[논문]단삼 유래 Tanshinone IIA가 3T3-L1 세포의 아포토시스 유도와 지방형성 억제에 미치는 영향

정승일; 이종우; 장선일

단삼 유래 Tanshinone IIA가 3T3-L1 세포의 아포토시스 유도와 지방형성 억제에 미치는 영향
Effects of Tanshinone IIA from Salvia Miltiorrhiza Bunge on Induction of Apoptosis and Inhibition of Adipogenesis in 3T3-L1 Cells 원문보기

동의생리병리학회지 = Journal of physiology & pathology in Korean Medicine, v.23 no.6, 2009년, pp.1409 - 1415

정승일 (전주생물소재연구소) , 이종우 (전주대학교 대체의학대학 대체건강관리학부 건강관리) , 장선일 (전주대학교 아토피.건강전문연구소)

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Obesity is especially a serious health problem in industrialized countries, because it is considered to be a risk factor associated with the genesis or development of various metabolic diseases, including cardiovascular disease and type 2 diabetes mellitus. The purpose of this study was to investigate the effects of tanshinone IIA from Salvia miltiorrhiza Bunge on induction of apoptossis and inhibition of adipogenesis in in 3T3-L1 preadipocytes and adipocytes. The results demonstrated that tanshinone IIA decreased cell population growth of 3T3-L1 preadipocytes, assessed with the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] and LDH (lactate dehydrogenase) assay. Flow cytometric analysis of 3T3-L1 preadipocytes exposed to tanshinone IIA showed that apoptotic cells increased in a timeand dose-dependent manner. Treatment with tanshinone IIA decreased the number of normal cells and increased the number of apoptotic cells in a dose-dependent manner. The induction of apoptosis in 3T3-L1 preadipocytes by tanshinone IIA was mediated through the activation of caspase-3 and Bax, and then through the cleavage of PARP and the down-regulation of Bcl-2. Moreover, tanshinone IIA significantly decreased the amount of intracellular triglycerides and GPDH (glycerol-3-phosphate dehydrogenase) activity in 3T3-L1 adipocytes. Our results suggest that tanshinone IIA efficiently induces apoptosis and inhibits adipogenesis in 3T3-L1 preadipocytes and adipocytes.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스를 유도하는데 관여하는 분자적 기전을 알아보기 위해서 우리는 아포토시스 유도와 관련된 단백질의 활성 및 발현을 조사하였다. 그 결과 caspase-3의 활성은 tanshinone IIA가 처리된 농도에 의존적으로 그 활성이 유의하게 증가되었다(Fig.
Annexin V-FITC는 phosphatidylserine과 결합하는데, 이러한 현상은 아포토시스 초기에 발견된다고 알려졌다²¹⁾. 따라서 tanshinone IIA 처리가 3T3-L1 전지방세포의 초기에 아포토시스를 유도할 수 있는 약리적 효과가 있는지 조사하였다. 그 결과 tanshinone IIA의 농도가 증가될수록 phosphatidylserine과 Annexin V-FITC의 결합이 증가됨을 확인할 수 있었다(Fig.
따라서 이 연구는 3T3-L1을 대상으로 tanshinone IIA을 처리하여 전지방세포에서 아포토시스 유도에 대한 기전과 지방세포에서 지방형성 억제을 조사하여 매우 흥미로운 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
이러한 결과는 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스 유도에 caspase-3가 관여된다는 사실을 제공해 주었다. 또한 tanshinone IIA가 유도하는 아포토시스에 있어서 또 다른 관련 분자들의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해서 아포토시스 유도 중요분자인 PARP의 발현을 조사하였다. Fig.
비만은 심혈관계 질환 및 제 2형 당뇨병을 포함한 여러 가지 대사성 질환을 일으키기 때문에 특별히 선진국에서 심각한 건강상의 문제로 주목 받고 있다. 본 연구의 목적은 3T3-L1 전지방세포와 지방세포에서 아포토시스의 유도와 지방형성을 억제에 대한 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 유래 tanshinone IIA의 효과를 조사하기 위한 것이다.
우리는 상기와 같이 tanshinone II의 항염증 분자기전을 보고한 후 이 약물이 지방세포에 어떠한 영향을 주는지 알아보기 위해서, 우선 3T3-L1 전지방세포의 성장에 미치는 tanshinone IIA의 영향을 MTT와 LDH 유리능을 조사하였다. 그 결과 3T3-L1 전지방세포의 성장은 tanshinone IIA의 농도가 증가할수록 유의하게 억제된다는 사실을 확인할 수 있었다(Fig.

제안 방법

FITC-conjugated Annexin V-FITC/PI 용액을 주입하여 실온에서 10분 동안 염색한 다음 FACScan flow cytometer를 이용하여 분석하였다. Annexin V-FITC and PI 여기파장은 525와 575 nm 여기필터를 활용하여 FACScan flow cytometer의 FL1과 FL2 channels에서 분석하였다. 각 실험군당 약 10,000개 세포를 대상으로 분석하였다.
Caspase-3 활성의 측정은 R&D Systems사에서 제공하는 caspase-3 activity assay kit을 이용하여 측정하였다.
Tanshinone IIA에 의해 유도된 초기와 후기 아포토시스 및 괴사 비율을 측정하기 위해서 3T3-L1 전지방세포는 (1✕10⁵ cells/dish) 6 cm dish에 접종하고 tanshinone IIA의 최종농도를 0-10 μM까지 다양하게 처리하여 72시간 배양 후 FITC-conjugated Annexin V-FITC/PI 염색을 하였다. FITC-conjugated Annexin V-FITC/PI 용액을 주입하여 실온에서 10분 동안 염색한 다음 FACScan flow cytometer를 이용하여 분석하였다. Annexin V-FITC and PI 여기파장은 525와 575 nm 여기필터를 활용하여 FACScan flow cytometer의 FL1과 FL2 channels에서 분석하였다.
Lactate dehydrogenase (LDH) 유리능은 통상적으로 이용되는 kit(BioVision, CA, USA)을 활용하여 측정하였다. 3T3-L1 전 지방세포는 MTT 분석에서와 같은 조건으로 tanshinone IIA을 처리하여 배양하였다.
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포에서 지방세포로 분화할 때 지방 함량에 미치는 영향을 알아보기 위해서 high glucose 배지에 0.5 mM IBMX, 1 μM DEX 및 1 μM INS를 첨가하여 배양한 후 Oil Red O 염색과 triglyceride 함량 및 GPDH의 활성을 측정하였다.
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장억제에 미치는 영향을 알아보기 위해서 여러 가지 농도의 tanshinone IIA (0-10μM)을 24-72 h까지 처리하고 MTT 분석과 LDH 유리능을 측정하였다.
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스 유도에 미치는 영향을 알아보기 위해서 tanshinone IIA (5 μM과 10 μM)을 24-72 h까지 처리하고 PI와 Annexin V-FITC로 염색하고 flow cytometer로 분석하여 아포토시스 활성을 측정하였다.
Tanshinone IIA에 의해 유도된 초기와 후기 아포토시스 및 괴사 비율을 측정하기 위해서 3T3-L1 전지방세포는 (1✕105 cells/dish) 6 cm dish에 접종하고 tanshinone IIA의 최종농도를 0-10 μM까지 다양하게 처리하여 72시간 배양 후 FITC-conjugated Annexin V-FITC/PI 염색을 하였다.
Membrane은 각 1차 항체(1:2000)를 주입하고 4℃에서 약 12시간 방치한 후 2차 항체(1:5000)를 주입하고 1시간 동안 방치하였다. 각 단계마다 PBST (PBS/Triton X-100)로 3번씩 세척하였다. 단백질 발현에 대한 신호는 Amersham ECL system (Amersham-Pharmacia Biotech, Arlington Heights, IL)으로 감광하여 측정하였다.
01%이하로 적정하였다. 각 시간에 적합하게 배양된 세포를 MTT 분석에 사용하였다. MTT 용액은 5 mg/ml의 농도로 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS, pH 7.
간단히 설명하면, 3T3-L1 전지방세포는 24, 48, 및 72시간 동안 가각 0-10 μM tanshinone IIA로 자극하였다.
02% EDTA/PBS)을 주입하여 수확한 다음 PBS로 2번 세척하고 4°C에서 30분간 80% 에탄올로 고정하였다. 고정된 세포는 실온에서 15분동안 40 mg/ml PI 용액으로 염색한 후 FACScan flow cytometer (Becton-Dickinson Immunocytometery Systems USA, San Jose, CA)을 이용하여 DNA량을 분석하였다. 약 10,000개의 세포의 정보를 얻어 세포 아포토시스 비율을 CELL Quest software로 분석하였다.
5 mM IBMX, 1 μM DEX 및 1 μM INS를 첨가하여 배양하였다. 그 후 세포배양은 정상배지로 교환하였으며, 48시간 마다 새로운 배지를 교환하면서 세포의 분화를 현미경하에서 관찰하고 수확하여 실험에 사용하였다.
각 단계마다 PBST (PBS/Triton X-100)로 3번씩 세척하였다. 단백질 발현에 대한 신호는 Amersham ECL system (Amersham-Pharmacia Biotech, Arlington Heights, IL)으로 감광하여 측정하였다.
3T3-L1 전 지방세포는 MTT 분석에서와 같은 조건으로 tanshinone IIA을 처리하여 배양하였다. 배양이 종료된 well에서 상층액을 얻어 LDH 유리능을 측정하였다. 측정 방법은 Sigma사가 제시한 방법에 준하여 수행하였다.
세포는 tanshinone IIA (0-10 μM)을 처리하여 72시간 동안 배양한 후 주의 깊게 냉각 PBS로 2번 세척하고 25 mM Tris/1 mM EDTA (pH 7.5)을 주입하여 세포를 용해하고 glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)의 활성을 측정하였다.
1% SDS, 10 mM NaF, 10 μg/mL leupeptin, and 1 mM PMSF]를 주입하여 용해하였다. 세포용해물의 단백질의 정량은 Bio-Rad DC protein assay kit (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 이용하여 측정하였다. 각 실험군의 단백질은 30 μg으로 적정하고 12% polyacrylamide gel [sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)]의 각 well에 주입하여 분리하였다.
고정된 세포는 실온에서 15분동안 40 mg/ml PI 용액으로 염색한 후 FACScan flow cytometer (Becton-Dickinson Immunocytometery Systems USA, San Jose, CA)을 이용하여 DNA량을 분석하였다. 약 10,000개의 세포의 정보를 얻어 세포 아포토시스 비율을 CELL Quest software로 분석하였다.
전지방세포시기의 3T3-L1의 배양은 10% FBS, 0.15% sodium bicarbonate와 1% penicillin-streptomycin이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃에서 5% CO2 유지되는 배양기에서 배양하였으며, 지방세포분화를 유도하기 위해서 전지방세포시기의 배양액에 0.5 mM IBMX, 1 μM DEX 및 1 μM INS를 첨가하여 배양하였다.
한편 우리는 3T3-L1 전지방세포를 IBMX, DEX 및 INS를 처리하고 지방세포로 유도한 후 tanshinone IIA를 처리하고 지방함량을 조사하였다. 그 결과 Fig.

대상 데이터

Annexin V-FITC, anti-capsase-3, anti-PARP, anti-Bax, anti-Bcl, anti-α-actin antibodies 및 anti-rabbit secondary horseradish peroxidase antibodies 등은 Santa Cruz Biotechnology사(USA)로부터 구입하여 사용하였다.
Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), bovine calf serum, and antibiotic mixture (penicillinstreptomycin) 등은 Gibco BRL사(Grand Island, NY)에서 구입하였으며, 기타 시약은 reagent grade급 이상을 Sigma사로부터 구입하여 사용하였다.
MTT dye [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide], propidium iodide, ribonuclease, Oil Red O, 3-isobutyl-1-methylxanthine(IBMX), dexamethasone(DEX), insulin(INS) 등은 Sigma사((St. Louis, MO, USA))로부터 구입하였다. Annexin V-FITC, anti-capsase-3, anti-PARP, anti-Bax, anti-Bcl, anti-α-actin antibodies 및 anti-rabbit secondary horseradish peroxidase antibodies 등은 Santa Cruz Biotechnology사(USA)로부터 구입하여 사용하였다.
Annexin V-FITC and PI 여기파장은 525와 575 nm 여기필터를 활용하여 FACScan flow cytometer의 FL1과 FL2 channels에서 분석하였다. 각 실험군당 약 10,000개 세포를 대상으로 분석하였다.
마우스 배아에서 유래한 3T3-L1 세포주는 American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA)사로무터 구입하여 사용하였다. 전지방세포시기의 3T3-L1의 배양은 10% FBS, 0.

데이터처리

miltiorrhiza) 뿌리로부터 Jang 등⁷⁾의 방법에 따라 분리하였다. Tanshinone IIA의 구조는 1H-NMR,13C-NMR와 MS spectra 자료를 얻고 Park 등¹⁰⁾의 결과와 비교하여 동정하였으며, 순도는 95% 이상이었다(Fig. 1).
모든 실험 값은 평균±표준오차(mean±SD)로 표시했으며, 통계분석은 ANOVA와 Student’s t-test로 처리했으며, 유의성 한계는 p<0.05로 정하였다.

이론/모형

5)을 주입하여 세포를 용해하고 glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)의 활성을 측정하였다. GPDH의 활성은 Wise and Green¹⁴⁾의 방법에 따라 결정하였으며, 효소활성은 단백질 unit/mg로 표현하였다.
MTT 분석은 Mosmann¹¹⁾의 방법에 준하여 수행하였다. 간단히 설명하면, 3T3-L1 전지방세포는 well 당 1✕10⁴개를 96 well plate에 접종하고 24시간 후에 0-10 μM tanshnone IIA가 함유된 배지를 100 μl씩 넣고 24, 48 및 72시간 동안 배양하였다.
Oil Red O 염색은 Ramirez-Zacarias 등¹³⁾의 방법에 따라 만들었다. 3T3 지방세포는 분화 시점으로부터 8일간 배양 후 수확 하였다.
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스 유도 관련 단백질들의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해서 tanshinone IIA (5 μM과 10 μM)을 12시간 또는 24시간 처리하고 단백질의 활성과 발현은 ELISA와 Western blot방법으로 분석하였다.
세포의 아포토시스는 Takada¹²⁾의 propidium iodide (PI) 염색방법에 따라 측정하였다. 간단히 설명하면, 3T3-L1 전지방세포는 24, 48, 및 72시간 동안 가각 0-10 μM tanshinone IIA로 자극하였다.
얻어진 세포 용해물은 caspase-3 activity assay kit을 활용하여 R&D Systems사가 제공하는 방법에 준하여 수행하였으며, microplate readers (Molecular devices, USA)를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.
배양이 종료된 well에서 상층액을 얻어 LDH 유리능을 측정하였다. 측정 방법은 Sigma사가 제시한 방법에 준하여 수행하였다.

성능/효과

Oil Red O로 염색하고 DMSO로 용출하여 지방의 함량을 측정한 결과 Fig. 5A와 같이 tanshinone IIA을 처리했을 경우 5 μM과 10 μM을 처리한 농도에서만 줄어든(p<0.05) 반면, 세포내 triglyceride 함량을 측정한 결과 Fig. 5B와 같이 tanshinone IIA의 농도가 높을수록 그 함량이 현저히 줄어들었다 (p<0.05).
Caspase-3는 PARP를 절단하여 세포사멸을 유도하는 중요한 단백질 효소 중의 하나이다²²⁾. PARP와 절단 PARP의 발현을 조사한 결과 tanshinone IIA의 농도가 증가할수록 PARP의 발현은 억제했으나, 절단 PARP의 발현은 증가하였다. 더욱이 tanshinone IIA는 Bax의 발현을 증가시킨 반면, Bcl-2의 발현을 감소시키는 약리적 효과가 있었다.
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장에 미치는 영향을 MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]와 LDH (lactate dehydrogenase) 분석을 통하여 조사한결과 농도와 시간에 의존적으로 유의하게 감소되었다. 또한 3T3-L1 전지방 세포에 tanshinone IIA를 처리하여 flow cytometer로 분석한 결과 시간과 농도에 의존적으로 아포토시스가 유도되었다.
우리는 상기와 같이 tanshinone II의 항염증 분자기전을 보고한 후 이 약물이 지방세포에 어떠한 영향을 주는지 알아보기 위해서, 우선 3T3-L1 전지방세포의 성장에 미치는 tanshinone IIA의 영향을 MTT와 LDH 유리능을 조사하였다. 그 결과 3T3-L1 전지방세포의 성장은 tanshinone IIA의 농도가 증가할수록 유의하게 억제된다는 사실을 확인할 수 있었다(Fig. 2). 또한 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스 유도에 미치는 영향을 알아보기 위해서 PI 염색을 하여 flow cytometer로 분석한 결과 Fig.
그 결과 Fig. 2A와 같이 3T3-L1세포의 성장은 tanshinone IIA의 농도와 시간에 의존적으로 억제되었으며, 72시간 배양시 IC50은 2.5 μM이었다.
그 결과 Fig. 5A와 같이 Oil Red O 함량은 저농도에서는 큰 변화가 없었으나, 5 μM과 10 μM 처리군에서는 유의하게 그 함량이 감소되었고, triglyceride와 GPDH는 5-10 μ M tanshinone IIA 처리군에서 모두 유의하게 감소되어 농도에 의존적이었다(Fig. 5B와 C).
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스를 유도하는데 관여하는 분자적 기전을 알아보기 위해서 우리는 아포토시스 유도와 관련된 단백질의 활성 및 발현을 조사하였다. 그 결과 caspase-3의 활성은 tanshinone IIA가 처리된 농도에 의존적으로 그 활성이 유의하게 증가되었다(Fig. 4A). 더불어 caspase-3, PARP, Bax 및 Bcl과 같은 아포토시스 유도에 관여하는 단백질 발현을 조사한 결과 Fig.
따라서 tanshinone IIA 처리가 3T3-L1 전지방세포의 초기에 아포토시스를 유도할 수 있는 약리적 효과가 있는지 조사하였다. 그 결과 tanshinone IIA의 농도가 증가될수록 phosphatidylserine과 Annexin V-FITC의 결합이 증가됨을 확인할 수 있었다(Fig. 3B). 이와 같이 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장을 억제하는 방향은 초기의 아포토시스를 유도함으로써 약리효과를 나타낸다는 사실을 알 수 있었다.
더불어 5 μM과 10 μM의 tanshinone IIA를 24시간 동안 처리하고 caspase-3의 발현을 조사한 결과 단백질의 활성과 유사하게 농도가 높을수록 증가했다(Fig. 4B).
4A). 더불어 caspase-3, PARP, Bax 및 Bcl과 같은 아포토시스 유도에 관여하는 단백질 발현을 조사한 결과 Fig. 4B와 같이 tanshinone IIA의 농도가 증가할수록 caspase-3의 발현이 증가함을 할 수 있었다. Caspase-3는 PARP를 절단하여 세포사멸을 유도하는 중요한 단백질 효소 중의 하나이다²²⁾.
05). 더욱이 GPDH 활성의 경우도 tanshinone IIA를 처리했을 경우 triglyceride의 함량과 유사하게 농도가 높을수록 GPDH 의 활성이 현저히 억제되었다. 이러한 결과는 3T3-L1 지방세포의 초기 분화에 있어서 tanshinone IIA가 뚜렷한 억제효과가 있음을 제공해주었다.
5B와 C). 따라서 3T3-L1 지방세포의 분화에 있어서 tanshinone IIA의 약리 및 분자기전의 조사가 남아 있을지라도 본 연구의 결과에서 제시한 tanshinone IIA는 지방세포의 분화를 효과적으로 억제하는 약리 효과가 있음을 확인할 수 있었다. Huang 등(2009)은 3T3-L1 세포를 대상으로 tanshinone IIA을 처리한 결과 peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-γ의 활성을 억제하는 신호전달 경로를 통하여 전지방세포에서 지방세포로 분화하는 것을 억제한다는 보고를 하였다⁹⁾.
따라서 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장을 대조군에 비해 효과적으로 억제시킬 수 있다는 것을 제시해 주었다(p<0.05).
Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장에 미치는 영향을 MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]와 LDH (lactate dehydrogenase) 분석을 통하여 조사한결과 농도와 시간에 의존적으로 유의하게 감소되었다. 또한 3T3-L1 전지방 세포에 tanshinone IIA를 처리하여 flow cytometer로 분석한 결과 시간과 농도에 의존적으로 아포토시스가 유도되었다. tanshinone IIA의 처리는 정상 세포수를 감소시킨 반면, 초기와 후기에 아포토시스를 농도에 의존적으로 증가시켰다.
또한 Annexin V-FITC로 염색하여 아포토시스 세포를 분석한 결과 PI 분석결과와 유사하게 tanshinone IIA의 농도와 시간에 의존적으로 아포토시스가 유도되었다(Fig. 3B) 이러한 결과는 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방 세포의 아포토시스를 효과적으로 유도하는 것을 제시해 주었다(p<0.05).
2). 또한 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스 유도에 미치는 영향을 알아보기 위해서 PI 염색을 하여 flow cytometer로 분석한 결과 Fig. 3A와 같이 농도에 의존적으로 아포토시스를 유도하는 사실을 확인할 수 있었다. Annexin V-FITC는 phosphatidylserine과 결합하는데, 이러한 현상은 아포토시스 초기에 발견된다고 알려졌다²¹⁾.
5 μM이었다. 또한 배지내로 유리되는 LDH의 활성을 조사한 결과 Fig. 2B와 같이 tanshinone IIA의 세포독성은 시간과 농도에 의존적으로 증가되었다. 따라서 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장을 대조군에 비해 효과적으로 억제시킬 수 있다는 것을 제시해 주었다(p<0.
본 연구의 결과를 요약하면, tanshinone IIA는 3T3-L1 전지방세포의 증식을 억제하는 효과가 있었고, 이러한 억제는 caspase-3의 활성 및 관련 분자를 억제 또는 활성화 시킴으로써 아포토시스를 유도하는 약리적 효과가 있었다. 또한 tanshinone IIA는 3T3-L1 지방세포의 분화시 지방의 함량을 억제하는 효과가 있었다.
4B). 이러한 결과는 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스 유도에 caspase-3가 관여된다는 사실을 제공해 주었다. 또한 tanshinone IIA가 유도하는 아포토시스에 있어서 또 다른 관련 분자들의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해서 아포토시스 유도 중요분자인 PARP의 발현을 조사하였다.
그러나 Bcl-2의 경우는 대조군에 비해 tanshinone IIA(5 μM과 10μM)를 처리한 세포에서 그 발현이 억제되었다. 이러한 결과는 tanshinone IIA가 아포토시스 관련 분자를 발현 또는 억제 시킴으로서 3T3-L1 전지방세포의 아포토시스를 유도한다는 것을 제시해주었다.
3B). 이와 같이 tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장을 억제하는 방향은 초기의 아포토시스를 유도함으로써 약리효과를 나타낸다는 사실을 알 수 있었다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	단삼이란 무엇인가?	단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)은 전통적으로 부종(edema), 관절염(arthritis) 및 간염(hepatitis) 등 인체질환에 사용된 약용식물이다5). Tanshinone IIA는 단삼의 뿌리에서 추출된 주요 diterpene계 화합물이다6).
	3T3-L1 전지방세포와 지방세포에서 아포토시스의 유도와 지방형성을 억제에 대한 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 유래 tanshinone IIA의 효과를 조사 분석한 결과는 어떠한가?	Tanshinone IIA가 3T3-L1 전지방세포의 성장에 미치는 영향을 MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]와 LDH (lactate dehydrogenase) 분석을 통하여 조사한결과 농도와 시간에 의존적으로 유의하게 감소되었다. 또한 3T3-L1 전지방 세포에 tanshinone IIA를 처리하여 flow cytometer로 분석한 결과 시간과 농도에 의존적으로 아포토시스가 유도되었다. tanshinone IIA의 처리는 정상 세포수를 감소시킨 반면, 초기와 후기에 아포토시스를 농도에 의존적으로 증가시켰다. Tanshinone IIA는 3T3-L1 전지방세포에서 caspase-3와 Bax의 활성을 증가시키므로써 PARP의 절단을 증가시켰고, Bcl-2의 억제조절에 의한 신호전달 체계로 아포토시스를 유도하였다. 더욱이 tanshinone IIA는 세포내 triglyceride의 함량과 GPDH (glycerol-3-phosphate dehydrogenase)의 활성을 감소시키는 약리 효과가 있었다.
	비만은 어떠한 요인인가?	21세기 현대 산업사회에서 비만(obesity)은 관상동맥심질환(oronary heart disease), 고혈압 및 제2형 당뇨병(type 2 diabetes mellitus) 등 심각한 대사성 질환을 (metabolic diseases) 야기하는 주요 요인으로 지목 받고 있다1). 최근 연구보고에 의하면, 대사성 질환을 야기하는 주요 요인인 비만을 줄이기 위한 전략으로 음식물의 섭취 감소, 에너지소비 증가, 전지방세포(preadipocytes)의 분화와 증식억제, 지방형성 과정(adipogenesis)의 억제 및 지방분해의 증가 등에 대한 기전(mechanism)을 제안하고 있다2).

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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