선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 도화에는 flavonoids 유래의 kaempferole- 그 배당체, albamyricetin 등의 성분들이 함유되어 있으몌Kim 등, 1991], kaempferole] 경우 지질과산화와 콜레스테롤 억제 효과가 있는 것으로 보고되고 있으나[Hur 등, 1998; Lee 등, 2004], 도화의 화장품으로서의 활용에 관한 내용은 보고된 바 없어, 본 연구에서는 미백 및 주름개선 억제 물질을 탐색하는 중 민간에서 미백이나 염증치료에 널리 사용되어진 도화(桃花)를 이용해 화장품 소재로서의 가능성을 검토하였다.
제안 방법
- 1과 같이 추출하였다. 일반적인 추출법으로 열수 및 에탄올 추출을 하였으며, 그 외 물과 에탄올에서 추출되지 않는 성분을 추출하기 위하여 아세톤 추출을 하였다. 열수 추출물의 경우 시료 100 g에 증류수 10배 양을 가하여 85℃2에서 3시간 환류냉각 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였으며, 에탄올 및 아세톤 추출물의 경우 70% 에탄올과 아세톤을 시료 중량의 10배 양을 가하여 실온에서 24시간 침지하여 상징액과 침전물을 분리하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출하였다.
- 일반적인 추출법으로 열수 및 에탄올 추출을 하였으며, 그 외 물과 에탄올에서 추출되지 않는 성분을 추출하기 위하여 아세톤 추출을 하였다. 열수 추출물의 경우 시료 100 g에 증류수 10배 양을 가하여 85℃2에서 3시간 환류냉각 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였으며, 에탄올 및 아세톤 추출물의 경우 70% 에탄올과 아세톤을 시료 중량의 10배 양을 가하여 실온에서 24시간 침지하여 상징액과 침전물을 분리하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출하였다. 각 추출물들은 원심분리 및 여과, 농축 후 동결 건조하여 냉장실에 보관하면서 본 실험의 시료로 사용하였다.
-
Tyrosinase 저해활성 측정.
-
Melanoma cell(B16F10)에서의 melanin 생합성 저해율 측정.
- 방법에 따라 측정하였다. 기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide> 사용하여 37℃3에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 0.
- CoUagen 생합성량 측정은 procollagen type I C-peptide(PCIP) EIA kit를 이용하여 측정하였다. 즉 DMEM으로 계대 배양된 섬유아세포를 사용하여 24well에 2x10s개로 분주하여, 24시간 후에 시료용액을 농도별로 넣은 후 무혈청 배양액으로 교환하여 24시간 처리하고, 세포배양액을 채취한 뒤 각 well에서 세포 배양액을 PCIP collagen assay kit를 이용하여 collagen 생합성량을 측정하였다.
- 즉 DMEM으로 계대 배양된 섬유아세포를 사용하여 24well에 2x10s개로 분주하여, 24시간 후에 시료용액을 농도별로 넣은 후 무혈청 배양액으로 교환하여 24시간 처리하고, 세포배양액을 채취한 뒤 각 well에서 세포 배양액을 PCIP collagen assay kit를 이용하여 collagen 생합성량을 측정하였다. 먼저 1차 collagen 항체가 균일하게 도포된 96-well plate에 채취한 세포 배양액 20μL을 넣고, 항원-항체 반응을 37℃ 항온 조에서 광차단하여 3시간 반응 .
- 대조군은 시료와 동량의 증류수를 첨가하여 동일한 조건으로 배양하였다. 여기에 5 mg/mL 농도로 제조한 MTT 용액 0.02 mL> 첨가하여 4시간 배양한 후 배양액을 제거하고 각 well당 DMSO:Etiianol(l:l) 0.15 mL 를 가하여 실온에서 30분간 반응 시킨 뒤 ELISA rea로 550nn에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율 측정은 시료 용액의 가군와 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.
- 이러한 collagene 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다[EI-Domyati 등, 2001; Giacomoni 와 Rein, 2001]. 또한 collagene 트립신 등의 단백질 분해효소의 작용을 받지 않으나, collagenase에 의해 분해된다는 보고가 있에Demina 와 Lysenko, 1996; Grant 와 Album, 1959], 도화 주줄물의 collagenase 저해 활성을 Fig. 8 과 같이 측정하였다. 도화 열수 및 에탄을 추출물의 경우 1, 000 ppm에서 17.
- 0%의 세포독성을 나타내었다. 세포독성 결과로부터 collagen 생합성 시료 용액의 농도를 도화 추출물은 lOOppm 이하로 측정하였으며, vitamin C의 경우 세포독성이 미비한 10ppm 이하의 농도로 결정하여 coUagen 생합성량을 측정하였다.
- 그러나 자연 노화에 따른 세포 활성의 감소와 같은 내적 요인에 의해 콜라겐의 생합성이 감소되고, 여러가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 분해가 가속화되어 피부 기질이 파괴되면서 주름이 생성된다. 본 연구에서는 콜라겐 생합성 증가를 확인할 수 있는 pwollagen type I C-peptide (PICP) enzyme immunoassay를 이용하여 elastase와 collagenase에서 효과를 보인 도화 추출물의 coilagen 생합성량을 Fig. 10과 같이 나타내었다. 도화 열수 및 에탄올 추출물의 collagen 생합성량은 lOOppm에서 27.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 도화(桃花, Prunus persica Flos)는 4 월 초순에 경북 경산에서 채집하여 이물질을 제거하고 세척한 후, 음건하여 실험재료로 사용하였다.
- 미백 및 주름억제 효과 측정에 사용된 시약인 mushroom tyrosinase, L-3, 4-dihydroxyphenyl-alanine(L-DOPA), porcine pancreas elastase(PPE), 7V-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, collagenase 및 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg 등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) 에서구입하여 사용하였으며, 콜라겐 생합성 측정에 사용된 시약은 procollagen type I C-peptide EIA kit(Takara-Bio Inc. Japan)을구입하여 사용하였다. 세포 생존율 측정에 사용된 melanoma 세포인 B16F10 과 fibroblast 세포인 CCRF S-180II 는 Korean Cell Line Bank(KCLB)에서 구입하여 사용하였다.
- Japan)을구입하여 사용하였다. 세포 생존율 측정에 사용된 melanoma 세포인 B16F10 과 fibroblast 세포인 CCRF S-180II 는 Korean Cell Line Bank(KCLB)에서 구입하여 사용하였다. 세포 생존율 측정 시약은 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium), fetal bovine serum(FBS), penicillin/streptomycin, trypsin 250, 0.
- 4% trypan blue staine Gibco BRL Co.(Grand Island, USA) 및 Haemacytometer (Marienfeld, Germany)에서 구입하여 사용하였으며, 3-[4, 5-dimethyl thiazol-2-yl]-2, 5-diphenyl-tetrazoliumbromide(MTT)는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.
- 세포주 melanoma(B 16F10), fibroblast(CCRF S-180II) cell 을 96 well plate에 0.6~8xl03cells/well이 되게, 0.18 mL 분주하고, 시료를 농도 별로 조제하여 0.02 mL 첨가한 후 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다. 대조군은 시료와 동량의 증류수를 첨가하여 동일한 조건으로 배양하였다.
데이터처리
- 통계처리는 SPSS 10.0을 사용하였으며, 유의차 검증은 분산분석 (ANOVA:analysis of variance)을 한 후 a=0.05 수준에서 Duncan의 다중검증법 (DMRT:Duncan, s multiple range test)에 따라 분석하였다.
이론/모형
- Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등[1986]의 방법에 따라 측정하였다. 반응구는 0.
- 피부 멜라노마 세포로부터의 melanin 생합성 저해 측정은 Hosoi 등[1985}의 방법에 따라 측정하였다. DMEM 배지로 배양된 멜라 노마 세포를 lOOnrni culture dish에 #가 되게 분주하고 24시간 배양 후 시료를 농도별로 조제하여 2 ml 첨가하고, 48시간 후에 인산완충액(pH 7.
- Elastase 저해활성 측정은 Cannell 둥[1988]의 방법에 따라 측정하였다. 기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide> 사용하여 37℃3에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다.
- Collagenase 저해활성 측정은 Wnsch 둥[1963]의 방법에 따라 측정하였다. 즉 반응구는 0.
- 세포 생존율 측정은 Carmichael 등의 방법 [198기에 따라 측정하였다. 세포주 melanoma(B 16F10), fibroblast(CCRF S-180II) cell 을 96 well plate에 0.
성능/효과
- 2와 같이 나타내었다. 도화 열수 및 에탄올 추출물 1,000 ppm에서 각각 54.0, 58.3%의 저해활성을 나타내었으며, 도화 아세톤 추출물의 경우 1,000ppm에서 47.3% 의 저해활성을 나타내어 도화 에탄올 주줄물의 tyrosinase 저해 활성이 가장 높았다. Lee 등[2001]의 제주산 식물을 이용한 tyrosinase 억제 활성을 측정한 결과 1,000 ppm의 농도에서 10.
- Tyrosinasee CiF*와 결합한 효소로 동식물, 미생물 및 사람 등에 널리 분포되어 있는 polyphenol oxidasee- 멜라닌 합성 과정에서 속도를 제한하는 등 멜라닌 합성의 주요한 조절적 단계를 나타내는 효소이다 [Hearing, 1987]. 이러한 멜라닌 생합성에 관여하는 주요 효소인 tyrosinse에 대한 영향을 측정한 결과, 도화 열수, 에탄올 및 아세톤 추출물 100ppm에서 각각 30.4, 40.0, 28.6%를 나타내어 도화 에탄올 추출물의 tyrosinase 저해활성이 가장 우수하였다. 또한 대조물질인 kojic acid는 10 ppm에서 132%의 저해 효과를 보인 반면, 도화 열수 및 에탄올 추출물 10 ppm에서는 21.
- 6%를 나타내어 도화 에탄올 추출물의 tyrosinase 저해활성이 가장 우수하였다. 또한 대조물질인 kojic acid는 10 ppm에서 132%의 저해 효과를 보인 반면, 도화 열수 및 에탄올 추출물 10 ppm에서는 21.2, 24.8%를 나타내어 kojic acid 보다 높은 저해율을 나타내었다. 이는 Choi 등[2006]의 도깨비 뿌리 추출물의 tyrosinase 저해활성을 측정한 결과 10 μml에서 123%의 저해효과를 나타낸 결과보다 도화 추출물의 저해효과가 높았으며, Chun 등 [2002]의 Quercetin이 멜라닌 세포(Melan-a)의 tyrosinase 활성도를 측정한 결과와, Choi 등[2003]의 산수유 메탄올 추출물이 B16F10 malanoma 세포주의 멜라닌 생성에 미치는 영향에서 tyrosinase 활성도를 측정한 결과보다도 도화 주줄물의 melanoma 세포에서의 tyrosinase 저해활성이 더 우수함을 확인할 수 있었다’
- 5와 같이 나타내었다. 도화 열수 및 아세톤 추출물의 경우 U)0ppm에서 41.0, 29.0%의 멜라닌 저해 효과를 나타내었으며, 도화 에탄올 추출물의 경우 100 ppm에서 56.5%의 효과를 나타내어 멜라닌 저해 효과가 높은 것으로 나타났으며, Fig. 6에서 보듯이 control 에 비해 농도가 높아질수록 melanoma 세포의 색이 옅어짐을 확인할 수 있었다. 이는 Kwak 등[2004]의 치자 열매 추출물의 B16F10 melanoma 세포의 melanin 억제효과가 10 mg/mL에서 열수 추출물의 경우 36.
- 8 과 같이 측정하였다. 도화 열수 및 에탄을 추출물의 경우 1, 000 ppm에서 17.0, 25.0%의 collagenase 저해 활성을 나타낸 반면, 도화 아세톤 추출물의 경우 48.0%의 저해활성을 나타내 vitamin C 와 EDTA 500 ppm에서의 저해효과와 유사한 결과를 보였다. 이는 피부 내에서 collagenase의 활성을 억제힘으로서 coHagen의 분해를 막아 주름생성을 억제할 것으로 사료된다.
- 도화 추출물에 의한 fibroblast 세포의 생존율을 확인한 결과 Fig. 9와 같이 도화 열수 에탄올 및 아세톤 추출물의 경우 lOOppm 이하에서 20.0% 이하의 세포독성을 니타내었으며, vitamin C의 경우 같은 농도에서 fibroblast 세포에 91.0%의 세포독성을 나타내었다. 세포독성 결과로부터 collagen 생합성 시료 용액의 농도를 도화 추출물은 lOOppm 이하로 측정하였으며, vitamin C의 경우 세포독성이 미비한 10ppm 이하의 농도로 결정하여 coUagen 생합성량을 측정하였다.
- 10과 같이 나타내었다. 도화 열수 및 에탄올 추출물의 collagen 생합성량은 lOOppm에서 27.7, 37.7%의 효과를 나타내었으며, 도화 아세톤 추출물의 경우 l(X)ppm에서 41.0%의 collagen 생합성 촉진 효과를 나타내어, 도화 아세톤 추출물의 collagen 생합성 촉진 효과가 가장 우수하였다. 이는 10 ppm의 vitamin.
- 생합성 촉진효과가 47.0%에 비해 다소 낮은 효과를 보였으나, 천연 주름억제제로서의 가능성을 확인할 수 있었으며, Lee 등 [2004]의 유백피 추출물의 collagen 생합성량을 측정한 결과 200 ppm에서 유백피 추출물의 경우 44.4%, 대조약JI doxycyclire 의 경우 56.1% 효과를 나타내어, 도화 추출물의 효과가 높음을 알 수 있었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.