고대부터 식품으로 많이 이용되어 왔던 마늘의 성분중의 하나인 alliin의 혈관 생리활성을 조사하기 위해 다양한 실험을 수행하였다. Alliin은 혈관내피세포의 증식과 이동을 증진시키는 기능이 있으며, 이는 alliin이 혈관형성을 촉진하고 혈관의 상처 치유에 도움을 줄 수 있음을 의미한다. 또한 alliin은 염증반응을 일으키는 과정에 나타나는 THP-1 세포의 혈관내피세포 부착을 억제하며, 혈전을 형성하는 THP-1 동종세포간 응집을 억제하는 기능도 갖고 있음이 확인되었다. 이와 같은 alliin의 세포 기능은 혈관의 주요 질환인 동맥경화의 발생 및 뇌졸증이나 심근경색의 원인이 되는 혈전의 형성 등을 억제할 수 있음을 의미한다. 한편 혈관의 주요 조절자 중의 하나인 산화질소의 생산에는 alliin이 관여하지 않음을 확인하였다. 종합해 보면, alliin은 혈관세포의 여러 가지 생리기능을 조절하는 혈관생리기능 개선제로 활용할 가능성이 있는 물질이다.
고대부터 식품으로 많이 이용되어 왔던 마늘의 성분중의 하나인 alliin의 혈관 생리활성을 조사하기 위해 다양한 실험을 수행하였다. Alliin은 혈관내피세포의 증식과 이동을 증진시키는 기능이 있으며, 이는 alliin이 혈관형성을 촉진하고 혈관의 상처 치유에 도움을 줄 수 있음을 의미한다. 또한 alliin은 염증반응을 일으키는 과정에 나타나는 THP-1 세포의 혈관내피세포 부착을 억제하며, 혈전을 형성하는 THP-1 동종세포간 응집을 억제하는 기능도 갖고 있음이 확인되었다. 이와 같은 alliin의 세포 기능은 혈관의 주요 질환인 동맥경화의 발생 및 뇌졸증이나 심근경색의 원인이 되는 혈전의 형성 등을 억제할 수 있음을 의미한다. 한편 혈관의 주요 조절자 중의 하나인 산화질소의 생산에는 alliin이 관여하지 않음을 확인하였다. 종합해 보면, alliin은 혈관세포의 여러 가지 생리기능을 조절하는 혈관생리기능 개선제로 활용할 가능성이 있는 물질이다.
Little is known about the cardiovascular roles of alliin, a functional component in garlic that has been used as food material. Thus, we examined a broad range of cardiovascular activities of alliin in this study. From our in vitro experiments, alliin was determined to act as a stimulant to induce e...
Little is known about the cardiovascular roles of alliin, a functional component in garlic that has been used as food material. Thus, we examined a broad range of cardiovascular activities of alliin in this study. From our in vitro experiments, alliin was determined to act as a stimulant to induce endothelial cell proliferation and endothelial cell migration. Since endothelial cell proliferation and migration are highly associated with angiogenesis and wound healing, alliin is suggested as a regulator to control angiogenesis and wound healing. In addition, alliin was elucidated to prevent lipopolysaccharide (LPS)-induced adhesion of THP-1 leukocytes to endothelial cells and LPS-induced homotypic THP-1 cell aggregation. These inhibitory effects indicate that alliin is likely to act as an anti-atherosclerotic and anti-thrombotic factor, because leukocytic adhesion to endothelial cells and homotypic leukocyte aggregation are highly associated with atherosclerosis and thrombosis, respectively. Our additional findings show that alliin has no effect on the production of nitric oxide (NO), an important vasoregulator. In conclusion, alliin is suggested as a regulator for controlling various cardiovascular functions.
Little is known about the cardiovascular roles of alliin, a functional component in garlic that has been used as food material. Thus, we examined a broad range of cardiovascular activities of alliin in this study. From our in vitro experiments, alliin was determined to act as a stimulant to induce endothelial cell proliferation and endothelial cell migration. Since endothelial cell proliferation and migration are highly associated with angiogenesis and wound healing, alliin is suggested as a regulator to control angiogenesis and wound healing. In addition, alliin was elucidated to prevent lipopolysaccharide (LPS)-induced adhesion of THP-1 leukocytes to endothelial cells and LPS-induced homotypic THP-1 cell aggregation. These inhibitory effects indicate that alliin is likely to act as an anti-atherosclerotic and anti-thrombotic factor, because leukocytic adhesion to endothelial cells and homotypic leukocyte aggregation are highly associated with atherosclerosis and thrombosis, respectively. Our additional findings show that alliin has no effect on the production of nitric oxide (NO), an important vasoregulator. In conclusion, alliin is suggested as a regulator for controlling various cardiovascular functions.
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문제 정의
Alliin이 또 다른 혈관기능인 혈관내피세포 이동에 미치는 영향은 어떠한지 조사하였다. 혈관내피세포의 이동은 혈관 형 °” 성 과정과 상처 치유 과정 중 일어나는 단계 중 하나로 혈관내 8 h 피세포 이동 측정은 혈관 형성과 상처 치유 과정에 alliin이미치는 영향을 평가해 볼 수 있는 방법이다.
Alliki이 혈관내피세포의 성장을 촉진한다는 것을 확인하였으므로, 다음으로 혈관 내피층에서 일어나는 세포사멸에는 al- liki이 어떤 영향을 미치는지 조사하였다. BAEC은 세포 외 기질에 부착하여 자라는 세포이기 때문에 죽은 세포는 모양이 둥글고 부유하고 있는 세포로 변화한다.
고대부터 식품으로 많이 이용되어 왔던 마늘의 성분 중의 하나인 allHn의 혈관 생리활성을 조사하기 위해 다양한 실험을 수행하였다. AUHn은 혈관내피세포의 증식과 이동을 증진시키는 기능이 있으며, 이는 alliin이 혈관형성을 촉진하고 혈관의 상처 치유에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
본 연구에서는 현재까지 많은 연구가 이루어지지 않았던 alliin의 혈관기능을 포괄적으로 이해하기 위하여 혈관 내피세포의 성장과 세포사멸, 혈관 내 상처를 치유하고 혈관 형성의 중요한 과정 중 하나인 혈관 내피 세포의 이동, 혈관을 확장시키고 혈소판 응집을 방해하는 산화질소 측정, 죽상동맥경화의 발달에 중요한 단계인 이종 세포간 부착현상, 상처 치료의 초기 단계인 혈구 세포의 응집 둥 다양한 혈관 기능에 alliin 이미치는 영향을 관찰하고, alliin에 의한 세포 내 신호 전달의 변화와 다양한 유전자의 조절 패 턴을 western blot과 RT-PCR 을 통해 확인하는 둥 세포 수준에서 일어나는 alliin의 다양한 기능을 조사함으로써 alliin의 새로운 혈관 기능에 관한 가능성을 제시코자 한다.
Alliin의 장시간처리가 eNOS의 발현을 억제시킨다는 것은 최소한 alliin이산화질소의 양을 증가시키지 못함을 의미한다. 한편 alliin이짧은 시간 내에 eNOS의 활성을 증가시키는지를 알아보기 위하여, alliin을 짧은 시간 동안 처리한 후 산화질소가 세포 내에서 증가하는지 확인해 보았다. 그 결과, Fig.
가설 설정
Alliin decreases endothelial cell apoptosis. A. Confluent BAECs were starved for 16 hr and then the cells were incubated for additional hours (24 hr) with none or various concentration of alliin. Then the apoptotic cells (round shrunken cells) were counted under a microscope.
RT-PCR was performed as described in materials and methods. B. Starved cells that were treated with indicated concentrations of alliin were lysed. Proteins of the lysed cells were resolved by SDS-PAGE, electrotransferred to PVDF membranes and immunoblotted with antibody specific for eNOS.
제안 방법
0.5% 소태아혈청이 첨가된 DMEM에 BAEC을 24시간 동안 배양한 후, 다양한 농도의 alliin을 24시간 처리한 뒤, [^-Thymidine (3.3~4.8 TBq/mM)을 1 시간 동안 전처리 하였다. 그 후 5% trichloroacetic add (TCA)로 세척한 후, 세포를 0.
내피세포 성장에 어떤 영향을 미치는 지 실험하였다. Alliin을 농도 별(0, 0.1, 1, 10, 20 uM)로 처리한 후 [3H]-Thymidine 편입을 통해서 세포 성장을 평가하였다(Fig. 1). 그림 1에서 보는 바와 같이, alliin의 농도가 증가할수록 [3H]-Thymidme 편입이 증가하는 것을 알 수 있었으며, 특히 20uM의 alliin을 처 리하였을 경우, FH]-Thy血dine은 2배 정도 현격하게 증가함을 확인할 수 있었다.
BAEC 세포를 이용하여 alHin이 혈관 생리 활성 가운데 하나인 내피세포 성장에 어떤 영향을 미치는 지 실험하였다. Alliin을 농도 별(0, 0.
따라서 세포 사멸은 모양이 둥글고 부유하고 있는 세포의 수를 세어서 측정하였다. BAEC의 세포사멸은 혈청기아로 유도하였고, alliin이 세포사멸에 미치는 효과는 혈청기아 상태에서 alliin을 처리하여 평가하였다. Fig.
또한 THP-1 세포를 배 양한 후 10 pM의 Calcein AM (Sigma, USA)을 37°C, 5% CO2 조건에서 45 분간반응 시 키고, PBS (phosphate buffered saline)를 이용하여 3회 세 척하였다. Calcein AM으로 염 색시 킨 THP-1 을 BAEC이 부착된 기판 위에 동량으로 첨가하여 부착된 THP-1 세포를 형광현미경으로 관찰하였다. 부착된 세포와 전체 세포의 비율을 계산하여 정량화 하였다.
이렇게 합성된 cDNA를 다시 주형으로 하여 PCR로 ECE-1 (endothelin converting enzyme-1)과 eNOS (endothelial nitric oxide synthase)의 전사체를 확인하였다. ECE-1 와 eNOS 프라이머의 붙임온도는 60°C로 동일하게 하였으며 대조군으로 사용된 GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) 역시 60°C로 동일하게 하였고, 28 주기를 실시한 후, PCR 생산물을 1.5% 한천 겔 전기영동으로 확인하였다. 실험에 사용된 프라이머는 아래와 같다.
조건으로 배양한 후 혈청기아 배지로 16 시간 동안 배양하였다. HEPES 완중액(140 mM NaCl, 5 mM KC1, 2 mM CaCU 5 mM glucose, 5 mM HEPES, 1 mM MgCl^ pH 7.4) 으로 2회 세 척하여 치환한 HEPES 완충액 에 alliin을 농도 별로 처리하였다. 그 후 세포를 수확하여 초음파파쇄로 분해한 후세포 분해 액을 13, 000 rpm으로 10 분간 원심분리를 하여 상층 액을 분획하였다.
각 실험조건에서 얻은 세포분해액은 단백질량을 측정하여 동일한 양 의총 단백질을 포함하는 일정량의 세포 분해액 내의 단백질들을 SDS-PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis) 에 의해 분리 시 켰다. SD&PAGE의 단백 질은 PVDF (polyvinyHdene fluo- ride)막으로 이동시켜 고정하고 분석하고자 하는 표적 단백질에 해당하는 1차 항체와 반응 후, 2차 항체를 반응시킨 뒤, 화학발광 검출법을 통해 X-선 필름에 현상한 후 western 결과를 관찰하였다.
THP-1 을 24시간 동안 배양한 후, 혈청기아 배지로 12시간 배양한 후에 alliin을 각 농도 별로 처리하여 8 시간까지 시간별로 진행되는 응집 현상을 현미경으로 관찰하였다.
8 TBq/mM)을 1 시간 동안 전처리 하였다. 그 후 5% trichloroacetic add (TCA)로 세척한 후, 세포를 0.2 N NaOH, 2% SDS (sodium dodecyl sulfate)로 분해하여 얻은 분해액을 액체섬광계수기를 이용하여 방사능을 측정하였다. 세포 분해 액의 단백질량은 Lowry 분석법으로 정량하여 세포 수의 변이를 보정하였다.
그 후 스크래퍼 찰과기(scraper)를 이용하여 창상 선을 만든 후 다시 PBS로 2회 세척하고 다양한 농도의 allHn을처리하였다. 세포이동 정도는 일정한 시면적에 이동한 세포 수를 세어 이동한 세포수의 비율을 계산하여 평가하였다.
BAEC은 세포 외 기질에 부착하여 자라는 세포이기 때문에 죽은 세포는 모양이 둥글고 부유하고 있는 세포로 변화한다. 따라서 세포 사멸은 모양이 둥글고 부유하고 있는 세포의 수를 세어서 측정하였다. BAEC의 세포사멸은 혈청기아로 유도하였고, alliin이 세포사멸에 미치는 효과는 혈청기아 상태에서 alliin을 처리하여 평가하였다.
2A에서 볼 수 있듯이, alliin을 처리하지 않은 대조군에 비해 alliin을 처리한 실험군에서 세포사멸 정도가 감소하였으며, alliin의 농도가 높아질수록 세포사멸 정도가더 많이 감소함을 확인할 수 있었다. 또한 alliki이 세포사멸을 억제한다는 사실을 다시 한 번 확인하기 위하여 western blot을 통해 세포사멸과 관련된 단백질인 procaspase-3와 active cas- pase-3양을 검출함으로써 caspase의 활성을 조사하여 세포사멸 억제효과를 확인하였다. Fig.
혈관내피세포에서 산화질소는 eNOS에 의해 L-arginine으로부터 합성된다[4]. 먼저 alliin이 eNOS의발현에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여 BAEC에 alliin을 처리한 후 eNOS의 mRNA 발현(Fig. 6A)과 단백질 발현 정도(Fig. 6B)를 각각 RT-PCR과 western blot을 통해 관찰하였다. Fig.
혈관내피세포의 이동은 혈관 형 °” 성 과정과 상처 치유 과정 중 일어나는 단계 중 하나로 혈관내 8 h 피세포 이동 측정은 혈관 형성과 상처 치유 과정에 alliin이미치는 영향을 평가해 볼 수 있는 방법이다. 본 연구에서는 1아 thymidine을 처리하여 세포 증식을 억제한 후 스크래퍼 찰과 b 기를 이용하여 창상선을 만든 뒤 이동한 세포 수를 세어서 평가하였다. Fig.
Calcein AM으로 염 색시 킨 THP-1 을 BAEC이 부착된 기판 위에 동량으로 첨가하여 부착된 THP-1 세포를 형광현미경으로 관찰하였다. 부착된 세포와 전체 세포의 비율을 계산하여 정량화 하였다.
그 후 세포를 수확하여 초음파파쇄로 분해한 후세포 분해 액을 13, 000 rpm으로 10 분간 원심분리를 하여 상층 액을 분획하였다. 산화질소를 측정하기 위해 상층액과 100nN의 DAF-2 (diaminofluoresceins)를 15 분간 상온에서 반웅시킨 후 형광분석계(Spectrofluorophotometer RF-5301 PC, SHIMADZU, Japan)를 이용하여 형광스펙트럼 (Ex: 495 nm, Em: 515 nm)을 측정하여 분석하였다.
세포성장은 [^-Thymidine 편입 정도를 측정하여 평가하였다. 0.
그 후 스크래퍼 찰과기(scraper)를 이용하여 창상 선을 만든 후 다시 PBS로 2회 세척하고 다양한 농도의 allHn을처리하였다. 세포이동 정도는 일정한 시면적에 이동한 세포 수를 세어 이동한 세포수의 비율을 계산하여 평가하였다.
정 량 분석 후 2 ug의 RNA를 주형으로 사용하면서 역전사효소(M~MLV reverse transcriptase, Promega, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 이렇게 합성된 cDNA를 다시 주형으로 하여 PCR로 ECE-1 (endothelin converting enzyme-1)과 eNOS (endothelial nitric oxide synthase)의 전사체를 확인하였다. ECE-1 와 eNOS 프라이머의 붙임온도는 60°C로 동일하게 하였으며 대조군으로 사용된 GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) 역시 60°C로 동일하게 하였고, 28 주기를 실시한 후, PCR 생산물을 1.
전면 성장한 BAEC에 다양한 농도의 allhn을 20시간 처리한 후 혈청기아 배지에서 20시간 배양한 뒤 분해 완충액(50 mMTris, 150 mM NaQ, 1% NP-40, 0.5% Sodium deoxy cholate, 0.1% SDS, pH 7.5)으로 분해하였다. 그 후 원심분리를 통해 상층 액을 획득하여, 세포 분해액으로 사용하였다.
전면 성장한 BAEC을 16-18 시간 동안 혈청기아시 킨 후 다양한 농도의 alliin을 처리하였다. 처리는 0, 2, 4, 8, 16, 24 시간 동안 처리하였고, 시간 경과에 따른 변화를 현미경을 이용해 사진 촬영하여 기록했으며, 세포사멸 세포(둥글고 부유 상태에 있는 세포)를 계산하여 세포사멸 비율을 결정하였다.
정 량 분석 후 2 ug의 RNA를 주형으로 사용하면서 역전사효소(M~MLV reverse transcriptase, Promega, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 이렇게 합성된 cDNA를 다시 주형으로 하여 PCR로 ECE-1 (endothelin converting enzyme-1)과 eNOS (endothelial nitric oxide synthase)의 전사체를 확인하였다.
농도의 alliin을 처리하였다. 처리는 0, 2, 4, 8, 16, 24 시간 동안 처리하였고, 시간 경과에 따른 변화를 현미경을 이용해 사진 촬영하여 기록했으며, 세포사멸 세포(둥글고 부유 상태에 있는 세포)를 계산하여 세포사멸 비율을 결정하였다.
대상 데이터
35 mm 배 양접시에 분주된 BAEC을 24 시간 동안 37°G 5% CO2 조건으로 배양한 후 혈청기아 배지로 16 시간 동안 배양하였다. HEPES 완중액(140 mM NaCl, 5 mM KC1, 2 mM CaCU 5 mM glucose, 5 mM HEPES, 1 mM MgCl^ pH 7.
Alliin은 Sigma-Aldrich (USA)사에서 제공하는 시약을 구입하여 증류수에 녹여 사용하였다.
실험에 사용하였다. BAEC은 20% 소태아혈청(fetal bo vine serum, Wei GENE Inc., Korea)과 0.5% 항생제 (streptomycin/penidllin)가 포함된 DMEM (glucose 1 g/liter Wei GENE Inc.)를 이용하여 37°C, 5% CO2 조건에서 배양하였다. THP-1 은 부유세포(suspension cell)로「플라스크에 배 양하였으며, 10% 소태아혈청과 0.
이론/모형
2 N NaOH, 2% SDS (sodium dodecyl sulfate)로 분해하여 얻은 분해액을 액체섬광계수기를 이용하여 방사능을 측정하였다. 세포 분해 액의 단백질량은 Lowry 분석법으로 정량하여 세포 수의 변이를 보정하였다.
성능/효과
BAEC의 세포사멸은 혈청기아로 유도하였고, alliin이 세포사멸에 미치는 효과는 혈청기아 상태에서 alliin을 처리하여 평가하였다. Fig. 2A에서 볼 수 있듯이, alliin을 처리하지 않은 대조군에 비해 alliin을 처리한 실험군에서 세포사멸 정도가 감소하였으며, alliin의 농도가 높아질수록 세포사멸 정도가더 많이 감소함을 확인할 수 있었다. 또한 alliki이 세포사멸을 억제한다는 사실을 다시 한 번 확인하기 위하여 western blot을 통해 세포사멸과 관련된 단백질인 procaspase-3와 active cas- pase-3양을 검출함으로써 caspase의 활성을 조사하여 세포사멸 억제효과를 확인하였다.
또한 alliki이 세포사멸을 억제한다는 사실을 다시 한 번 확인하기 위하여 western blot을 통해 세포사멸과 관련된 단백질인 procaspase-3와 active cas- pase-3양을 검출함으로써 caspase의 활성을 조사하여 세포사멸 억제효과를 확인하였다. Fig. 2B에서 보는 것과 같이, alliin 의 처 리 농도가 높아질수록 active caspase-3의 양이 감소함을 알 수 있었다. 이는 alliin의 농도가 높아질수록 세포사멸의 정도가 감소함을 의미한다.
6A에서 보듯이 혈관내피세포에 10 uM al- liin을 처리하였을 경우 시간이 지날수록 ECE-1 의 mRNA 양은 변하지 않지만 eNOS mRNA 양은 감소하는 것을 알 수 있었다. eNOS의 단백질양 정도 역시 alliin의 농도가 높아질수록 감소함을 확인할 수 있었다(Fig. 6B). Alliin의 장시간처리가 eNOS의 발현을 억제시킨다는 것은 최소한 alliin이산화질소의 양을 증가시키지 못함을 의미한다.
한편 alliin이짧은 시간 내에 eNOS의 활성을 증가시키는지를 알아보기 위하여, alliin을 짧은 시간 동안 처리한 후 산화질소가 세포 내에서 증가하는지 확인해 보았다. 그 결과, Fig. 6C에서 보는 바와 같이 alliin의 단시간 처리는 산화질소의 생성에는 아무런 영향을 미치지 않음을 알 수 있었다. 이러한 결과들은 alliin이 가진 다양한 혈관 기능은 산화질소와 관련이 없을 것으로 추측할 수 있다.
이는 alliin 자체는 혈전을 형성하는 데에는 아무런 영향을 미치지 않음을 의미한다. 그러나 LPS를 THP-1 세포에 처리한 경우, THP-1 동종세포간응집이 일어났고, alliin을 LPS와 함께 THP-1 세포에 처리하였을 경우 LPS만 처리한 양성 대조군에 비해 THP-1 세포의 응집이 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 위의 결과는 alliin이 혈전 형성을 억제하는 기능을 갖고 있음을 의미하며, alliin의 이와 같은 효과는 뇌졸증이나 심근경색과 같은 혈관질환의 발생을 억제기능과 연관되어 있음을 예측할 수 있다.
1). 그림 1에서 보는 바와 같이, alliin의 농도가 증가할수록 [3H]-Thymidme 편입이 증가하는 것을 알 수 있었으며, 특히 20uM의 alliin을 처 리하였을 경우, FH]-Thy血dine은 2배 정도 현격하게 증가함을 확인할 수 있었다. 이렇게 농도 의존적으로 [3H]-Thynudine 편입이 증가하는 것은 alliin이 혈관내피 세포의 증식을 촉진함을 의미한다.
AUHn은 혈관내피세포의 증식과 이동을 증진시키는 기능이 있으며, 이는 alliin이 혈관형성을 촉진하고 혈관의 상처 치유에 도움을 줄 수 있음을 의미한다. 또한 alliin은염증반응을 일으키는 과정에 나타나는 THP-1 세포의 혈관내피세포 부착을 억제하며, 혈전을 형성하는 THP-1 동종세포간응집을 억제하는 기능도 갖고 있음이 확인되었다. 이와 같은 alliin의 세포 기능은 혈관의 주요 질환인 동맥경화의 발생 및뇌졸증이나 심근경색의 원인이 되는 혈전의 형성 둥을 억제할 수 있음을 의미한다.
의미한다. 먼저, alliin 이 세포의 증식과 이동을 유발하는 세포 수준에서의 기능은, 세포의 증식과 이동이 혈관생성과 혈관의 상처 치유에 필수적인 과정이기 때문에 alliin이 혈관생성을 촉진하고 혈관의 상처 치유에 도움을 줄 수 있다는 것을 의미한다. 또한 백혈구가 혈관 내피층에 부착하는 현상은 염증 반응의 하나로써, 동맥경화의 발생과 밀접한 관련이 있기 때문에, 염증 반응을 유도하는 LPS가 THP-1 세포를 혈관내피세포에 부착시키는 것을 억제하는 alliin의 세포 기능은 alliin이동맥경화의 발생을 억제시킬 수 있음을 의미한다.
본 연구를 통해, alliin이 갖고 있는 혈관내피세포의 다양한 생리활성을 조사한 결과, alliin이 혈관내피세포의 기능장애를 개선할 수 있는 생리기능을 갖는 분자로서의 가능성을 확인하였다. 본 연구를 통해 alliin이 세포 수준에서 나타내는 생리활성을 요약하면 다음과 같다.
기전에 관해서는 아직 이해되지 않고 있다. 분자 생물학적 이해를 하기 위하여 혈관기능에 중요한 역할을 하고 있는 산화질소의 생산과 alliin이 어떤 관계가 있는지 알아보기 위하여 eNOS의 발현 혹은 활성에 affin이 어떤 역할을 하는지 알아보았으나, 산화질소의 생산에 alliin은 관여하지 않음을 알 수 있었다. 오히려 alliin은 산화질소를 생산하는 eNOS의 발현을 억제하는 것으로 보아 alliin이 일으키는 다양한 혈관 기능은 산화질소와 관계가 없는 것으로 추측된다.
그러나 LPS를 THP-1 세포에 처리한 경우, THP-1 동종세포간응집이 일어났고, alliin을 LPS와 함께 THP-1 세포에 처리하였을 경우 LPS만 처리한 양성 대조군에 비해 THP-1 세포의 응집이 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 위의 결과는 alliin이 혈전 형성을 억제하는 기능을 갖고 있음을 의미하며, alliin의 이와 같은 효과는 뇌졸증이나 심근경색과 같은 혈관질환의 발생을 억제기능과 연관되어 있음을 예측할 수 있다.
3). 이러한 결과는 alliin이 동맥경화의 발생을 억제할 수 있는 기능을 보유할 가능성이 높을 것임을 암시하는 것이다.
백혈구와 혈관내피세포에 LPS를 처리한 후 배양하면 염증반응으로 인해 두 세포간의 부착이 일어난다. 하지만 alliin 을 LPS와 함께 세포에 처리하였을 경우 THP-1 세포와 BAEC 간의 부착이 줄어드는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3). 이러한 결과는 alliin이 동맥경화의 발생을 억제할 수 있는 기능을 보유할 가능성이 높을 것임을 암시하는 것이다.
한편 본 연구에서 혈전형성과 밀접하게 연관되어 있는 THP-1 동종세포간 응집현상을 관찰해본 결과, alliin은 THP-1 세포의 응집 형성을 유도하지 않으며, 오히려 LPS에 의해 유도된 THP-1 세포의 응집을 억제한다는 것을 확인할 수 있었다. 이와 같이 alliin의 세포수준에 보여준 LPS 유발 THP-1 동종간 세포응집 억제현상은 뇌졸증이나 심근경색을 일으키는 혈전의 형성을 억제하는 기능이 있음을 암시한다.
이와 같은 alliin의 세포 기능은 혈관의 주요 질환인 동맥경화의 발생 및뇌졸증이나 심근경색의 원인이 되는 혈전의 형성 둥을 억제할 수 있음을 의미한다. 한편 혈관의 주요 조절자 중의 하나인산화질소의 생산에는 alliin이 관여하지 않음을 확인하였다. 종합해 보면, alliin은 혈관세포의 여 러 가지 생리 기능을 조절하는 혈관생리기능 개선제로 활용할 가능성이 있는 물질이다.
후속연구
본 연구결과를 종합해보면 allHn이 혈관내피세포의 여러 가지 생리활성을 조절하여 동맥경화를 비롯한 다양한 심혈관계질환의 치료를 위한 물질일 가능성을 제시하고 있다.
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