세포의 세포독성보다 강하게 즉정되었으며, 인체 구강유상피암종 세포의 세포 생존율도 다른 세포처럼 농도 의존적으로 감소하였다. 인체 구강유상피암종 세포에 대한 최소억제 농도의 결과에 의하면, LNAQ12.
- 불포화 지방산 LNA, DHA 및 Ef*의 NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 부착 능의 검색 결과에 의하면, 세포 생존율의 농도의존 성같이 불포화 지방산에서 세포 부착 능의 활성의 경향은 그림 2와 유사한 농도 의존적 감소하였다. 불포화 지방산의 세포부착 능의 활성은 거의 비숫하게 감소하였으며, 1〜 100rM 범위의 농도에서 LNA, DHA 및 ERY 불포화 지방산은 통계적으로 유의성이 관찰되지 않았다.
- 불포화 지방산 LNA, DHA 및 E改의 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 세포 부착 능을 XTT 정량분석법으로 측정한 결과에 의하면, 인체 피부흑생종 세포의 경우처럼, 농도 의존적으로 감소하였으며, NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 부착능보다 농도 의존성이 크게 관찰되었다. 세포 부착 능의 활성은 LNA의 경구에는, 2511MLNA 농도에서부터 통계적으로 유의성이 있었으며, 농도가 증가할수록 통계적인 유의성도 높게 관찰되었다 (p<0.
- 불포화지방산의 항산화능은 불포화 지방산의 이중결합의 수과 탄소수에 따른 분자구조에 관련하여, 세포의 생존율이나 부착능에 큰 영향을 미치지 않았다. 불포화 지방산은 NIH3T3 섬유 모세포에 대하여 형태학적 변화를 거의 유도하지 못하였으나, 인체 피부흑색종 세포주와 인체 구강유상피암종 세포주에 대하여 형태학적 변화를 심하게 관찰되었으며, 50 nM 불포화 지방산 농도에서는 세포 사멸체가 관찰되었다. 이상의 결과에서 불포화 지방산, LNA, DHA 및 ER1 는 정상세포보다 암세포에 나타내는 세포독성이 강하며, 암세포는 나타내는 세포독성이 다르게 나타났으며, 불포화 지방산의 분자구조에 따른 암세포 주와 항산화능의 활성 관계를 연구할 필요가 있다고 생각된다.
- 2와 유사한 농도 의존적 감소하였다. 불포화 지방산의 세포부착 능의 활성은 거의 비숫하게 감소하였으며, 1〜 100rM 범위의 농도에서 LNA, DHA 및 ERY 불포화 지방산은 통계적으로 유의성이 관찰되지 않았다. LNA의 최소억제 농도(755.
- 의존성이 크게 관찰되었다. 세포 부착 능의 활성은 LNA의 경구에는, 2511MLNA 농도에서부터 통계적으로 유의성이 있었으며, 농도가 증가할수록 통계적인 유의성도 높게 관찰되었다 (p<0.01, p<0Ml). 25 皿 DHA와 25 pM EPA.
- 3 pM)의 세포 생존율보다는 약 3배의 강한 세포독성이 측정되었다. 세포 생존율에 의하면, DHA는 50 jiM 농도와 100 pM 농도에서 통계적으로 유의성이 있었으나, 25 pM EPA 농도에서부터 통계적으로 유의 성이 관찰되었다© <0.05, p<0.01). 그렇지만 다른 불포화 지방산에서는 관찰되지않은 세포독성이 25 皿 LNA에서 특이하게 강하게 나타나기 시작하였다.
- 이는 불포화 지방산의 탄소원자 수와 이중결합의 증가에 의하여 나타나는 결과로 보고6) 되고 있어, 본 연구에서는 오메가3 불포화 지방산 중 탄소 원자 수와 이중결합 수가 각각 다른 LNA, DHA 및 E啟를 선정하여, 정상세포인 NIH3T3 섬유모 세포주와 암세포인 인체 피부흑색종 세포주 및 인체 구강유상피암종 세포주에 처리한 후, 세포 생존율, 세포 부착능, 세포의 형태학적 관찰 및 항산화 작용을 측정하였다. 세포 생존율은 정상 세포주와 암세포주에서 농도 의존적으로 감소하였으나, 암세포 주보다 정상 세포주에서 IC50 가 높아 세포독성이 약하게 나타났으며, 세포 부착능에서도 세포 생존율에서와 유사한 활성검색이 나타났다. 세포의 광학 현미경적 관찰에서도 암세포 주에 대하여 형태학적 변화와 세포 수의 감소가 심하였으나, 정상 세포주에 대하여는 약하게 나타났다.
- 높아 세포독성이 약한 것으로 관찰되었다. 암세포주에 나타내는 세포독성은 불포화 지방산에 따라 다르게 나타나, LNA 의 세포 생존율에 대한 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(112.1 gM)는 인체 피부흑색종 세포의 최소억제 농도(2492pM) 보다 2.2배의 강한 세포독성을 나타냈으며, NIH3T3 섬유모 세포주에 최소억제 농도(504.5 测1)보다 약 4.5 의 강한 세포독성이 관찰되었으며, 다른 불포화 지방산보다 세포 생존율이 가장 낮은 연구 결과를 얻게 되었다. LNA의 세포 부착 능의 검색결과에 의하면, 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 최소억제 농도(245.
- 오메가 3 계열 불포화 지방산 중에 LNA는 다른 불포화 지방산(DHA 및 EPA)보다 농도가 증가함에 따라, NIH3T3 섬유 모세포 주에 대한 세포 생존율은 약간 더 감소하였으며, 100 |iM LNA 농도에서 통계적으로 유의성도 관찰되었다0vO.O5). LNA 의 최소억제 농도(504.
- 하였다. 이러한 연구결과에 근거하여, 불포화 지방산 중 탄소사슬이 길고, 이중결합이 많은 오메가 3 계열인 LNA, DHA 및 EPA를 선정하여, 정상 세포주인 NIH3T3 섬유모 세포에 세포 생존율을 MTT 정량분석법으로 측정한 결과에 의하면, 오메가 3계열의 LNA, DHA 및 EPA 불포화 지방산은 농도 의존적으로 세포독성이 증가하였다.
- 그러나 인체 구강유상피암종 세포주에서는 25 pM LNA와 25 DHA 농도 이상, 25 pM EPA 농도에서 통계적으로 유의성이 있었다. 정상 세포인 MH3T3 섬유모 세포에 대한 心()은 LNA<EPA<DHA 순。이었으나, 암세포인 인체 피부흑색종 세포와 인체 구강유상피암종 세포주에 대한 IC50 농도를 세포주에 따라 차이가 있어, 인체 피부흑색종 세포주에 대하여는 EPA<DHA<LNA 순서로 관찰되었으며, 인체 구강유상피암종세포주에 대하여는 DHA<EPA<LNA 순서로 나타났다. 불포화지방산의 항산화능은 불포화 지방산의 이중결합의 수과 탄소수에 따른 분자구조에 관련하여, 세포의 생존율이나 부착능에 큰 영향을 미치지 않았다.
- 인체 구강유상피암종 세포에 대한 최소억제 농도의 결과에 의하면, LNAQ12.1 pM)에서 가장 강한 세포독성이 나타났다. LNA의 세포 생존율은 DHA(442.
- 불포화 지방산은 농도 의존적으로 감소하였다. 인체 피부흑색종 세포의 세포 부착 능은 NIH3T3 섬유모 세포주에 대한 세포 부착능보다 농도 의존성이 크게 관찰되었다. EPA의 최소억제 농도(234.
- 의존성이 크게 관찰되었다. 인체 피부흑생종 세포에 대한 최소억제 농도의 결과에 의하면, EW16.1 pM)에서 가장 강한 세포독성이 나타났다. EPA의 세포 생존율은 LNA(249.
- 항산화 작용이 있는 불포화 지방산이 암세포 주에 대한 세포독성 효과에 대한 연구 결과에 따라, ⑰ LNA, DHA 및 EPA의 DPPH 라디칼 소거 능에 의한 항산화 효과를 측정한 결과, Table U과 Fig. 8에서 보는 바와 같이, LNA, DHA와 ERA의 자유기 라디칼 소거능은 농도에 따라 의존성이 미약하게 관찰됨을 알 수가 있었다. LNA가 다른 불포화 지방산보다 세포독성이 강하게 관찰되었으나, 자유기 라디칼의 소거 능은 비교적2로 낮은 라디칼 소거능이 측정되었으며, 불포화 지방산의 자유기 라디칼의 소거 능은 46.
후속연구
- 顼 세포 고사기 전은 여러 연구자들에 의해 암의 예방과 치료에 많은 관여를 하고 있다고 보고되고 있다.2728) 불포화 지방산의 탄소원자의 수와 이중결합의 증가에 따라 세포 생존율 및 세포 부착능에 대한기전은 앞으로 연구가 계속되어야 할 것이다.
- 5 배의 효능이 검색되어, 다른 불포화 지방산보다 비교적。로 높은 활성효과가 관찰되었다, 그러나 EPA의 세포 활성에 대한 연구 결과를 검토하여보면, NIH3T3 섬유모 세포주에 대하여, 다른 불포화 지방산의 세포 활성보다 세포독성이 낮으나, 암세포 주에 대한 세포독성은 비교적으로 높게 관찰되었으며, 세포 부착 능의 검색에서도 다른 불포화 지방산에 비하여 높은 활성이 관찰되었다(Eble I). 불포화 지방산은 세포주에 따라 세포 생존율과 세포부착 능의 민감성에 차이가 있으므로, 앞으로 불포화 지방산과 세포주에 따른 생리활성 검색이 분자구조에 어떤 영향을 연구할 필요가 있다.8")
- 불포화 지방산은 NIH3T3 섬유 모세포에 대하여 형태학적 변화를 거의 유도하지 못하였으나, 인체 피부흑색종 세포주와 인체 구강유상피암종 세포주에 대하여 형태학적 변화를 심하게 관찰되었으며, 50 nM 불포화 지방산 농도에서는 세포 사멸체가 관찰되었다. 이상의 결과에서 불포화 지방산, LNA, DHA 및 ER1 는 정상세포보다 암세포에 나타내는 세포독성이 강하며, 암세포는 나타내는 세포독성이 다르게 나타났으며, 불포화 지방산의 분자구조에 따른 암세포 주와 항산화능의 활성 관계를 연구할 필요가 있다고 생각된다.
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