돼지 분변 및 도체에서 분리한 대장균, 장구균의 항생제 내성율 조사 Surveillance of antimicobial resistance ratio of E. coli and Enterococcus spp. isolated from fecal and carcasses of pigs in slaughterhouse원문보기
The present study was conducted to investigate isolation and antimicrobial resistance ratio of E. coli, E. faecium and E. faecalis from feces(l50 samples) and carcasses (150 samples) on slaughtered pigs from 6 slaughterhouse of 13 cities in the Gyeongnam during the period from January 2009 to Decemb...
The present study was conducted to investigate isolation and antimicrobial resistance ratio of E. coli, E. faecium and E. faecalis from feces(l50 samples) and carcasses (150 samples) on slaughtered pigs from 6 slaughterhouse of 13 cities in the Gyeongnam during the period from January 2009 to December 2009. Isolation ratio of E. coli from feces and carcasses were 98 (65.3%) and 110(73.3%), respectively, and simultaneously, E. faecalis and E. faecium from feces and carcasses were isolated 21 (14%), 52(34.7%) and 18(12%), 14 (9.3%), respectively. All E. coli isolated from feces and carcasses except cefepime (0%) and ceftiofur (0%) were exhibited 2.4~83.6% of resistance to teteracycline (83.6%), ampicillin (68.2%), streptomycin (60%), chloram-phenicol (53.8%) and cephalothin (2.4%). All E. faecalis isolated from feces and carcasses except penicillin(0%) and vancomycin (0%) were exhibited 2.7~80.8% of resistance to teteracycline (80.8%), quinupristin/dalfopristin (78%), erythromycin (56.1%), streptomycin (43.8%) and bacitracin (2.7%). All E. faecium isolated from feces and carcasses except gentamicin (0%), vancomycin (0%), florfenicol (0%), linezloid (0%) and bacitracin (0%) were exhibited 3.1~53.1% of resistance to rifampin (53.1%), erythromycin and tetracycline (25%), penicillin (15.6%), ciprofloxacin (9.3%), and streptomycin, chloramphenicol, and quinupristin/dalfopristin (3.1%). According to the heard size, resistance ratio of E. coli strains isolated from feces and carcasses in slaughtered pigs-breeding farms over 1,500 heard to tetracycline, ampicillin, streptomycin and chloramphenicol showed higher resistance ratio (1.0~16.8%) than those of farms-breeding under 1,500 heard. From the our results, we suggest that a few of antimicrobials were used in the Gyeongnam than the other cities.
The present study was conducted to investigate isolation and antimicrobial resistance ratio of E. coli, E. faecium and E. faecalis from feces(l50 samples) and carcasses (150 samples) on slaughtered pigs from 6 slaughterhouse of 13 cities in the Gyeongnam during the period from January 2009 to December 2009. Isolation ratio of E. coli from feces and carcasses were 98 (65.3%) and 110(73.3%), respectively, and simultaneously, E. faecalis and E. faecium from feces and carcasses were isolated 21 (14%), 52(34.7%) and 18(12%), 14 (9.3%), respectively. All E. coli isolated from feces and carcasses except cefepime (0%) and ceftiofur (0%) were exhibited 2.4~83.6% of resistance to teteracycline (83.6%), ampicillin (68.2%), streptomycin (60%), chloram-phenicol (53.8%) and cephalothin (2.4%). All E. faecalis isolated from feces and carcasses except penicillin(0%) and vancomycin (0%) were exhibited 2.7~80.8% of resistance to teteracycline (80.8%), quinupristin/dalfopristin (78%), erythromycin (56.1%), streptomycin (43.8%) and bacitracin (2.7%). All E. faecium isolated from feces and carcasses except gentamicin (0%), vancomycin (0%), florfenicol (0%), linezloid (0%) and bacitracin (0%) were exhibited 3.1~53.1% of resistance to rifampin (53.1%), erythromycin and tetracycline (25%), penicillin (15.6%), ciprofloxacin (9.3%), and streptomycin, chloramphenicol, and quinupristin/dalfopristin (3.1%). According to the heard size, resistance ratio of E. coli strains isolated from feces and carcasses in slaughtered pigs-breeding farms over 1,500 heard to tetracycline, ampicillin, streptomycin and chloramphenicol showed higher resistance ratio (1.0~16.8%) than those of farms-breeding under 1,500 heard. From the our results, we suggest that a few of antimicrobials were used in the Gyeongnam than the other cities.
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문제 정의
지금까지 가축에 대한 항생제 내성균의 분포 조사는 대부분 가축의 질병을 치료하기 위한 치료제 선발 목적으로 이루어진 것으로서 주로 가축의 병원성 세균에 대하여 실시하였으나 본 조사는 2008년부터 농림수산식품부가 주관하고 수의과학검역원과 전국 축산물위생 검사기관이 참여하는 ''축산 항생제 내성균 감시체계 구축” 사업과 병행하여 경상남도 내 사육되고 있는 돼지의 정상세균총에 대한 항생제 내성 실태를 파악하기 위하여 도내 도축장에 출하되는 돼지의 분변 및 도체에서 대장균과 장구균을 분리하여 항생제 내성을 조사하였다.
제안 방법
, Basingstoke, Hants, Eiigland)에 도말하여 37"C에서 하룻밤 배양한 후 금속 성 광택을 나타낸 집락을 선택하여 MacConkey agar (Becton Dickinson)에 다시 도말하여 37°C에서 하룻밤 배양하였다. 다음날 핑크색 집락을 선택하여 Vitek (bioMerieux Vitek, Hazelwood, MO) 및 생화학 검사로 최종 확인하였다.
도체 표면을 swab한 시료 1ml를 Azide dextrose btoth 9ml에 접종하여 36°C 48시간 증균 배양하였고 분리배양은 위의 분변시료 처리와 동일한 방법으로 실험하였다.
도체표면을 swab한 시료 1ml를 BGLB broth(Becton Dickinson) 접종하여 445°C에서 24〜48시간 동안 증균 배양하였고, 분리배양, Vitek과 생화학 검사는 분변 시료에서 분리 동정한 방법과 동일하게 실험하였다
군, 6 개 도축장에 출하된 돼지의 분변과 도체표면을 swab 한 시료를 균 분리에 사용하였다. 분변 및 도체 표면의 시료 채취는 항생제내성균검사 요령에 따라 균 분리를 하였으며, 돼지 분변 150시료, 돼지 도체 150시료 등 총 300시료를 채취하여 냉장상태를 유지하여 실험실로 운반하였으며, 균 분리는 시료채취 후 24시간 안에 처리하였다.
대상 데이터
2009년 1월에서 12월까지 경남도내 13개 시 . 군, 6 개 도축장에 출하된 돼지의 분변과 도체표면을 swab 한 시료를 균 분리에 사용하였다.
2009년 1월에서 12월까지 경남도내 13개 시 . 군, 6 개 도축장에 출하된 돼지의 분변과 도체표면을 swab 한 시료를 균 분리에 사용하였다. 분변 및 도체 표면의 시료 채취는 항생제내성균검사 요령에 따라 균 분리를 하였으며, 돼지 분변 150시료, 돼지 도체 150시료 등 총 300시료를 채취하여 냉장상태를 유지하여 실험실로 운반하였으며, 균 분리는 시료채취 후 24시간 안에 처리하였다.
항생제 감수성 시 험은 National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)의 disc diffusion 방 법으로 실시 하였다. 사용한 항생제 disc는 Becton Diekenson(BBL Sensi~Disk)에서 구입하였다. 대장균에 사 용한 disc는 ampicilin(10[ig, AM), amoxicillin/ clavulanic acid(30/10^g, AMC), cephalothin (30|ig, CF), cefepime (30|ig, FEP), ceftiofur (30ug, XNL), gentamicin (10^g, GM), apramycin (15p.
이론/모형
분변시 료는 Enterococcus agar (Becton Dickinson)에 직접 도말한 후 37°C에서 하룻밤 배양하였다. 다음날 까만색 집락을 선택하여 polymerase chain reaction (TCR) 법을 이용하여 E. faecium 및 E. faecalis를 동정하였다
도말 후 15분 이내에 항생제 Disc 를 dispenser로 접종한 후 35°C 16~18시간 배양하고 판독하였다. 판독 기준은 NCCLS의 기준에 따랐으며, 표준균주는 수의과학검 역원에서 분양받은 E. coli ATCC 25922, E.faecalis ATCC 29212를 사용하였다.
항생제 감수성 시 험은 National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)의 disc diffusion 방 법으로 실시 하였다. 사용한 항생제 disc는 Becton Diekenson(BBL Sensi~Disk)에서 구입하였다.
성능/효과
이 실험에서 항생제 내성율 조사는 2008년도부터 "축산 항생제 내성균 감시체계 구축” 사업과 병행하여 2009년도 도내 도축장에 출하한 돼지에 대한 대장균의 항생제 내성을 조사한 결과로 TE가 83.6%로 가장 높고, AM 68.2%, S 60%, C 53.8%, SXT 48.0%로 높은내성율을 보였는데(Table 1), 이는 2006년 전국 40농장에서 도축장에 출하된 돼지에서 분리한 대장균의 내성율인 TE 92.6%, AM 68.3%, S 68.0%, C 52.2%, SXT44.0%와 유사한 결과를 보였으며(임 등, 2007a, b), 2009년 전국 73개 농장에서 분리한 대장균에 대한 항생제 내성 조사 결과 TE 87.9%, AM 84.5%, S 75.9%, C 75.0%, SXT 70.7%(식품의약품안전청, 2009) 보다 낮은 내성률을 보여 경남지역 돼지사육농장이 전국의 다른 시 - 도보다 적은 항생제를 사용하는 것으로 판단된다.
9%로 비슷한 내성율을 보였으나. 43.8% 이상 높은 내성율을 보인 SYN, E, S은 도체 보다 분변에서 분리된 균의 내성율이 17.4〜32% 높게 나타났다(Table 2). E.
2%로 나타났다. 그리고 내성율 50% 이상을 보인 항생제 4종 모두 도체 보다 분변에서 분리된 대장균에서 내성율이 6-12% 높게 나타났다(Table 1).
1%, E 25%, TE 25% 였으며, GM, VA, FFC, LNZ 및 B의 내성율은 0%였다. 그리고 내성율이 높게 나타난 TE, RA, E은 분변 보다도 체에서 분리된 균에서 내성율이 19.1 〜31.7%로 높게 나타났다(Table 3).
대장균의 항생제별 내성율은 TE, AM, S과 C에 대하여 각각 83.6%, 68.2%, 60%와 53.8%를 나타내 었으며, 사육규모별 내성율은 1, 500두 이상 사육하는 농가에서 TE, AM, S과 C 등에 동일 항생제에 대하여 적게는 1-0%, 높게는 16.8%정도 높은 내성율을 보였다. 이러한 결과를 다른 시 .
9%의 내성을 보여 비슷한 종류의 항생제에서 높은 내성을 보이는 결과는 거의 일치 하지만, 타 시 . 도에 비하여 경남지역에서 E.faecalis균 항생제 내성율은 감소하는 것으로 나타났다. 이러한 결과의 원인은 다양하게 있을 수 있겠지만 질병 예방과 발생 또는 성장 촉진을 위하여각 시 .
도축장에 출하된 돼지에서 분리된 대장균 208 균주에 대하여 사육규모별 항생제 내성율을 조사한 결과항생제 내성율이 비교적 높은TE, AM, S, C 등이 1, 500 두 이상 사육하는 농가에서 1.0〜16.8%정도 높은 내성율을 보였다(Table 4).
또한 닭 분변에서 분리한 대장균의 내성 조사 결과 TE 86.8%, AM 48.1%, S 61.3%, C 31.1%, SXT 35.8%(김 등, 2007)와 소 분변에서 분리한 대장균의 항생제에 대한 내성 조사 결과에서 나타난 TE 40.8%, AM 11.3%, S 23.5%, C 5.9%(임 등(2007a, b)의 결과와 이번 연구에서 나타난 TE 87.7%, AM 73.4%, S 63.2%, C 60.2%, SXT 47.9%의 결과를 비교하면 닭이나 소에 비하여 돼지에서 유래된 대장균의 내성 율이 매우 높게 나타났다. 이는 돼지가 소에 비하여 질병 발생이 많고 밀집 사육 등으로 인한 질병 발생을 억제하기 위하여 사료첨가용 및 치료용 항생제를 많이 사용하고 있기 때문으로 판단되며, 이 결과는 과거 또는 현재의 축산분야에서 치료와 예방목적으로 사용하는 항생제의 종류와 사용량의 증가와 직접적으로 관계가 있는 것으로 생각되며 축종별 항생제의 사용량이 돼지, 닭 및 소 순으로 많이 사용되고, 2002 〜2008년 실제로 가축에서 사용되고 있는 항생제중 돼지에 54〜57%가 사용된 것으로 보아(하 등, 2003; 식품의약품안전청, 2009) 이러한 높은 내성률은 항생제의 사용량과 관련이 있는 것으로 추정된다.
이번 시험에서 대장균에 대한 Fluroroquinolone 계열항생제의 내성률 조사 결과 CIP 3.8%, ENO이 3.8%, Cephem계 항생제인 CF 2.4%, XNL 0%를 보였는데, 이는 2003년 전국 도축장 조사 결과 CIP 8.1%, ENO 8.1%, CF 8.1%(송 등, 2004), 2008〜2009년 전국 돼지농장을 대상으로 조사한 CIP 29.3%, CF 18.1%, XNL0%(식품의약품안전청, 2009)보다는 매우 낮은 수치로 경남지역 농가에서 아직까지 이 계열의 약제에 대한 사용이 미미한 것으로 생각되나 전국적으로 내성률이 증가추세에 있어 앞으로 경남지역에서 이 약제에 대한 모니터링이 필요할 것으로 생각된다.
이번 시험에서 분리된 대장균 208균주에 대하여 사육 규모별 항생제 내성율 조사한 결과 1, 500두 이상 사육하는 농장에서 적게는 1.0%에서 높게는 16.8% 정도까지 TE, SXT, AM, FFC, C와 S에 내성율을 보였는데, 이는 사육규모가 클수록 밀사 등 사육환경 이 불량하여 질병의 예방이나 치료를 위하여 항생제를 많이 사용하고 있는 것으로 판단되어 밀사 등 사육환경의 개선이 무엇보다 절실히 요구된다.
이번 조사에서 E.faecium 내성율을 제외하고 분변이나 도체에서 분리한 대장균과 장구균이 TE에 대해 비록 가장 높은 내성율을 보였지만, 대장균에 대한 TE의 내성율이 2003년 90.2%, 2006년 92.6%, 2009년 87.9%에 비하여 이번 조사에서 83.6%로 점차 내성률이 줄어드는 경향을 보였는데 이는 TE 의 사용량이 '03년부터 '05년까지 전체 판매되는 항생제의 약 47~51%를 차지하였으나 '06년 46%, , 07년과, 08년에는 40% 이하로 조사되어(식품의약품안전청, 2009) TE 사용의 감소와 어느 정도 연관성이 있는 것으로 판단되지만 본 조사 결과 아직도 가장 높은 내성율을 보이는 것은 이 TE가 주로 저 농도의 배합사료 첨가항생제로 오랫동안 사용된 결과로 사료된다.
장구균인 E. faecalis6^ 대한 항생제 내성율은 2006 년 도축장 조사 결과 TE 98.7%, SYN 100%, E 66.0%, S 57.3%, C 29.3%, 2009년 돼지농장 조사 결과 TE 99.0%, E 85.1%, S 69.3%, C 60.4%(임 등, 2007; 식품의약품안전청, 2009)인데 비하여 이번 시험에서는 TE80.8%, SYN 78%, E 56.1%, S 43.8%, C 21.9%의 내성을 보여 비슷한 종류의 항생제에서 높은 내성을 보이는 결과는 거의 일치 하지만, 타 시 . 도에 비하여 경남지역에서 E.
항생제별 내성율을 보면 RA 53.1%, E 25%, TE 25% 였으며, GM, VA, FFC, LNZ 및 B의 내성율은 0%였다. 그리고 내성율이 높게 나타난 TE, RA, E은 분변 보다도 체에서 분리된 균에서 내성율이 19.
항생제별 내성율을 보면 TE 80.8%, SYN 78%, E 56.1%, S 은 43.8%였으며, P 및 VA 의 내성율은 0%, B, LNZ 및 CIP 의 내성율은 2.7〜 10.9%로 나타났다. 그리고 내성율 80.
항생제별 내성율을 보면 TE 83.6%, AM 68.2%, S 60%, C 53.8%로 나타났고, FEP 및 XNL은 내성율이 0%였으며, CF, CIP, ENO 및 AMC의 내성율은 2.4% ~7.2%로 나타났다. 그리고 내성율 50% 이상을 보인 항생제 4종 모두 도체 보다 분변에서 분리된 대장균에서 내성율이 6-12% 높게 나타났다(Table 1).
후속연구
이러한 결과의 원인은 다양하게 있을 수 있겠지만 질병 예방과 발생 또는 성장 촉진을 위하여각 시 . 도 또는 농가별로 사용한 항생제량을 정확하게 알 수 없기 때문에 결론을 도출하기에는 어려움이 있으며, 보다 정확한 분석이 필요할 것으로 생각된다.
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