[논문]장염비브리오가 보유하는 β-lactamase (VPA0477)의 유전학적 특성

이남형; 송현정; 박창수; 김희대; 박권삼

doi:10.5657/kfas.2011.0597

장염비브리오가 보유하는 β-lactamase (VPA0477)의 유전학적 특성
Genetic Characterization of β-lactamase (VPA0477) in Vibrio parahaemolyticus 원문보기

한국수산과학회지 = Korean journal of fisheries and aquatic sciences, v.44 no.6, 2011년, pp.597 - 604

이남형 (군산대학교 식품생명공학과) , 송현정 (군산대학교 식품생명공학과) , 박창수 (대구카톨릭대학교 식품생명공학과) , 김희대 (충북도립대학 바이오생명의약과) , 박권삼 (군산대학교 식품생명공학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Using 108 strains of Vibrio parahaemolyticus isolated from seawater, we investigated ampicillin-resistance profiles and the genetic characterization of ${\beta}$-lactamase (VPA0477). All of the strains studied, except one strain, were resistant to ampicillin. However, the strain that was susceptible to ampicillin had the same ${\beta}$-lactamase gene as the ampicillin-resistant strains. We compared ${\beta}$-lactamase promoter region sequences among five strains, including both ampicillin-resistant and -susceptible strains. In the susceptible strain, a nucleotide at position -19 in the methionine initiation codon for ${\beta}$-lactamase was not present in the ampicillin-resistant strains. The genes in the region containing the gene VPA0477 were present in all of the tested strains, and LA-PCR analysis showed that the distance between VPA0474 and VPA0479 in all of the V. parahaemolyticus samples was precisely 5.7 kb. In V. parahaemolyticus ${\beta}$-lactamase, four important structural features that are conserved in Class A ${\beta}$-lactamases were present in the deduced amino acid sequences. Taken together, our study demonstrates that V. parahaemolyticus ${\beta}$-lactamase is included in the Class A ${\beta}$-lactamase group, and some nucleotides within the promoter region are of particular importance for ${\beta}$-lactamase activity.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

제안 방법

실험에 사용한 DNA 증폭용 primers는 Table 1에 나타내었다. Genome sequence가 완료된 장염비브리오 RIMD2210633 균주의 해당 유전자 염기서열을 참조하여 Bioneer (Daejon, Korea)에 의뢰 합성하였다.
Table 2에 나타낸 바와 같이 장염비브리오는 ß-lactam계 항생물질의 한 종류인 ampicillin에 다양한 MIC를 나타내고 있기 때문에 다른 종류의 ß-lactam계 항생물질에 대한 MIC를 검토하였다(Table 3).
본 실험에 사용한 108개 해수분리 장염비브리오에는 ß-lactamase (VPA0477)의 보유성이 밝혀졌다. VPA0477 유전자가 어떤 메커니즘을 통해 장염비브리오에 삽입되었을 때 VPA0477 유전자 단독 또는 다른 유전자와 함께 염색체 DNA 에 삽입되었는가 여부는 PCR assay로 검토하였다. 장염비브리오 RIMD2210633 균주의 VPA0477 유전자 상류 및 하류에 존재하는 유전자 배열은 Fig.
VPA0477 유전자를 포함한 약 5.7 kb의 DNA 증폭은 LAPCR Kit (version 2; Takara Shuzo, Japan)를 사용하였으며 LAPCR 반응은 95℃에서 3분간 열 변성한 후 98℃ 20초, 58℃ 30초, 68℃ 7분을 30회 반복한 다음 마지막으로 72℃에서 10분 1회 신장하였다. 증폭된 DNA 산물은 0.
균주에 따라 ampicillin 내성에 대한 MIC가 다른 이유를 밝히기 위하여 MIC가 각각 다른 2,048(strain 3), 1,024(strain 10), 512(strain 41), 128(strain 61)및 <2 µg/mL (strain 17) 5개 균주를 선별하여 각 균주의 VPA0477 유전자의 DNA 염기서열을 결정한 다음 아미노산으로 치환하여 장염비브리오 RIMD2210633 균주의 VPA0477와 비교하였다(Fig. 2).
이는 장염비브리오 VPA0477 유전자의 상류 및 하류 영역의 DNA 배열은 거의 유사함을 나타내는 증거라 판단된다. 더 정확한 결과를 위하여 VPA0477 유전자를 포함한 약 5.7 kb 영역을 LA-PCR assay로 증폭하였다. 그 결과 실험에 제공된 6개 균주는 거의 유사한 크기로 증폭되었다(Fig.
본 연구에서는 해수분리 장염비브리오의 ampicillin 내성 profile 및 최소발육억제농도(minimum inhibi tory concentration, MIC)를 검토하였으며, 아울러 균에 따라 ampicillin에 대한 MIC가 다른 이유를 ß-lactamase (VPA0477)의 유전학적 해석을 통해 검토하였다.
여기에 식염이 3% 첨가된 Luria-Bertani (LB) broth에서 전배양한 시험균주 5 µL을 접종하여 35℃에서 18시간 정치 배양후 균 증식여부는 육안으로 확인하였다.
Table 1에 나타낸 primers 및 각 균주의 정제된 염색체 DNA를 주형으로 95℃에서 3분간 열 변성한 후 95℃ 30초, 55℃ 30초, 72℃ 1분을 30회 반복하여 DNA를 증폭하였다. 증폭산물은 pT7Blue T-vector에 TA cloning하였으며, 염기서열은 error 방지를 위하여 3개의 clone를 사용하여 양쪽 방향으로 염기서열을 결정하였다. 염기서열의 alignment는 CLUSTAL W프로그램을사용하였으며, 상동성 검색은 NCBI (http://www.

대상 데이터

유전자 조작에 사용한 각종 효소류는 Takara (Japan)사의 제품을 사용하였으며, plasmid DNA 정제는 Qiagen (USA)사의 QIAprep Spin Miniprep Kit를 사용하였다. Ampicillin, carbenicillin, cefotaxime, cephalothin, oxacillin 및 penicillin-G 등의 항생제는 Sigma (USA)사의 제품을 사용하였다.
본 실험에 사용한 108개 해수분리 장염비브리오에는 ß-lactamase (VPA0477)의 보유성이 밝혀졌다.
사용한 ß-lactam계 항생물질에는 carbenicillin, cefotaxime, cephalothin, oxacillin 및 penicillin-G 등 5종을 사용하였으며, 균주는 ampicillin에 각각 다른 MIC를 나타내는 일부 선별된 장염비브리오 및 VPA0477 결손균주(Lee and Park, 2010)를 사용 하였다.
2008년부터 2010년까지 전라북도 부안군 곰소만의 표층해수에서 분리한 장염비브리오 108개 균주에 대한 ampicillin내성 및 최소발육억제농도(MIC)를 측정한 결과는 Table 2에 나타내었다. 실험에 사용한 108개 균주 중 ampicillin에 감수성을 나타낸 균주는 1개 균주(0.9%)이며, 나머지 107개 균주(99.1%)는 최소발육억제농도의 차이는 있지만 ampicillin에 내성을 나타내 었다. Table 2에 나타낸 바와 같이 2,048 µg/mL의 MIC를 나타내는 균주는 22개 균주(20.
실험에 사용한 균주는 2008년부터 2010년에 전북 곰소만의 표층 해수에서 분리한 장염비브리오 108개 균주 및 참고 균주로는 genome sequence가 완료된 장염비브리오 RIMD2210633 (Makino et al., 2003)를 사용하였다. 유전자 조작에는 실험실에 보관중인 Escherichia coli DH5 α 를 사용하였다.
유전자 조작에는 실험실에 보관중인 Escherichia coli DH5 α 를 사용하였다. 유전자 조작에 사용한 각종 효소류는 Takara (Japan)사의 제품을 사용하였으며, plasmid DNA 정제는 Qiagen (USA)사의 QIAprep Spin Miniprep Kit를 사용하였다. Ampicillin, carbenicillin, cefotaxime, cephalothin, oxacillin 및 penicillin-G 등의 항생제는 Sigma (USA)사의 제품을 사용하였다.
유전자 조작에는 실험실에 보관중인 Escherichia coli DH5 α 를 사용하였다.

데이터처리

증폭산물은 pT7Blue T-vector에 TA cloning하였으며, 염기서열은 error 방지를 위하여 3개의 clone를 사용하여 양쪽 방향으로 염기서열을 결정하였다. 염기서열의 alignment는 CLUSTAL W프로그램을사용하였으며, 상동성 검색은 NCBI (http://www.ncbi.nim.nih. gov/BLAST)를 통하여 실시하였다.

이론/모형

MIC는 미국 NCCLS (National Committee for Laboratory Standards, 2002)법에 기초하여 변법으로 측정하였다. 멸균된 Muller-Hinton broth (Merck, Germany)에 농도를 달리한 ampicillin을 첨가한 후 멸균된 소형시험관에 배지를 2 mL씩 분주하였다.

성능/효과

1,024 µg/mL 이상의 고도내성을 나타내는 균주는 전체 108개 균주 중 87개 균주(80.6%) 로 매우 높은 비율을 차지하고 있었다.
3에 나타낸 바와 같이 장염비브리오 유전자의 전형적인 promoter motif (-10 and -35 regions)는 존재하나, 전형적인 Shine-Dalgarno 서열은 찾을 수 없었다. 5종의 해수 분리 균주 중 2종(strain 61과 strain 17)을 제외한 나머지 3균주의 VPA0477 유전자 프로모터 영역의 염기서열은 동일하였다. RIMD2210633 균주의 VPA0477 유전자는 염기서열이 동일한 3개의 해수분리 균주의 유전자와는 2개의 염기서열 즉 start codon에서 -41번째 및 -125번째의 염기가 달랐다.
2에 나타낸 바와 같이 ampicillin에 대한 MIC가 각각 다른 해수분리 장염비브리오 5개 균주의 VPA0477 유전자는 RIMD2210633 균주의 VPA0477와 동일하게 283개의 아미노산으로 이루어져 있으며, 감수성 균주를 제외한 4개 균주의 아미노산 서열은 동일하였다. Ampicillin 내성 해수분리 장염비브리오 4개 균주의 48번째 아미노산은 glutamic acid인 반면 RIMD2210633 균주는 lysine이며, 142번째 아미노산은 leucine 인 반면 RIMD2210633 균주는 glutamine으로 단지 2개의 아미노산에서 차이가 있었다. 또한 감수성 균주(strain 17)의 경우, 97번째 아미노산이 cysteine인 반면 나머지 균주는 tryptophan 이였을 뿐 특별한 차이는 없었다.
장염비브리오 RIMD2210633 균주의 VPA0477 유전자 상류 및 하류에 tansposon 또는 phage DNA의 존재유무를 확인하였으나 존재 하지 않았다(data not shown). Ampicillin에 대한 MIC가 다른 6개 균주를 사용하여 VPA0477 유전자 상류 및 하류에 존재하는 7개 유전자의 존재유무를 PCR assay로 확인한 결과 실험에 제공된 모든 균주에서 확인하고자 했던 7개 유전자는 증폭되었다 (Table 4). 이는 장염비브리오 VPA0477 유전자의 상류 및 하류 영역의 DNA 배열은 거의 유사함을 나타내는 증거라 판단된다.
5종의 해수 분리 균주 중 2종(strain 61과 strain 17)을 제외한 나머지 3균주의 VPA0477 유전자 프로모터 영역의 염기서열은 동일하였다. RIMD2210633 균주의 VPA0477 유전자는 염기서열이 동일한 3개의 해수분리 균주의 유전자와는 2개의 염기서열 즉 start codon에서 -41번째 및 -125번째의 염기가 달랐다. Strain 61 균주의 경우, start codon에서 -29 위치의 염기는 다른 종의 염기가 C인 반면 T로 단 하나의 염기서열 차이를 보였다.
Strain 17균주는 start codon에서 -19 위치의 nucleotide는 결실되어 존재 하지 않았으며, -135 위치의 염기는 T였다. 결론적으로 MIC가 낮거나(strain 61) 또는 감수성 균주(strain 17)에서는 promoter motif 영역의 염기서열이 다른 균들과 다르거나 또는 start codon에서 -19 위치의 염기가 존재하지 않아 전사를 위한 RNA polymerase가 프로모터에 결합이 불충분하기 때문에 전사과정이 부분적이거나 또는 거의 불가능하여 ampicillin에 대한 MIC 차이를 보이는 것으로 판단된다. 따라서 이들 균주에 대한 전사및 발현 차이의 검토는 차후에 필요하다 하겠다.
그 결과 실험에 사용한 8개 모든 균주는 cefotaxime 및 cephalothin에 <2 µg/mL 및 4 µg/mL의 MIC를 나타내어 야생형, VPA0477 결손균주 및 ampicillin 감수성 균주(strain 17)간의 차이는 전혀 없었다.
7 kb 영역을 LA-PCR assay로 증폭하였다. 그 결과 실험에 제공된 6개 균주는 거의 유사한 크기로 증폭되었다(Fig. 5). 이는 증폭된 영역의 DNA는 균주에 상관없이 거의 동일한 구조로 이루어져 있다는 증거이다.
놀랍게도 ampicillin 감수성 균주에서도 VPA0477 유전자가 존재한다는 점은 매우 의외의 결과이며, VPA0477 유전자를 보유하고 있으면서도 ampicillin에 감수성을 나타내는 이유는 VPA0477 유전자의 변이에 의한 전사 또는 번역과정의 문제로 인해 β-lactamase의 발현이 전혀 불가능하거나 불충분하여 ampicillin에 감수성을 나타낸다고 판단된다.
최근 장염비브리오의 ampicillin 내성에 관련하는 유전자는 이 균의 작은 염색체에 존재하는 VPA0477로 밝혀졌다(Lee and Park, 2010). 따라서 108개 균주에 대한 VPA0477 유전자 유무를 dot blot hybridization 및 PCR assay로 확인한 결과 실험에 사용한 108개 모든 균주에서 양성으로 확인되었다(data not shown). 놀랍게도 ampicillin 감수성 균주에서도 VPA0477 유전자가 존재한다는 점은 매우 의외의 결과이며, VPA0477 유전자를 보유하고 있으면서도 ampicillin에 감수성을 나타내는 이유는 VPA0477 유전자의 변이에 의한 전사 또는 번역과정의 문제로 인해 β-lactamase의 발현이 전혀 불가능하거나 불충분하여 ampicillin에 감수성을 나타낸다고 판단된다.
Carbenicillin 및 penicillin-G는 ampicillin과 거의 유사한 결과를 나타내었다. 야생형 균주는 이들 항생물질에 내성을 나타내었지만 VPA0477 결손균주 및 ampicillin 감수성 균주는 감수성을 나타내었다. 이들 결과는 ß-lactam계 항생물질의 종류에 따라 MIC 및 감수성 농도가 다르다는 Vibrio harveyi의 연구결과와 유사하다(Teo et al.
이상의 결과를 종합해 보면, 장염비브리오의 ß-lactamase (VPA0477)는 Class A ß-lactamase에 속하며, 이 유전자의 상류및 하류를 포함한 DNA는 과거의 어느 시점에 하나의 큰 단위로서 장염비브리오에 삽입되었을 가능성이 제기되며, 균주에 따라 ampicillin에 대한 MIC가 다른 점은 ß-lactamase (VPA0477) 의 프로모터 영역의 일부 DNA의 변이 또는 결실의 결과라고 판단된다.
장염비브리오의 VPA0477 유전자는 비브리오속에서 보고된 Class A group ß-lactamase의 중요한 구조적 특징 아미노산 서열이 동일한 위치에 존재할 뿐만 아니라 분자량도 매우 유사하다는 특징으로 미루어 Class A group ß-lactamase에 속한다고 판단된다.

후속연구

이상의 결과를 종합해 보면, 장염비브리오의 ß-lactamase (VPA0477)는 Class A ß-lactamase에 속하며, 이 유전자의 상류및 하류를 포함한 DNA는 과거의 어느 시점에 하나의 큰 단위로서 장염비브리오에 삽입되었을 가능성이 제기되며, 균주에 따라 ampicillin에 대한 MIC가 다른 점은 ß-lactamase (VPA0477) 의 프로모터 영역의 일부 DNA의 변이 또는 결실의 결과라고 판단된다. 본 실험에 제공된 108개 장염비브리오 모든 균주에서 VPA0477 유전자가 존재하고 있다는 점은 장염비브리오의 분리 및 동정을 위한 표적유전자로 활용 가능성이 높다고 판단된다. 이를 위해서는 분리장소 및 시기가 다른 더 많은 장염비브리오를 대상으로 VPA0477 유전자의 존재유무를 확인하는 실험은 필요하다 하겠다.
본 실험에 제공된 108개 장염비브리오 모든 균주에서 VPA0477 유전자가 존재하고 있다는 점은 장염비브리오의 분리 및 동정을 위한 표적유전자로 활용 가능성이 높다고 판단된다. 이를 위해서는 분리장소 및 시기가 다른 더 많은 장염비브리오를 대상으로 VPA0477 유전자의 존재유무를 확인하는 실험은 필요하다 하겠다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	장염비브리오란 무엇인가?	장염비브리오는 해수 및 기수지역에 분포하고 있는 저도 호염성 해양세균으로 이 균에 오염된 어패류를 생식하거나 불충분하게 가열 처리된 수산물을 섭취하였을 때 급성위장염 증상을 나타내는 식중독 원인세균이다(Sakazaki et al., 1968; Honda and Iida, 1993).
	장염비브리오가 생산하는 대표적인 병원성 독소는 무엇이 있는가?	, 1968; Honda and Iida, 1993). 이 균이 생산하는 대표적인 병원성 독소는 내열성용혈독(thermostable direct hemolysin, TDH), 내열성용혈독 관련용혈독(TDH-related hemolysin, TRH), serine protease 및 type III secretion systems (TTSS 1 또는 2)를 통해 분비되는 각종 effector 단백질 등이 보고되어 있으나 정확한 병원성 메커니즘에 관한 설명은 아직도 많이 부족한 실정이다(Honda and Iida, 1993; Lee et al., 2002; Makino et al.
	계절에 따른 장염비브리오의 특징은 무엇인가?	, 1968; Honda and Iida, 1993). 장염비브리오는 수온이 17℃ 이상으로 상승하는 하절기에는 자유 유영의 형태로 해수에서 쉽게 검출되나 수온이 10℃ 이하로 낮아지면 해수에서의 검출빈도는 급격히 떨어지며 수온이 낮은 동절기에는 해저의 저질에서 동물성 플랑크톤의 키틴질 등에 부착하여 월동한다고 보고되어 있다(Kaneko and Colwell, 1975). 우리나라에서 장염비브리오에 의한 식중독 사고는 수온이 상승한 여름철에 집중적으로 발생하며 매년 전체 세균성 식중독 사고의 약 20% 전후를 차지하고 있는 실정이다.

참고문헌 (24)

Choury D, Aubert G, Szajnert MF, Azibi K, Delpech M and Paul G. 1999. Characterization and nucleotide sequence of CARB-6, a new carbenicillin-hydrolyzing $\ss$ -lactamase from Vibrio cholerae. Antimicrob Agents Chemother 43, 297-301.
Highton CE and Hobbs DG. 1971. Penicillin and cell wall synthesis: a study of Bacillus licheniformis by electron microscopy. J Bacteriol 106, 646-658.
Honda T and Iida T. 1993. The pathogenicity of Vibrio parahaemolyticus and the role of the thermostable direct haemolysin and related haemolysins. Rev Med Microbiol 4, 106-113.

상세보기
Kaneko T and Colwell RR. 1975. Adsorption of Vibrio parahaemolyticus onto chitin and copepods. Appl Microbiol 29, 269-274.

상세보기
Kodama T, Hiyoshi H, Gotoh K, Akeda Y, Matsuda S, Park KS, Cantarelli VV, Iida T and Honda T. 2008. Identification of two translocon proteins of Vibrio parahaemolyticus type III secretion system 2. Infect Immun 76, 4282-4289.

상세보기
Kodama T, Rokuda M, Park KS, Cantarelli VV, Matsuda S, Iida T and Honda T. 2007. Identification and characterization of VopT, a novel ADP-ribosyltransferase effector protein secreted via the Vibrio parahaemolyticus type III secretion system 2. Cell Microbiol 9, 2598-2609.

상세보기
Lambert HP and O'Grady FW. 1992. Antibiotics and chemotherapy. In Veterinary medicine, 6th ed., Churchill Livingstone. New York. U.S.A., 130-139.
Lee CY, Cheng MF, Yu MS and Pan MJ. 2002. Purification and characterization of a putative virulence factor, serine protease, from Vibrio parahaemolyticus . FEMS Microbiol Lett 19, 31-37.
Lee H, Oh YH, Park SG and Choi SM. 2007. Antibiotic susceptibility and distribution of Vibrio parahaemolyticus isolated from the seafood. Kor J Env Hlth 33, 16-20.
Lee HW, Lim SK and Kim MN. 2009. Characteristics of ampicillin- resistant Vibrio spp. isolated from a west coastal area of Korea peninsula. J Kor Fish Soc 42, 20-25.
Lee KW and Park KS. 2010. Antibiotic-resistance profiles and the identification of the ampicillin-resistance gene of Vibrio parahaemolyticus isolated from seawater. Kor J Fish Aquat Sci 43, 637-641.
Makino K, Oshima K, Kurokawa K et al., 2003. Genome sequence of Vibrio parahaemolyticus : a pathogenic mechanism distinct from that of V. cholerae . Lancet 361, 743-749.

상세보기
Massova I and Mobashery S. 1998. Kinship and diversification of bacterial penicillin-binding proteins and $\ss$ -lactamases. Antimicrob agents Chemother 42, 1-17.

상세보기
National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2002. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. Twelfth informational supplement M100-S12. Wayne, PA:19087-19098. U.S.A.
NVRQS (National Veterinary Research and Quarantine Service). Monitoring of microbial resistance on the food animals and meats. 1-92.
Oh EG, Yu HS, Shin SB, Son KT, Park KB, Kwon JY, Lee TS and Lee HJ. 2008. Trimethoprim resistance of Vibrio parahaemolyticus isolated from the fish farm. J Kor Fish Soc 41, 324-329.
Park KS, Ono T, Rokuda M, Jang MH, Okada K, Iida T and Honda T. 2004. Functional characterization of two type III secretion systems of Vibrio parahaemolyticus. Infect Immun 72, 6659-6665.

상세보기
Sakazaki R, Tamura K, Kato T, Obara Y and Yamai S. 1968. Studies on the enteropathogenic, facultatively halophilic bacterium, Vibrio parahaemolyticus . 3. Enteropathogenicity. Jpn J Med Sci Biol 21, 325-331.

상세보기
Son JC, Park SW and Min KJ. 2003. Environmental and antimicrobial characteristics of Vibrio spp. isolated from fish, shellfish and brackish water samples in Gyeongbuk eastern coast. Kor J Env Hlth 29, 94-102.
Son KT, Oh EG, Lee TS, Lee HJ, Kim PH and Kim JH. 2005. Antimicrobial susceptibility of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio alginolyticus from farms on the southern coast of Korea. J Kor Fish Soc 38, 365-371.
Teo JWP, Suwanto A and Poh CL. 2000. Novel $\ss$ -lactamase genes from two environmental isolates of Vibrio harveyi. Antimicrob Agents Chemother 44, 1309-1314.

상세보기
Tomasz A and Waks S. 1975. Mechanism of action of penicillin: triggering of the pneumococcal autolytic enzyme by inhibitors of cell wall synthesis. Proc Natl Acad Sci USA 72, 4162-4166.

상세보기
Yu HS, Park KB, Oh EG, Lee TS, Shin SB, Kwon JY, Kim JH and Son KT. 2010. Trimethoprim resistance by class I integron in Vibrio parahaemolyticus from a fish farm. Kor J Fish Aquat Sci 43, 125-130.
Weng SF, Chao YF and Lin JW. 2004. Identification and characteristic analysis of the ampC gene encoding $\ss$ -lactamase from Vibrio fischeri. Biochem Biophys Res Commun 314, 838-843.

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증