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문제 정의
- 그래서 본 실험에서는 반하의 점막자극 물질에 의한 발모효과를 실험적으로 관찰하고자 반하 추출물(生半夏와 薑製半夏)과 생반하분획물을 이용하였다. 본 실험에서 生半夏 추출물과 薑製半夏 추출물을 정상 생쥐에 16일간 도포한 후 관찰히면 털을 깎은 후 50% EtOH을 16일째 도포한 대조군에서는 4마리 동물중 1마리에서만 발모현상이 부분적으로 관찰되었고, 薑製半夏 추출물을 도포한 실험군에서는 4마리 동물 중 1마리에서만 발모현상이 전체적으로 관찰되었으나 生半夏 추출물을 도포한 군에서는 4마리 전체에서 발모현상이 털을 깎은 전체부위에서 관찰되었다.
- 데에도 어려움이 있었다. 본 실험에서는 半夏의 유독성 성분이 피부의 직접적인 자극을 유발하여 국소적인 기혈순환을 촉진시켜 모발의 성장을 유발하게 할 수 있다는 가능성에 근거를 두고 반하추출물(生半夏 추출물과 薑製半夏 추출물)과 여러가지 용매를 사용하여 분획한 생반하분획물을 정상 생쥐와 자연적으로 발생한 원형탈모 생쥐를 이용하여 양모와 발모 효과를 실험적으로 검증하고자 하였다.
- 이에 저자는 탈모 방지 및 발모효과를 갖는 새로운 천연 약물의 개발을 위하여, 자발적 원형탈모 생쥐 모델과 정상 생쥐를 이용하여 半夏 추출물과 生半夏 분획물의 육안적인 발모효과와 형태학적인 변화를 관찰하고, 정상 생쥐에서 피부조직내 발모관련 인자들에 대한 면역조직화학적 관찰 및 분자생물학적 변화를 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 10. Macroscopic observation before the experiment (Oday) (10a), and after topical application of extracts of Pinelliae Rhizoma (PR group) during 6th day (10b), 12th day (10c) and 15th day (10d) of Rhizoma Pinelliae group in spontaneous alopecia areata model of C57BL/6N mice. Hair growth activity was observed in heated group with extracts of Pinelliae RhzomaFH group) during day (10c) and 15th day (10d).
- 각각의 cyclee 94 ℃ 에서 30 초간 denaturation 시킨 후, primer에 따라 48-56 ℃ 에서 30 초간 annealing 시키고, 72℃ 에서 30 초간 extension시켰다. PCR product는 1% agarose gel 에서 전기영동하였고, ethidium bromide로 염색을 한 후 Gel Doc(Bio-Rad, USA)을 사용하여 관찰하였다24). PCR에 사용된 primer는 Table 1과 같다.
- 이후 spectrophotometer를 이용하여 260, 280 nm에서 OD값을 측정하여 RNA를 정량화 했다. Total RNA 1 ㎖으로 ImProm- Ⅱ reverse transcriptase (Promegar M314A)를 이용하여 제조회사의 방법에 준하여 cDNA 를 합성하였고, GoTaq(Promegar M712B) 을 이용하여 thermal cycler (Perkin Elmer 2400, USA)에서 30 cycle 동안 증폭하였다. 각각의 cyclee 94 ℃ 에서 30 초간 denaturation 시킨 후, primer에 따라 48-56 ℃ 에서 30 초간 annealing 시키고, 72℃ 에서 30 초간 extension시켰다.
- 고정 후 일반적인 방법에 의하여 수세, 탈수과정을 거쳐 paraffin으로 포매하였으며, 포매 후 7 ㎛의 절편을 제작하여 H&E 염색을 시행하였다.
- 농축된 시료를 동결건조기를 이용하여 건조한 후 10 g(수득율은 2.5 %)의 시료를 회수하였다. 농측된 시료에 250 ㎖ 의 물을 넣은 후 동량의 chloroform을 넣고 분획깔대기에서 chloroform층을 2회 분획하여 회수하였다.
- 이용하여 농축하였다. 농축된 시료를 동결건조기를 이용하여 건조한 후 生半夏 추출물은 5 g(수득율은 25%)을회수하였고 薑製半夏 추출물은 8g의 시료를 회수하였다.
- 모든 실험군에서 시료의 도포는 하루 2회씩 오전과 오후에 1회씩 스프레이를 이용하여 뿌린 후에 면봉을 사용하여 3-4회 문질러 흡수를 촉진시켰다.
- 또한 원형탈모 생쥐군에서는 탈모가 일어난 등부위에만 도포하였으며, 일부 원형탈모 생쥐군에서는 원형탈모 부위 주위에 있는 털을 깎고 도포하였다. 반하추출물을 이용한 실험군은 정상 생쥐를 대조군, 生半夏 추출물 도포군 및 薑製半夏 주출물 도포군으로 나누었고, 자발적 원형탈모 생쥐를 이용한 실험은 대조군과 生半夏 추출물 도포 군으로 나누었다. 생반하분획물을 이용한 실험군은 정상 생쥐를 대조군, chloroform 분획물 도포군, ethyl acetate 분획물 도포군 및 물분획 도포군으로 나누어 시행하였다.
- 13a). 생반하 분획물 중 chloroform 분획층을 도포한 4마리의 동물중 3마리에서 발모현상이 전체적으로 관찰되었으나(Fig. 13b), ethyl acetate 분획층을 도포한 4마리 동물중 1마리에서 부분적인 발모현상을 관찰하였다(Fig. 13c). 그러나 chloroform과 ethyl acetate 로 분획하고 남은 물층을 도포한 4마리 동물중 3마리에서는 발모현상이 부분적으로 관찰되었다(Fig.
- 반하추출물을 이용한 실험군은 정상 생쥐를 대조군, 生半夏 추출물 도포군 및 薑製半夏 주출물 도포군으로 나누었고, 자발적 원형탈모 생쥐를 이용한 실험은 대조군과 生半夏 추출물 도포 군으로 나누었다. 생반하분획물을 이용한 실험군은 정상 생쥐를 대조군, chloroform 분획물 도포군, ethyl acetate 분획물 도포군 및 물분획 도포군으로 나누어 시행하였다.
- 수치하지 않은 반하(이하 生半夏라 함)와 생강으로 수치한강제반하(이하 薑製半夏라 함)를 각각 200 g씩 분쇄하여, 80% ethanol(EtOH)용액 1000 를 넣고 3주간 침지시킨 후 여과하여 감압농축기를 이용하여 농축하였다. 농축된 시료를 동결건조기를 이용하여 건조한 후 生半夏 추출물은 5 g(수득율은 25%)을회수하였고 薑製半夏 추출물은 8g의 시료를 회수하였다.
- 시료의 도포액은 반하추출물 도포액(生半夏와 薑製半夏)과 생반하분획물 도포액은 추출물 각각 1 g을 50% EtOH 용액 30 ㎖에 희석하여 피부에 도포하였으며, 대조군의 경우 50 % EtOH(ethanol)만을 피부에 도포한 군을 대조군으로 하였다. 모든 실험군에서 시료의 도포는 하루 2회씩 오전과 오후에 1회씩 스프레이를 이용하여 뿌린 후에 면봉을 사용하여 3-4회 문질러 흡수를 촉진시켰다.
- 자발적 원형탈모 생쥐에서 생반하추출물의 발모현상을 관찰하기 위하여 정상 생쥐에서 사용하였던 같은 농도로 희석하여 실험에 사용하였다. 실험동물은 각 군에 4-5마리씩 배정 하였으며 도포 방법은 정상 생쥐에서의 발모실험과 같은 방법으로 도포하였으며, 도포하기 전에 촬영한 사진과 도포 후 6일, 12일 및 15일째에 촬영한 사진을 육안적으로 비교 관찰하였다';
- 준하여 RNA를 추출하였다. 이후 spectrophotometer를 이용하여 260, 280 nm에서 OD값을 측정하여 RNA를 정량화 했다. Total RNA 1 ㎖으로 ImProm- Ⅱ reverse transcriptase (Promegar M314A)를 이용하여 제조회사의 방법에 준하여 cDNA 를 합성하였고, GoTaq(Promegar M712B) 을 이용하여 thermal cycler (Perkin Elmer 2400, USA)에서 30 cycle 동안 증폭하였다.
- 자발적 원형탈모 생쥐(Fig. 12a)에 15일간 도포한 후 털을 깎고 관찰 한 바 대조군에서는 15일째까지 어떠한 발모현상도 관찰 할 수 없었으나(Fig. 12b) RP군에서는 원형탈모 부위에 전체적으토 육안적인 발모현상을 뚜렷하게 관찰하였다(Fig. 12c).
- 정상 생쥐에 생반하분획물을 10일간 도포한 후 희생시켜 조직 절편을 제작하여 H&E염색을 시행하여 모낭의 변화를 광학현미경으로 관찰하였다. 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나(Fig.
- 정상 생쥐에 생반하추출물을 도포한 후 10일째에 피부를 적출하여 deep freezer(-70℃)에 보관해 두었다가 피부조직 100 mg 에 Trizol 1 ㎖를 넣어 homogenizer로 분쇄하였으며, 제조회사의 방법에 준하여 RNA를 추출하였다. 이후 spectrophotometer를 이용하여 260, 280 nm에서 OD값을 측정하여 RNA를 정량화 했다.
- 정상 생쥐에서 반하의 발모효과를 관찰하기 위하여 정상 생쥐 등쪽부위의 털을 소동물용 clipper로 짧게 깎은 후에 1일 2회씩 50% EtOH을 도포한 대조군(이하 control group)과 生半夏 추출물을 도포한 군(이하 PR군 이라 함) 및 薑製半夏 추출물을 도포한 군(이하 PRG군이라 함)으로 나누어 16일 동안 도포한 후 관찰한 결과는 다음과 같다.
- 정상 생쥐에서 반하추출물(生半夏와 薑製半夏 추출물)과 생반하분획물의 발모현상을 관찰하기 위하여 소동물용 clipper로 털을 짧게 깎고 시료를 도포한 후 8일, 10일 및 16일 동안 관찰하였다. 자발적 원형탈모 생쥐에서 생반하추출물의 발모현상을 관찰하기 위하여 정상 생쥐에서 사용하였던 같은 농도로 희석하여 실험에 사용하였다.
- 자발적 원형탈모생쥐에서 생반하추출물을 15일간 도포한 실험군에서는 5마리 전체에서 육안적인 발모 현상이 관찰되었다. 정상 생쥐에서 생반하분획물의 chloroform 분획층과 물층을 실험 9일째 도포한 군에서는 4마리 가운데 3마리에서 각각 전체적 또는 부분적인 발모현상을 관찰하였다.
- 정상 생쥐의 털을 깎고 contTo군(대조군), PR군(生半夏)추출물 도포군) 및 PRG군(薑製半夏 추출물 도포 군)으로 나누어 시료를 도포한 다음 실험 10일째에 생쥐를 희생시켜 조직절편을 제작하여 H&E염색을 시행하여 모낭의 변화를 광학현미경으로 관찰하였다.
- 정상 생쥐의 피부내 모낭의 변화를 관찰하기 위하여 반하추출물(生半夏와 薑製半夏 추출물)과 생반하분획물을 도포한 후 각각 10일째와 9일째에 2마리를 희생시켜 등쪽 피부를 척추 선에 평행하게 절개하여 normal buffered formalin 용액으로 고정하였다. 고정 후 일반적인 방법에 의하여 수세, 탈수과정을 거쳐 paraffin으로 포매하였으며, 포매 후 7 ㎛의 절편을 제작하여 H&E 염색을 시행하였다.
- 정상적인 생쥐를 이용한 실험에서는 생쥐의 등부위의 털을 소동물용 clipper를 이용하여 깍은 후에 정상적인 휴지기 상태에 있는 생쥐만을 선발하여 실험군을 배정하였다. 또한 원형탈모 생쥐군에서는 탈모가 일어난 등부위에만 도포하였으며, 일부 원형탈모 생쥐군에서는 원형탈모 부위 주위에 있는 털을 깎고 도포하였다.
- 탈모방지 및 발모효과를 갖는 새로운 천연 약물의 개발을 위하여, C57BL/6N 정상생쥐와 자발적 원형탈모 생쥐 모델을 이용하여 생반하추출물, 강제반하추출물 및 생반하분획물의 발모효과를 관찰하고자 생쥐 피부의 육안적인 발모효과, 형태학적인 변화 및 TGF-, IGF, prolactin 및 placenta lactogen의 발현에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 정상생쥐에서 생반하추출물과 강제반하추출물을 도포한 실험군은 대조군에 비하여 육안적인 발모현상을 뚜렷하게 관찰하였고, 생반하추출물은 실험 8일째부터 육안적인 발모효과를 나타내었으며, 강제반하추출물을 도포한 군보다 발모현상이 뚜렷하였다.
- 털을 깎은 후 50% EtOH을 10일째 도포한 control군에서는 4마리 가운데 1마리에서만 부분적인 발모현상을 관찰하였고(Fig. 2a)z RP군에서는 4마리 전체에서 발모현상을 관찰하였다(Fig. 2b). RPG군에서는 4마리 가운데 2마리에서 부분적인 발모현상을 관찰하였다(Fig.
- 털을 깎은 후 50% EtOH을 16일째 도포한 control군에서는 4마리 가운데 1마리에서만 부분적인 발모현상을 관찰하였고(Fig. 3a), PR군에서는 4마리 전체에서 털을 깎은 전체부위에서 발모 현상을 관찰하였다(Fig. 3b). 그러나 PRG군에서는 4마리 가운데 1마리에서만 전체적인 발모현상을 관찰하였다(Fig.
- 털을 깎은 후 50% EtOH을 8일째 도포한 control군에서는 4 마리 모두 육안적인 발모현상은 전혀 관찰할 수 없었으나(Fig. la), PP군에서는 피부가 회색으로 변하는 발모현상을 4마리 가운데 3마리에서 관찰하였고(Fig. lb), PRG군에서는 4마리 가운데 1 마리에서 발모현상을 관찰하였다(Fig. lc).
- Chloroform으로 분획하고 남은 물층을 다시 ethyl acetate(EtOAc)를 넣고 분획깔대기에서 EQAc층을 3회 분획하여 회수하였다. 회수된 EtOAc층을 감압농축기를 이용하여 농축한 뒤 동결건조하여 EtOAc분획물 1 g을 회수하였다. 그 후 EtOAc로 분획하고 남은 물층을 감압농축기를 이용하여 농축한 뒤 동결건조하여 물층 분획물 5 g을 회수하여 실험에 사용하였다.
- 농측된 시료에 250 ㎖ 의 물을 넣은 후 동량의 chloroform을 넣고 분획깔대기에서 chloroform층을 2회 분획하여 회수하였다. 회수된 chloroform층을 감압농축기를 이용하여 농축한 후 동결건조하여 4 g의 분획물을 회수하였다. Chloroform으로 분획하고 남은 물층을 다시 ethyl acetate(EtOAc)를 넣고 분획깔대기에서 EQAc층을 3회 분획하여 회수하였다.
대상 데이터
- 정상 생쥐를 이묨한 실험군은 실험의 정확성을 위하여 모두 출생날짜가 유사한 생쥐를 사용하였다. 21주령 이상의 C57BL/6N 원형탈모 생쥐는 실험실에서 사육한 생쥐 중 원형탈모가 발생한 생쥐만을 선발히여 사용하였다.
- 회수된 EtOAc층을 감압농축기를 이용하여 농축한 뒤 동결건조하여 EtOAc분획물 1 g을 회수하였다. 그 후 EtOAc로 분획하고 남은 물층을 감압농축기를 이용하여 농축한 뒤 동결건조하여 물층 분획물 5 g을 회수하여 실험에 사용하였다.
- 실험동물은 체중 25 g 내외의 숫놈 7주령 C57BL/6N 정상 생쥐와 21주령 이상의 C57BL/6N 생쥐에서 자발적으로 발생한 원형탈모 생쥐를 이용하였다. 정상 생쥐를 이묨한 실험군은 실험의 정확성을 위하여 모두 출생날짜가 유사한 생쥐를 사용하였다.
- 실험에 사용한 수치하지 않은 生半夏(Pinellae Rhizoma)와 생강으로 수치한 薑製半夏(Pinellae Rhizoma treated with ginger juice)는 시중 건재약국에서 구입하여 정선하여 사용하였다.
- 생쥐를 이용하였다. 정상 생쥐를 이묨한 실험군은 실험의 정확성을 위하여 모두 출생날짜가 유사한 생쥐를 사용하였다. 21주령 이상의 C57BL/6N 원형탈모 생쥐는 실험실에서 사육한 생쥐 중 원형탈모가 발생한 생쥐만을 선발히여 사용하였다.
성능/효과
- 6). Prolactin(PRL)의 발현은 대조군에 비하여 RP군이 약 115%로 증가하였으나(Fig. 7) placenta lactogen(PL)은 대조군에 비해 PR 군이 약 93%로 감소하였다(Fig. 8).
- 관찰하였다. 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나(Fig. 14a), 생반하분획물의 chloroform 분획층을 도포한 군에서는 휴지기에서 성장기 중기로 성장하여 피부의 피하층까지 성장 한 후 모간이 다시 진피층까지 성장하였다(Fig. 14b), Ethyl acetate 분획층을 도포한 군에서는 휴지기에서 성장기 초기로 분화하는 단계로서 모낭의 성장이 미약하게 관찰되었다(Fig. 14c). 물층을 도포한 군에서는 발생중인 성장기 초기 또는 중기의 모낭들이 진피층과 피하층에서 주로 관찰되었으므로 일두 모낭의 모간이 진피층에서도 관찰되었다(Fig.
- 증가하였다. 또한 prolactin(PRL)의 발현은 대조군에 비하여 반하추출물 도포 군이 약 115%로 증가하였으나 placenta lactogen(PL)은 대조군에 비해 약 93%로 감소하였다.
- 본 실험에서 生半夏 추출물과 薑製半夏 추출물을 정상 생쥐에 16일간 도포한 후 관찰히면 털을 깎은 후 50% EtOH을 16일째 도포한 대조군에서는 4마리 동물중 1마리에서만 발모현상이 부분적으로 관찰되었고, 薑製半夏 추출물을 도포한 실험군에서는 4마리 동물 중 1마리에서만 발모현상이 전체적으로 관찰되었으나 生半夏 추출물을 도포한 군에서는 4마리 전체에서 발모현상이 털을 깎은 전체부위에서 관찰되었다. 또한 도포 후 모낭의 변화를 광학현미경으로 관찰 한 바 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나, 강제반하추출물을 도포한 실험군에서는 일부 모낭에서만 휴지기에서 성장기 모낭으로 성장하여 있었고 일부 모낭들은 휴지기 상태로 존재하였으나, 생반하추출물을 도포한 군에서는 전체적으로 성장기 중기로 성장한 모낭으로서 모낭들이 피하층까지 성장하여 있었다. 이상의 실험결과로 정상 생쥐에서 생반하추출물을 도포한 모든 생쥐에서는 발모현상이 뚜렷하게 관찰되어 생반하추출물에는 발모를 촉진하는 물질이 함유되어 있음을 알 수 있었다.
- 물층을 도포한 4마리 가운데 3마리에서는 발모현상을 부분적으로 관찰하였으나 chloroform 분획층을 도포한 군보다는 약간 미약하였다. 또한 본 실험 10일째 모낭의 광학현미경적 변화에서 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나 chloroform 분획층을 도포한 군에서는 휴지기에서 성장기 중기로 성장하여 있었고, 물층에서는 성장기 초기 또는 중기로 성장하여 있었다. 또한 본 실험의 자발적 원형탈모 생쥐모델에서 생반하추출물을 15 일간 도포한 실험군에서의 발모효과를 육안적으로 관찰한 결과, 대조군에서는 5마리 가운데 1마리에서 일부 발모현상을 관찰할 수 있었으나, 생반하추출물을 도포한 군에서는 12일째부터 5마리 전체에서 발모현상이 관찰되었다.
- 또한 본 실험 10일째 모낭의 광학현미경적 변화에서 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나 chloroform 분획층을 도포한 군에서는 휴지기에서 성장기 중기로 성장하여 있었고, 물층에서는 성장기 초기 또는 중기로 성장하여 있었다. 또한 본 실험의 자발적 원형탈모 생쥐모델에서 생반하추출물을 15 일간 도포한 실험군에서의 발모효과를 육안적으로 관찰한 결과, 대조군에서는 5마리 가운데 1마리에서 일부 발모현상을 관찰할 수 있었으나, 생반하추출물을 도포한 군에서는 12일째부터 5마리 전체에서 발모현상이 관찰되었다. 이상의 실험결과로 생반하분획물의 chloroform 분획층과 물층에는 정상 생쥐와 자발적 원형탈모생쥐에서 발모를 촉진하는 물질이 함유되었음을 알 수 있었다.
- 또한 자발적 원형탈모생쥐의 털을 깎고 17일간 비교한 바 대조군에서는 17일째까지 어떠한 발모현상도 관찰할 수 없었으나(Fig. llb-d; No. 4, 5 mice) RP군에서는 대체적으로 육안적인발모현상을 뚜렷하게 관찰하였다(Fig. llb-d; No. l, 2, 3 mice).
- 본 실험에서 9일째 생반하분획물을 9일째 도포한 결과 대조군에서는 어떠한 발모현상도 관찰할 수 없었으나 chloroform 분획 층을 도포한 4마리 동물 중 3마리에서 발모현상을 전체적으로 관찰되었고, ethyl acetate 분획층을 도포한 4마리 동물중 1마리에서 발모현상을 부분적으로 관찰하였다. 물층을 도포한 4마리 가운데 3마리에서는 발모현상을 부분적으로 관찰하였으나 chloroform 분획층을 도포한 군보다는 약간 미약하였다.
- 이용하였다. 본 실험에서 生半夏 추출물과 薑製半夏 추출물을 정상 생쥐에 16일간 도포한 후 관찰히면 털을 깎은 후 50% EtOH을 16일째 도포한 대조군에서는 4마리 동물중 1마리에서만 발모현상이 부분적으로 관찰되었고, 薑製半夏 추출물을 도포한 실험군에서는 4마리 동물 중 1마리에서만 발모현상이 전체적으로 관찰되었으나 生半夏 추출물을 도포한 군에서는 4마리 전체에서 발모현상이 털을 깎은 전체부위에서 관찰되었다. 또한 도포 후 모낭의 변화를 광학현미경으로 관찰 한 바 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나, 강제반하추출물을 도포한 실험군에서는 일부 모낭에서만 휴지기에서 성장기 모낭으로 성장하여 있었고 일부 모낭들은 휴지기 상태로 존재하였으나, 생반하추출물을 도포한 군에서는 전체적으로 성장기 중기로 성장한 모낭으로서 모낭들이 피하층까지 성장하여 있었다.
- 본 실험에서 정상생쥐에서의 분자생물학적 변화를 관찰하기 위하여 생반하추출물을 도포한 후 털의 성장과 관련된 인자들의 발현량을 관찰한 바 TGF-0의 발현은 대조군(100%)에 비하여 생반하추출물을 10일간 도포한 군에서 146%로 발현량이 증가하였으며, IGF의 발현은 대조군에 비하여 107%로 약간 증가하였다. 또한 prolactin(PRL)의 발현은 대조군에 비하여 반하추출물 도포 군이 약 115%로 증가하였으나 placenta lactogen(PL)은 대조군에 비해 약 93%로 감소하였다.
- 실험 개시전0일째부터 15일째까지 대조군에서의 육안적인 발모 현상은 6일째, 12일째 및 15일째에는 5마리 가운데 1마리에서 일부 발모현상을 관찰할 수 있었으나(Fig. 9b-c), 나머지 4마리에서는 발모현상을 전혀 관찰할 수 없었다. 그러나 PR군에서는 6일째에 5마리 가운데 2마리에서(Fig.
- 또한 감각신경원의 활성에 의한 CGRP의 분비가 fetal rat osteoblast에서 eAMP수준을 증가시켜 50)IGF-1의 분비를 촉진한다고 하였다. 이러한 연구보고와 비교하면 본 실험에서의 IGF의 발현양의 증가는 반하추출물의 점막 자극 물질에 의한 감각신경세포의 활성에 의한 CGRP분비 촉진 및 IGF 발현양의 증가를 초래한 것으로 사료된다.
- 또한 본 실험의 자발적 원형탈모 생쥐모델에서 생반하추출물을 15 일간 도포한 실험군에서의 발모효과를 육안적으로 관찰한 결과, 대조군에서는 5마리 가운데 1마리에서 일부 발모현상을 관찰할 수 있었으나, 생반하추출물을 도포한 군에서는 12일째부터 5마리 전체에서 발모현상이 관찰되었다. 이상의 실험결과로 생반하분획물의 chloroform 분획층과 물층에는 정상 생쥐와 자발적 원형탈모생쥐에서 발모를 촉진하는 물질이 함유되었음을 알 수 있었다.
- 또한 도포 후 모낭의 변화를 광학현미경으로 관찰 한 바 대조군에서는 휴지기 모낭으로서 어떠한 변화도 관찰할 수 없었으나, 강제반하추출물을 도포한 실험군에서는 일부 모낭에서만 휴지기에서 성장기 모낭으로 성장하여 있었고 일부 모낭들은 휴지기 상태로 존재하였으나, 생반하추출물을 도포한 군에서는 전체적으로 성장기 중기로 성장한 모낭으로서 모낭들이 피하층까지 성장하여 있었다. 이상의 실험결과로 정상 생쥐에서 생반하추출물을 도포한 모든 생쥐에서는 발모현상이 뚜렷하게 관찰되어 생반하추출물에는 발모를 촉진하는 물질이 함유되어 있음을 알 수 있었다.
- 정상 생쥐에서 생반하추출물을 도포한 후 털의 성장과 관련된 인자들의 발현량을 10일째에 관찰한 바 TGF-β의 발현은 대조군(100%)에 비하여 생반하추출물 도포군에서는 146%로 IGF의 발현은 107%로,prolactin의 발현은 약 115%로 증가하였으나 placenta lactogene 대조군에 비해 약 93%로 감소하였다. 자발적 원형탈모생쥐에서 생반하추출물을 15일간 도포한 실험군에서는 5마리 전체에서 육안적인 발모 현상이 관찰되었다. 정상 생쥐에서 생반하분획물의 chloroform 분획층과 물층을 실험 9일째 도포한 군에서는 4마리 가운데 3마리에서 각각 전체적 또는 부분적인 발모현상을 관찰하였다.
- 3c). 정상 생쥐에서 생반하추출물(PR군)과 강제반하 추출물(PRG군)의 발모효과는 생반하 추출물을 도포한 모든 생쥐에서 발모현상을 뚜렷하게 관찰하였다.
- 정상생쥐에서 생반하추출물을 실험 10일째 도포한 군에서는 전체적으로 성장기 중기의 모낭으로서 모낭들은 피하층까지 성장하였으며, 강제반하를 도포한 실험군에서는 일부 모낭에서만 휴지기에서 성장기 모낭으로 성장하여 피부의 진피층에서 피히층으로 이행하는 부위까지 성장한 모낭들이 관찰되었다. 정상 생쥐에서 생반하추출물을 도포한 후 털의 성장과 관련된 인자들의 발현량을 10일째에 관찰한 바 TGF-β의 발현은 대조군(100%)에 비하여 생반하추출물 도포군에서는 146%로 IGF의 발현은 107%로,prolactin의 발현은 약 115%로 증가하였으나 placenta lactogene 대조군에 비해 약 93%로 감소하였다. 자발적 원형탈모생쥐에서 생반하추출물을 15일간 도포한 실험군에서는 5마리 전체에서 육안적인 발모 현상이 관찰되었다.
- 정상생쥐에서 생반하추출물과 강제반하추출물을 도포한 실험군은 대조군에 비하여 육안적인 발모현상을 뚜렷하게 관찰하였고, 생반하추출물은 실험 8일째부터 육안적인 발모효과를 나타내었으며, 강제반하추출물을 도포한 군보다 발모현상이 뚜렷하였다. 정상생쥐에서 생반하추출물을 실험 10일째 도포한 군에서는 전체적으로 성장기 중기의 모낭으로서 모낭들은 피하층까지 성장하였으며, 강제반하를 도포한 실험군에서는 일부 모낭에서만 휴지기에서 성장기 모낭으로 성장하여 피부의 진피층에서 피히층으로 이행하는 부위까지 성장한 모낭들이 관찰되었다.
- 정상생쥐에서 생반하추출물과 강제반하추출물을 도포한 실험군은 대조군에 비하여 육안적인 발모현상을 뚜렷하게 관찰하였고, 생반하추출물은 실험 8일째부터 육안적인 발모효과를 나타내었으며, 강제반하추출물을 도포한 군보다 발모현상이 뚜렷하였다. 정상생쥐에서 생반하추출물을 실험 10일째 도포한 군에서는 전체적으로 성장기 중기의 모낭으로서 모낭들은 피하층까지 성장하였으며, 강제반하를 도포한 실험군에서는 일부 모낭에서만 휴지기에서 성장기 모낭으로 성장하여 피부의 진피층에서 피히층으로 이행하는 부위까지 성장한 모낭들이 관찰되었다. 정상 생쥐에서 생반하추출물을 도포한 후 털의 성장과 관련된 인자들의 발현량을 10일째에 관찰한 바 TGF-β의 발현은 대조군(100%)에 비하여 생반하추출물 도포군에서는 146%로 IGF의 발현은 107%로,prolactin의 발현은 약 115%로 증가하였으나 placenta lactogene 대조군에 비해 약 93%로 감소하였다.
- 정상생쥐에서의 분자생물학적 변화를 관찰하기 위하여 생반하추출물을 도포한 군(PR군)에서의 발모 관련 인자들의 발현량을 관찰한 바 도포 후 10일째 TGF-8의 발현은 대조군(100%)에 비하여 RP군에서 146%토 발현량이 증가하였으며(Fig. 5), IGF의 발현은 대조군에 비하여 PR군이 107%로 약간 증가하였다(Fig. 6). Prolactin(PRL)의 발현은 대조군에 비하여 RP군이 약 115%로 증가하였으나(Fig.
후속연구
- 이상의 실험결과 생반하추출물에는 정상 생쥐와 자발적 원형탈모 생쥐에서 털의 성장을 촉진시키는 양모와 발모효과가 강제반하추출물보다 양호하였으며, 특히 생반하분획물의 경우 chloroform 분획층에서 모발의 성장과 관련된 물질이 많이 함유되었음이 나타나 탈모의 예방과 치료에 응용될 수 있을 것으로 사료된다.
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