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문제 정의
- 따라서, 본 연구예서는 목단피의 항산화효과 및 LDL 산화 억제 효과를 in Wg에서 관찰하고 천연항산화제로서의 개발 가능성을 검토하는 한편, 혈소판 응집 저해효과를 탐색함으로써 동맥경화의 예방 및 치료에의 응용 가능성을 검토하였다.
- 이와 같이 NO는 NO 자체로서 보다는 peroxynitrite의 형태로 다양한 산화적 손상을 유발하며, 일단 생성된 NO는 ONCQ-의 형태로 조직 손상을 일으키므로 NO에 의한 다양한 질환을 예방 또는 치료하기 위해서는 ONOO> 소거할 수 있는 물질이 유용하다 In tnX에서 가장 강력한 peroxynitrite 소거제로는 D(-)penicillamine과 ebselen이 있고, 그 외 과일, 와인, 차, 녹황색 채소의 성분으로서 효과적인 항산화제로 알려져 있는 ascorbic acid, a-tocopherol, flavonoids, polyhydroxyphenol 등이 있다 본 실험은 peroxynitrite 소거능 실험으로 MRB 추출물이 RNS의 생성을 효과적으로 방지 할 수 있는지를 살펴보고자 MRB의 ONOO- 소거 활성을 DHR 123을 이용하여 측정하였다. MRB 열수 추출물(IC5o=4.
가설 설정
- Fig. 4. Effects of the extract of MRB on the platetet aggregation induced by collagen. 1.
제안 방법
- MRB 열수 추출물 10 iiL와 NO 제공물질인 3-morpholinosydnonimine hydrochloride (SIN-1) 과 4, 5-Diaminofluorescein. (DAF~2)를 96 well plate에 첨가하였으며, DAF-2와 NO의 반응에 의해 방출되는 형광은 10분 후 excitation wave length 485 nm 및 emission wave length 530 nm에 서 Multi-detection microplate reader틀 이용하여 측정하였다.
- 25% Gatin이다. Cuvette에 PRP 400 μL, agonist인 collagen 50 pL, sample pL를 넣고, 항혈전작용을 평가하였다. 혈소판 활성화 억제작용은 omeagen으로 유도된 aggregation (%)을 대조군(A)으로, MRB 열수 추출물을 전처리한 후 유도된 aggregation (을 시료군(E)으로 하여 다음 계산식에 따리 inhibition 로 나타내었다.
- 그러나 비정상적인 혈소판의 활성화는 혈소판 응집 및 혈전형성을 초래하여 폐쇄성 혈관질환의 임상적 발현에 관여하게 된다. 또한 혈소판에서 유리된 물질들은 혈관수축, 염증 및 동맥경회성 혈관질환 등에도 관여하고 있음이 알려져 있다4% 따라서, 혈행 개선과 관련한 MRB의 in vitro 실험적 효능평가방법으로 혈소판 응집 억제능을 실시하였다. 농도별 MRB 열수 추출물에 대한 혈소관 응집 억제 활성을 측정한 결과, 음성대조군으로 혈소판에 증류수만을 처리하였을 때는 5분 동안 19.
- 3). 또한, 이를 정량화하기 위하여 반응시간 20시간이 경과한 후에 분해된 fibrin의 무게를 측정하였다. 반응시작 15시간이 경과된 후 혈전 분해량이 눈에 띄게 증가하였으며 20시간 후에는 약 1, 892 mg의 분해된 혈전을 얻을 수 있었다.
- 먼저 2 의 RNA틀 DNase와 섞고 DNA 제거 효소를 37℃에서 30분 동안 활성화 시켰다. 반응이 종료한 뒤 75℃에서 DNase를 불활성화 시킨 후 역전사 반응을 진행 하였다. 역전사 반응에서는 주형인 RNA와 oligo dT primer를 섞고 70'C에서 5분간 반응을 전개시킨 후 4℃에서 5분 동안 정치하였다.
- 항산화 효소계 발현에 대한 여러가지 의견들이 있으나, 산화적 스트레스가 가해질 때, 이로 인한 손상을 줄이기 위해 항산화 효소계 발현이 증가하는데 항산화제 투여 시에는 이들 이산화적 스트레스를 소거하게 되므로 항산화 효소계의 발현이 오히려 감소된다는 설이 있다. 본 연구에서 HepG2 세포에 6로 산화적 스트레스를 유발한 뒤 MRB 열수 추출물을 처리하여 세포의 산화적 손상 및 항산화효소의 mRNA 발현을 관찰하였다. 그 결과, Fig.
- 사용하여 측정하였다. 일정 농도의 MRB 열수 추출물 10 UL 와 menadione 10 μL를 넣고 potassium phosphate buffer (pH 7.4) 130 μL를 넣어 hydroxyl radical을 생성시킨 후, 125 μM DCFDA에 estemse틀 넣어 반응시킨 DCFDH틀 50 yL 첨가하여 20분간 생성된 형광의 변화를 측정하였다. 이 형광의 양을 excitation wavelength 485 nm 및 emission welength 530 nm 에서 Multi-detection microplate read 슌!" (Microplate Fluorescence Genious, Tecan, Austria)^.
- 즉, 10 의 MRB 열수 추출물 희석용액(L000 u g/mL) 또는 Trolox 아andai선에 ABTS 용액 1.0 mL를 첨가하여 1분 후 UVisibl spectrophotomefe호 (Ultrospec 6300 proz Amersham Bioscience)를 이용하여 734nm에서 흡광도를 측정하였다. 6분간 monitwing하였고 1 mM Tmlox와 비교하여 흡광도의 저해 %로 나타내었다.
- 즉, 96-well microplate에 MRB 열수 추출물을 농도별로 취하고 90 mM NaCb 5 mM KC1 및 100 pM diethylenetriaminepenta acetic acid와 10 yM DHR 123를 함유하는 sodium phosphate buffer (pH 7.4)를 가하였다. 이에 10 μ M ONCQ를 첨가한 후 형광광도계를 이용하여 excitation 500 nm, emission 536 nm에서 측정하였다.
- 즉, Qzaediphenyi-p-picryl-hydrazyl (DPPH) 16 mg을 100 mL의 에탄올에 녹인 후 100 mL의 증류수를 혼합하여 여과지로 여과한 후 이 여액 2.5 mL에 일정농도의 MRB 열수 추출물 05 mL을 혼합한 후 528nm에서 시간에 따른 흡광도의 변화를 측정하였다.
- Cuvette에 PRP 400 μL, agonist인 collagen 50 pL, sample pL를 넣고, 항혈전작용을 평가하였다. 혈소판 활성화 억제작용은 omeagen으로 유도된 aggregation (%)을 대조군(A)으로, MRB 열수 추출물을 전처리한 후 유도된 aggregation (을 시료군(E)으로 하여 다음 계산식에 따리 inhibition 로 나타내었다.
대상 데이터
- 본 실험의 시료로 사용한 목단피(牧丹皮, Moutan Ro아 Bark, MRB)는 2006년산 국산제품을 (주) 옴니허브에서 구입한후 정선수치하여 사용하였다 시료 100 g을 마쇄한 후 3 L round flask에 넣고 2 L의 물을 가한 다음 가열맨틀에서 3 hr 전탕 하였다 이를 1 mm-pore-size filter (Whatman No. 2)로 여과한 후 불용성 물질들은 제거하였다' 여과된 약액은 rotary vaccum evaporator (EYELA Digital water bath SB-1000, EYELA, Japan) 를 이용하여 감압농축 한 후 동결건조 하여 18.68 g의 동결건조 분말 시료를 얻었다(수율: 18.68%).
데이터처리
- 통계 분석은 SPSS (version 14.0 for Windows, SPSS Inc.z USA) program을 이용하여 각 군의 평균과 표준편차를 산출하고 군 간의 차이 유무를 one-way ANOVA로 분석한 뒤 p<0 Q5에서 유의한 차이가 있는 경우 Tukey te닻를 이용하여 검정하였다.
이론/모형
- Human LDL의 REMe 윤 등】이의 방법에 따라 agarose gel electrophoresis로 분석하였다. 간단히, PBS (pH 7.
- MRB 열수 추출물의 Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC) 값은 Roberta와 Miller 등의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 10 의 MRB 열수 추출물 희석용액(L000 u g/mL) 또는 Trolox 아andai선에 ABTS 용액 1.
- . MRB 열수 추출물의 superoxide anion 소거 효과를 측정하기 위해 NBT 환원법을 이용하였다. 이 방법은 xanthine oxidaseofl hypoxanthine-S첨가하여 생성된 superoxide anion이 노란색의 NBT를 환원시켜 청색의 diformazan으로 변화시킴으로써 560 nm에서 홉광도가 증가되게 된다.
- MRB 열수 추출물의 혈전에 대한 분해활성은 human fibrin plate를 이용하여 Astrup와 Mullertz의 방법”)을 토대로 측정하였다. 100 mm petri dish에 thrombin 용액(50 unit/mL)을 100 μ L 주입한 후, 여기에 0.
- MRB 의 혈소판 응집 억제활성을 검색하기 위하여 aggregometer (Chrono Log 490-2Dz Chrono Log, USA)를 이용하여 혈소판 응집 억제활성을 irnpedance 법으로 측정하였다. 먼저, Sprague Dawley (SD) male rat의 혈액을 3.
- MRB 추출물의 human LDL 산화 억제효과는 Yagi의 방법 에 의해 측정하였다. 즉, human LDL 0.
- MRB의 NO radical 소거 효과는 DAF-2 assay를 이용하여 측정하였다. MRB 열수 추출물 10 iiL와 NO 제공물질인 3-morpholinosydnonimine hydrochloride (SIN-1) 과 4, 5-Diaminofluorescein.
- MRB의 hydroxyl radicale 제거능을 측정하기 위하여 2;7edichloro dihydofluorescein diacetate (DCFDA) 측정방법 을 사용하여 측정하였다. 일정 농도의 MRB 열수 추출물 10 UL 와 menadione 10 μL를 넣고 potassium phosphate buffer (pH 7.
- MRB의 peroxynitrite 소거 효과는 Crow의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 96-well microplate에 MRB 열수 추출물을 농도별로 취하고 90 mM NaCb 5 mM KC1 및 100 pM diethylenetriaminepenta acetic acid와 10 yM DHR 123를 함유하는 sodium phosphate buffer (pH 7.
- MRB의 superoxide anion 소거 효과는 Goh와 Niki의 방법'히에 따라 측정하였다. 시험관에 일정 농도의 MRB 열수 추출물, 30 mM의 EDTA (pH 7.
- MRB의 유리기 소거 효과는 Blois에 의한 벼}법에 따라 측정하였다. 즉, Qzaediphenyi-p-picryl-hydrazyl (DPPH) 16 mg을 100 mL의 에탄올에 녹인 후 100 mL의 증류수를 혼합하여 여과지로 여과한 후 이 여액 2.
- 이루어졌다. 역전사 효소 반응은 Promega사에서 제공된 manufactUTe에 따라 DNase의 처리 및 reverse transcription 과정을 순차적으로 실시하였으며, 과정은 다음과 같다. 먼저 2 의 RNA틀 DNase와 섞고 DNA 제거 효소를 37℃에서 30분 동안 활성화 시켰다.
성능/효과
- 산화된 LDLe 생리활성 물질을 분해하고 내피세포예 염증을 일으켜 혈전 및 칼슘 침착으로 결국에는 동맥경화를 유발하게 된다히. CuSO4 유도-LDL 산화 억제 효과에 대한 MRB의 효과를 검토한 결과 Table 4에 나타난 바와 같이 MRB 열수 추출물은 값이 43.17+1.13 /mL로 대조군으로 사용된 AA (IC5o=21.09±0.62 ug/mL) 및 BHT (IC5o=26.31±0.22 ug/mL)보다는 낮았으나, 비교적 높은 효과를 나타내었다. Chen 등*'은 Glycine tommtella 뿌리 에탄올 추출물에서 LDL 산화 억제효과를 측정한 결과 유의적으로 lag phage를 지연시킴으로써 Glycine toe가 생체 내에서 산화적 스트레스에 의해 유발되는 손상과 그로 인한 질병유발을 예방하는데 좋은 소재가 될 수 있음을 시사한 바 있다.
- 이 moleculee 구리, 철과 같은 금속이온 존재 시 superoxide anient과 hydrogen pesdde에 외해 생성되어 지질, 플리펩타이드, 단백질 및 DNA 와 반응하는데, 특히 thiamin과 guanosine과 더욱 더 빠르게 반응하는 것으로 알려져 있다찌 따라서, 천연물에 존재하는 hydroxyl radical 소거제를 검색하는 것은 여러 다양한 질환을 예방하는 차원에서 중요한 의미가 있다. Dye의 산화로부터 생성되는 형광을 측정함으로써 microsome과 ester DCFDA와의 상호반응성을 측정하는 DCFDA ally는 microsome의 산소 라디칼생성을 자극하는 의 활성을 평가하기 위한 빠르고, 보다더 민감한 시스템이다 MRB 열수 추출물의 hydroxyl radical 소거 효과를 측정한 결과, 값이 102.87+10.24 ug/mL로 나타나 강력한 항산화제로 알려져 있는 AA (1C59, 79±Z96 ug/mL) 보다는 낮지만 hydroxyl race에 대한 소거 활성을 갖는 것으로 나타났으며 (Table 3), 따라서 MRB는 hydroxyl radical을 효과적으로 소거하여 micRSom윤의 지질과산화를 억제시킬 것으로 사료되었다.
- IB1 로 사용되는 MRB를 열수 추출하여 in vitro 상에서의 항산화 효과를 TEAC법에 의한 항산화효과, DPPH를 이용한 유리기 소거효과' ROS (superoxide anion, hydroxyl radical) 소거효과 및 RNS (NO radical, peroxynitrite) 소거효파에 의해 알아본 결과, ℃든 실험에 대해 항산화효과가 높았으며, 틈& RNS 소거활성이 큰 것으로 나타났다. 또한, MRB 열수 주출물3 항산화효소계 (Cu .
- 이와 같이 NO는 NO 자체로서 보다는 peroxynitrite의 형태로 다양한 산화적 손상을 유발하며, 일단 생성된 NO는 ONCQ-의 형태로 조직 손상을 일으키므로 NO에 의한 다양한 질환을 예방 또는 치료하기 위해서는 ONOO> 소거할 수 있는 물질이 유용하다 In tnX에서 가장 강력한 peroxynitrite 소거제로는 D(-)penicillamine과 ebselen이 있고, 그 외 과일, 와인, 차, 녹황색 채소의 성분으로서 효과적인 항산화제로 알려져 있는 ascorbic acid, a-tocopherol, flavonoids, polyhydroxyphenol 등이 있다 본 실험은 peroxynitrite 소거능 실험으로 MRB 추출물이 RNS의 생성을 효과적으로 방지 할 수 있는지를 살펴보고자 MRB의 ONOO- 소거 활성을 DHR 123을 이용하여 측정하였다. MRB 열수 추출물(IC5o=4.35±O.13 ug/mL)의 peroxynitrite 소거 효과는 대조군으로 사용된 AA (IC5o=2.54+O.O4 pg/mL) 보다는 낮았으나 비교적 높은 소거 효과를 보여, MRB가 효과적인 peroxynitrite 소거제로 작용함을 알 수 있었다(Table 3).
- 04%의 혈소판 응집률을 보였고, 양재조군으로 혈소판, 증류수 외에 혈소판 응집제인 cEagen을 첨가하였을 때는 9438%외 응집률을 보였다. MRB 열수 추출물을 최종 농도 L 2, 5 /mL로 처리했을 때, 각각 88.26%, 79.84%, 3753%의 혈소판 응집률을 보여 농도 의존적 응집 억제효과를 나타내었다. 또한 잘 알려진 혈소판 응집 억제 물질인 eugenole 처리했을 땨1, 혈소판 응집튤이 25, 6옹%로 약 75%의 응집 억제효과를 보여 MRB 가 eug시 보다는 다소 낮지만 우수한 억제효과를 보여 동만녘화 및 고혈압의 예방 및 치료에 응용할 수 있을 것으로 기대된다.
- RNS 중 하나인 nitric oxide radical 에 대한 MRB의 소거 활성을 측정한 결과는 Table 3과 같다. MRB 열수 추출물의 IC50값은 1.52+0.04 ug/mL로 탁월하게 높은 NO radical 소거 활성을 보인데 반해, 대조군으로 이용된 AA (IC59.79±2.96 ug/mL)는 MRB에 비해 현저히 낮은 소거 효과를 보였다. 이러한 MRB의 라디칼 소거효과는 ROS보다 RNS의소거에 더 탁월한 효과를 보이는 것으로 사료되었다.
- 이때, superoxide anion 소거 활성을 갖는 물질을 첨가하면, NBT 의 환원을 감소시켜 diformazs의 생성 역시 감소하게 된다. MRB 열수 추출물의 superoxide anion 소거 활성을 측정한 결과 Table 3에 나타난 바와 같이 IC값이 0.43±0.03 mg/mL로 항산화효과가 널리 알려진 AA (IC50=1.22±0.02 mg/mL) 보다는 탁월하게 우수한 소거 활성을 나타내어 superoxide ankm에 대해 효과적인 소거제로 작용하는 것으로 나타났다.
- DPPH는 안정한 라디칼로 cysteinez gkthion과 같은 함유황 아미노산과 ascorbic acid, tocopherolz hydroquinone, pyrogallola4 같은 polyhydroxy aromatic compounds, p -phenylenediamine, p-aminophenol과 같은 aromatic amine 등에 의해 환원되어 짙은 자색이 탈색되므로 수소 공여능 또는 유리기 소거 작용을 측정하는데 널리 사용되고 있는 편리한 방법이다 저 본 연구에서 DPPH를 이용하여 MRB 열수 추출물의 유리기 소거효과를 측정한 결과는 Table 2와 같다. MRB 열수 추출물의 유리기 소거효과는 10값이 412.18±10.37 ug/mL로 대조군으로 쓰인 A쇼 및 BHT 보다는 높게 나타났다. 항암작용' 항산화 작용 등 다양한 기능성이 있다고 보고된 10종의 식용버섯 및 약용버섯의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타낸 Kim 등의 연구에서는 표고버섯 19.
- TYolox와 비교함으로써 평가한다. MRB 열수 추출물의 항산화 효과를 TEAC법으로 측정한 결과, Table 2에 나타내었듯 MRB 열수 추출물의 TEAC 값은 0.053±Q001토 나타났다. 반면 대조군으로 사용한 ascorbic acid (AA)와 butylated hydroxytoluene (BHT) 의 TEAC 값이 각각 0.
- 한편, h나man LDL에 대한 MRB 열수 추출물의 산화 억제효과를 검토한 결고}, 대조군으로 사용된 AA 및 BHT 보다는 낮았지만, 비교적 우수한 효과를 보여 MRB의 우수한 항산화활성이 산화 LDL 내의 지질 과산화물의 축적에 의해 일어나는 각종 연쇄반응을 억제함으로써 세포의존성 동맥경화의 초기단계를 예방할 수 있는 기능성 물질로 이용될 수 있음을 시사하였다. MRB 열수 추출물의 혈전분해 활성을 fibrin plate 상에서 관찰한 결과, 20 시간 경과 후에 유의적으로 fibrin 분해링이 증가히는 결과를 확인할 수 있었으며, 농도별 MRB 열수 추출물에 대- 혈소판 응집 억제 활성을 측정한 결고}, collagen 유도 혈소판 응집에 대해 농도 의존적 응집 억제효과를 나타내었다. 또한, 혈소판 응집 억제 물질인gen이을 처리했을 때와 비교하여 MRB가 eugenole} 유사한 억제 효과를 노8 동맥경화 및 고혈압의 예방 및 치료에 응용할 수 있을 것으로 기대되었다’ 이상의 실험결과로무터 본 실험에 사용된 MRB는 새로운 항산화 - 항혈전 효과에 의한 항동맥경화 기능성 소재로의 개발 가능성이 매우 높을 것으로 사료된다.
- 본 연구에서 HepG2 세포에 6로 산화적 스트레스를 유발한 뒤 MRB 열수 추출물을 처리하여 세포의 산화적 손상 및 항산화효소의 mRNA 발현을 관찰하였다. 그 결과, Fig. 1에 나타난 바와 같이 Cu - Zn-SOD, GPx 및 catalase으 mRNA 발현 양상에는 큰 변호}가 나타나지 않았으나 GR의 mRNA 발현에 있어 HepG2 세포에 6를 처리하였을 때, 항산화효소 활성이 현저히 감소되었으나 MRB 열수 추출물을 처리하였을 경우 농도에 의존적으로 항산화효소 활성이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과로부터 MRB는 산화적 스트레스로부터의 세포 내 손상을 효과적으로 방어하는 것으로 사료된다.
- 또한 혈소판에서 유리된 물질들은 혈관수축, 염증 및 동맥경회성 혈관질환 등에도 관여하고 있음이 알려져 있다4% 따라서, 혈행 개선과 관련한 MRB의 in vitro 실험적 효능평가방법으로 혈소판 응집 억제능을 실시하였다. 농도별 MRB 열수 추출물에 대한 혈소관 응집 억제 활성을 측정한 결과, 음성대조군으로 혈소판에 증류수만을 처리하였을 때는 5분 동안 19.04%의 혈소판 응집률을 보였고, 양재조군으로 혈소판, 증류수 외에 혈소판 응집제인 cEagen을 첨가하였을 때는 9438%외 응집률을 보였다. MRB 열수 추출물을 최종 농도 L 2, 5 /mL로 처리했을 때, 각각 88.
- 6%로 보고되었다끼. 따라서, MRB 열수 추출물이 앞서 언급한 추출물에 비해 저농도에서 50% 소거활성을 나타내어 우리에게 잘 알려진 약용식물이나 항산화 효과로 알려진 녹차에 비하여 유리기 소거활성이 뒤지지 않는다는 것을 확인 할 수 있었다.
- 소거활성이 큰 것으로 나타났다. 또한, MRB 열수 주출물3 항산화효소계 (Cu . Zn-SOU GPxz GR 및 catalase) mRNA 발현에 미치는 영향을 RLPCR에 의해 살펴본 결과' MRB는 산화적스트레스로부터의 세표내 손상을 효과적으로 방어하며 항산화 효소계의 이상 발현을 억제시키는 것으토 사료되었다. 한편, h나man LDL에 대한 MRB 열수 추출물의 산화 억제효과를 검토한 결고}, 대조군으로 사용된 AA 및 BHT 보다는 낮았지만, 비교적 우수한 효과를 보여 MRB의 우수한 항산화활성이 산화 LDL 내의 지질 과산화물의 축적에 의해 일어나는 각종 연쇄반응을 억제함으로써 세포의존성 동맥경화의 초기단계를 예방할 수 있는 기능성 물질로 이용될 수 있음을 시사하였다.
- 053±Q001토 나타났다. 반면 대조군으로 사용한 ascorbic acid (AA)와 butylated hydroxytoluene (BHT) 의 TEAC 값이 각각 0.327±0.001 과 1.217±0.002S 나타났는바 MRB 추출물이 이들 시료와 비교하여 ABTS'* 소거 활성은 다소 낮은 것으로 판단되었다.
- 1에 나타난 바와 같이 Cu - Zn-SOD, GPx 및 catalase으 mRNA 발현 양상에는 큰 변호}가 나타나지 않았으나 GR의 mRNA 발현에 있어 HepG2 세포에 6를 처리하였을 때, 항산화효소 활성이 현저히 감소되었으나 MRB 열수 추출물을 처리하였을 경우 농도에 의존적으로 항산화효소 활성이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과로부터 MRB는 산화적 스트레스로부터의 세포 내 손상을 효과적으로 방어하는 것으로 사료된다.
- Zn-SOU GPxz GR 및 catalase) mRNA 발현에 미치는 영향을 RLPCR에 의해 살펴본 결과' MRB는 산화적스트레스로부터의 세표내 손상을 효과적으로 방어하며 항산화 효소계의 이상 발현을 억제시키는 것으토 사료되었다. 한편, h나man LDL에 대한 MRB 열수 추출물의 산화 억제효과를 검토한 결고}, 대조군으로 사용된 AA 및 BHT 보다는 낮았지만, 비교적 우수한 효과를 보여 MRB의 우수한 항산화활성이 산화 LDL 내의 지질 과산화물의 축적에 의해 일어나는 각종 연쇄반응을 억제함으로써 세포의존성 동맥경화의 초기단계를 예방할 수 있는 기능성 물질로 이용될 수 있음을 시사하였다. MRB 열수 추출물의 혈전분해 활성을 fibrin plate 상에서 관찰한 결과, 20 시간 경과 후에 유의적으로 fibrin 분해링이 증가히는 결과를 확인할 수 있었으며, 농도별 MRB 열수 추출물에 대- 혈소판 응집 억제 활성을 측정한 결고}, collagen 유도 혈소판 응집에 대해 농도 의존적 응집 억제효과를 나타내었다.
후속연구
- 활성질소종과 항산화 방어계 (antioxidant defense system) 간워 균형이 깨어질 때 동맥경화와 같은 각종 만성 염증성 질환(chnmic inflammatory disease)이 일어나게 된다하 동맥경화의 경우 Kunsch와 Medfwd의 연구 허에 따르면 여러가지 동맥경화의 위험인자들이 혈관세포 내 산화적스트께스를 증가시키고, 이에 따라 2차적으로 redox sensitive signaling pathway와 transcription factor를 활성화함으로써 혈관 세포와 면역세포의 상호작용에 의한 염증을 유발하고, 혈관 기능의 장애를 초래하셔 동맥경화를 유발한다고 한다. 따라서, 항산화 효과가 큰 천연물은 동맥경화와 같은 만성 염증성 질환의 예방 및 치료에 중요한 역할을 할 수 있을 것이다.
- 84%, 3753%의 혈소판 응집률을 보여 농도 의존적 응집 억제효과를 나타내었다. 또한 잘 알려진 혈소판 응집 억제 물질인 eugenole 처리했을 땨1, 혈소판 응집튤이 25, 6옹%로 약 75%의 응집 억제효과를 보여 MRB 가 eug시 보다는 다소 낮지만 우수한 억제효과를 보여 동만녘화 및 고혈압의 예방 및 치료에 응용할 수 있을 것으로 기대된다.
- MRB 열수 추출물의 혈전분해 활성을 fibrin plate 상에서 관찰한 결과, 20 시간 경과 후에 유의적으로 fibrin 분해링이 증가히는 결과를 확인할 수 있었으며, 농도별 MRB 열수 추출물에 대- 혈소판 응집 억제 활성을 측정한 결고}, collagen 유도 혈소판 응집에 대해 농도 의존적 응집 억제효과를 나타내었다. 또한, 혈소판 응집 억제 물질인gen이을 처리했을 때와 비교하여 MRB가 eugenole} 유사한 억제 효과를 노8 동맥경화 및 고혈압의 예방 및 치료에 응용할 수 있을 것으로 기대되었다’ 이상의 실험결과로무터 본 실험에 사용된 MRB는 새로운 항산화 - 항혈전 효과에 의한 항동맥경화 기능성 소재로의 개발 가능성이 매우 높을 것으로 사료된다.
- Chen 등*'은 Glycine tommtella 뿌리 에탄올 추출물에서 LDL 산화 억제효과를 측정한 결과 유의적으로 lag phage를 지연시킴으로써 Glycine toe가 생체 내에서 산화적 스트레스에 의해 유발되는 손상과 그로 인한 질병유발을 예방하는데 좋은 소재가 될 수 있음을 시사한 바 있다. 이상의 결과로 본 실험에 이용한 MRB의 강력한 항산화활성을 바탕으로 산화 LDL 내의 지질 과산화물의 축적 억제를 통해 MRB7} 동맥경화 예방 소재로의 개발 가능성을 제시할 수 있을 것으로 사료된다.
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