In vivo embryo produced from Hanwoo donor cows were collected and transferred to Hanwoo recipients. Cows, at random stages of the estrous cycle, received Progesterone Releasing Intravaginal Device (CIDR-plus, InterAg, New Zealand) together with injection of 1 mg estradiol benzoate and 50 mg progeste...
In vivo embryo produced from Hanwoo donor cows were collected and transferred to Hanwoo recipients. Cows, at random stages of the estrous cycle, received Progesterone Releasing Intravaginal Device (CIDR-plus, InterAg, New Zealand) together with injection of 1 mg estradiol benzoate and 50 mg progesterone, and gonadotropin treatment began 4 day later. For superovulation, a total of 28 mg FSH was intramuscularly injected twice a day in the way of decreasing doses 4 day (5, 5, 4, 4, 3, 3, 2 and 2 mg). Twenty one Hanwoo donor cows were flushed on day 7 of estrus cycle with same FSH and artificial insemination by the same technicians. Embryos were recovered 7 days after the second insemination by flushing the uterus with Embryo Collection Medium. The results obtained were as follows: The rates of transferable embryos were 50.3%, and 78 fresh embryos at morulae and blastocysts stage were transferred into Hanwoo recipients on day 7 of estrus cycle. The pregnancy rates were first embryo transfer 55.6%, 2nd 62.9% and 3rd 57.9%, respectively. In conclusion, These results suggest that CIDR-based superovulation protocol may be effectively used for production of superior Hanwoo embryos. Also, since it seems the condition of recipient cows greatly affect pregnancy rate, it is very important to evaluate recipient for effective cattle production.
In vivo embryo produced from Hanwoo donor cows were collected and transferred to Hanwoo recipients. Cows, at random stages of the estrous cycle, received Progesterone Releasing Intravaginal Device (CIDR-plus, InterAg, New Zealand) together with injection of 1 mg estradiol benzoate and 50 mg progesterone, and gonadotropin treatment began 4 day later. For superovulation, a total of 28 mg FSH was intramuscularly injected twice a day in the way of decreasing doses 4 day (5, 5, 4, 4, 3, 3, 2 and 2 mg). Twenty one Hanwoo donor cows were flushed on day 7 of estrus cycle with same FSH and artificial insemination by the same technicians. Embryos were recovered 7 days after the second insemination by flushing the uterus with Embryo Collection Medium. The results obtained were as follows: The rates of transferable embryos were 50.3%, and 78 fresh embryos at morulae and blastocysts stage were transferred into Hanwoo recipients on day 7 of estrus cycle. The pregnancy rates were first embryo transfer 55.6%, 2nd 62.9% and 3rd 57.9%, respectively. In conclusion, These results suggest that CIDR-based superovulation protocol may be effectively used for production of superior Hanwoo embryos. Also, since it seems the condition of recipient cows greatly affect pregnancy rate, it is very important to evaluate recipient for effective cattle production.
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문제 정의
상업적인 소 수정란이식 확대는 1970년 초기에 시작하였으며, 수정란이식은 체외수정란을 이용한 비외과적인 방법으로 시작되었다(Mapletoft 등, 2002). 따라서 본 연구는 한우의 다배란 처리로 생산된 소 수정란을 회수하여 이식 가능 수정란과 이식한 결과를 조사하였다.
제안 방법
투여 6회째에 CIDR를 제거하였다. AntorinR10 최종 투여 후 12시간 전후에 발정을 확인하고 Gonadorelin (GnRH, Fertagyl. Intervet, Holland) 200 g을 근육 주사하였으며, 22시간과 34시간에 각각 1스트로씩 2회 인공수정을 실시하였다. 수정란 채 란은 공란우 21두를 5회로 나누어 각각 실시하였다.
공란우 21두는 5회에 나누어서 과배란 처리를 실시하였다. 1차, 2차, 3차에서는 5두씩, 4차, 5차는 3두씩 수정란을 채란하였다.
공란우는 공란우의 발정 주기 와 관계없이 Progesterone Releasing Intravaginal Device(CIDR-plus, InterAg, New Zealand) 를 질내 삽입하고 5 일째부터 FSH(AntorinR10, Kawasaki, Japan) 28 mg을 5/5, 4/4, 3/3 및 2/2AU씩 나누어 4일간 12시간 간격의 감량법(28 mg group, n=21)으로 근육 주사하였으며, An- torinR10 투여 6회째에 CIDR를 제거하였다. AntorinR10 최종 투여 후 12시간 전후에 발정을 확인하고 Gonadorelin (GnRH, Fertagyl.
공란우를 인공수정 후 7일째에 2% lidocaine(리도카인, 제일제 약) 5 ml로 경막외 마취 후 fetal bovine seram(FBS, Gib- co)가 2% 또는 polyvinyl alcohol(PVA, Sigma)가 0.1% 첨가된 Dulbecco's Phosphate-Buf&red Salines(D-PBS, Gibco)으로 자궁을 관류하여 수정란을 채란하고, 14~84배율의 실체 현미경(Olympus, Japan)하에서 수정란을 회수하였다. 수정란의 평가는 Manual of the International Embryo Transfer Society (Stringfellow과 Seidel, 1998)5] code 1 (excellent or good) 과 code2(f)에 해당하는 수정란은 이식가능 수정란, code 3(poor)과 code 4(dead or degeneration)의 수정 란은 이 식 불가능 수정 란으로 4등급으로 구분하였다.
한우 공란우 21두에서 과배란 처리로 인공수정을 실시한 후 7일째 수정란 회수용 카데타를 사용하여 수정란을 회수하였다. 다배란 처리는 5회 실시로 공란우는 각 1회씩 수정란을 회수하였다. 총 회수된 수정란은 155개였으며, 이 중 이식이 가능한 수정란은 78개로 50.
손 등(2006)은 자연발정 관찰 후 과배란 처리한 공란우나 발정 주기와는 상관없이 CIDR를 이용한 과배란처리 공란우에서도 유의적인 차이를 보이지 않았다고 보고하였다. 이러한 결과를 토대로 본연구에서는 CIDR 처리와 FSH 제제를 이용하여 과배란 처리를 실시하여 수정란을 채란하였다.
같다. 한우 공란우 21두에서 과배란 처리로 인공수정을 실시한 후 7일째 수정란 회수용 카데타를 사용하여 수정란을 회수하였다. 다배란 처리는 5회 실시로 공란우는 각 1회씩 수정란을 회수하였다.
대상 데이터
본 연구에서 사용된 공란우는 국립축산과학원 가축유전자원시험장과 한우시험장의 보유축 중에서 한우 21두를 선발하여 시험에 공시하였다. 수란우는 영주시 한우 번식 농가에서 사육 중인 소로서 직장검사에 의해 건강한 생식기를 갖고 있는 한우를 선발하여 호홉기 질환 혼합 백신(소 전염성비기관염+소 바이러스성 설사병 十 파라인플루엔자 및 아까바네병 등의 예방 접종을 실시한 후 본 시험에 공시하였다.
시험에 공시하였다. 수란우는 영주시 한우 번식 농가에서 사육 중인 소로서 직장검사에 의해 건강한 생식기를 갖고 있는 한우를 선발하여 호홉기 질환 혼합 백신(소 전염성비기관염+소 바이러스성 설사병 十 파라인플루엔자 및 아까바네병 등의 예방 접종을 실시한 후 본 시험에 공시하였다.
수란우는 발정발현 6~8일에 직장 검사를 통하여 뚜렷한 황체가 있는 개체를 선발하고 2% lidocaine 5 ml로 , 경막외마취를 실시한 후 황체가 있는 자궁각에 이식하였다. 수정란이식 농가는 19개 농가이며, 시술자는 2명이 수행하였다.
데이터처리
실험 결과의 통계학적 분석은 SAS pakage(version 6, 12) 이 용과 GLM producer를 사용하여 각 처리구간 유의성을 검증하였다.
이론/모형
1% 첨가된 Dulbecco's Phosphate-Buf&red Salines(D-PBS, Gibco)으로 자궁을 관류하여 수정란을 채란하고, 14~84배율의 실체 현미경(Olympus, Japan)하에서 수정란을 회수하였다. 수정란의 평가는 Manual of the International Embryo Transfer Society (Stringfellow과 Seidel, 1998)5] code 1 (excellent or good) 과 code2(f)에 해당하는 수정란은 이식가능 수정란, code 3(poor)과 code 4(dead or degeneration)의 수정 란은 이 식 불가능 수정 란으로 4등급으로 구분하였다. 수정란이식에 사용한 수정란은 주로 1, 2 등급만을 이식에 공시하였다.
성능/효과
Fig. 1은 1차 수정란이식의 결과로서 5농가 수란우 27두에 이식을 실시하여 그 중 15두가 임신이 확인되어 수태율은 55.6% 의 결과를 얻었으며, Fig. 2에서는 2차 수정란이식의 결과로서 10농가에 수란우 27두에 수정란이식을 실시한 결과’ 17두에서 임신을 확인하여 62.9%의 수태율 결과를 나타내었다. 2 차 수정란이식에서는 수란우 2두에 이식하여 2두 모두 임신한 농가가 4농가가 있었으니- 수란우 2누에 이식하여 임신이 되지 않은 농기(I)도 있었다.
수정란이식 농가는 4농가에서 실시하였다. 수란우 19두에 수정란이식을 실시한 결과' 11두가 임신되어 57.9%의 수태율을 보였다. B농가의 경우는 1두에 이식하였으나 임신이 확인되지 않았다.
2 차 수정란이식에서는 수란우 2두에 이식하여 2두 모두 임신한 농가가 4농가가 있었으니- 수란우 2누에 이식하여 임신이 되지 않은 농기(I)도 있었다. 수정란이식 결과, 수태율이 제일 높은 농가는 C농가로서 수란우 4두에 이식하여 3두가 임신하여 75% 수태율을 보였다. 그리고, Fig.
총 회수된 수정 란은 155개 였다. 수정란이식이 가능한 단계인 상실배와 배반포 그리고 확장 배반포 단계의 수정란은 7.1%와 40.6% 그리고 2.6%의 비율로 나타났다. 전체 이식 가능한 수정란의 수는 78개로 50.
8±22개를 회수한 결과보다는 다소 낮은 회수율을 보였다. 이러한 회수 결과의 차이는 많은 공란우의 사양 조건과 영양 수준의 차이, 사용한 성선호르몬의 종류, 투여 용량 및 공란우 사용 횟수 등 많은 요인에 따라서 이식 가능 수정란의 회수 효율에 영향을 미치는 것으로 사료된다. 호르몬의 투여 용량에 따른 회수 결과를 살펴보면 일본 淺田 등(#)은 흑모 화우종 경산우에 Antorin R10을 20 AU와 28 AU로 과배란 처리한 결과, 회수 난자 수는 각각 8.
다배란 처리는 5회 실시로 공란우는 각 1회씩 수정란을 회수하였다. 총 회수된 수정란은 155개였으며, 이 중 이식이 가능한 수정란은 78개로 50.3%, 미수정란 및 발달중지란은 77개로 회수되었다. 155개 중 이식 가능 수정란 비율은 50.
후속연구
현장에 수정 란이식을 위해서는 수란의 선발과 관리에 대하여 전반적인 교육을 사전에 실시하는 것이 수태율 향상을 유도하는데 도움이 될 것으로 본다. 성공적인 수정란이식을 위해서는 수정란이식의 수태율에 영향을 주는 다양한 원인들에 대해서 좀 더 다양한 방법으로 연구가 지속적으로 이루어져야 할 것으로 사료된다.
3%(43두)였다. 이상의 결과를 볼 때 수정란이식 후 수태율을 향상을 위해서는 각 농가마다수란우의 관리를 적절히 수행한다면 보다 향상된 결과를 기대할 수 있을 것이다.
참고문헌 (14)
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