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문제 정의
- 국내 유통되는 샐러드와 새싹채소에서 분리된 Enterococcus 에 대하여 vancomycin resistant enterococci(VRE)의 분포를 조사하기 위해서 vancomycin에 대한 최소발육억제농도 (MIC)를 조사하였다. 그 결과 샐러드와 새싹채소에서 분리된 Enterococcus6^ 대한 vancomycin의 MIC 범위는 0.
- 따라서 본 연구는 국내에서 시판되고 있는 신선편의 식품인 샐러드와 새싹채소로부터 Enterococcus를 분리 , 동정하고 분리 균의 항생제 감수성을 분석하여 항생제 위해 가능성을 평가하고자 하였다.
제안 방법
- Enterococcosel agai에서 검은색 집락을 분리하여 5% 면양 혈액이 첨가된 tryptic soy agar(Difco)에 배양 후 그람양성 구균의 균주만을 선별하여 45℃에서의 생육여부, 6.5% NaCl 존재하의 생육, catalase 생성유무와 함께 Enterococcus 에 특이적 primer인 Ent 1(5'-TAC TGA CAA ACC ATT CAT GAT G-8)과 Ent 2(5'-AAC TTC GTC AAC GCG AAC-3)를 이용하여 PCR을 수행하고 API 20 Strep kit (bioMericeux, Marcy I'Etoil, France)와 자동화 미생물 동정 장치 인 Vitek((bioMericeux)의 결과를 통합하여 Enterococcus spp를 동정하였다.
- 대상 항생제는 National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)에서 Enterococcuse] 항생제 검사로 주천된 vancomycin, penicillin, chloramphenicol, tetracycline, rifampin, streptomycin 그리고 ampicillin과 erythromycin을 사용하였다[]6]. Muller-Hilton(MH) broth(Oxoid, Hampshire, England)에서 배양된 균액을 MH 한천배지에 항생제를 단계별로 희석하여 첨가한 배지에 접종기구를 이용하여 접종한 후 37P에서 24 시간 배양하였다. 최소생육저해 농도(minimum inhibitory concentration, MIC)는 각각의 항생제가 첨가된 배지에서 균주가 증식하지 않는 최소농도로 결정하였다.
- 모든 시료는 clean bench에서 무균적으로 처리 되었으며, 모든 검체를 다룰 때에는 멸균한 시약스푼, 가위, 칼을 이용하였다. 채취한 시료 25 g을 취하여 0.
- 전처리된 검액 1 mL을 9 mL 0.85% 생리 식염수 용액에 넣어 10진 희석하여 Enterococci 선택배지인 Enterococcusel agar(Difco, Bercon, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA)에 분주 도말하여 37℃에서 24~72시간 배양한 후 검은색 집락 중 대표적인 것을 분리하여 동정하였다.
- 채취한 시료 25 g을 취하여 0.85% 멸균 생리 식염수를 가하여 120초 동안 stomaker(IUL, Barcelona, Spain) 를 이용하여 균질화한 후 1 mL을 시험 검액으로 사용하였고 실험 과정에서 사용되는 배지 및 기구는 12FC에서 가압멸균하여 사용하였다.
- Muller-Hilton(MH) broth(Oxoid, Hampshire, England)에서 배양된 균액을 MH 한천배지에 항생제를 단계별로 희석하여 첨가한 배지에 접종기구를 이용하여 접종한 후 37P에서 24 시간 배양하였다. 최소생육저해 농도(minimum inhibitory concentration, MIC)는 각각의 항생제가 첨가된 배지에서 균주가 증식하지 않는 최소농도로 결정하였다.
대상 데이터
- 국내 대형마트에서 유통되는 샐러드 47종과 새싹채소 37 종을 구입하여 총84종의 시료에서 Enteorococcus를 분리하였다. 생화학적 특성을 확인하기 위하여 사용된 표준 균주로는 Enterococcus faecalis KCTC 2011, Entercoccus faecium KCCM 12118등을 사용하였다.
- 이용하여 수행하였다[21]. 대상 항생제는 National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)에서 Enterococcuse] 항생제 검사로 주천된 vancomycin, penicillin, chloramphenicol, tetracycline, rifampin, streptomycin 그리고 ampicillin과 erythromycin을 사용하였다[]6]. Muller-Hilton(MH) broth(Oxoid, Hampshire, England)에서 배양된 균액을 MH 한천배지에 항생제를 단계별로 희석하여 첨가한 배지에 접종기구를 이용하여 접종한 후 37P에서 24 시간 배양하였다.
- 생화학적 특성을 확인하기 위하여 사용된 표준 균주로는 Enterococcus faecalis KCTC 2011, Entercoccus faecium KCCM 12118등을 사용하였다.
이론/모형
- 분리한 Enterococcus의 항생제 감수성은 한천 희석방법을 이용하여 수행하였다[21]. 대상 항생제는 National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)에서 Enterococcuse] 항생제 검사로 주천된 vancomycin, penicillin, chloramphenicol, tetracycline, rifampin, streptomycin 그리고 ampicillin과 erythromycin을 사용하였다[]6].
성능/효과
- Enterococcusel agai에서 검은색 집락을 선택하여 4VC에서의 생육, 6.5% NaCl 존재하의 생육, catalase 생성 유무를 확인한 후 Enterococcus 에 특이적 primer인 Entl, Ent2를이용하여 PCR을 수행한 결과 샐러드 47개중에서 32개에서 Entrococcw가 검출되었으며 새싹채소 37개 중 27개 에 서 Enterococcuse 분리되었다(Fig. 1).
- faecium 6균주 또한 저농도 내성을 보였다. Erythromycin에 대한 감수성 실험결과, 샐러드와 새싹채소 분리균에서 각각 22%, 20%의 저농도 내성을 보였다. 독일의 Klare 등[10]은 동물 유래 vancomycin 내성 E, faecium 8균주의 항생제 감수성 결과, penicillin에는 저항성 , chloramphenicol과 rifampicin에는 감수성을 나타냄을 확인하였다.
- Vancomycin에 대해 저농도 내성을 보이는 분리균은 샐러드에서 19균주, 새싹채소에서 29균주로 전체 분리균 중 51% 로 나타났다. 저농도 내성 균주는 E.
- Vitek과 API 20 strep kit의 결과를 종합하여 샐러드와 새싹채소에서 분리한 Enterococcus species를 동정하였다. 샐러드 32개의 시료에서 분리한 Enterococcus 41개 균주 중에서 E.
- faecium에서 가장 많이 관찰된다. Penicillin0!] 대한 감수성 실험 결과, E. faecalis 8균주 모두 저농도 내성을 갖으며, E. faecium 6균주 또한 저농도 내성을 보였다. Erythromycin에 대한 감수성 실험결과, 샐러드와 새싹채소 분리균에서 각각 22%, 20%의 저농도 내성을 보였다.
- 4%)로 가장 적게 분리되었으며, E. 拘。两时는 4주 (9.8%), E. gallmarunie 12주(292%)로 가장 많이 검출되었으며, E. hime는 2주(4.9%)로 분리되었으며 E. gallinarum/ cass기ifl知虑도 E. gallinarume}- 같이 12주(29.2%)로 가장 많이 검출되었다.
- 조사하였다. 그 결과 샐러드와 새싹채소에서 분리된 Enterococcus6^ 대한 vancomycin의 MIC 범위는 0.25 |ig/mL에서 8.0 |ig/mL로 나타났으며 , 고농도 vancomycin에 내성을 보이는 균주는 확인되지 않았다. 분리된 Enterococcus 중 E.
- 따라서 본 연구의 결과, 샐러드와 새싹채소에서 분리한 Enterococcuse- streptomycin, chloramphenicol0]] 대해서 모든 균들이 내성을 나타내었으며, tetracyclin, penicillin, rifampicin, ampicillin과 erythromycin의 다른 항생제에 대해서는 균주에 따라 다른 감수성을 나타내어 동물 유래 Emmcocg와는 다른 항생제 감수성을 보였다,
- 0 |ig/mL로 나타났으며 , 고농도 vancomycin에 내성을 보이는 균주는 확인되지 않았다. 분리된 Enterococcus 중 E. avium 2균주, E. faecalis 1균주, E. faecium 2균주, E. gallinarum 20균주, E. gallinarum/casseliflavus 23종이저농도 내성(MIC, 4.0 μg/mL)을 보이며 이 균주들을 제외하고는 vancomycin에 감수성 (MIC 0.25-2.0 μg/mL)을 보였다(Table 2).
- casseliflavus 6종으로 같다. 분포는 샐러드에서는 E. avium이 많이 검출된 것 이외에는 새싹채소와 비슷한 분포를 나타내며, 새싹채소에서는 샐러드보다 E. faecalis, E. faecium0] 더 많이 검출되었다(Fig. 3).
- 새싹채소 27개에서 분리한 Enterococcus 54균주 가운데 E. avium 4균주(7.4%), E. faecalis 7주(13%), E. faecium 10주(18.5%), E. gallinarum 16주(29.6%) 순으로 가장 많이 검출되었으며, E. gallinarum/casseliflavus 14주(25.9%)가 검출되었다 (Table 1).
- 나타났다. 저농도 내성 균주는 E. avium 4.2%, E. faecalis 2.1%, E. faecium 4.2%, E. gallinarum 41.6%, E. gallinarum/casseliflavus 48%로 확인되었다. Chadwick 등 (3)은 닭과 돼지고기 및 쇠고기에서 VRE를 분리하였으며, 식품유통을 거쳐 VanA 유전자가 전이될 수 있을 것이라 하였다.
- 그러나 식품 중 VRE의 검출에 대한 연구보고는 많지 않은 실정이다. 최근 특별한 열처리가 필요 없거나 간단한 열처리 등으로 최소 가공된 ready-to-eat 형태의 식품인liesh-cut-vegetable 선호하는 경향이 증가하고 있다[1, 16], Enterococcus는 자연환경에 널리 분포하고 있는 만큼 이러한 최소 가공 식품에는 VRE가 존재할 수 있으나 본 연구의 결과 이들 최소 가공 식품 중 VRE의 내성 정도가 높지 않은 것으로 나타났다.
후속연구
- Enterococcuse- 자연환경에 널리 분포하고 있으므로 식품의 원료에 따라 그 분포가 상이할 것이라 생각되며, 이러한 최소 가공 식품에는 VRE가 존재할 수 있다. 따라서 앞으로 특별한 열처리 없이 섭취하는 신선편의 식품에 대한 VRE의 관리와 저감화 방안 등에 계속적인 모니터링이 필요할 것이라 생각되어진다.
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