[논문]등골나물 추출물이 인간의 유방암세포인 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착에 미치는 영향

우은영; 박소영; 권수진; 권규택; 김종대; 임순성; 윤정한

doi:10.9721/kjfst.2011.43.2.213

등골나물 추출물이 인간의 유방암세포인 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착에 미치는 영향
Effect of Eupatorium japonicum Extract on the Metastasis, Invasion and Adhesion of MDA-MB-231 Human Breast Cancer Cells 원문보기

한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology, v.43 no.2, 2011년, pp.213 - 219

우은영 (한림대학교 식품영양학과) , 박소영 (한림대학교 식품영양학과) , 권수진 (한림대학교 식품영양학과) , 권규택 (한림대학교 식품영양학과) , 김종대 (강원대학교 바이오산업공학부 식품생명공학) , 임순성 (한림대학교 식품영양학과) , 윤정한 (한림대학교 식품영양학과)

초록
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등골나물은 국화과 여러해살이 식물로 한방에서는 고혈압, 폐렴, 황달, 홍역, 요통 등에 사용한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 등골나물의 꽃 부위를 추출하여 등골나물 추출물이 유방암 세포인 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착은 등골나물 추출물의 농도($0-20{\mu}g/mL$)가 증가할수록 현저하게 감소하였다. 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2의 활성을 억제하였고, TIMP-1의 발현은 감소시킨 반면 TIMP-2의 발현은 증가시켰다. 또한, 등골나물 추출물은 uPA, VEGF 그리고 ICAM의 mRNA 및 단백질 수준을 현저히 감소시켰다. 특히, 등골나물 헥산 분획물이 유방암세포의 이동을 현저하게 억제하였다. 이상의 결과로부터 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2, uPA, TIMP-1 및 ICAM의 감소, TIPM-2의 증가를 통해 유방암세포의 전이를 억제하는 것으로 판단된다. 따라서 본 연구는 이러한 효능을 지닌 등골나물 추출물을 암전이에 효과가 있는 암예방제나 항암제로 개발할 수 있는 가능성을 제시한다.

Abstract ▼ AI-Helper

The metastatic effect of Eupatorium japonicum extract (EJE) on MDA-MB-231 human breast cancer cells was investigated. MDA-MB-231 cells were treated with various concentrations of EJE (0, 5, 10 and $20{\mu}g/mL$). EJE inhibited cell migration, invasion and adhesion of MDA-MB-231 cells in dose-dependent manners. Gelatin zymography exhibited that EJE significantly down regulated secretion of matrix metalloproteinase (MMP)-9 and MMP-2. EJE decreased the protein levels of tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1 but increased TIMP-2 levels. Additionally, EJE reduced the protein and mRNA levels of urokinase-type plasminogen activator (uPA), vascular endothelial growth factor (VEGF) and intercellular adhesion molecule (ICAM). In several solvent fractions of EJE, the hexane fraction markedly decreased MDAMB-231 cell migration. Thus, these finding suggest that EJE may be a potential antimetastatic agent, which can considerably inhibit the metastatic and invasive capacity of breast cancer cells.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

ECM의 분해에 관여하는 중요한 유전자로는 세포외 기질의 구성성분을 분해하는 효소인 MMPs와 plasminogen을 plasmin으로 활성화시켜 세포외 기질의 분해를 유도하는 uPA가 있다(7). 등골나물 추출물이 MDA-MB-231 세포의 이동 및 침윤을 억제하였으므로 관련 유전자의 발현에 미치는 영향을 조사하였다. MMPs의 분비를 조사하기 위하여 gelatin zymography를 수행한 결과 pro MMP-9과 pro MMP-2는 20 mg/mL의 등골나물 추출물을 처리한 경우에만 유의적으로 감소하였다(Fig.
등골나물 추출물이 암세포의 이동 및 침윤을 억제하였으므로 암전이에 또 다른 중요한 요인인 암세포의 부착에 미치는 등골 나물 추출물의 영향을 조사하였다. 등골나물 추출물을 처리하고 human collagen type I이 코팅된 plate에 부착된 MDA-MB-231세포수를 정량한 결과 등골나물 추출물 처리로 인하여 MDA-MB231 세포의 부착이 농도의존적으로 감소하였다(Fig.
이상의 결과로부터 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2, uPA, TIMP-1 및 ICAM의 감소, TIPM-2의 증가를 통해 유방암세포의 전이를 억제 하는 것으로 판단된다. 따라서 본 연구는 이러한 효능을 지닌 등골나물 추출물을 암전이에 효과가 있는 암예방제나 항암제로 개발할 수 있는 가능성을 제시한다.
등골나물은 국화과 여러해살이 식물로 한방에서는 고혈압, 폐렴, 황달, 홍역, 요통 등에 사용한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 등골나물의 꽃 부위를 추출하여 등골나물 추출물이 유방암 세포인 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착은 등골나물 추출물의 농도(0-20 µg/mL)가 증가할수록 현저하게 감소하였다.
본 연구에서는 지금까지 생리활성에 대한 연구가 이루어지지 않은 등골나물 추출물이 유방암의 전이에 미치는 영향을 조사하기 위해 인간의 유방암 세포인 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤및 부착에 미치는 영향을 조사하고 그 작용기전을 규명하고자 하였다.

제안 방법

cells/dish의 밀도로 100 mm dish 에 분주하였다. 24시간 배양 후, 1% charcoal-stripped FBS를 함유한 DMEM/F12 배지로 serum deprivation하여 혈청에 함유된 여러 성분들의 효과를 최소화하였다. Serum deprivation 후 등골나물 추출물을 0, 5, 10 및 20 µg/mL의 농도로 첨가하여 24시간 동안 세포를 배양하였다.
Adhesion assay를 위해 Type-I collagen coated CytoMatrix Cell Adhesion strip에 세포를 분주하고 등골나물 추출물을 0, 5, 10 및 20 µg/mL의 농도로 첨가하여 45분 동안 배양하였다.
그 후 membrane을 horse radish peroxidase(HRP)-linked anti-rabbit, mouse, 혹은 goat IgG를 첨가하여 1시간 교반한 후 TBST로 10분간 3회 헹구었다. Antibody에 결합한 단백질들의 signal은 immobilon western chemiluminescent HRP substrate를 이용하여 가시화 하였고 분자량은 molecular weight standard와 비교하여 나타내었다.
MMP-9, -2, uPA 및 TIMP-1의 감소, TIPM-2의 증가 그리고 adhesion molecule들의 감소를 통해 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착을 억제시킨 등골나물 추출물에 함유되어 있는 활성성분을 조사하기 위해 여러 용매를 이용하여 단계적으로 분획하고 각각의 분획물이 MDA-MB-231 세포의 이동에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 비극성 유기용매인 헥산, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드를 사용하여 분리한 분획에서 MDA-MB231 세포의 이동이 각각 97, 69 및 85% 억제되었으며 특히, 헥산 분획물(HX)에서 세포의 이동이 가장 현저히 억제됨을 확인하였다(Fig.
MMPs 활성을 조사하기 위하여 농축된 conditioned medium을 0.2% 젤라틴이 포함된 SDS-PAGE에서 전기영동한 후 renaturing buffer(2.5% Triton X-100)로 30분씩 2번 씻은 뒤, 50 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5), 0.15 mmol/L NaCl, 10 mmol/L CaCl2, 0.02% Brij35를 포함하는 developing buffer로 37℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 젤은 0.
1% Tween²⁰⁾에서 1시간 동안 blocking한다음 TBST로 10분간 3회 헹구었다. Membrane에 MMPs, TIMPs, uPA 또는 VEGF antibody를 첨가하고 4℃에서 16시간 동안 교반 하여 antibody를 붙인 후, TBST로 10분간 3회 헹구었다. 그 후 membrane을 horse radish peroxidase(HRP)-linked anti-rabbit, mouse, 혹은 goat IgG를 첨가하여 1시간 교반한 후 TBST로 10분간 3회 헹구었다.
RNA(3 µg)는 Superscript II reverse transcriptase(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)를 사용하여 42℃에서 1시간 45분 동안, 그리고 70℃에서 15분 동안 반응시켜 cDNA를 얻은 후, real-time PCR을 수행하였다.
Real-time PCR 에 필요한 primer는 Bioneer(Daejeon, Korea)에서 주문·제작하였다.
Serum deprivation 후 등골나물 추출물을 0, 5, 10 및 20 µg/mL의 농도로 첨가하여 24시간 동안 세포를 배양하였다.
종양세포와 기저막의 matrix와의 유착에는 다양한 adhesion molecule들이 관여하는 것으로 알려져 있다(28). 그 중 세포와 세포, 세포와 기질간의 결합을 매개하는 단백질인 integrin과 integrin 수용체의 ligand로 알려진 inter-cellular cell adhesion molecule(ICAM)의 발현을 Western blot을 수행하여 조사하였다. Fig.
Membrane에 MMPs, TIMPs, uPA 또는 VEGF antibody를 첨가하고 4℃에서 16시간 동안 교반 하여 antibody를 붙인 후, TBST로 10분간 3회 헹구었다. 그 후 membrane을 horse radish peroxidase(HRP)-linked anti-rabbit, mouse, 혹은 goat IgG를 첨가하여 1시간 교반한 후 TBST로 10분간 3회 헹구었다. Antibody에 결합한 단백질들의 signal은 immobilon western chemiluminescent HRP substrate를 이용하여 가시화 하였고 분자량은 molecular weight standard와 비교하여 나타내었다.
등골나물 추출물의 분획물은 추출물 30 g에 300 mL의 증류수와 동일한 양의 메틸렌클로라이드를 첨가하고 분획하여 메틸렌클로라이드층만을 분리함으로써 메틸렌클로라이드 분획물(MC)을 제조하고, 나머지 용액(물층)에 동일한 양의 헥산을 첨가하고 분획하여 헥산층만을 분리함으로써 헥산 분획물(HX)을 제조하였다. 같은 방법으로 에틸아세테이트 분획물(EA)과 부탄올 분획물 (BT)을 제조하고, 나머지 용액은 물 분획물(WT)으로 사용하였다.
암전이는 암세포의 세포외 기질(extracellular matrix; ECM) 분해, 이동 및 혈관 내 이동, 암세포의 원격 부위 착상 과정을 통해 이루어진다(21). 등골나물 추출물이 MDA-MB-231 세포의 전이에 미치는 영향을 조사하기 위하여 먼저 transwell system을 사용하여 세포의 이동 및 침윤에 미치는 영향을 조사하였다. MDAMB-231 세포에 등골나물 추출물을 0, 5, 10 및 20 µg/mL로 처리하고 4시간 동안 이동한 세포의 수를 확인한 결과 등골나물 추출물은 MDA-MB-231 세포의 이동을 농도의존적으로 감소시킴을 확인하였다(Fig.
2C). 등골나물 추출물이 MMPs의 분비를 억제하였으므로 MMPs의 활성을 저해하는 단백질로 알려진 TIMPs의 발현을 Western blot을 수행하여 확인하였다. Fig.
등골나물(Eupatorium japonicum)의 꽃에 70% 에탄올을 가하여 등골나물 꽃을 완전히 침지시킨 후, 70℃에서 환류시키면서 추출 하였다. 추출을 통해 제조된 등골나물 추출액은 감압농축기 (Heidolph, Schwabach, Germany)를 이용하여 감압농축한 뒤, −20℃에서 동결건조하였다.
02% Brij35를 포함하는 developing buffer로 37℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 젤은 0.25% coomassie brilliant blue solution으로 2시간 동안 염색을 한 후, 탈색하여 젤라틴의 분해 정도를 관찰하였다.
분획을 통해 제조된 용매별 등골나물 분획물은 각각 감압농축기를 이용하여 감압농축한 뒤, −20℃에서 동결건조하여 제조하였다.
세포를 여러 농도의 등골나물 추출물로 처리하고 total RNA를 Qiagen RNase mini kit(Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 분리하였다. RNA(3 µg)는 Superscript II reverse transcriptase(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)를 사용하여 42℃에서 1시간 45분 동안, 그리고 70℃에서 15분 동안 반응시켜 cDNA를 얻은 후, real-time PCR을 수행하였다.
위와 같은 방법으로 세포를 처리한 다음 무혈청 배지에 등골 나물 추출물을 0, 5, 10 및 20 µg/mL의 농도로 첨가하여 세포를 배양하였다.
추출을 통해 제조된 등골나물 추출액은 감압농축기 (Heidolph, Schwabach, Germany)를 이용하여 감압농축한 뒤, −20℃에서 동결건조하였다.

대상 데이터

RNase H, Oligo(dT) Primer, 100 bp DNA Ladder, Superscript II RNase H-Reverse transcriptase는 Invitrogen(Carlsbad, CA, USA)에서, Amicon® Ultra-15와 ImmobilonTM Western Chemiluminescent HRP Substrate는 Millipore(Billerica, MA, USA)에서, 그리고 단백질 정량을 위한 BCA protein assay kit는 Pierce(Rockford, IL, USA)에서 구입하였다.
등골나물 추출물의 분획물은 추출물 30 g에 300 mL의 증류수와 동일한 양의 메틸렌클로라이드를 첨가하고 분획하여 메틸렌클로라이드층만을 분리함으로써 메틸렌클로라이드 분획물(MC)을 제조하고, 나머지 용액(물층)에 동일한 양의 헥산을 첨가하고 분획하여 헥산층만을 분리함으로써 헥산 분획물(HX)을 제조하였다. 같은 방법으로 에틸아세테이트 분획물(EA)과 부탄올 분획물 (BT)을 제조하고, 나머지 용액은 물 분획물(WT)으로 사용하였다. 분획을 통해 제조된 용매별 등골나물 분획물은 각각 감압농축기를 이용하여 감압농축한 뒤, −20℃에서 동결건조하여 제조하였다.
본 실험에서 사용한 인간의 유방암세포인 MDA-MB-231 세포는 American Type Culture Collection(ATCC)에서 구입하였다. 세포 배양에 사용한 Dulbecco’s modified eagle’s medium: Nutrient mixture ham’s F12(DMEM/F12), Fetal bovine serum(FBS), trypsin-EDTA, penicillin-streptomycin은 Cambrex Bio Technology (Walkersville, MD, USA)에서, migration assay에 사용한 8.
세포 배양에 사용한 Dulbecco’s modified eagle’s medium: Nutrient mixture ham’s F12(DMEM/F12), Fetal bovine serum(FBS), trypsin-EDTA, penicillin-streptomycin은 Cambrex Bio Technology (Walkersville, MD, USA)에서, migration assay에 사용한 8.0 µm pore size의 transwell과 세포배양에 사용한 멸균된 플라스틱 용기는 Corning Costar(Corning, New York, NY, USA)에서 구입하였다.

데이터처리

수집된 결과는 SAS(Statistical Analysis System) Window 8.1 프로 그램(SAS Institute, Cary, NC, USA)을 이용하여 통계 분석하였으며, 각 실험군의 평균치간의 유의성은 p<0.05 수준에서 Duncan’s multiple range test에 의해 분석하였다.

이론/모형

Invasion assay는 matrigel이 미리 코팅된 Matrigel invasion chamber(BD Biosciences)를 사용하여 transwell migration assay와 같은 방법으로 수행하였다.
Polycarbonate filter를 통해 이동한 세포는 hematoxylin-eosin staining 방법으로 염색하였고 이동된 세포의 수는 현미경(×100)을 이용하여 정량하였다.
신생혈관생성은 암전이 과정에 관여할 뿐만 아니라 초기 전암 병소(premalignant lesions)에서부터 암세포의 성장에 필수적인 과정으로서 인식되고 있으며, vascular endothelial growth factor(VEGF)는 신생혈관생성을 유도하는 중요한 angiogenic factor로 알려져 있다(25). 따라서 등골나물 추출물이 VEGF의 발현에 미치는 영향을 확인하기 위하여 Western blot 및 real-time PCR을 수행하였다. 그 결과 VEGF의 발현은 5 µg/mL의 등골나물 추출물을 처리하였을 때 증가하였다가 10과 20 µg/mL 처리시에는 점차 감소하는 경향을 보였다(Fig.
65 mM EDTA로 처리하여 세포를 계대배양하였고 배지는 2-3일 마다 교환하였다. 살아 있는 세포의 수는 MTT assay방법으로 측정하였다(20).
암세포의 이동을 조사하기 위하여 transwell cell culture chamber 를 사용하였다. 먼저 transwell membrane의 아래쪽을 0.

성능/효과

등골나물 추출물이 MMPs의 분비를 억제하였으므로 MMPs의 활성을 저해하는 단백질로 알려진 TIMPs의 발현을 Western blot을 수행하여 확인하였다. Fig. 2B에 따르면 TIMP-1은 20 mg/mL의 등골나물 추출물을 처리한 경우에만 감소하는 것으로 나타났으며, 그와는 반대로 TIMP-2는 10과 20 mg/mL의 등골 나물 추출물을 처리한 경우에 유의적으로 증가하는 것으로 나타났다. TIMP-1의 경우는 MMP-9의 저해제로도 알려져 있으나(14), 그 외에도 세포증식 촉진, 세포사멸 억제 등의 다른 여러 가지 기능을 가지고 있어(23) 이러한 결과를 보인 것으로 판단된다.
MDAMB-231 세포에 등골나물 추출물을 0, 5, 10 및 20 µg/mL로 처리하고 4시간 동안 이동한 세포의 수를 확인한 결과 등골나물 추출물은 MDA-MB-231 세포의 이동을 농도의존적으로 감소시킴을 확인하였다(Fig. 1A).
MMP-9의 mRNA 수준을 확인하기 위해 real-time PCR을 수행한 결과 10과 20 µg/mL 등골 나물 추출물은 MMP-9의 transcript 수준을 유의적으로 감소시켰다(Fig. 2C).
등골나물 추출물이 MDA-MB-231 세포의 이동 및 침윤을 억제하였으므로 관련 유전자의 발현에 미치는 영향을 조사하였다. MMPs의 분비를 조사하기 위하여 gelatin zymography를 수행한 결과 pro MMP-9과 pro MMP-2는 20 mg/mL의 등골나물 추출물을 처리한 경우에만 유의적으로 감소하였다(Fig. 2A). MMP-9의 mRNA 수준을 확인하기 위해 real-time PCR을 수행한 결과 10과 20 µg/mL 등골 나물 추출물은 MMP-9의 transcript 수준을 유의적으로 감소시켰다(Fig.
VEGF의 mRNA수준을 확인한 결과에서도 Western blot 결과와 마찬가지로 VEGF의 tran script 수준이 5 µg/mL의 등골나물 추출물에 의해 증가하는 경향을 보이다가 10과 20 µg/mL 농도에서는 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다(Fig. 4B).
ECM의 분해에 관여하는 또 다른 중요한 유전자인 uPA는 암세포에서 분비되며 uPA receptor와 결합하여 plasminogen을 plasmin으로 활성화시키며 활성화된 plasmin은 직·간접적으로 ECM 을 분해하여 세포의 이동 및 침윤을 도와준다(24). uPA 단백질의 발현 변화를 확인하기 위하여 Western blot을 수행한 결과 등골 나물 추출물은 uPA 단백질의 발현을 농도의존적으로 감소시켰으며 특히, 분자량 35 kDa의 active uPA가 현저하게 감소하였다(Fig. 3A). 이러한 결과는 mRNA 수준에서도 확인할 수 있었다(Fig.
그 결과 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착은 등골나물 추출물의 농도(0-20 µg/mL)가 증가할수록 현저하게 감소하였다.
그 결과 VEGF의 발현은 5 µg/mL의 등골나물 추출물을 처리하였을 때 증가하였다가 10과 20 µg/mL 처리시에는 점차 감소하는 경향을 보였다(Fig. 4A).
MMP-9, -2, uPA 및 TIMP-1의 감소, TIPM-2의 증가 그리고 adhesion molecule들의 감소를 통해 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착을 억제시킨 등골나물 추출물에 함유되어 있는 활성성분을 조사하기 위해 여러 용매를 이용하여 단계적으로 분획하고 각각의 분획물이 MDA-MB-231 세포의 이동에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 비극성 유기용매인 헥산, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드를 사용하여 분리한 분획에서 MDA-MB231 세포의 이동이 각각 97, 69 및 85% 억제되었으며 특히, 헥산 분획물(HX)에서 세포의 이동이 가장 현저히 억제됨을 확인하였다(Fig. 6). 보통, 헥산에 의해 분리되어 나오는 물질은 비교적 휘발성이 낮은 완전 비극성 유기화합물로 알려져 있어 등골나물에 들어있는 비극성 유기화합물이 암세포의 이동을 억제하는데 효과를 나타낼 것으로 판단된다.
그 결과 MDA-MB-231 세포의 이동, 침윤 및 부착은 등골나물 추출물의 농도(0-20 µg/mL)가 증가할수록 현저하게 감소하였다. 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2의 활성을 억제하였고, TIMP-1의 발현은 감소시킨 반면 TIMP-2의 발현은 증가시켰다. 또한, 등골나물 추출물은 uPA, VEGF 그리고 ICAM의 mRNA 및 단백질 수준을 현저히 감소시켰다.
등골나물 추출물이 암세포의 이동 및 침윤을 억제하였으므로 암전이에 또 다른 중요한 요인인 암세포의 부착에 미치는 등골 나물 추출물의 영향을 조사하였다. 등골나물 추출물을 처리하고 human collagen type I이 코팅된 plate에 부착된 MDA-MB-231세포수를 정량한 결과 등골나물 추출물 처리로 인하여 MDA-MB231 세포의 부착이 농도의존적으로 감소하였다(Fig. 5A). 종양세포와 기저막의 matrix와의 유착에는 다양한 adhesion molecule들이 관여하는 것으로 알려져 있다(28).
등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2의 활성을 억제하였고, TIMP-1의 발현은 감소시킨 반면 TIMP-2의 발현은 증가시켰다. 또한, 등골나물 추출물은 uPA, VEGF 그리고 ICAM의 mRNA 및 단백질 수준을 현저히 감소시켰다. 특히, 등골나물 헥산 분획물이 유방암세포의 이동을 현저하게 억제하였다.
1A). 또한, 세포외 기질 성분으로 알려진 matrigel로 코팅된 invasion chamber를 사용하여 15시간 동안 세포의 침윤을 살펴본 결과 세포의 침윤 역시 농도의존적으로 감소함을 확인하였다(Fig. 1B). 그러나, 같은 시간 동안 등골나물 추출물을 처리하였을 때 세포의 증식에는 어떠한 영향도 미치지 않는 것으로 나타났다(Fig.
이러한 결과를 통해 등골나물 추출물은 integrin-α2와 ICAM 의 발현을 조절함으로써 암세포의 부착을 억제하는 것으로 보인다.
특히, 등골나물 헥산 분획물이 유방암세포의 이동을 현저하게 억제하였다. 이상의 결과로부터 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2, uPA, TIMP-1 및 ICAM의 감소, TIPM-2의 증가를 통해 유방암세포의 전이를 억제 하는 것으로 판단된다. 따라서 본 연구는 이러한 효능을 지닌 등골나물 추출물을 암전이에 효과가 있는 암예방제나 항암제로 개발할 수 있는 가능성을 제시한다.
이상의 결과를 통해 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2, uPA 및 TIMP-1의 감소, TIPM-2의 증가 그리고 adhesion molecule들의 감소를 통해 유방암세포의 전이를 억제하는 것으로 판단된다. 따라서, 등골나물 추출물은 비교적 독성과 부작용이 적은 암전이 억제제로 개발할 수 있는 좋은 소재가 될 수 있음을 제시한다.
또한, 등골나물 추출물은 uPA, VEGF 그리고 ICAM의 mRNA 및 단백질 수준을 현저히 감소시켰다. 특히, 등골나물 헥산 분획물이 유방암세포의 이동을 현저하게 억제하였다. 이상의 결과로부터 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2, uPA, TIMP-1 및 ICAM의 감소, TIPM-2의 증가를 통해 유방암세포의 전이를 억제 하는 것으로 판단된다.

후속연구

이상의 결과를 통해 등골나물 추출물은 MMP-9, MMP-2, uPA 및 TIMP-1의 감소, TIPM-2의 증가 그리고 adhesion molecule들의 감소를 통해 유방암세포의 전이를 억제하는 것으로 판단된다. 따라서, 등골나물 추출물은 비교적 독성과 부작용이 적은 암전이 억제제로 개발할 수 있는 좋은 소재가 될 수 있음을 제시한다. 이러한 용도로 등골나물 추출물을 사용하기 위해서는 전이 억제 효능을 나타내는 성분의 동정, 동물 모델을 이용한 in vivo 실험 및 좀 더 세밀한 기전 연구 등 추후에도 지속적이고 다양한 연구의 수행이 필요할 것이다.
1C). 이러한 결과를 통해 등골나물 추출물은 세포독성이 없으면서 유방암세포인 MDA-MB-231의 이동 및 침윤을 억제하여 암전이 억제제로 개발할 수 있는 좋은 소재가 될 수 있음을 제시한다.
따라서, 등골나물 추출물은 비교적 독성과 부작용이 적은 암전이 억제제로 개발할 수 있는 좋은 소재가 될 수 있음을 제시한다. 이러한 용도로 등골나물 추출물을 사용하기 위해서는 전이 억제 효능을 나타내는 성분의 동정, 동물 모델을 이용한 in vivo 실험 및 좀 더 세밀한 기전 연구 등 추후에도 지속적이고 다양한 연구의 수행이 필요할 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	한방에서 등골나물은 어떤 질환에 사용되는가?	등골나물은 국화과에 속하는 여러해살이풀로 한국·중국·일본 등지에 분포하며 야생(주로 산과 들)에서 서식 한다. 어린 잎은 나물로 먹기도 하고 꽃은 차로 마시기도 하며 한방에서는 황달, 중풍 및 고혈압 등에 사용하는 것으로 알려져 있다(3).
	MMP의 역할은?	세포외 기질(extracellular matrix, ECM)의 구성성분을 분해하는 유전자로는 matrix metalloproteinase(MMPs), plasminogen activator(PA), cathepsin 등이 알려져 있다(5-7). MMP는 zinc와 calcium dependent proteinase로 콜라겐과 다른 matrix 단백질들을 분해함으로써 암의 전이에 중추적인 역할을 담당한다(8). 지금까지 알려진 여러 종류의 MMP 중 type IV collagenase인 MMP-2(72 kDa)와 MMP-9(92 kDa)은 기저 막과 ECM의 주요 구조 성분인 type IV collagen을 분해할 뿐 아니라 신생혈관 형성에도 관여하여 종양의 이동 및 침윤을 유도한다(9,10).
	세포외 기질의 구성성분을 분해하는 유전자에는 어떤 것들이 있는가?	종양이 생성되어 악성 암으로 발전한 후 다른 조직으로 전이 되기 위해서는 세포외 기질의 분해, 신생혈관 형성(angiogenesis), 순환계를 통한 종양세포의 이동 및 새로운 조직에 부착하여 침윤하는 일련의 과정을 거쳐야 한다(4). 세포외 기질(extracellular matrix, ECM)의 구성성분을 분해하는 유전자로는 matrix metalloproteinase(MMPs), plasminogen activator(PA), cathepsin 등이 알려져 있다(5-7). MMP는 zinc와 calcium dependent proteinase로 콜라겐과 다른 matrix 단백질들을 분해함으로써 암의 전이에 중추적인 역할을 담당한다(8).

참고문헌 (28)

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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