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제안 방법
- 1차 모델에서 계산한 LPD와 µ max 값을 각각 linear model과 quadratic model을 이용하여 2차 모델을 개발하였다.
- , Seoul, Korea)에 취하였다. V.vulnificus ATCC27562, NCCP14549, NCCP11887과 V.cholerae NCCP14552, NCCP12842는 생장 패턴이 유사하여 병원성 비브리오균을 대표하는 예측모델 개발을 위해 두가지 균주를 혼합하여 사용하였다. 혼합한 균액을 100 µL씩 접종하여 초기 균수가 3.
- 국내에서의 1일 1인 식중독 발생 가능 확률을 계산하기 위해 초기 오염도, 저장 온도 및 시간, 섭취자 비율 및 섭취량, 용량-반응 모델 등의 결과를 활용하여 @RISK와 연동되는 Excel spreadsheet에 시나리오를 구성했다. 최종적으로 구성된 시나리오를 @RISK 프로그램을 이용하여 10,000번의 몬테카를로 시뮬레이션을 시행했고, 이를 통해 1일 1인 식중독 발생 가능 확률을 계산하였다.
- Paul, MN, USA)에 취하고 APW 20 mL을 넣은 뒤 1분간 균질화하였다. 균질액을 APW에 십진 희석한 후, CHROM TM agar Vibrio배지에 평판 도말하였으며 37 o C에서 24시간 동안 배양 후 계수하여 균수를 확인하였다. 일반 세균수는 희석액을 tryptic soy agar (TSA; Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA)에 동일 방법으로 평판 도말하여 확인하였다.
- cholerae 식중독에 걸릴 확률을 추정하기 위해 대형 할인마트, 시장 및 횟집에서 관리자와의 면담을 통해 유통 시간에 대한 정보를 수집했다. 그 결과 우렁쉥이의 경우 최소 1시간, 최대 48시간 진열되는 것으로 조사되어 이를 Uniform 분포[Uniform(1, 48)]로 적용하였다. 유통 온도에 대한 정보는 시료의 품온 및 진열대 온도를 직접 측정하여 수집하였고 이 또한 Uniform 분포[Uniform(0, 10)] 로 적용하였다.
- cholerae 감염의 위험이 추정된 바 있다18) . 그래서 우렁쉥이를 섭취하고 V. vulnificus 및 V. cholerae 식중독에 걸릴 확률을 추정하기 위해 대형 할인마트, 시장 및 횟집에서 관리자와의 면담을 통해 유통 시간에 대한 정보를 수집했다. 그 결과 우렁쉥이의 경우 최소 1시간, 최대 48시간 진열되는 것으로 조사되어 이를 Uniform 분포[Uniform(1, 48)]로 적용하였다.
- 남해 권역(경남 통영시 일원), 동해 권역(강원도 강릉시등 동해안 일원), 수도권(노량진 수산시장 등 수도권 일원), 서해 권역(전북 군산시 등 서해안 일원), 네 권역을 중심으로 유통(마트, 횟집, 시장) 단계에서의 우렁쉥이 101 개를 채취 후 V. vulnificus와 V. cholerae의 오염실태를 조사하였다. 유통환경(시간 및 온도)은 직접 측정하거나 전문가의 의견을 참고하였으며 조사 결과를 바탕으로 @RISK 프로그램을 이용하여 확률분포모델을 산정하였다.
- cholerae를 섭취하게 되는 용량(Dose, CFU)은 최종 오염도(CFU/g)와 섭취자의 우렁쉥이 섭취량(g)을 고려하여 산출하였다. 또한 V.vulnificus와 V. cholerae에 대한 용량-반응 모델을 문헌 조사를 통하여 선정하였다.
- , San Jose, CA, USA)을 이용하여 개발하였다. 또한 모델 개발에 이용하지 않은 온도(13 o C, 23 o C)에서 접종된 V. vulnificus와 V. cholerae의 생장을 관측한 값과 모델 개발을 통하여 예측한 값을 비교하여 적합성을 판단하였다. 적합성을 판단하기 위하여 RMSE (Root Mean Square Error)를 계산하였고 식은 아래와 같다 14) .
- 병원성 비브리오균의 예측모델 개발을 위해 접종실험(4samples/data points)을 실시하였다. 그 결과 7o C, 10o C, 15o C, 20o C의 모든 온도에서 점차 사멸하는 것을 확인하 였으며(Fig.
- 5 Log CFU/g 수준이 되도록 하였고, 균이 고르게 분포하도록 흔들어 준 뒤 4 o C 에서 15분 간 부착시켰다. 시중에서 오염된 우렁쉥이가 봉지 우렁쉥이로 판매되는 상태를 시뮬레이션하기 위하여 충진수를 우렁쉥이가 잠기는 정도로 5 mL씩 담은 후 7 o C, 10 o C, 15 o C, 20 o C에서 일정 기간 동안 저장하여 병원성 비브리오균의 생장 패턴을 확인하였다. 일정 시간마다, 균을 접종한 우렁쉥이를 멸균된 집게로 집어 멸균백(3M, St.
- 우렁쉥이는 10 g씩 무균적으로 채취하여 50 mL conical tube (Hyundai micro Co., Seoul, Korea)에 취하였다. V.
- 우렁쉥이를 섭취하였을 경우 1일 1인에게서의 병원성 비브리오균 식중독 발생 확률을 추정하기 위하여 위의 결과들을 바탕으로 @RISK와 연동되는 Excel spreadsheet에 Table 3과 같은 시나리오를 구성하고 시뮬레이션 모델을 개발하였다.
- 우렁쉥이를 통해 V. vulnificus와 V. cholerae를 섭취하게 되는 용량(Dose, CFU)은 최종 오염도(CFU/g)와 섭취자의 우렁쉥이 섭취량(g)을 고려하여 산출하였다. 또한 V.
- 균질액을 APW에 십진 희석한 후, CHROM TM agar Vibrio배지에 평판 도말하였으며 37 o C에서 24시간 동안 배양 후 계수하여 균수를 확인하였다. 일반 세균수는 희석액을 tryptic soy agar (TSA; Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA)에 동일 방법으로 평판 도말하여 확인하였다. 각 온도에서의 1차 모델은 Baranyi 모델을 이용하였으며 (Table 1) DMfit 프로그램을 통해, 최대생장률(µ max ; maximum specific growth rate)과 유도기(LPD; Lag Phase Duration)를 산출 하였다.
- 국내에서의 1일 1인 식중독 발생 가능 확률을 계산하기 위해 초기 오염도, 저장 온도 및 시간, 섭취자 비율 및 섭취량, 용량-반응 모델 등의 결과를 활용하여 @RISK와 연동되는 Excel spreadsheet에 시나리오를 구성했다. 최종적으로 구성된 시나리오를 @RISK 프로그램을 이용하여 10,000번의 몬테카를로 시뮬레이션을 시행했고, 이를 통해 1일 1인 식중독 발생 가능 확률을 계산하였다.
대상 데이터
- 2016년도에 수행된 국민건강영양조사에서 전체 응답자는 7,042명이며 이 중 ‘우렁쉥이(또는 멍게)’ 함유 식품을 섭취했다고 응답한 섭취 인원은 18명으로 추출되었다.
- 본 연구에서는 V. vulnificus ATCC27562, NCCP14549, NCCP11887, V. cholerae NCCP14552 (Non-O1), NCCP12842 (O23)를 American Type Culture Collection (ATCC) 및 National Culture Collection for Pathogens (NCCP)에서 분양 받아 사용했으며, 각각의 균주는 20%글리세롤을 함유한 바이알에 담아 -80 o C에 보관하며 사용 하였다. -80 o C에서 동결되어 있는 각각의 균주 100 µL를 Luria-Bertani (LB; Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA)에 NaCl (Samchun chemicals, Seoul, Korea) 2%를 첨가한 액체 배지 10 mL에 현탁하여 37 o C에서 배양하였다.
- 우렁쉥이의 섭취자 비율 및 섭취량은 보건복지부의 국민건강영양조사(2016년) 원시자료를 통하여 산출하였다. 2016년 국민건강영양조사의 원시자료 중 24시간 회상법으로 조사된 자료를 바탕으로 SAS ® version 9.
데이터처리
- 2016년 국민건강영양조사의 원시자료 중 24시간 회상법으로 조사된 자료를 바탕으로 SAS ® version 9.3을 이용하여 우렁쉥이 함유 식품을 섭취하였다고 응답한 섭취인원과 섭취량을 SAS coding을 이용하여 추출하였다.
- Polynomial linear model과 quadratic model을 이용하였으며, 1차 모델 결과로부터 계산된 온도에 따른 µ max와 LPD 값에 대한 2차 모델을 SigmaPlot10.0 (Systat Software, Inc., San Jose, CA, USA)을 이용하여 개발하였다.
- 84 g으로 나타났다. 우렁쉥이 섭취자의 섭취량을 @RISK Fitting 프로그램으로 fitting하여 최적 확률분포모 델을 추정하였다. 그 결과, 우렁쉥이 섭취량 데이터에 대한 최적 확률분포모델은 Exponential distribution[Expon (66.
- cholerae의 오염실태를 조사하였다. 유통환경(시간 및 온도)은 직접 측정하거나 전문가의 의견을 참고하였으며 조사 결과를 바탕으로 @RISK 프로그램을 이용하여 확률분포모델을 산정하였다.
- cholerae의 생장을 관측한 값과 모델 개발을 통하여 예측한 값을 비교하여 적합성을 판단하였다. 적합성을 판단하기 위하여 RMSE (Root Mean Square Error)를 계산하였고 식은 아래와 같다 14) .
- 3을 이용하여 우렁쉥이 함유 식품을 섭취하였다고 응답한 섭취인원과 섭취량을 SAS coding을 이용하여 추출하였다. 추출된 데이터는 Excel (Microsoft@ Excel 2007, Microsoft Corp., Redmond, WA, USA) spreadsheet를 이용하여 응답자 중복성 검사를 실시하였으며, 이를 통해 선정식품에 대한 섭취자 비율과 섭취량을 산출하였다.
이론/모형
- 각 온도에서의 1차 모델은 Baranyi 모델을 이용하였으며 (Table 1) DMfit 프로그램을 통해, 최대생장률(µ max ; maximum specific growth rate)과 유도기(LPD; Lag Phase Duration)를 산출 하였다.
- 용량-반응 모델은 가장 널리 이용되는 Beta-Poisson model[P=1-(1+Dose/β)-α ]을 사용하였다.
- 그 결과 우렁쉥이의 경우 최소 1시간, 최대 48시간 진열되는 것으로 조사되어 이를 Uniform 분포[Uniform(1, 48)]로 적용하였다. 유통 온도에 대한 정보는 시료의 품온 및 진열대 온도를 직접 측정하여 수집하였고 이 또한 Uniform 분포[Uniform(0, 10)] 로 적용하였다.
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