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문제 정의
- 본 연구는 벤조피렌(benzo(α)pyrene)으로 간독성이 유발된 흰쥐에 대해 번데기동충하초 균사체 배양액의 간독성 회복 효과를 검정하기 위하여, 혈중의 aspartate aminotransferase (AST) 및 alanine aminotransferase (ALT) 효소활성과 간조직의 lipid peroxide (LPO), glutathione (GSH)의 농도 및 glutathione S-transferase (GST) 효소활성을 측정하여 간독성 회복을 검정하였다.
제안 방법
- 항생제 무첨가 사료를 식이하여, 12시간 간격의 light-dark cycle을 유지되는 항온실(23±1℃, 습도 50~60%)에서 수행되었다. 5마리의 흰쥐를 1개의 군으로 대조군, 동충하초 균사체 배양액 투여군, 벤조피렌 투여 간독성 유발군, 번데기동충하초 균사체 배양액-벤조피렌 동시 투여군으로 나누어 수행하였다. 번데기동충하초 균사체 배양액은 흰쥐 kg 체중 당 50 mg의 비율로 5주간 경구투여하였다.
- 간조직의 LPO, GSH의 함량과 GST 효소활성을 측정하였다. 4배의 인산완충용액(0.
- 5마리의 흰쥐를 1개의 군으로 대조군, 동충하초 균사체 배양액 투여군, 벤조피렌 투여 간독성 유발군, 번데기동충하초 균사체 배양액-벤조피렌 동시 투여군으로 나누어 수행하였다. 번데기동충하초 균사체 배양액은 흰쥐 kg 체중 당 50 mg의 비율로 5주간 경구투여하였다. 벤조피렌의 간독성 유발은 채혈 24시간 전에 흰쥐 kg 체중당 0.
- 번데기동충하초 균사체 배양액은 흰쥐 kg 체중 당 50 mg의 비율로 5주간 경구투여하였다. 벤조피렌의 간독성 유발은 채혈 24시간 전에 흰쥐 kg 체중당 0.3 mg의 비율로 복강주사하였다.
- AST 및 ALT는 간세포에 존재하는 효소로, 각 효소의 측정치는 간세포의 염증 정도를 판단하는 기준이 된다. 본 실험은 벤조피렌에 의하여 간손상이 유발된 흰쥐의 번데기동충하초 배양액에 의한 간독성 회복의 영향을 AST 및 ALT 효소활성으로 비교하였다.
- 항생제 무첨가 사료를 식이하여, 12시간 간격의 light-dark cycle을 유지되는 항온실(23±1℃, 습도 50~60%)에서 수행되었다.
- 혈중 AST와 ALT 효소활성을 측정하기 위하여, 에테르로 질식된 흰쥐의 좌심방으로부터 혈액을 채혈하였다. 채취한 혈액은 실온에서 60분간 방치한 후, 4℃, 15,000 rpm으로 15분간 원심분리(Supra 25K, USA)한 상등액을 사용하였다.
대상 데이터
- 5-5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid, 1-chloro-2,4-dinitrobenzene, EDTA 및 벤조피렌은 Sigma Co. (USA)로부터 구입하여 사용하였다.
- AST 및 ALT kit는 영동제약(주)로부터, GST assay kit 및 LPO assay kit는 Cayman Chem (USA)로부터 구입하였다. 5-5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid, 1-chloro-2,4-dinitrobenzene, EDTA 및 벤조피렌은 Sigma Co.
- HaM/ICR 계열의 7주령 웅성 흰쥐를 사용하였다. 항생제 무첨가 사료를 식이하여, 12시간 간격의 light-dark cycle을 유지되는 항온실(23±1℃, 습도 50~60%)에서 수행되었다.
- 번데기동충하초(C. militaris KCTC 6064)는 유전자은행으로부터 분양받아 사용하였다. 균사체 배양은 24℃에서 GYM 액체 배양배지(glucose 1.
데이터처리
- 실험 결과는 평균값±표준편차로 표시하였으며, 유의성은 SPSS program (SPSS Inc., USA)을 사용하여 분석하였다.
이론/모형
- 4)에서 간조직을 homogenizer로 파쇄(4℃, 2,500 rpm×10분)한 다음, 14,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 상등액을 얻어 사용하였다. GST 활성은 Habig 등(3)의 방법을 사용하였다. 실험 결과는 평균값±표준편차로 표시하였으며, 유의성은 SPSS program (SPSS Inc.
- 채취한 혈액은 실온에서 60분간 방치한 후, 4℃, 15,000 rpm으로 15분간 원심분리(Supra 25K, USA)한 상등액을 사용하였다. 실험은 영동제약(주)의 분석방법에 따라 AST 및 ALT kit를 이용하여 측정하였다. 효소활성은 혈청 ml당 Karmen unit로 표시하였다.
성능/효과
- CFD-벤조피렌 병용 투여군의 52.3 µmol/min/ml의 결과는 벤조피렌에 의해 유발된 간독성이 CFD에 의해 회복됨을 보여 주었다.
- 9 µmol/g으로 간독성을 유발하지 않음을 나타내었다. CFD-벤조피렌 처리군의 측정치는 벤조피렌 처리군과 비교시 CFD에 의해 어느 정도 간독성이 회복되는 효과가 있음을 보여주었다.
- LPO, GSH의 농도와 AST, ALT 및 GST 효소활성의 실험결과, 번데기동충하초 배양액은 간독성을 유발하지 않음은 물론, 벤조피렌에 의해 유발된 흰쥐의 간독성을 회복시킴을 나타내었다.
- 4 Karment unit)과 비교시 높은 효소활성으로 벤조피렌에 의해 간독성이 유발됨을 보여주었다(Table 1). 그러나, CFD 투여군에서의 AST 및 ALT는 각각 0 및 17.2 Karment unit로 대조군과 동일하거나 낮은 수치를 보여주어, CFD에 의한 간 독성은 유발되지 않음을 보여주었다. 또한 CFD와 벤조피렌 동시 투여시, 벤조피렌 단독 투여군과 비교시 낮아짐을 보여 간독성이 회복됨을 나타내었다.
- 2 Karment unit로 대조군과 동일하거나 낮은 수치를 보여주어, CFD에 의한 간 독성은 유발되지 않음을 보여주었다. 또한 CFD와 벤조피렌 동시 투여시, 벤조피렌 단독 투여군과 비교시 낮아짐을 보여 간독성이 회복됨을 나타내었다.
- 벤조피렌 처리군의 LPO 및 GSH 측정치는 310.2 및 184.7 µmol/g으로 정상 대조군의 측정치 29.7 및 380.1 µmol/g과 비교시 LPO 값은 증가하였고 GSH 값은 낮아져 벤조피렌이 간독성을 유발함을 알 수 있었다(Table 2).
- 벤조피렌을 단독 투여한 흰쥐의 AST (177.4 Karmen unit) 및 ALT (220.4 Karmen unit) 측정치는 대조군의 AST (0 Karmen unit) 및 ALT (38.4 Karment unit)과 비교시 높은 효소활성으로 벤조피렌에 의해 간독성이 유발됨을 보여주었다(Table 1). 그러나, CFD 투여군에서의 AST 및 ALT는 각각 0 및 17.
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