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문제 정의
- 본 연구는 상기와 같은 초음파 공정을 통한 홍경천 분획물들의 면역 조절 활성 탐색을 통해 특정 용매 분획물의 유용 생리활성을 검증하여 이를 면역조절 기능성 식품 소재화로서의 가치를 부여하고자 한다.
제안 방법
- 4~5×104 cells/㎖의 농도로 조절한 NK-92MI 세포를 24 well plate에 900 ㎕ 씩 분주하여 24시간 배양 후 상기와 같은 방법으로 얻은 B 세포와 T 세포의 배양 상층액을 100 ㎕ 씩 첨가하여 배양 48시간 후부터 6일 동안 각 well의 생세포 수를 측정하여 그 활성을 확인하였다 (Yueran et al., 2003; Cesilia 2002).
- NK 세포의 활성 측정을 위해 시료를 첨가한 면역 B세포와 T세포의 배양액을 각각 NK 세포에 첨가하여 나타나는 생육도의 변화를 측정하여 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 활성을 평가하였다. 6일 동안 NK 세포의 생육도를 관찰한 결과, 모든 분획물에서 대조군 보다 높은 생육 활성을 나타내었으며 대체로 chloroform 분획물과 water 분획물에서 활성이 높게 나타났다.
- Nitrite의 표준물질로 sodium nitirite를 사용하였으며 농도는 32 µM부터 0.25 µM까지 RPMI 1640 배지를 이용 하여 단계 희석하여 얻는 표준곡선과 비교하여 계산하였다.
- SRB assay는 세포 단백질의 염색을 통하여 세포의 증식이나 독성을 측정하는 방법으로 실험에 사용되는 세포의 농도를 4~5 × 104 cells/㎖으로 조절한 다음 96 well plate의 각 well 에 100 ㎕ 씩 분주하여 24시간 동안 배양 (37℃, 5% CO2) 한 후, 각각의 시료를 최종농도가 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 0.1 ㎎/㎖되게 조절하여 100 ㎕ 씩 첨가하였다.
- 원심분리기를 이용하여 배양액을 분리시킨 후 배양 상층액만을 취하여 Chemicon (USA)사의 IL-6, TNF-α kit를 이용하여 분비된 Cytokine의 양을 측정하였다. microplate reader (Molecular Devices, USA)를 이용하여 450 ㎚에서 측정하였으며 얻어진 O.D.값을 표준물질을 이용하여 작성한 표준곡선과 비교하여 Cytokine의 양을 측정하였다 (Han et al., 1998; Ha et al,, 2008).
- 세포 독성은 인간 정상 신장 세포주인 HEK293을 이용하여 측정하였고 면역세포 생육 및 Cytokine 측정 실험을 위해 T cell (Jurkat, ATTC, USA)와 B cell (Raji, ATTC, USA)를 사용하였으며, NK cell (NK-92MI cell, ATTC, USA)을 이용하여 면역 증진 효과를 측정하였다. 대식세포의 nitric oxide 생성능은 마우스 유래 macrophage (J774.1, ATTC, USA)를 사용 하여 측정하였고 분화도 측정을 위해 인간 전 골수성 세포인 HL-60 (human promyelocytic leukemia)세포를 사용하였다. 인간 전과립 세포와 대식세포는 RPMI 1640 배지와 10% heating inactivated FBS를 첨가시켜 배양하였고, NK-cell은 αMEM 배지와 2 mM L-glutamine, 0.
- 따라서 시료와 LPS를 같이 투여 하여 대식세포로부터 NO−의 생성능을 확인하였다.
- 마우스 유래 J774.1 대식세포를 이용하여 홍경천 분획물의 첨가를 통하여 활성화 된 대식세포 배양액에 축적되어 있는 nitric oxide의 양을 microplate assay를 통해 정량하여 측정하였다. 대상 세포를 4~5×104 cells/㎖의 농도로 조절하여 24 well plate에 분주하여 48시간 동안 배양한 후 실험에 사용하였다.
- 면역 활성에 중요한 역할을 담당하는 면역세포 분비물인 Cytokine의 측정을 통해 면역세포 생육 증진에 따른 면역 활성 증진도를 확인하였다. 세포의 농도를 4~5 × 104 cells/㎖의 농도로 조절하여 24 well plate에 900 ㎕ 씩 분주한 후 24시간 동안 배양 (37℃, 5% CO2)하였다.
- 면역반응에 중요한 역할을 하는 B세포와 T세포를 이용하여 MTT assay를 통해 세포 생존률을 측정하여 면역세포의 생육 증진 효과와 시료 첨가를 통한 B세포와 T세포의 cytokine 분비량 측정결과를 Table 1에 나타내었다. 그 결과 모든 추출물에서 생육이 농도 의존적으로 증가하였으며 특히 chloroform 분획물이 최고농도 1.
- 면역세포 생육 증진효과 실험은 24 well plate에 세포를 2.0 × 104 cells/㎖의 농도로 조절 한 후 시료를 투여하여 7일 동안 배양시키면서 1일 단위로 각 well 의 세포수를 세포계수기 (Chemometec, Germany)를 이용하여 측정하였다 (Kwon et al., 2008).
- 세포의 농도를 4~5 × 104 cells/㎖의 농도로 조절하여 24 well plate에 900 ㎕ 씩 분주한 후 24시간 동안 배양 (37℃, 5% CO2)하였다. 배양 후 시료의 최종농도가 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 ㎎/㎖이 되도록 조절하여 100 ㎕를 첨가하여 다시 24시간 동안 배양 (37℃, 5% CO2) 하였다. 원심분리기를 이용하여 배양액을 분리시킨 후 배양 상층액만을 취하여 Chemicon (USA)사의 IL-6, TNF-α kit를 이용하여 분비된 Cytokine의 양을 측정하였다.
- )를 이용하여 40 ㎑에서 30분 동안 초음파 추출을 병행하였다. 상기의 추출공정에 의해 얻어진 홍경천 추출물로부터 분획물을 얻기 위하여 극성의 차이를 이용해 서로 다른 극성, 비극성 용매 (water, butanol, ethyl acetate, chloroform)를 첨가하여 단계적으로 분획하였다. 홍경천 초음파 추출물을 100 g을 증류수에 완전히 용해시킨 후 분획여두에 넣고 Chloroform 300 ㎖을 첨가하여 Water층과 Chlroform층을 분리하였고 이와 같은 공정을 3번 반복하였다.
- 선천면역반응에 중요한 역할을 하는 자연살해세포 (Natural Killer cell, NK cell)의 활성을 측정하여 시료 첨가 시 나타나는 면역증진 효과를 평가하였다. NK cell은 ATCC로부터 NK-92MI 세포를 분양받아 사용하였으며, α-MEM배지에 2 mM L-glutamine, 0.
- 세포 독성은 인간 정상 신장 세포주인 HEK293을 이용하여 측정하였고 면역세포 생육 및 Cytokine 측정 실험을 위해 T cell (Jurkat, ATTC, USA)와 B cell (Raji, ATTC, USA)를 사용하였으며, NK cell (NK-92MI cell, ATTC, USA)을 이용하여 면역 증진 효과를 측정하였다. 대식세포의 nitric oxide 생성능은 마우스 유래 macrophage (J774.
- 대상 세포를 4~5×104 cells/㎖의 농도로 조절하여 24 well plate에 분주하여 48시간 동안 배양한 후 실험에 사용하였다. 시료를 처리하여 48시간 동안 배양한 후 상등액 50 ㎕를 취하여 동일부피의 Griess 시약 (1% sulfanilamide/0.1% N-(1-naphthyl)-ethylenediamine digydochloride/2.5% H3PO4)을 첨가하여 실온에서 10분간 반응시킨 후 microplate reader (Molecular Devices, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. Nitrite의 표준물질로 sodium nitirite를 사용하였으며 농도는 32 µM부터 0.
- 동일한 과정을 통해 Ethyl acetate, Butanol을 순차적으로 가하여 각 분획물을 얻었고 최종 남은 용액은 Water 분획물로 사용하였다. 얻어진 각각의 분획물을 감압여과 장치로 여과하여 농축한 후 동결건조하여 용매를 완전히 제거한 뒤 본 실험에 사용하였다.
- 원심분리기를 이용하여 배양액을 분리시킨 후 배양 상층액만을 취하여 Chemicon (USA)사의 IL-6, TNF-α kit를 이용하여 분비된 Cytokine의 양을 측정하였다.
- 홍경천 뿌리를 깨끗이 세척하고 상온에서 건조 후 분쇄한 후 수직 환류 냉각기가 부착된 추출 플라스크에 시료 중량 10배의 증류수를 용매로 사용하여 60℃에서 12시간 동안 추출을 2회 반복하였다. 이를 다시 초음파 발생기 (Asia industry, Kor.)를 이용하여 40 ㎑에서 30분 동안 초음파 추출을 병행하였다. 상기의 추출공정에 의해 얻어진 홍경천 추출물로부터 분획물을 얻기 위하여 극성의 차이를 이용해 서로 다른 극성, 비극성 용매 (water, butanol, ethyl acetate, chloroform)를 첨가하여 단계적으로 분획하였다.
- , 2006b). 이에 본 연구는 초음파 병행 추출을 이용함과 동시에 극성, 비극성 용매 (butanol, water, ethyl acetate, chloroform)를 이용하여 얻어진 분획물을 생리활성 검증 실험에 사용하였다. 상기와 같은 용매의 성분 친화력에 따른 분배를 통해 성분을 분리하는 용매 분획을 실시할 경우 추출물에 존재하는 다량의 화합물을 물리, 화학적으로 성질이 유사한 화합물 군끼리 분리할 수 있어 용매 분획물 각각의 특이적인 유용 생리활성 평가에 기여하며, 활성 성분의 분리와 농축에 의한 독성저감 및 신물질과 기저물질 농도의 증가로 인한 효율적인 활성 증진으로 인해 기능성 소재로서 활용도를 높이고 식품 가공에 단계적인 분획 추출 공정을 직접 적용할 경우 효율적, 경제적 산업화를 가능하게 한다.
- 인간 유래 T 세포주인 Jurkat과 B 세포주인 Raji를 이용 하여 홍경천 분획물 첨가를 통한 면역 기증 증강 효과를 확인하였다. 인간 유래 면역세포는 10% FBS를 함유하는 RPMI1640 배지를 이용하여 5% CO2, 37℃에서 배양하였으며, MTT assay를 이용하여 면역세포 증식율을 측정하는 방식으로 그 효과를 평가하였다.
- 인간 유래 T 세포주인 Jurkat과 B 세포주인 Raji를 이용 하여 홍경천 분획물 첨가를 통한 면역 기증 증강 효과를 확인하였다. 인간 유래 면역세포는 10% FBS를 함유하는 RPMI1640 배지를 이용하여 5% CO2, 37℃에서 배양하였으며, MTT assay를 이용하여 면역세포 증식율을 측정하는 방식으로 그 효과를 평가하였다. Yellow tetrazolium salt MTT는 살아 있는 세포에서 물에 녹지 않는 formazan crystal로 환원되는데 이 크리스탈을 DMSO로 녹여서 생성된 크리스탈의 양을 분광학적인 방법 (Spectroscopic method)으로 측정하여 세포의 생존율을 확인하는 것이다.
- 인간 전과립 세포와 대식세포는 RPMI 1640 배지와 10% heating inactivated FBS를 첨가시켜 배양하였고, NK-cell은 αMEM 배지와 2 mM L-glutamine, 0.2 mM myoinositol, 20 mM folic acid, 10−4M 2-mercaptoethanol, 12.5% fetal bovine serum과 12.5% horse serum을 첨가시켜 배양하였다.
- 인간 정상 신장 세포 HEK293을 이용하여 SRB (sulforhodamine B) assay (Doll and Peto, 1983)를 통해 홍경천 분획물의 정상세포에 대한 독성을 측정하였다. SRB assay는 세포 단백질의 염색을 통하여 세포의 증식이나 독성을 측정하는 방법으로 실험에 사용되는 세포의 농도를 4~5 × 104 cells/㎖으로 조절한 다음 96 well plate의 각 well 에 100 ㎕ 씩 분주하여 24시간 동안 배양 (37℃, 5% CO2) 한 후, 각각의 시료를 최종농도가 0.
- )은 2004년 중국연변에서 홍경천 뿌리를 수입하여 사용하였다. 홍경천 뿌리를 깨끗이 세척하고 상온에서 건조 후 분쇄한 후 수직 환류 냉각기가 부착된 추출 플라스크에 시료 중량 10배의 증류수를 용매로 사용하여 60℃에서 12시간 동안 추출을 2회 반복하였다. 이를 다시 초음파 발생기 (Asia industry, Kor.
- 상기의 추출공정에 의해 얻어진 홍경천 추출물로부터 분획물을 얻기 위하여 극성의 차이를 이용해 서로 다른 극성, 비극성 용매 (water, butanol, ethyl acetate, chloroform)를 첨가하여 단계적으로 분획하였다. 홍경천 초음파 추출물을 100 g을 증류수에 완전히 용해시킨 후 분획여두에 넣고 Chloroform 300 ㎖을 첨가하여 Water층과 Chlroform층을 분리하였고 이와 같은 공정을 3번 반복하였다. 동일한 과정을 통해 Ethyl acetate, Butanol을 순차적으로 가하여 각 분획물을 얻었고 최종 남은 용액은 Water 분획물로 사용하였다.
대상 데이터
- Cytokine 측정을 위한 IL-6와 TNF-α KIT는 Chemicon (USA)사의 것을 구입하여 실험에 사용하였다.
- NK cell은 ATCC로부터 NK-92MI 세포를 분양받아 사용하였으며, α-MEM배지에 2 mM L-glutamine, 0.2 mM myoinisitol, 20 mM folic acid, 10−4M 2-mercaptoethanol, 12.5% FBS와 12.5% horse serum을 첨가하여 배양 (37℃, 5% CO2)하였다.
- NO−생성능의 양성대조구 물질로는 LPS (Lipopolysaccharide)를 사용하였다 (Ding et al., 1998).
- 본 실험에서 사용된 세포는 human promyelocytes (HL-60)인 전골수세포로서macrophage, granulocyte, monocyte나 eosinophil 등으로 분화되는 등 분화 유도제에 따라 다른 세포 분화가 유도되는 기작을 가지고 있다 (Edmund and Wolf, 1985). 세포 분화는 수정란으로부터 유래된 미분화 세포가 특정 형질을 갖는 세포들로 변화되어 가는 과정이며, 이러한 과정은 여러 신호 전달 체계와 유전자의 형질 발현의 조절에 기인한다.
- 본 연구에 사용된 홍경천 (Rhodiola sachalinensis A. Bor.)은 2004년 중국연변에서 홍경천 뿌리를 수입하여 사용하였다. 홍경천 뿌리를 깨끗이 세척하고 상온에서 건조 후 분쇄한 후 수직 환류 냉각기가 부착된 추출 플라스크에 시료 중량 10배의 증류수를 용매로 사용하여 60℃에서 12시간 동안 추출을 2회 반복하였다.
- 본 연구의 세포배양 시 사용되는 RPMI 1640, Alpha minimum essential medium (α-MEM) 배지와 Fetal bovine serum, horse serum은 GIBCO (USA)로부터 구입하였으며, Hepes buffer, Gentamycin sulfate, Trypsin-EDTA는 SIGMA (USA)에서 구입하여 사용하였다.
- 5% horse serum을 첨가하여 배양 (37℃, 5% CO2)하였다. 인간 B 세포와 T 세포를 T-25 Flask에 각각 배양하여 시료를 투여한 후 증식정도를 관찰하면서 2~3번 계대 배양하였다. 배양 후 원심분리기를 이용하여 배양액을 분리하여 상층액을 얻었다.
- 인간 전골수성 세포인 HL-60 (human promyelocytic leukemia) 세포를 4×105 cells/㎖의 농도로 조절하여 24 well plate에 900 ㎕ 씩 분주하여 24시간 배양한다.
성능/효과
- NK 세포의 활성 측정을 위해 시료를 첨가한 면역 B세포와 T세포의 배양액을 각각 NK 세포에 첨가하여 나타나는 생육도의 변화를 측정하여 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 활성을 평가하였다. 6일 동안 NK 세포의 생육도를 관찰한 결과, 모든 분획물에서 대조군 보다 높은 생육 활성을 나타내었으며 대체로 chloroform 분획물과 water 분획물에서 활성이 높게 나타났다. 특히 활성이 최대 증가한 6일째 B세포와 T세포 배양액을 첨가한 NK 세포에서 chloroform 분획물이 각각 14.
- B세포와 T세포의 생육을 배양 날짜별로 살펴 본 결과 분획물을 첨가한 모든 실험군에서 배양 6일째까지 생육이 유의적으로 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 특히 B 세포와 T세포에서 모두 chloroform 분획물 첨가를 통해 최고 생육도를 나타낸 6일째 각각 13.2 × 104 cells/㎖와 12.6 × 104 cells/㎖로 가장 높은 농도를 나타내었다.
- 각 시료에 대한 IL-6 분비량을 살펴보면, chloroform 분획물이 B세포와 T세포에서 각각 91 × 10−4 pg/㎖, 95 × 10−4 pg/㎖로 가장 많은 분비량을 나타내었다.
- 결과를 통해 대식세포의 NO− 생성은 LPS 첨가를 통해 증가됨을 확인할 수 있었으며, 홍경천 분획물 시료만을 투여하였을 경우 LPS보다 적지만 일정량 이상의 NO−가 생성되었다.
- 하지만 홍경천 분획물 시료와 LPS를 동시에 처리한 결과 NO− 생성량이 증가한 것은 홍경천 분획물 첨가를 통하여 LPS 등 세균 내 독소와 함께 상승작용을 이루어 NO− 생성능을 증진시킴으로써 면역체계에 활성 증진 효과를 나타낸 것으로 볼 수 있다. 결과를 통해 홍경천의 모든 분획물이 이러한 면역 증진 효과를 나타내었음을 확인할 수 있다. 특히 chloroform 분획물 시료 첨가를 통해 NO− 생성량이 11.
- 그 결과 면역세포 생육 증진 측정 실험과 마찬가지로 농도에 따라 cytokine 분비량이 유의적으로 증가하였으며 최고농도 1.0 ㎎/㎖에서 IL-6와 TNF-α 모두 가장 높은 수치를 나타내었다.
- 면역반응에 중요한 역할을 하는 B세포와 T세포를 이용하여 MTT assay를 통해 세포 생존률을 측정하여 면역세포의 생육 증진 효과와 시료 첨가를 통한 B세포와 T세포의 cytokine 분비량 측정결과를 Table 1에 나타내었다. 그 결과 모든 추출물에서 생육이 농도 의존적으로 증가하였으며 특히 chloroform 분획물이 최고농도 1.0 ㎎/㎖ 일 때 B세포와 T세포에서 각각 135.6%와 137.6%의 생존율을 보이며 가장 높은 생육활성을 나타내었다.
- 6에 나타내었다. 모든 분획물 시료 첨가를 통해 배양시간에 따라 HL-60 세포의 분화도가 증가하며 4일째 최대치를 나타내었고 5일째부터 감소하는 경향을 나타내었다. 홍경천 chloroform 분획물이 최대 분화도를 나타낸 4일째 control에 비해 약 1.
- 4%의 가장 높은 독성을 나타내었다. 반면 분획물 중 Ethyl acetate 분획물이 1.0 ㎎/㎖에서 14.58%의 가장 높은 세포독성을 나타내었으며 이는 조추출물에서 나타난 독성과 비교하였을 때 세포독성이 8.82% 감소된 수치이다. 특히 butanol 분획 물과 chloroform 분획물이 13.
- 2에서 보는 바와 같다. 분획을 실시하지 않은 일반적인 열수 추출을 통한 홍경천 조추출물은 0.6 ㎎/㎖ 이상의 농도에서 세포독성의 급격한 증가를 나타내며 시료의 최고농도 1.0 ㎎/㎖에서 23.4%의 가장 높은 독성을 나타내었다. 반면 분획물 중 Ethyl acetate 분획물이 1.
- 이러한 결과로 보아 홍경천 조추출물이 면역세포의 생육을 촉진시키기는 하나 면역물질 분비에 있어 효율적인 결과를 나타내지 못하였으며 이는 홍경천 조추출물이 가지고 있는 활성 성분이 면역세포에 효과적으로 자극을 줄 수 있으나 상기 세포독성 실험에서 나타난 비교적 높은 세포독성이 면역세포의 기능 및 활성을 저감시키거나, 빠른 사멸을 유도하기 때문이라 사료되며, 결과적으로 분획을 통한 홍경천의 독성저감이 홍경천의 면역기능 증진에 있어 효과적인 기여를 하였다고 생각된다. 상기에서 서술한 바와 같이 농도와 배양일에 따른 세포의 생육 및 cytokine 분비량 측정 결과를 살펴보았을 때 chloroform 홍경천 분획물이 면역 활성과 관련하여 가장 좋은 활성을 나타내었으며 그 결과 홍경천의 chloroform 분획물이 면역 활성과 관련하여 기능성 소재로서의 활용 가능성이 있음을 확인할 수 있었다.
- 각 분획물의 생육 증진도와 cytokine 분비량을 홍경천 조추출물과 비교하였을 때 조추출물의 경우 세포의 생육도가 분획물에 비해 높은 반면 그에 따른 cytokine 분비량이 낮은 결과를 나타내었다. 이러한 결과로 보아 홍경천 조추출물이 면역세포의 생육을 촉진시키기는 하나 면역물질 분비에 있어 효율적인 결과를 나타내지 못하였으며 이는 홍경천 조추출물이 가지고 있는 활성 성분이 면역세포에 효과적으로 자극을 줄 수 있으나 상기 세포독성 실험에서 나타난 비교적 높은 세포독성이 면역세포의 기능 및 활성을 저감시키거나, 빠른 사멸을 유도하기 때문이라 사료되며, 결과적으로 분획을 통한 홍경천의 독성저감이 홍경천의 면역기능 증진에 있어 효과적인 기여를 하였다고 생각된다. 상기에서 서술한 바와 같이 농도와 배양일에 따른 세포의 생육 및 cytokine 분비량 측정 결과를 살펴보았을 때 chloroform 홍경천 분획물이 면역 활성과 관련하여 가장 좋은 활성을 나타내었으며 그 결과 홍경천의 chloroform 분획물이 면역 활성과 관련하여 기능성 소재로서의 활용 가능성이 있음을 확인할 수 있었다.
- 67% 낮아진 세포독성 수치임을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과는 분획을 통한 홍경천 독성 분산으로 인한 결과라 사료되며, 기존의 연구 (Cui et al., 2003)에서 에탄올 조추출물과 에탄올 조추출물의 분획물 중 가장 낮은 독성을 나타낸 Haxane 분획층이 1.0 ㎎/㎕에서 각각 약 33.6%, 26.4%의 세포독성을 나타낸 것과 비교하였을 때 본 연구 결과에서 열수조추출물 및 그 분획물이 전반적으로 매우 낮은 세포독성을 가지고 있음을 확인할 수 있다. 특히 특정 용매에서의 낮은 독성이 확인됨에 따라 본 연구에서 제시한 분획 공정을 통한 홍경천 분획물의 활성 성분이 기능성 소재로서의 높은 활용 가능성을 갖고 있다고 사료된다.
- 82% 감소된 수치이다. 특히 butanol 분획 물과 chloroform 분획물이 13.33%와 13.73%로 가장 낮은 독성을 나타내었으며 이는 조추출물에 비해 각각 10.07%, 9.67% 낮아진 세포독성 수치임을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과는 분획을 통한 홍경천 독성 분산으로 인한 결과라 사료되며, 기존의 연구 (Cui et al.
- 특히 chloroform 분획물 시료 첨가를 통해 NO− 생성량이 11.2 µM로 가장 높은 값을 보였다.
- 특히 활성이 최대 증가한 6일째 B세포와 T세포 배양액을 첨가한 NK 세포에서 chloroform 분획물이 각각 14.05 × 104 cells/㎖, 13.6 × 104 cells/㎖의 생육을 나타내었으며 이는 대조군보다 29% 이상의 증가한 세포 활성도로 가장 높은 생육 증진을 나타내었다.
- 모든 분획물 시료 첨가를 통해 배양시간에 따라 HL-60 세포의 분화도가 증가하며 4일째 최대치를 나타내었고 5일째부터 감소하는 경향을 나타내었다. 홍경천 chloroform 분획물이 최대 분화도를 나타낸 4일째 control에 비해 약 1.32배 높은 세포 분화 활성도를 나타내었다. 이는 홍경천 chloroform 분획물에 의한 세포 분화 유도 물질의 증가로 세포 분화 활성도를 초래하였다고 볼 수 있으며, 면역체계에 점진적 작용을 할 수 있을 것으로 사료된다.
후속연구
- 이러한 세포분화로 인하여 세포와 세포간의 신호전달체계에 영향을 미쳐 세포와 구조의 기능을 결정짓게 되는 것이다. 이러한 분화 촉진으로 인하여 여러가지 세포로의 분화를 촉진하게 될 것으로 사료되어지며 그 중 면역세포에도 그 효과가 있을 것으로 생각되어지는 바이다. 5일 동안 세포 분화도를 측정한 결과를 Fig.
- 이는 홍경천 chloroform 분획물에 의한 세포 분화 유도 물질의 증가로 세포 분화 활성도를 초래하였다고 볼 수 있으며, 면역체계에 점진적 작용을 할 수 있을 것으로 사료된다. 이상의 결과를 통해 홍경천의 chloroform 분획물이 면역기능 향상과 나아가 기능성 식품으로서의 연구 개발에 있어 가능성 있는 소재로 사용될 수 있을 것으로 사료되어진다.
- 4%의 세포독성을 나타낸 것과 비교하였을 때 본 연구 결과에서 열수조추출물 및 그 분획물이 전반적으로 매우 낮은 세포독성을 가지고 있음을 확인할 수 있다. 특히 특정 용매에서의 낮은 독성이 확인됨에 따라 본 연구에서 제시한 분획 공정을 통한 홍경천 분획물의 활성 성분이 기능성 소재로서의 높은 활용 가능성을 갖고 있다고 사료된다.
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