곤충병원세균(Photorhabdus temperata ssp. temperata) 유래 곤충 면역 억제물질 생성 비교 연구를 통한 저렴한 세균 배지 선발 Comparative Analysis of Immunosuppressive Metabolites Synthesized by an Entomopathogenic Bacterium, Photorhabdus temperata ssp. temperata, to Select Economic Bacterial Culture Media원문보기
곤충병원세균인 Photorhabdus temperata ssp. temperata(Ptt)는 곤충의 면역반응을 억제시켜 피기생 곤충 체내에서 공생하는 기주 선충의 발육을 도모하게 된다. 또한 Ptt의 변역억제 활성은 Bacillus thuringiensis(Bt)의 병원성을 증가시킨다. 본 연구는 이러한 유용 곤충병원세균의 대량 생산을 위한 저렴한 배지를 선발하기 위해 수행되었으며, 두 연구용 배지(LB, TSB)와 저렴한 산업용 두 배지(MY, M2)를 상호 비교하였다 모든 배양액에 동일한 밀도의 Ptt를 접종하고 배양하였을 때 48 시간 이후 정지상이 나타났다. 그러나 연구용 배양액인 LB와 TSB에서 두 가지 산업용 배양액보다 정지상에서 높은 세균 밀도를 보였다. 네 가지 배지에서 증식된 Ptt 배양액은 모두 배추좀나방(Plutella xylostella) 3령충에 대한 Bt 병원성을 현격하게 제고시켰고, 이들 배지 종류에 따라 치아가 없었다. 네 가지 배양액에서 세균의 증식에 의해 생산되는 대시물질의 양과 배지별 생산되는 대사물질의 동일성을 확인하기 위해 헥산과 에틸아세테이트의 유기용매로 추출했다. 시간별 배양액의 유기용매 추출물질은 세균의 증식과 비슷하게 대사물질의 생산량에서도 증가하는 것을 알 수 있었다. 역상 HPLC를 이용하여 네 가지 세균 배양액 각각에서 대사물질을 분리하였고, 정량적으로 네 가지 대사물질이 서로 다른 배지에서 통계적으로 차이 없이 검출되었다. 본 연구는 비교적 저렴한 두 가지 산업용 배지가 유용 대사물질의 생성에 변화 없이 Ptt 세균을 저렴하게 배양할 수 있다고 제시하고 있다.
곤충병원세균인 Photorhabdus temperata ssp. temperata(Ptt)는 곤충의 면역반응을 억제시켜 피기생 곤충 체내에서 공생하는 기주 선충의 발육을 도모하게 된다. 또한 Ptt의 변역억제 활성은 Bacillus thuringiensis(Bt)의 병원성을 증가시킨다. 본 연구는 이러한 유용 곤충병원세균의 대량 생산을 위한 저렴한 배지를 선발하기 위해 수행되었으며, 두 연구용 배지(LB, TSB)와 저렴한 산업용 두 배지(MY, M2)를 상호 비교하였다 모든 배양액에 동일한 밀도의 Ptt를 접종하고 배양하였을 때 48 시간 이후 정지상이 나타났다. 그러나 연구용 배양액인 LB와 TSB에서 두 가지 산업용 배양액보다 정지상에서 높은 세균 밀도를 보였다. 네 가지 배지에서 증식된 Ptt 배양액은 모두 배추좀나방(Plutella xylostella) 3령충에 대한 Bt 병원성을 현격하게 제고시켰고, 이들 배지 종류에 따라 치아가 없었다. 네 가지 배양액에서 세균의 증식에 의해 생산되는 대시물질의 양과 배지별 생산되는 대사물질의 동일성을 확인하기 위해 헥산과 에틸아세테이트의 유기용매로 추출했다. 시간별 배양액의 유기용매 추출물질은 세균의 증식과 비슷하게 대사물질의 생산량에서도 증가하는 것을 알 수 있었다. 역상 HPLC를 이용하여 네 가지 세균 배양액 각각에서 대사물질을 분리하였고, 정량적으로 네 가지 대사물질이 서로 다른 배지에서 통계적으로 차이 없이 검출되었다. 본 연구는 비교적 저렴한 두 가지 산업용 배지가 유용 대사물질의 생성에 변화 없이 Ptt 세균을 저렴하게 배양할 수 있다고 제시하고 있다.
An entomopathogenic bacterium, Photorhabdus temperata ssp. temperata (Ptt), suppresses insect immune responses and facilitates its symbiotic nematode development in target insects. The immunosuppressive activity of Ptt enhances pathogenicity of various microbial pesticides including Bacillus thuring...
An entomopathogenic bacterium, Photorhabdus temperata ssp. temperata (Ptt), suppresses insect immune responses and facilitates its symbiotic nematode development in target insects. The immunosuppressive activity of Ptt enhances pathogenicity of various microbial pesticides including Bacillus thuringiensis (Bt). This study was performed to select a cheap and efficient bacterial culture medium for large scale culturing of the bacteria. Relatively cheap industrial bacterial culture media (MY and M2) were compared to two research media, Luria-Bertani (LB) and tryptic soy broth (TSB). In all tested media, a constant initial population of Ptt multiplied and reached a stationary phase at 48 h. However, more bacterial colony densities were detected in LB and TSB at the stationary phase compared to two industrial media. All bacterial culture broth gave significant synergism to Bt pathogenicity against third instars of the diamondback moth, Plutella xylostella. Production of bacterial metabolites extracted by either hexane or ethyl acetate did not show any significant difference in total mass among four culture media. Reverse phase HPLC separated the four bacterial metabolites, which were not much different in quantities among four bacterial culture broths. This study suggests that two industrial bacterial culture media can be used to economically culture Ptt in a large scale.
An entomopathogenic bacterium, Photorhabdus temperata ssp. temperata (Ptt), suppresses insect immune responses and facilitates its symbiotic nematode development in target insects. The immunosuppressive activity of Ptt enhances pathogenicity of various microbial pesticides including Bacillus thuringiensis (Bt). This study was performed to select a cheap and efficient bacterial culture medium for large scale culturing of the bacteria. Relatively cheap industrial bacterial culture media (MY and M2) were compared to two research media, Luria-Bertani (LB) and tryptic soy broth (TSB). In all tested media, a constant initial population of Ptt multiplied and reached a stationary phase at 48 h. However, more bacterial colony densities were detected in LB and TSB at the stationary phase compared to two industrial media. All bacterial culture broth gave significant synergism to Bt pathogenicity against third instars of the diamondback moth, Plutella xylostella. Production of bacterial metabolites extracted by either hexane or ethyl acetate did not show any significant difference in total mass among four culture media. Reverse phase HPLC separated the four bacterial metabolites, which were not much different in quantities among four bacterial culture broths. This study suggests that two industrial bacterial culture media can be used to economically culture Ptt in a large scale.
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문제 정의
본 연구는 실험용 배지와 재료 성분이 비슷한 산업용 배지를 선택하기 위해 실험에 사용된 LB 액체배지와 유사한 yeast extract 액체배지인 Media Yeast (MY) 액체배지와 TSB 배지와 유사한 a)y 액체배지인 Media 204 (M2) 액체배지를 이용하여 곤충병원세균의 배양 및 그 대사물질을 확인하였다 또한 이 곤충병원세균의 다양한 배양액이 배추좀나방(PlMteHa 刼成I)에 대한 Bt의 감염력을 증가시키는지를 조사하였다. 끝으로 병원세균에서 분비되는 물질을 추적하기 위해 이들 배양을 분리하여 분획구에 포함된 화학물질 존재를 역상 HPLC를 이용하여 분석하였다.
가설 설정
각 배지 1 L를 제조하는데 투입되는 비용을 산정 딩-시(2010년 9월 29일)의 소비자 가격을 기준으로 산출하였다. 이때 연구용 TSB, LB 배지는 각각 13, 264원과 4205원이며 산업용 MY 및 M2 배지는 각각 580원과 754원으로 연구용 배지보다 산업용 배지가 7~22배 저렴했다.
제안 방법
60x250 mm, Gemini C18, Phenomenex, Torrance, CA, USA)。] 장착된 HPLC (Waters 600, Waters, Milford, DE, USA)를 이용하여 분석하였다. HPLC 분석조건은 이동싱■으로 methanol : water (50:50, v/v)를 사용하였고, 유속을 분당 0.5 m止로 하였으며, 용출된 화합물의 피크들은 UV 254 nm 조건에서 photo diode array 검출기(Waters 996, Waters)로 파장에 대한 흡수특성을 분석하였다
kurstaki로서 32, 000 IU/mg의 활성을 보유하였다. LB, TSB, MY, M2 배지에서 배양된 곤충병원세균 배양액에 Bt가 10 ppm이 되도록 첨가하였다. 유기용매 추출액은 dimethyl sulfoxide (Sigma-Aldrich Korea, Seoul, Korea)를 이용하여 녹였고 다시 증류수를 이용하여 희석 현탁액을 제조하였다.
LB, TSB, MY, M2 액체배지에서 4, 8, 12, 24, 36, 48, 60 시간 배양된 1 L의 용액을 5,000 ipm에서 20 분간 원심분리한 후 상층액을 분별깔때기(2 L, Horex, Siheung, Korea)로 수집했다 헥산 추출은 이 배앙액에 330 mL씩 3회 반복하여 실시하였다 매 반복 배양액과 헥산(Sigma-Aldrich Korea, Seoul, Korea) 용매의 혼합을 10분간 유도하였으며, 층 분리는 중력을 이용하여 25℃ 에서 2 시간 동안 실시하였다 추출된 헥산층(990 mL)은 서로 혼합하였으며, 남은 배양액은 다시 에틸아세테이트(Sigma-Aldrich Korea) 추출에 이용되었다 에틸아세테이트 추출도 마찬가지로 상기의 방법으로 330 mL씩 3회 실시되었다 추출된 두 유기용매 층은 회전 농축기(N-1000, Eyala, Tokyo, Japan)를 이용하여 37 士 1℃에서 1시간 동안 150 ipm 속도의 조건에서 농축되었다
TLC 판(Merck, Darmstadt, Germany) 에 분획구 물질 (200 由)을 각각 처리한 후 methanol : ethyl acetate (4:1, v/v)의 전개용액을 이용하여 물질 분리를 실시하였다. 전개 용액이 정점에 이르면, TLC 판을 자외선 투영기 (Spectroline, New York, USA)를 통하여 분리 띠를 확인한 후, sea sand (Junsei, Tokyo, Japan)와 iodine (Duksan, Ansan, Korea) 혼합물(19:1, g/g) 100 g이 담겨진 병에서 발색시켰다.
20 urn의 PTFE syringe filter (DISMIC-13HP, Advantec, Anyang, Gyeonggi, Korea)로 여과한 후, 고정상으로 C18 역상 컬럼(0 4.60x250 mm, Gemini C18, Phenomenex, Torrance, CA, USA)。] 장착된 HPLC (Waters 600, Waters, Milford, DE, USA)를 이용하여 분석하였다. HPLC 분석조건은 이동싱■으로 methanol : water (50:50, v/v)를 사용하였고, 유속을 분당 0.
이 현탁액에 배추잎(1 cm)을 10 분간 침지시킨 후 여과지가 깔려진 용기(직경 9 cm)에서 5 분간 건조시켰다. 각 배추잎에 배추좀나방 3령충을 10 마리씩 3 반복으로 처리하였으며, 매일 24 시간 주기로 5 일 동안 생존수를 계수하였다 대조구는 Bt 단독 또는 살균수로 상기와 동일하게 처리하였다
각각의 배지에서 48 시간 동안 배양시킨 배양액의 살충력 차이를 확인하기 위해 Bt (10 ppm) 생물농약을 혼합하여 배추좀나방 3령 유충에 대해 섭식 처리 효과를 분석했다 (Fig. 2). Bt 단독으로는 약 20%의 살충율을 기록했지만, Ptt 배양액과 혼합할 경우 LB, TSB, MY M2 배지 모두에서 Bt의 병원력을 현격하게 증가시키는 것으로 나타냈다.
1). 곤충병원세균인 Ptt를 각각 LB, TSB, MY M2 배지에 2.5 X 104 cfii/mL 접종하고 배양 4 시간마다 분광광도계를 이용하여 OD590를 측정하여 세균밀도 변화를 추적했다 모든 배지 조건에서 세균은 48 시간 이후에 정지상에 이르게 되었다. 이때 각각 LB, TSB, MY, M2 배지를 비교해보면 연구용 배지가 산업용 배지 보다 성장 속도가 빠른 것으로 보였다 또한 정지상에 이른 세균 밀도를 비교하여 보면 연구용 배지 중에서도 TSB 배지(7.
조사하였다. 끝으로 병원세균에서 분비되는 물질을 추적하기 위해 이들 배양을 분리하여 분획구에 포함된 화학물질 존재를 역상 HPLC를 이용하여 분석하였다.
네 가지의 정지기의 세균배양액 헥산 분획구와 에틸아세테이트 분획구를 TLC를 이용하여 각각의 배지에서 배양된 대사물질의 동일성의 여부를 확인하였다(Figs. 3C, D). 네 가지 세균 배양액의 헥산 분획구가 유사하게 나타났으며 에틸아세테이트 분획구 또한 유사하게 나타났다.
둘째로 산업용 배지에서 성장되고 세균이 생산하는 물질은 연구용 배지와 유사하게 대사물질 총생산량에서 차이를 보이지 않았다 세균의 이차대사산물을 본 연구에서는 유기용매 추출물의 질량으로 분석했다. 이때 세균 배양에 따라 이들 이차대사산물의 생산량이 증가했으며, 세균의 성장곡선에 비추어 거의 정지상에 다다르는 시점에서 이차대사산물의 양도 최대치에 이르는 것을 보였다.
이 동결 시료가 추후 반복되는 세균 배양의 원시료로 이용되어 계대배양에 따른 세균 변이 가능성을 줄였다 글리세롤 동결 세균 시료 250 此를 1 L의 LB 액체배지에 첨가하고 28℃ 에서 200 rpm의 속도로 회전 배양하였다. 배양 후 4, 8, 12, 24, 36, 48, 60 시간마다 분광광.도계(Uvikon 930, Kontron, Ales, France)를 이용하여 590 nm에서 흡광도를 측정하였다 정지상에 이른 48 시간 배양액이 생물검정과 물질 분리에 이용되었다
본 연구에서 비교 분석된 네 가지 배지의 전체 단가를 비교했다. 각 배지 1 L를 제조하는데 투입되는 비용을 산정 딩-시(2010년 9월 29일)의 소비자 가격을 기준으로 산출하였다.
서로 다른 배지에서 배양 시간별로 배양액을 수거하여 헥산과 에틸 아세테이트의 유기 용매로 이차대사산물 생산량을 측정하였다(Rgs. 3A, B). 헥산 분획구의 경우 네 가지배양액의 교반배양 최초 측정 시간인 4 시간부터 대사물질이 발생하기 시작하며 36 시간 이상의 배양액에서는 대사물질의 정지기인 것을 알 수 있었다.
세균배양액으로부터 유기용매를 이용하여 준비된 헥슨上 분획구, 에틸아세테이트 분획구 물질들을 TLC로 분리하였다. TLC 판(Merck, Darmstadt, Germany) 에 분획구 물질 (200 由)을 각각 처리한 후 methanol : ethyl acetate (4:1, v/v)의 전개용액을 이용하여 물질 분리를 실시하였다.
이상에서 추출한 두 용매 층의 물질 조성을 알아보기 위해 역상 HPLC를 통해 물질을 분리하였다(Fig. 4). 네가지 배지 종류별 대사물질의 분획구의 분리 피크가 유사하게 검출되었다(Figs.
TLC 판(Merck, Darmstadt, Germany) 에 분획구 물질 (200 由)을 각각 처리한 후 methanol : ethyl acetate (4:1, v/v)의 전개용액을 이용하여 물질 분리를 실시하였다. 전개 용액이 정점에 이르면, TLC 판을 자외선 투영기 (Spectroline, New York, USA)를 통하여 분리 띠를 확인한 후, sea sand (Junsei, Tokyo, Japan)와 iodine (Duksan, Ansan, Korea) 혼합물(19:1, g/g) 100 g이 담겨진 병에서 발색시켰다.
, 2004) 동결보관중인 것을 이용하였다 이들 균주는 LB(1 L 제조시 bacto trypton 10 g, yeast extract 5 g, sodium chloride 10 g) 배지를 이용하여 28℃ 에서 12 시간동안 배양하여 단일균총을 채취하였다. 채취된 단일 균총을 다시 LB, TSB(24 g/L, Bectondickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA) 배지와 산업용 LB 배지인 MY 배지(1 L 제조시 glucose 20 g, L-monosodium glutamate 12 g, yeast extract 2.5 g, monopotassium phosphate 1 g, calcium chloride 1 g, magnesium sulfate 0.3 g, copper (II) sulfate 0.03 g, manganese sulfate 0.02 g, iron (II) sulfate 0.02 g, zinc sulfate 0.02 g)와 산업용 TBS 배지인 M2 배지(1 L 제조시 glucose 20 g, soybean flour 25 g, monopotassium phosphate 2 g, calcium caibonate 1 g, magnesium sulfate 0.3 g, copper (II) sulfate 0.01 g, manganese sulfete 0.02 g, iron (II) sulfate 0.02 g, zinc sulfate 0.02 g)를 이용흐卜여 28℃ 에서 12 시간 동안 200 ipm의 속도로 회전 배양한 후 글리세롤을 30%의 농도가 되도록 첨가한 후 동결 분획시료를 만들었다. 이 동결 시료가 추후 반복되는 세균 배양의 원시료로 이용되어 계대배양에 따른 세균 변이 가능성을 줄였다 글리세롤 동결 세균 시료 250 此를 1 L의 LB 액체배지에 첨가하고 28℃ 에서 200 rpm의 속도로 회전 배양하였다.
대상 데이터
Control represents cabbage soaking in sterile water. Each dose treatment used 30 larvae with three replications. Mortality was estimated at 48 h after the treatment Different letters above standard deviation bats indicate significant difference among means at Type I error = 0.
곤충병원세균인 P- temperata temperata ANU101은 기주 선충에서 분리된 후(bark et al., 1999; Kang et al., 2004) 동결보관중인 것을 이용하였다 이들 균주는 LB(1 L 제조시 bacto trypton 10 g, yeast extract 5 g, sodium chloride 10 g) 배지를 이용하여 28℃ 에서 12 시간동안 배양하여 단일균총을 채취하였다. 채취된 단일 균총을 다시 LB, TSB(24 g/L, Bectondickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA) 배지와 산업용 LB 배지인 MY 배지(1 L 제조시 glucose 20 g, L-monosodium glutamate 12 g, yeast extract 2.
배양 후 4, 8, 12, 24, 36, 48, 60 시간마다 분광광.도계(Uvikon 930, Kontron, Ales, France)를 이용하여 590 nm에서 흡광도를 측정하였다 정지상에 이른 48 시간 배양액이 생물검정과 물질 분리에 이용되었다
본 연구는 2010년도 농촌진흥청 아젠다 사업(대과제명: 화학농약 대체기술)으로부터 지원받아 수행하였다 본 연구사업 기간 동안 서삼열은 교육과학기술부의 2단계 BK21 사업을 통해 지원받았다
시험곤충은 안동시 송천동에 소재한 배추밭에서 채집한 유중을 약제 처리하지 않고 실내에서 누대 사육한 것을 사용하였다. 유충은 온도 25 ± 1℃, 광주기 16:8 h (L:D), 상대습도 4360%의 배양기에서 배추를 먹이로 사육했다.
LB, TSB, MY, M2 배지에서 배양된 곤충병원세균 배양액에 Bt가 10 ppm이 되도록 첨가하였다. 유기용매 추출액은 dimethyl sulfoxide (Sigma-Aldrich Korea, Seoul, Korea)를 이용하여 녹였고 다시 증류수를 이용하여 희석 현탁액을 제조하였다. 이 현탁액에 배추잎(1 cm)을 10 분간 침지시킨 후 여과지가 깔려진 용기(직경 9 cm)에서 5 분간 건조시켰다.
데이터처리
모든 살충효과 시험 결과는 백분율 자료로서 arcsine 변환 후 SAS의 PROC GLM (SAS Institute, 1989)을 이용하여 ANOVA 분석 및 처리 평균간 비교를 실시하였다.
성능/효과
본 연구는 비교적 가격 면에서 저렴한 산업용 배지", M2)가 연구용 배지(LB, TSB)만큼 곤충병원세균의 배양능력 및 유용 대사물질 생산을 유지하는 것을 나타냈다. 첫째呈 산업용 배지들은 모두 연구용 배지와 유사하게 성장곡선을 나타내어 48 시간 이후에 정지상에 이르는 세균성장 패턴을 보였다' 그러나 정지상에 도달한 세균 집단밀도는 연구용 배지에 비해 산업용 배지에서 다소 낮은 밀도를 보였다 그러나 이때 세균을 제외한 배양액에는 병원력에 영향을 주는 인자가 유사하게 분포했다는 것을 알 수 있다.
2). Bt 단독으로는 약 20%의 살충율을 기록했지만, Ptt 배양액과 혼합할 경우 LB, TSB, MY M2 배지 모두에서 Bt의 병원력을 현격하게 증가시키는 것으로 나타냈다. 배양액에 따른 이러한 Bt 병원력 증가 효과에서는 차이가 없었다(F = 0.
4A, B). 극성이 높은 펩타이드류(Ac-FGV, PY, cPY)는 5~7분 사이에 검출되었고 극성이 낮은 BZA는 27~28분 사이에서 검출되는 것을 확인할 수 있었다 헥산 추출물의 경우 주로 펩타이드류가 주요 피크로 분리되었고, 에틸아세테이트 추출물의 경우 BZA가 주요피크로 나타났다. 이를 정량적으로 비교하여 보면 네 가지 배양액에서 유사하게 이들 면역억제물질을 생산한다는 것을 확인할 수 있지만(Figs.
3C, D). 네 가지 세균 배양액의 헥산 분획구가 유사하게 나타났으며 에틸아세테이트 분획구 또한 유사하게 나타났다.
본 연구 결과에서 네 가지 세균 배지 배양액에서 비롯된 두 가지 유기 용매 추출물은 역상 HPLC 분석에서 다양한 검출 피크를 나타냈다. 이들 가운데 주요 피크는 기존에 X.
3 mg/mL의 생산량을 보여다. 에틸아세테이트 분획구의 네 가지 배양액 또한 헥산 분획구와 비슷한 생산 곡선을 나타내었으며 정지기(F = 0.62; df =3, 88; P = 0.6034)의 에틸아세테이트 추출물은 6.0 士 0.5 mg/mL라는 것을 알 수 있었다.
5 X 104 cfii/mL 접종하고 배양 4 시간마다 분광광도계를 이용하여 OD590를 측정하여 세균밀도 변화를 추적했다 모든 배지 조건에서 세균은 48 시간 이후에 정지상에 이르게 되었다. 이때 각각 LB, TSB, MY, M2 배지를 비교해보면 연구용 배지가 산업용 배지 보다 성장 속도가 빠른 것으로 보였다 또한 정지상에 이른 세균 밀도를 비교하여 보면 연구용 배지 중에서도 TSB 배지(7.4 X 1013 cfb/mL)가 LB 배지(6.2 x 1013 cfb/mL)보다 높은 성장 효과를 나타냈으며, 산업용 배지의 경우 MY 배지(7.8 X 1012 cfij/mL)가 M2 배지(6.4 x 1011 cfWmL)보다 효율이 높은 것으로 나타났다.
추출물의 질량으로 분석했다. 이때 세균 배양에 따라 이들 이차대사산물의 생산량이 증가했으며, 세균의 성장곡선에 비추어 거의 정지상에 다다르는 시점에서 이차대사산물의 양도 최대치에 이르는 것을 보였다. 세균의 경우 자신들이 분버]흐}'는 물질에 따라 서로의 밀도를 감지할 수 있는 quorum seising 기작을 갖고 이에 따라 이차대사산물의 생합성 관련 유전자의 발현을 유도할 수 있다고 알려지고 있다(De main, 1998).
극성이 높은 펩타이드류(Ac-FGV, PY, cPY)는 5~7분 사이에 검출되었고 극성이 낮은 BZA는 27~28분 사이에서 검출되는 것을 확인할 수 있었다 헥산 추출물의 경우 주로 펩타이드류가 주요 피크로 분리되었고, 에틸아세테이트 추출물의 경우 BZA가 주요피크로 나타났다. 이를 정량적으로 비교하여 보면 네 가지 배양액에서 유사하게 이들 면역억제물질을 생산한다는 것을 확인할 수 있지만(Figs. 4C, D), 특별히 산업용 배지인 MY 배지에서는 비교적 안정적으로 높게 생산한다는 것을 확인할 수 있었다.
후속연구
특별히 산업용 배지에서 성장한 세균이 이들 네 가지 물질을 모두 분비했다는 것은 다시 앞에서 기술된 Bt 병원력 증가 효과가 버]■로 이들 물질에 의해 야기되었음을 반증하는 것이다. 따라서 추후 Ptt를 이용하여 Bt의 협력제로 개발을 위해서는 가격이 저렴한 산업용 배지를 통해 대량」胯이 가능하다는 것을 본 연구를 통해 제시한다
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