[논문]고목(苦木)의 염증 반응 억제 효과

류익한; 조한백; 김송백; 서윤정; 최창민

doi:10.15204/jkobgy.2011.24.1.001

고목(苦木)의 염증 반응 억제 효과
The Inhibitory Effect of Picrasmae Lignum on Inflammatory Responses 원문보기

大韓韓方婦人科學會誌 = The Journal of Korean obstetrics & gynecology, v.24 no.1, 2011년, pp.1 - 14

류익한 (원광대학교 한의과대학 부인과 교실) , 조한백 (원광대학교 한의과대학 부인과 교실) , 김송백 (원광대학교 한의과대학 부인과 교실) , 서윤정 (원광대학교 한의과대학 부인과 교실) , 최창민 (원광대학교 한의과대학 부인과 교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: The purpose of this study was to investigate the anti-inflammatory effects of aqueous extract from Picrasmae Lignum(PL). Methods: To evaluate the anti-inflammatory effects of PL extract, the productions of NO, PGE2 and expression of pro-inflammatory cytokine(IL-1b, IL-6 and TNF-a) were measured in LPS-induced RAW 264.7 cells. Furthermore Western blot analysis has been done to look into the inhibitory mechanisms such as MAPKs and NF-kB. Results: PL extract down-regulated LPS-induced NO, PGE2, IL-1b, IL-6 and TNF-a productions mainly through JNK and p38 MAPK pathway and NF-kB pathway. Conclusions: These results suggest that PL extract may be effective for the treatment of inflammatory diseases.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

苦木 추출물의 항염증 작용을 알아보기 위하여 RAW 264.7 세포에서 LPS 자극에 의한 NO 생성에 미치는 영향을 조사하였다.
苦木 추출물의 항염증 작용을 알아보기 위하여 RAW 264.7 세포에서 LPS 자극에 의한 PGE₂ 생성에 미치는 영향을 조사하였다.
苦木 추출물이 RAW 164.7 세포에서 LPS로 유도된 cytokine의 생성을 억제하는 기전을 알아보기 위해 MAPK family 인 ERK, JNK, p38의 활성화 정도를 알아보기로 하였다. MAPKs의 활성화는 각각의 인산화를 통해 이루어진다.
苦木 추출물이 RAW 164.7 세포에서 LPS로 유도된 cytokine의 생성을 억제하는 기전을 알아보기 위해 NF-kB의 활성화 정도를 알아보기로 하였다. NF-kB 의 활성은 Ik-Ba의 분해에 의존하므로 Ik-Ba의 농도를 관찰하여 NF-kB의 활성을 알아보았다.
이에 본 논문에서는 苦木의 항염증 작용을 실험적으로 규명하기 위하여 lipopolysaccharide(LPS)로 유도된 RAW 264.7 세포에서 nitric oxide(NO), prostaglandin E₂(PGE₂), tumor necrosis factor alpha(TNF-a), interleukin(IL)-1b, IL-6의 생성을 측정하였고, 염증억제 작용 기전을 구명하기 위해 mitogen-activated protein kinase(MAPK) family인 extracelluar signal-regulated kinase(ERK), c-Jun NH₂-terminal kinase(JNK), p38 MAPK 및 inhibitory kappa B alpha(Ik-Ba)의 발현을 관찰하여 有意한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
또한 내복 및 외용으로 습진 및 골반내조직의 염증 등에도 상당한 효과가 있다⁸⁾고 하여 부인과 영역의 염증성 질환인 帶下 및 골반염증성 질환 등에 응용이 가능할 것으로 기대된다. 이에 본 논문에서는 苦木의 항염증 작용을 실험적으로 규명하였다.

제안 방법

7 세포를 한국세포주은행(KCLB; Seoul, Korea)으로부터 분양받아 사용하였다. 5% CO₂, 37℃ incubator 조건하에서 10% FBS와 penicillin-streptomycin이 함유된 RPMI-1640 배지에 배양하였으며, 2일 마다 10㎝ dish에 분주하였다.
동일한 양의 단백질을 샘플링 버퍼(4×)를 같이 넣어 섞은 다음 그 샘플을 10% SDS-PAGE에 전기영동 한 후 5% skim milk로 2 시간 blocking 하였다. ERK, p38, JNK의 phosphorylation 과 Ik-Ba를 ECL detection 용액으로 확인하였다.
7 세포에서 LPS로 유도된 cytokine의 생성을 억제하는 기전을 알아보기 위해 NF-kB의 활성화 정도를 알아보기로 하였다. NF-kB 의 활성은 Ik-Ba의 분해에 의존하므로 Ik-Ba의 농도를 관찰하여 NF-kB의 활성을 알아보았다.
PCR반응이 끝난 후 4× 샘플링 buffer를 섞은 뒤 1.5% agarose gel에 10 ㎕씩을 넣고 전기영동 한 후 자외선을 이용하여 반응을 확인 하였다.
RAW 264.7 세포를 60 ㎜ culture dish에 5 × 106 cells/dish로 세포를 현탁하고 serum free media(RPMI 1640)로 12 시간 starvation 시킨 후 苦木 추출물를 여러 농도(0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖)로 1 시간 동안 전처리 하였다.
RAW 264.7 세포를 RPMI-1640 배지에서 2 × 105 cells/well의 밀도로 현탁하여 苦木 추출물을 여러 농도(0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖)로 1 시간 동안 전처리 하였다.
RAW 264.7 세포를 RPMI-1640배지에서 2 × 105 cells/well의 밀도로 현탁하여 苦木 추출물을 여러 농도(0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖)로 1 시간 동안 전처리 하였다.
RAW 264.7 세포에서 전염증성 사이토카인의 발현에 대한 苦木 추출물의 효과를 조사하기 위하여, 苦木 추출물을 다양한 농도로 전처리하고 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 세포 상층액에서 IL-1b, IL-6, TNF-a를 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 IL-1b, IL-6, TNF-a 발현을 증가시켰다.
mRNA의 발현을 정량적으로 표현하기 위해 정량 중합 효소 반응을 측정하였다. 합성된 cDNA 1 ㎕, Real time PCR master mix 4 ㎕, pimer 및 probe를 넣고 PCR 조건으로 반응 시켰다.
苦木 추출물을 다양한 농도로 전 처리한 후 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 IL-1b, IL-6, TNF-a의 mRNA를 측정한 결과 LPS 자극은 mRNA의 발현을 증가시켰다.
苦木 추출물을 다양한 농도로 전처리하고 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 세포 상층액에서 NO의 생성을 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 NO의 생성을 증가 시켰다.
苦木 추출물을 다양한 농도로 전 처리한 후 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 IL-1b, IL-6, TNF-a의 mRNA를 측정한 결과 LPS 자극은 mRNA의 발현을 증가시켰다.
苦木 추출물이 RAW 264.7 세포에서 전염증성 인자들을 단백질 수준에서 억제하였음에 착안하여(Fig. 4), mRNA수준에서도 전염증성 인자들을 억제하는지 알아보았다.
苦木의 세포독성에 관해 알아보기 위하여 RAW 264.7 세포에 苦木 추출물을 농도 의존적으로 처리하여 24 시간 후에 세포의 생존율을 측정하였다. 그 결과 실험군은 대조군에 비해 세포 생존율을 유의하게 저하시키지 않았다.
간단히 설명하면 지수성장을 하는 세포들을 RPMI-1640 배지에서 2 × 105 cells/well의 밀도로 현탁하여 여러 농도(0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖)로 苦木 추출물을 처리하였다.
그 후에 PCR 은 각각의 tube에 1 ㎕ cDNA, 1× PCR buffer, 1 mM MgCl 2, 200 mM dNTPs, 0.2 mM의 primer를 넣고 PCR 조건인 92℃에서 30 초, 60℃에서 45 초, 72℃에서 30 초를 30 cycle 반복하였다.
5%의 naphtylethylendiamide)은 아질산염과 화학 반응하여 보라색의 아조염을 형성하는데 이것은 NO의 농도와 일치한다. 따라서 아조염의 농도로부터 아질산염의 농도를 측정하여 NO의 농도를 계산한다.
마우스 대식 세포주인 RAW 264.7 세포를 LPS로 자극하였을 때 苦木 추출물의 항염증 효과를 조사한 바, 먼저 苦木 추출물의 농도별 처리는 세포독성을 나타내지 않았다. 苦木 추출물은 염증 매개물인 NO와 PGE₂의 생성을 억제하였으며, 전염증성 사이토카인인 IL-1b, IL-6, TNF-a의 생성을 단백질 수준과 mRNA 수준에서 억제하였다.
먼저 苦木 추출물의 세포 독성을 확인하였다. MTT 분석법으로 세포 생존율을 측정한 결과 고목 추출물은 RAW 264.
LPS는 동물에 여러 종류의 실험적자가 면역질환을 유발하는 물질로, 대식세포를 자극하여 일과성의 급성 염증을 유발하는 것으로 알려져 있다¹⁸⁾. 본 실험에서는 RAW 264.7 세포를 LPS로 단독 자극한 군을 대조군으로 설정하고, 苦木 추출물을 전처리한 후 LPS로 자극한 군을 실험군으로 설정하였다.
PCR 조건은 92℃에서 30 초, 60℃에서 45 초, 72℃에서 30 초를 40 cycle로 하였다. 정량 중합 효소 반응에 쓰인 Forward(f)와 reverse(r) primer 및 TaqMan probe는 Applied Biosystems에서 합성 하였다.

대상 데이터

LPS(500 ng/㎖)로 자극한 후 24 시간 동안 배양한 뒤, 세포 상층액에서 PGE₂ 및 TNF-a, IL-1b, IL-6을 ELISA 방법으로 정량하였다. ELISA는 Mouse ELISA kit(PGE₂, TNF-a, IL-1b, IL-6)를 BD pharmingen(CA, USA)사에서 구입하여 사용하였다.
Fetal bovine serum(FBS), RPMI-1640, penicillin-streptomycin 등의 세포 배양용 시약들은 Gibco BRL(Grand Island, USA) 사에서 구입하였으며, 배양조는 Corning(Rochester, USA)사에서 구입하였다. 실험에 사용된 시약 중 chloroform, LPS, Tris-HCl, sodium dodesyl sulfate(SDS), acrylamide, bisacrylamide 등은 SIGMA(St.
Louis, USA)사에서 구입하였으며, anti-phospho-ERK1/2, anti-phospho-p38, anti-phospho-JNK, anti-Ik-Ba는 Cell Signaling Technology(MA, USA)사에서 구입하였다. Trizol은 invitrogen(Carlsbad, CA, USA)사에서, PCR master mix는 Roche(Basel, Switzerland)사에서, ECL detection 용액은 Amersham(Buckinghamshire, UK) 사에서 구입하였다. 실험에 사용된 모든 시약은 분석용 등급이상으로 사용하였다.
대식세포 계열인 RAW 264.7 세포를 한국세포주은행(KCLB; Seoul, Korea)으로부터 분양받아 사용하였다. 5% CO₂, 37℃ incubator 조건하에서 10% FBS와 penicillin-streptomycin이 함유된 RPMI-1640 배지에 배양하였으며, 2일 마다 10㎝ dish에 분주하였다.
Fetal bovine serum(FBS), RPMI-1640, penicillin-streptomycin 등의 세포 배양용 시약들은 Gibco BRL(Grand Island, USA) 사에서 구입하였으며, 배양조는 Corning(Rochester, USA)사에서 구입하였다. 실험에 사용된 시약 중 chloroform, LPS, Tris-HCl, sodium dodesyl sulfate(SDS), acrylamide, bisacrylamide 등은 SIGMA(St. Louis, USA)사에서 구입하였으며, anti-phospho-ERK1/2, anti-phospho-p38, anti-phospho-JNK, anti-Ik-Ba는 Cell Signaling Technology(MA, USA)사에서 구입하였다. Trizol은 invitrogen(Carlsbad, CA, USA)사에서, PCR master mix는 Roche(Basel, Switzerland)사에서, ECL detection 용액은 Amersham(Buckinghamshire, UK) 사에서 구입하였다.
실험에 사용한 RAW 264.7 세포는 대식세포주로서 사이토카인의 자극만으로도 스스로 NO를 생성하는 특성을 가지고 있어 일반적으로 세포독성을 갖는 물질의 독성 검정을 위해 유용하게 사용되고 있다¹⁷⁾. LPS는 동물에 여러 종류의 실험적자가 면역질환을 유발하는 물질로, 대식세포를 자극하여 일과성의 급성 염증을 유발하는 것으로 알려져 있다¹⁸⁾.
실험에 사용한 苦木은 옴니허브(경북 영천)에서 구입 후 원광대학교 한의과대학 본초학 교실에서 정선하여 사용하였다.

데이터처리

로 나타내었다. 실험결과에 대한 통계처리는 Oneway ANOVA에 준하였고, p-value가 0.05 미만일 경우 유의한 것으로 판정하였다.

이론/모형

5 ㎎/㎖)로 1 시간 동안 전처리 하였다. LPS(500 ng/㎖)로 자극한 후 24 시간 동안 배양한 뒤, 세포 상층액에서 PGE₂ 및 TNF-a, IL-1b, IL-6을 ELISA 방법으로 정량하였다. ELISA는 Mouse ELISA kit(PGE₂, TNF-a, IL-1b, IL-6)를 BD pharmingen(CA, USA)사에서 구입하여 사용하였다.
RAW 264.7 세포의 생존율은 밀집세포의 미토콘드리아 탈수소 효소에 의해자줏빛 formazan 생성물로 변하는 MTT 환원을 바탕으로 MTT 분석법으로 측정했다. 간단히 설명하면 지수성장을 하는 세포들을 RPMI-1640 배지에서 2 × 10⁵ cells/well의 밀도로 현탁하여 여러 농도(0.
Trizol로 추출한 RNA는 MML-V reverse transcriptase의 protocol을 사용하여 cDNA로 합성하였다. 역전사 반응을 위하여 total RNA 1 ㎍에 0.

성능/효과

苦木 추출물을 다양한 농도로 전처리한 후 LPS로 자극하였다. 15 분 후 인산화 정도를 측정한 결과 LPS로 자극한 RAW 264.7 세포에서는 ERK, JNK, p38의 활성이 증가하였다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 0.
苦木 추출물을 다양한 농도로 전 처리한 후 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 IL-1b, IL-6, TNF-a의 mRNA를 측정한 결과 LPS 자극은 mRNA의 발현을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 TNF-a, IL-6의 mRNA 발현이 유의하게 억제되었다.
7 세포에서 전염증성 사이토카인의 발현에 대한 苦木 추출물의 효과를 조사하기 위하여, 苦木 추출물을 다양한 농도로 전처리하고 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 세포 상층액에서 IL-1b, IL-6, TNF-a를 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 IL-1b, IL-6, TNF-a 발현을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 TNF-a, IL-6 발현이 유의하게 억제되었다.
苦木 추출물을 다양한 농도로 전처리하고 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 세포 상층액에서 NO의 생성을 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 NO의 생성을 증가 시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 NO의 생성이 유의하게 억제되었다(Fig.
苦木 추출물을 다양한 농도로 전처리하고 LPS로 자극하였다. 24 시간 후 세포 상층액에서 PGE₂의 생성을 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 PGE₂ 생성을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 PGE₂ 생성이 유의하게 억제되었다(Fig.
먼저 苦木 추출물의 세포 독성을 확인하였다. MTT 분석법으로 세포 생존율을 측정한 결과 고목 추출물은 RAW 264.7 세포에 대해 독성을 나타내지 않았다(Fig. 1).
苦木 추출물 0.5 ㎎/㎖는 활성화된 대식세포에서 JNK와 p38 MAPK의 활성을 억제하였다(Fig. 6).
7 세포를 LPS로 자극하였을 때 苦木 추출물의 항염증 효과를 조사한 바, 먼저 苦木 추출물의 농도별 처리는 세포독성을 나타내지 않았다. 苦木 추출물은 염증 매개물인 NO와 PGE₂의 생성을 억제하였으며, 전염증성 사이토카인인 IL-1b, IL-6, TNF-a의 생성을 단백질 수준과 mRNA 수준에서 억제하였다. 또한 苦木 추출물은 MAPKs 중 JNK, p38 MAPK 및 NF-kB의 활성을 억제하였으나, ERK의 활성은 억제하지 못했다.
苦木 추출물은 활성화된 대식세포에서 TNF-a, IL-6의 분비를 단백질 단계 및 mRNA 수준에서 억제하였으며, 0.5 ㎎/㎖의 농도에서 IL-1b의 분비를 억제하였고, 0.1 ㎎/㎖ 이상의 농도에서 IL-1b의 mRNA 발현을 억제하였다(Fig. 4, 5).
7 세포에서는 ERK, JNK, p38의 활성이 증가하였다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 0.5 ㎎/㎖의 농도에서 JNK와 p38의 활성이 억제되었다(Fig. 6).
24 시간 후 세포 상층액에서 PGE₂의 생성을 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 PGE₂ 생성을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 PGE₂ 생성이 유의하게 억제되었다(Fig. 3-A).
24 시간 후 세포 상층액에서 IL-1b, IL-6, TNF-a를 측정한 결과 LPS 자극은 대식세포에서 IL-1b, IL-6, TNF-a 발현을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 TNF-a, IL-6 발현이 유의하게 억제되었다. IL-1b의 발현 또한 억제되었으나 0.
7 세포에 苦木 추출물을 농도 의존적으로 처리하여 24 시간 후에 세포의 생존율을 측정하였다. 그 결과 실험군은 대조군에 비해 세포 생존율을 유의하게 저하시키지 않았다. 즉, 苦木 추출물은 RAW 264.
따라서 苦木 추출물은 대식세포에서 염증 반응이 발생하였을 때, NO 및 PGE₂의 생성을 억제하며, NF-kB 및 MAPKs 중 JNK, p38 MAPK의 활성을 억제함으로써 전염증성 cytokine의 생성을 억제하는 것으로 나타났다.
또한 苦木 추출물이 COX-2 mRNA의 발현에 미치는 영향을 조사한 결과 LPS 자극은 COX-2 mRNA 발현을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 COX-2 mRNA 발현이 억제되었다(Fig.
또한 苦木 추출물이 iNOS mRNA의 발현에 미치는 영향을 조사한 결과 LPS 자극은 iNOS mRNA 발현을 증가시켰다. 苦木 추출물을 전처리한 실험군에서는 iNOS mRNA 발현이 억제되었다(Fig.
15분 후 Ik-Ba 의 농도를 측정한 결과 LPS로 단독 자극한 대조군에서는 Ik-Ba의 농도가 감소하였다. 실험군에서는 苦木 추출물의 농도가 증가할수록 Ik-Ba의 농도가 증가하였으며, 0.5 ㎎/㎖의 농도에서 대조군과 비교하여 Ik-Ba의 농도가 높았다(Fig. 7).
이상의 실험 결과들을 통해 苦木 추출물이 대식세포에서 NF-kB와 JNK, p38 MAPK의 활성을 억제하여 IL-1b, IL-6, TNF-a와 NO 및 PGE 2의 생산을 억제함으로써 항염증 효과를 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 苦木 추출물의 이와 같은 작용은 부인과적인 염증성 질환을 포함한 다양한 염증성 질환에 응용이 가능할 것으로 생각되며, 향후 추가적인 실험을 통한 보다 다양한 근거 마련이 이루어져야 할 것이다.

후속연구

이상의 실험 결과들을 통해 苦木 추출물이 대식세포에서 NF-kB와 JNK, p38 MAPK의 활성을 억제하여 IL-1b, IL-6, TNF-a와 NO 및 PGE 2의 생산을 억제함으로써 항염증 효과를 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 苦木 추출물의 이와 같은 작용은 부인과적인 염증성 질환을 포함한 다양한 염증성 질환에 응용이 가능할 것으로 생각되며, 향후 추가적인 실험을 통한 보다 다양한 근거 마련이 이루어져야 할 것이다.
quassin, picrasmin 등이 함유되어 있으며⁸⁾, 항암활성과 면역조절작용을 지니고 있으며, 항고혈압, 항산화, 소염, 해독 작용 등을 갖고 있다고 알려져 있으며^9,10), 기존의 연구를 통해 항산화 활성¹¹⁾ 및 항암작용^12-14)이 보고되었다. 또한 苦木은 내복 및 외용으로 습진 및 골반 내조직의 염증 등에도 상당한 효과가 있었으며, 소염(특히 급성 염증에 대한), 지통 작용이 있다⁸⁾고 하여 부인과 질환에의 응용이 가능할 것으로 기대된다.
항염증 작용이 있는 것으로 알려진 苦木은 淸熱燥濕, 解毒殺蟲하는 효능이 있어 세균성 이질, 위장염, 담도감염, 회충병, 급성 화농성 감염, 옴, 습진, 화상을 치료한다고 하였다. 또한 내복 및 외용으로 습진 및 골반내조직의 염증 등에도 상당한 효과가 있다⁸⁾고 하여 부인과 영역의 염증성 질환인 帶下 및 골반염증성 질환 등에 응용이 가능할 것으로 기대된다. 이에 본 논문에서는 苦木의 항염증 작용을 실험적으로 규명하였다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	염증이란 무엇인가?	염증은 활성화된 면역세포에 의해 일어나는 선천 면역 계통의 복합적인 반응으로1) 감염, 외상, 화학적 · 기계적 · 방사선 및 열에 의한 손상, 과민반응 등에 의해 발생 한다2). 국소 순환계의 순환장애와 혈액 성분의 혈관 외로 삼출 및 조직 증식이 동반되는 일련의 과정으로 나타나게 되며, 발적, 종창, 발열, 동통 및국소 기능장애 등이 나타난다3).
	비스테로이드성 소염진통제의 문제점은 무엇인가?	이러한 염증성 질환에서 현재 가장 널리 사용되고 있는 약물인 비스테로이드성 소염진통제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)는 장기 투여시 출혈성 위장관 궤양을 비롯하여, 신기능 저하, 혈압 상승 등의 문제점을 안고 있다6). 따라서 기존 약물에 비하여 부작용이 적으면서 효과적인 항염제 개발이 요구되고 있으며, 천연물들의 약리효과에 대해 관심이 증대되고 있다.
	염증으로 인해 나타날 수 있는 증상은 무엇인가?	염증은 활성화된 면역세포에 의해 일어나는 선천 면역 계통의 복합적인 반응으로1) 감염, 외상, 화학적 · 기계적 · 방사선 및 열에 의한 손상, 과민반응 등에 의해 발생 한다2). 국소 순환계의 순환장애와 혈액 성분의 혈관 외로 삼출 및 조직 증식이 동반되는 일련의 과정으로 나타나게 되며, 발적, 종창, 발열, 동통 및국소 기능장애 등이 나타난다3). 이러한 염증 반응은 조직에 가해진 손상을 회복 하기 위한 일련의 과정으로 생명체가 외부자극에 대한 자기보호를 목적으로 혈관, 신경, 체액 및 세포를 이용하여 손상을 국소화 시키고 제거하는 것을 의미 한다4).

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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