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문제 정의
- Acetone은 USFDA법이나 AOAC법에서 대상 성분과 유사한 물리화학적 특성을 나타내는 농약 잔류분을 추출하는데 보편적으로 사용되는 표준적 용매로서 이미 많은 연구자들에 의하여 농약 추출에 그 효율과 재현성이 인정된바 있다(Kwon 등, 2008). 농산물 추출물로부터 methoxyfe- nozide, chromafenozide 및 tebufenozide 성분 외에 추출 혼입된 농산물 유래 불순물을 세척하기 위한 조정제 분배법으로 H-hexane, n-hexane/dichloromethane 혼합액, dichloro methane 및 문헌적으로 대상 농약의 추출 효율이 우수하다고 보고된(Lin 등, 2008) IM NaOH가 함유된 염기성 조건의 dichloromethane을 분배용매로 이용하여 최적의 분배법을 확립하고자 하였다. 분석대상 농약이 비교적 낮은 극성 혹은 중간극성을 나타내는 점을 감안하여 수용성 유기용매 추출액을 포화식염수/증류수로 희석한 후 직접 비극성 용매인 n-hexane 이나 n-hexane/dichloromethane 혼합액, 혹은 낮은 극성을 나타내는 dichloromethane 등으로 분배하는 방법을 검토하였다(Table 4).
- 따라서 본 연구에서는 물리화학적 특성이 유사한 metho xyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide를 대상으로 계열별 분석법을 확립하여 농축 유지 제거과정 및 정제과정이 간소화된 신뢰성 높은 HPLC-UVD/MS 동시분석법을 확립하여 일상적 분석법으로서의 범용성과 효율성을 극대화 하고자 하였다.
제안 방법
- 필요할 것이다. 또한 본 연구의 대상 시료들 중 일부 시료인 현미와 콩은 지방 함량이 최대 20% 이상 함유되어 있을 수 있으므로 비극성 지방성분을 제거하는 데 효율이 높은 "-hexane/acetouitrile법과 같은 지방 제거법을 적용하여 분해효율을 검토하였다(Table 5). n-Hexane/acetonit- rile 분배를 2회 수행하였을 때 각 성분별 회수율이 최소 97% 이상을 나타내었고, 3회의 분배를 수행하여도 회수율이 크게 향상되지 않는 양상을 나타내었으므로, 유지 등 비극성 간섭물질의 제거를 위한 n-hexane/acetonitrile 분배법은 분획 조건 I로 분배하는 것으로 설정하였으며, 이 방법은 고 유지 시료로 판단되는 콩 및 현미 시료의 회수율 시험에 적용할 계획이며, 반면 지방함량이 1% 미만인 저 지방 시료인 배추, 사과, 고추 등에서는 그 정제정도가 극히 미미할 것으로 판단되어 n-hexane/acetonitrile 분배과정을 생략하고 회수율 시험을 수행하였다.
- 150 mL의 acetone 에 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 혼합 표준용액(2 mg/L) 1 mL를 첨가하고, 50 mL의 포화식염수와 450 mL의 증류수를 가한 뒤, 분액여두에 옮기고, 분배용매로 n-hexane 100 mL, n-hexane/dich- loromethane(20/80, v/v) 100 mL, dichloromethane 50 mL (x 2회) 및 문헌적으로 우수한 추출효율을 보인다고 보고된 (Lin 등, 2008) IM NaOH를 첨가한 dichloromethane 50 mL (X 2회)로 처리를 달리하여 각각 추출하였다. 각 분배 추출액은 무수 sodium sulfhte에 통과시켜 수분을 제거하고 40°C 이하에서 감압농축 하였다.
- HPLC-UVD/MS# 이용하여 농산물 시료에서 diacylhy- drazine계 살충제인 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebiifEozide의 잔류 분석법을 확립하였다. 농산물 시료에 acetone을 가하여 추출된 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 잔류분은 dichloromefhane 분배 법과 florisil 흡착 크로마토그래피법으로 정제하여 분석대상 시료로 하였다.
- Methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 각 표준용액 0.05~0.5 mg/kg을 20 μL씩 HPLC에 주입하여 크로마토그램의 signal/noise의 비를 구하여 LOD 및 LOQ를 계산하였다.
- Methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 농도별 표준용액은 각각의 stock solution을 혼합하여 성분별 0.02-2 mg/L의 농도가 되도록 차례로 희석하고, 20 yL를 HPLC에 주입하여 peak의 면적을 기준으로 표준 검량선을 작성하였다.
- 또한 본 연구의 대상 시료들 중 일부 시료인 현미와 콩은 지방 함량이 최대 20% 이상 함유되어 있을 수 있으므로 비극성 지방성분을 제거하는 데 효율이 높은 "-hexane/acetouitrile법과 같은 지방 제거법을 적용하여 분해효율을 검토하였다(Table 5). n-Hexane/acetonit- rile 분배를 2회 수행하였을 때 각 성분별 회수율이 최소 97% 이상을 나타내었고, 3회의 분배를 수행하여도 회수율이 크게 향상되지 않는 양상을 나타내었으므로, 유지 등 비극성 간섭물질의 제거를 위한 n-hexane/acetonitrile 분배법은 분획 조건 I로 분배하는 것으로 설정하였으며, 이 방법은 고 유지 시료로 판단되는 콩 및 현미 시료의 회수율 시험에 적용할 계획이며, 반면 지방함량이 1% 미만인 저 지방 시료인 배추, 사과, 고추 등에서는 그 정제정도가 극히 미미할 것으로 판단되어 n-hexane/acetonitrile 분배과정을 생략하고 회수율 시험을 수행하였다.
- 각 분배 추출액은 무수 sodium sulfhte에 통과시켜 수분을 제거하고 40°C 이하에서 감압농축 하였다. 농축된 잔류물은 10 mL 67% 메탄올에 재용해하여 HPLC로 분석하였으며, 분배용매별 3 반복으로 실험을 수행하여 회수율을 계산하였다. 한편 현미 및 콩과 같이 비극성인 지용성 물질이 많이 함유되어 있는 농산물에서 비극성 유지성분의 제거를 위한 추가적 액.
- 잔류농약 분석 시 HPLC의 검출기로 사용빈도가 높은 검출기는 자외흡광검출기, 형광 검출기 및 전기화학검출기를 들 수 있으나, 대상 농약들은 산화환원 반응을 띠지 않고, 자체 분자구조 내 형광을 나타내지도 않으며, 분자구조 내 -NH기를 함유하고 있어 분자구조상 230-260 nm 에서 흡광도가 발생할 것으로 예상되어 자외흡광검출기법을 선택하였다. 대상 화합물 3종의 동시분석을 위한 최적의 HPLC 분석파장을 선정하기 위하여 메탄올에 용해한 각 2 mg/L의 표준품을 on-line HPLC/DAD를 이용하여 200-300 nm 범위에서 각 성분별 최대흡수파장(#)을 검토하였다. 그 결과 methoxyfenozide는 200 nm에서, tebufenozide는 198 및 236 nm, chromafenozide는 203 및 250 nm에서 각각 높은 흡광도를 나타내었으며(Fig 2), 세 가지 농약 성분의 최대 흡광도를 고려할 때 검출파장으로는 약 200~210 nm가 가장 감도가 우수할 것으로 예상되나, 210 nm 부근의 파장 영역에서는 용매에 의한 노이즈 현상이 심할 것으로 판단되어 세 성분의 최적 흡광도를 고려하여 분석파장을 225 nm로 설정하였고, 분석파장이 다소 단파장임으로 시료추출 후 충분한 정제과정을 통해 농산물 및 식품시료에서 유래하는 천연 성분이 충분히 제거 되어야만 HPLC를 이용한 기기분석이 가능할 것으로 판단되어진다.
- 3 mg/J으로 거의 녹지 않는 비극성 화합물이다. 또한 증기압이 모두 1X10, mPa 미만으로 매우 낮아 GLC로 분석하기는 어려울 것이므로 HPLC에 의한 분석법을 검토하였다. 잔류농약 분석 시 HPLC의 검출기로 사용빈도가 높은 검출기는 자외흡광검출기, 형광 검출기 및 전기화학검출기를 들 수 있으나, 대상 농약들은 산화환원 반응을 띠지 않고, 자체 분자구조 내 형광을 나타내지도 않으며, 분자구조 내 -NH기를 함유하고 있어 분자구조상 230-260 nm 에서 흡광도가 발생할 것으로 예상되어 자외흡광검출기법을 선택하였다.
- 본 연구에서 확립한 잔류분석법의 효율 및 신뢰성을 검정하기 위하여 회수율 시험을 수행하였다. 즉 무농약 농산물 시료를 마쇄하고 시료 25 g에 MQL의 10 및 50배에 해당하는 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 표준용액을 첨가한 다음 상기 분석과정을 행하여 회수율을 측정하였다.
- 이 중 florisil은색소와 지방의 제거가 뛰어나 미국의 FDA(1999)나 AOAC (2000) 등에서 가장 많이 사용하는 방법이다. 본 연구에서도 분석대상 성분의 극성 등을 고려하여 Horisil을 흡착제로 선정하였으며, 용매의 극성 조절을 위해 w-hexane/ethyl acetate 의용 매체 계를 사용하여 최적의 정제방법을 검토하였다(Table 6).
- 농산물 추출물로부터 methoxyfe- nozide, chromafenozide 및 tebufenozide 성분 외에 추출 혼입된 농산물 유래 불순물을 세척하기 위한 조정제 분배법으로 H-hexane, n-hexane/dichloromethane 혼합액, dichloro methane 및 문헌적으로 대상 농약의 추출 효율이 우수하다고 보고된(Lin 등, 2008) IM NaOH가 함유된 염기성 조건의 dichloromethane을 분배용매로 이용하여 최적의 분배법을 확립하고자 하였다. 분석대상 농약이 비교적 낮은 극성 혹은 중간극성을 나타내는 점을 감안하여 수용성 유기용매 추출액을 포화식염수/증류수로 희석한 후 직접 비극성 용매인 n-hexane 이나 n-hexane/dichloromethane 혼합액, 혹은 낮은 극성을 나타내는 dichloromethane 등으로 분배하는 방법을 검토하였다(Table 4). 대상성분들의 액-액 분배조건에 따른 분배효율을 조사한 결과 n-hexane 용액 100 mL로 분획하였을 때 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufeno zide 성분의 회수율은 각각 55 ~78% 였으며, w-hexane/dich- loromethane(20:80J v/v)용액 100 mL로 분획하였을 때 회수율은 약 82~102% 수준을, dichloromethane 50 mL로 2회 반복하여 분획하였을 때 회수율은 약 95~118%, 문헌적으로 우수하다고 알려진(Lin 등, 2008) 1M NaOH 1mL함유 di chloromethane 50 mL로 2회 반복하여 분획하였을 때 회수율은 94~121%를 나타내었으나 일부 성분이 120%가 넘는 양상을 나타내었고, 1M NaOH가 함유되지 않는 조건과 큰차이가 없어 분획용매 HI을 액-액 분배조건에 의한 metho xyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 성분의 분배 용매로 선정하였다.
- 식품의 농약 잔류허용기준(식품의약품안전청, 2009) 중 methoxyfenozide 및 tebufenozide0]] 사용등록 되어 기준이 설정된 농산물 중 곡류는 현미, 두류는 콩, 채소류는 고추 및 배추, 과일류 중 사과를 대표시료로 선정하였고, chromafe- nozide의 경우 아직 국내 잔류허용기준이 설정되어 있지 않아 methoxyfenozide 및 tebufenozide와 동일한 농산물 시료를 적용하였다. 분석에 사용된 현미, 콩, 고추, 배추 및 사과의 무농약 시료는 지역 대형마트에서 유기농 인증시료를 구입한후 식품공전 상 검체 처리방법에 따라 전처리 하였으며(식품의약품안전청, 2009), 대조구 시료는 잔류농약 검사를 실시하여 무농약 시료임을 확인한 후 사용하였다.
- 한편 현미 및 콩과 같이 비극성인 지용성 물질이 많이 함유되어 있는 농산물에서 비극성 유지성분의 제거를 위한 추가적 액.액 분배과정의 효율 검토는 분배용매별 효율 검증에서 가장 우수한 분배 용매로 결정된 dichloromethane 50 mL(x 2회)로 분배된 추출액을 무수 sodium sulfate 20 g에 통과시켜 수분을 제거하고 40°C 이하에서 감압농축한 후, acetonitrile이 포화된 n-hexane 40 mL를 첨가하고, i-hexane 이 포화된 acetonitrile 40 mL씩 2회 및 3회 분배 추출한 후 40°C 이하에서 감압농축 하였으며, 농축된 잔류물은 10 mL 67% 메탄올에 재용해하여 HPLC로 분석하였고, n-hexane/acetonitrile 분배 횟수별 회수율을 계산하였다.
- 충진된 florisil 컬럼에 n-hexane 50 mL를 가하여 싱단에 소량의 n-hexane0] 님을 정도로 유출시켜 활성화시킨 후 n-hexane에 용해된 2 mg/L 농도의 표준용액 10 mL를 가하고, 다시 100 mL 의 H-hexane/ethyl acetate(90/10, v/v) 용액으로 pre-washing 후 n-hexane/ethyl acetate 혼합용액의 조성별로 각각 50 mL씩 3회 용리시켰으며, 각 혼합용액의 조성별 용리액을 농축시킨 후 67% 메탄올 10 mL로 재정용 하였다. 이 용액 20 μL를 HPLC로 분석하여 용리액의 조성별 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 회수율을 검토하였다.
- 또한 증기압이 모두 1X10, mPa 미만으로 매우 낮아 GLC로 분석하기는 어려울 것이므로 HPLC에 의한 분석법을 검토하였다. 잔류농약 분석 시 HPLC의 검출기로 사용빈도가 높은 검출기는 자외흡광검출기, 형광 검출기 및 전기화학검출기를 들 수 있으나, 대상 농약들은 산화환원 반응을 띠지 않고, 자체 분자구조 내 형광을 나타내지도 않으며, 분자구조 내 -NH기를 함유하고 있어 분자구조상 230-260 nm 에서 흡광도가 발생할 것으로 예상되어 자외흡광검출기법을 선택하였다. 대상 화합물 3종의 동시분석을 위한 최적의 HPLC 분석파장을 선정하기 위하여 메탄올에 용해한 각 2 mg/L의 표준품을 on-line HPLC/DAD를 이용하여 200-300 nm 범위에서 각 성분별 최대흡수파장(#)을 검토하였다.
- 위하여 회수율 시험을 수행하였다. 즉 무농약 농산물 시료를 마쇄하고 시료 25 g에 MQL의 10 및 50배에 해당하는 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 표준용액을 첨가한 다음 상기 분석과정을 행하여 회수율을 측정하였다.
- x250 mm, 5 ym spherical)을 사용하였고, 기타 분석조건은 Table 1 과 같다. 한편 LC/MS분석은 Agilent 6110 Quardropole LC-MS를 사용하였고, 분석 조건 중 일부는 HPLC 분석과 달리하여 분석을 실시하였으며, 자세한 분석조건은 Table 2에 나타내었다.
- 한편, 개발된 분석법의 신뢰성을 증대하기 위하여 LC/MS 의한 재확인 과정을 추가하였다. LC/MS 분석 시 분석대상 성분의 분자구조로부터 유도되는 분자이온과 주요 fragment ion을 확인함으로써 보다 신뢰성 있는 정성확인이 가능하다는 장점이 있다(Kwon 등, 2008).
대상 데이터
- Baker(USA)로부터 구입하여 130°C에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 후 활성화하여 사용하였다. n-Hexane, dichloromethane, acetonitrile 및 ethyl acetate 는 잔류분석용을 acetone, methanol 및 deionized water는 HPLC용을 J. T. Baker(USA)에서 구입하여 사용하였다. 기타 유기용매 및 무기시약은 시약특급 또는 잔류분석용을 사용하였다.
- 농산물 시료로부터 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 성분을 추출하기 위한 용매로는 acetone^ 사용하였다. Acetone은 USFDA법이나 AOAC법에서 대상 성분과 유사한 물리화학적 특성을 나타내는 농약 잔류분을 추출하는데 보편적으로 사용되는 표준적 용매로서 이미 많은 연구자들에 의하여 농약 추출에 그 효율과 재현성이 인정된바 있다(Kwon 등, 2008).
- 잔류 분석법을 확립하였다. 농산물 시료에 acetone을 가하여 추출된 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 잔류분은 dichloromefhane 분배 법과 florisil 흡착 크로마토그래피법으로 정제하여 분석대상 시료로 하였다. Ci8 컬럼을 이용한 HPLC 분석 시 불순물의 간섭은 없었으며, 대표 농산물 중 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 분석정량한계(MQL)는 0.
- 농산물 중 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufe- nozide의 분석에 사용된 HPLC는 Agilent 1200 series(USA) 를 사용하였고, 컬럼은 YMC-pak ODS AM 303(4.6 mm i.d.x250 mm, 5 ym spherical)을 사용하였고, 기타 분석조건은 Table 1 과 같다. 한편 LC/MS분석은 Agilent 6110 Quardropole LC-MS를 사용하였고, 분석 조건 중 일부는 HPLC 분석과 달리하여 분석을 실시하였으며, 자세한 분석조건은 Table 2에 나타내었다.
- 기타 유기용매 및 무기시약은 시약특급 또는 잔류분석용을 사용하였다. 농축기는 Eyela NE-1000SW(Japan)# 사용하였고 농산물 시료는 호모게나이저(IKA, Ultra-Turrax T-25, USA) 를 이용하여 마쇄 및 균질화 하였다.
- 본 연구에서 사용된 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide의 분석용 표준품은 순도 98% 이상의 분석용 표준품을 Chem Service로부터 구입하여 사용하였다. 표준품의 stock solution은 methanol 에 각 500 mg/L 의 농도로 조제하여 -20"C 냉동고에 보관하면서 필요시마다 보관 중인 stock solution을 희석하여 사용하였다.
- 적용하였다. 분석에 사용된 현미, 콩, 고추, 배추 및 사과의 무농약 시료는 지역 대형마트에서 유기농 인증시료를 구입한후 식품공전 상 검체 처리방법에 따라 전처리 하였으며(식품의약품안전청, 2009), 대조구 시료는 잔류농약 검사를 실시하여 무농약 시료임을 확인한 후 사용하였다.
성능/효과
- Florisil 흡착크로마토그라피용 용매의 다양한 극성 조절을 이용하여 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufe- nozide의 회수율을 검토한 결과 n-hexane/ethyl acetate(85:15, v/v) 용매 100 mL로 pre-washing 한 후, n-hexane/ethyl acetate(70:30, v/v)의 혼합용매 150 mL로 용출할 경우 me thoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 세 성분 모두 최소 97~112%의 회수율을 확인할 수 있어 검토된 용매체계 중 가장 우수한 양상을 나타내어 florisil 흡착크로마토그래피법을 이용한 간섭물질 제거법으로 확립하였다.
- Methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 2] 농도별 표준용액 (0.02 ~2 mg/L) 20 pL를 HPLC에 주입, 분석하여 얻은 검량선의 회귀방정식은 각각 y=62.719x-0.8229 (R2=0.9998), y=52.8377x-0.8571 (7&0.9995) 및 y=67.37x -0.486 (*=0.9996) 으로 직선성이 우수하였다.
- LC/MS 분석 시 분석대상 성분의 분자구조로부터 유도되는 분자이온과 주요 fragment ion을 확인함으로써 보다 신뢰성 있는 정성확인이 가능하다는 장점이 있다(Kwon 등, 2008). Methoxyfenozide, chroma fenozide 및 tebufenozide2] 이온화를 돕기 위하여 HPLC 분석에 이용된 이동상 용매에 0.1%의 formic acid를 첨가하여 분석을 실시하였고, ESI positive-ion mode에서 높은 감도를 나타내었으며, total-ion chromatogram으로 Fig. 5~6과 같은 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 의 mass spectrum을 얻을 수 있었으며, 각 성분에 대한 모 분자로 부터 sodium(Na)이 결합된 형태인 부가생성물의 특징적인 측정 fragments를 확인할 수 있었다.
- 대상 화합물 3종의 동시분석을 위한 최적의 HPLC 분석파장을 선정하기 위하여 메탄올에 용해한 각 2 mg/L의 표준품을 on-line HPLC/DAD를 이용하여 200-300 nm 범위에서 각 성분별 최대흡수파장(#)을 검토하였다. 그 결과 methoxyfenozide는 200 nm에서, tebufenozide는 198 및 236 nm, chromafenozide는 203 및 250 nm에서 각각 높은 흡광도를 나타내었으며(Fig 2), 세 가지 농약 성분의 최대 흡광도를 고려할 때 검출파장으로는 약 200~210 nm가 가장 감도가 우수할 것으로 예상되나, 210 nm 부근의 파장 영역에서는 용매에 의한 노이즈 현상이 심할 것으로 판단되어 세 성분의 최적 흡광도를 고려하여 분석파장을 225 nm로 설정하였고, 분석파장이 다소 단파장임으로 시료추출 후 충분한 정제과정을 통해 농산물 및 식품시료에서 유래하는 천연 성분이 충분히 제거 되어야만 HPLC를 이용한 기기분석이 가능할 것으로 판단되어진다.
- 분석대상 농약이 비교적 낮은 극성 혹은 중간극성을 나타내는 점을 감안하여 수용성 유기용매 추출액을 포화식염수/증류수로 희석한 후 직접 비극성 용매인 n-hexane 이나 n-hexane/dichloromethane 혼합액, 혹은 낮은 극성을 나타내는 dichloromethane 등으로 분배하는 방법을 검토하였다(Table 4). 대상성분들의 액-액 분배조건에 따른 분배효율을 조사한 결과 n-hexane 용액 100 mL로 분획하였을 때 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufeno zide 성분의 회수율은 각각 55 ~78% 였으며, w-hexane/dich- loromethane(20:80J v/v)용액 100 mL로 분획하였을 때 회수율은 약 82~102% 수준을, dichloromethane 50 mL로 2회 반복하여 분획하였을 때 회수율은 약 95~118%, 문헌적으로 우수하다고 알려진(Lin 등, 2008) 1M NaOH 1mL함유 di chloromethane 50 mL로 2회 반복하여 분획하였을 때 회수율은 94~121%를 나타내었으나 일부 성분이 120%가 넘는 양상을 나타내었고, 1M NaOH가 함유되지 않는 조건과 큰차이가 없어 분획용매 HI을 액-액 분배조건에 의한 metho xyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 성분의 분배 용매로 선정하였다.
- 9%) 분석성분, 처리수준 및 농산물 시료 종류에 관계없이 잔류분석기준인 회수율 70-120% 범위와 분석오차 10% 이내를 만족하였다(Table 7~9). 따라서 이상의 결과에서 확립된 분석법은 국내 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufeno- zide에 대해 잔류허용기준이 설정된 농산물에 충분히 적용이 가능함을 알 수 있다.
- 본 실험에서 사용한 농산물의 무처리 시료에서는 대상 농약성분의 peak가 전혀 관찰되지 않았으며, 처리된 시료에서는 각 성분별 동일한 머무름 시간대에 정확히게 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 의 잔류분만을 확인할 수 있었다. 또한 methoxyfenozide, chro mafenozide 및 tebufenozide 세 성분 모두 검출할 수 있는 감도 또한 S/N 그10에서 0.02 mg/kg 수준의 잔류분 까지 검출할 수 있는 높은 감도를 나타내었고, 5종의 대표 작물에 대한 회수율을 검증한 결과 10 및 50 MQL 수준에서 86.5 ~ 96/7%의 양호한 회수율을 보였고, 정밀성도 양호하여(CV < 1-8%) 분석성분, 처리수준 및 농산물 시료 종류에 관계없이 잔류분석기준인 회수율 70~120% 범위와 분석오차 10% 이내를 완전하게 만족시켰다. 따라서 본 연구에서 사용한 LGMS 의 SIM조건을 이용할 경우에도 HPLC2VD를 이용한 정량법과더불어 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufe- noride의 추가적인 정량법으로도 완벽하게 사용이 가능할 것으로 판단된다.
- 마쇄한 각각의 농산물 무처리 시료에 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 표준용액을 10 및 50 MQL 의 농도가 되도록 첨가하고, 상기 검토된 전체적 분석 방법으로 3회 반복하여 분석한 결과(Fig. 4) 10 MQL수준에서는 88.98-100.16%, 50 MQL 수준에서는 91.69~104.75%의양호한 회수율을 보였고, 정밀성도 양호하여(CV < 3.9%) 분석성분, 처리수준 및 농산물 시료 종류에 관계없이 잔류분석기준인 회수율 70-120% 범위와 분석오차 10% 이내를 만족하였다(Table 7~9). 따라서 이상의 결과에서 확립된 분석법은 국내 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufeno- zide에 대해 잔류허용기준이 설정된 농산물에 충분히 적용이 가능함을 알 수 있다.
- 7에서는 selected ion monitoring(SIM) mode에서 본 실험에 사용한 농산물의 대표성 시료에서 methoxyfeno zide, chromafenozide 및 tebiif&iozide의 잔류분을 재확인한 chromatogram이다. 본 실험에서 사용한 농산물의 무처리 시료에서는 대상 농약성분의 peak가 전혀 관찰되지 않았으며, 처리된 시료에서는 각 성분별 동일한 머무름 시간대에 정확히게 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufenozide 의 잔류분만을 확인할 수 있었다. 또한 methoxyfenozide, chro mafenozide 및 tebufenozide 세 성분 모두 검출할 수 있는 감도 또한 S/N 그10에서 0.
- 05 mg/kg 이하 또는 MRL의 1/2 이하까지 정량이 가능하도록 추천하고 있다. 본 실험의 methoxyfeno zide, chromafenozide 및 tebufenozide 의 분석정량한계는 모두 0.04 mg/kg으로 계산되어 잔류분석법 기준에 적합하였다.
- 분석용 HPLC 칼럼은 C18계열의 YMC-pak ODS AM 303 (4.6x250 mm, 5㎛)을 이용하였고, 이때 이동상으로 여러 종류의 용매계를 검토한 결과 증류수 : 메탄올(33:67, v/v)의 isocratic 조건에서 분리가 가장 양호한 양상을 나타내었으며, 상기 Table 1 의 HPLC 분석조건에서 methoxyfenozide, chro mafenozide 및 tebufenozide의 머무름 시간을 조사한 결과 15분 미만에 대상 성분 모두 극성별로 분리 용출이 가능한 것을 확인하였다.
- 1 mg/kg(2 ng/20 yL) 수준이었다. 한편 분석 기기의 안정성 평가를 위해 재현성 평가를 실시하였는데 1 mg/kg의 혼합 표준품을 10번 반복 주입 분석하여 머무름 시간 및 peak 면적의 변이계수(CV, %)를 조사하였고, 두 변수 모두 최대 1.79% 미만으로 극히 높은 분석 재현성을 나타내어 반복 분석 간 오차가 작아 기기가 안정적이고 재현성 있는 분석을 수행할 수 있음을 확인하였다(Table 3).
후속연구
- Dichloromethane을 이용한 액-액 분배과정에 의하여 시료 중에 포함된 상당부분의 극성 및 일부 비극성 방해물질은 제거되었으리라 판단되지만, dichloromethane 분배 시 n-hexane 에 비하여 불순물이 많이 추출되기 때문에 비극성 간섭물질은 완전하게 제거되지 않았을 것으로 판단되므로 추가적인 정제과정이 필요할 것이다. 또한 본 연구의 대상 시료들 중 일부 시료인 현미와 콩은 지방 함량이 최대 20% 이상 함유되어 있을 수 있으므로 비극성 지방성분을 제거하는 데 효율이 높은 "-hexane/acetouitrile법과 같은 지방 제거법을 적용하여 분해효율을 검토하였다(Table 5).
- 5 ~ 96/7%의 양호한 회수율을 보였고, 정밀성도 양호하여(CV < 1-8%) 분석성분, 처리수준 및 농산물 시료 종류에 관계없이 잔류분석기준인 회수율 70~120% 범위와 분석오차 10% 이내를 완전하게 만족시켰다. 따라서 본 연구에서 사용한 LGMS 의 SIM조건을 이용할 경우에도 HPLC2VD를 이용한 정량법과더불어 methoxyfenozide, chromafenozide 및 tebufe- noride의 추가적인 정량법으로도 완벽하게 사용이 가능할 것으로 판단된다.
- 8%였으며, 농산물 시료 및 처리수준에 관계없이 10%미만의 분석오차를 나타내어 잔류분석 기준 이내를 만족하였다. 본 연구에서 확립한 diacylhydrazine계 살충제인 methoxyfenozide, chroma-fenozide 및 tebufenozide의 잔류분석법은 검출한계, 회수율 및 분석오차 면에서 국제적 분석기준을 만족할 뿐만 아니라, LC/MS SIM을 이용한 잔류분의 재확인과정 및 회수율 검증의 결과를 총괄해 볼 때 분석과정의 편이성 및 신뢰성이 확보된 공정분석법으로 사용이 가능 할 것으로 판단된다.
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