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문제 정의
- 본 연구의 목적은 FASN 유전자변이와 한우의 지방 및 지방산형질과의 연관성을 찾는데 있다. FASN 유전자 엑손 34번의 g.
제안 방법
- A→G과 지방산조성 및 지방형질과의 연관성을 조사하였다.
- PCR-RFLP 분석은 PCR반응물 5 ul에 제한효소 1～1.5 unit을 첨가하고 각 제한효소별 활성온도에서 3시간 이상 반응 시킨 후 절단된 DNA 단편의 크기를 고려하여 ethidum bromide가 포함된 2～3% agarose gel에 전기영동한 후, 나타난 DNA 밴드 양상 분석을 통해 최종적으로 각 개체별 SNP 유전자형을 판정하였다.
- PCRRFLP를 위한 PCR 반응은 genomic DNA 1 ul(50 ng), 10×PCR reaction buffer(10 mM Tris-HCl, pH 8.3, 50 mM KCl, 1.5 mM MgCl2), 2.5 mM dNTPs, 10 pmol primer, 1 unit Taq polymerase(G&P, Korea)를 사용하여 총 반응액 15 ul로 보정 후 PTC-240 DNA Engine Tetrad 2 Cycler(MJ reserch, USA)를 이용하여 반응을 수행하였다.
- 합성 반응은 95℃에서 10분 간 최초 변성(pre-denaturation) 시킨 후, 95℃에서 40초 동안 변성(denaturation), 61℃에서 40초간 접합(annealing), 그리고 72℃에서 1분 간 합성(extension)반응의 3단계를 35회 반복한 후 72℃에서 마지막 합성(final extension)을 10분간 수행하였다. PCR이 끝난 후 3 ul의 PCR 산물을 1.5% agarose gel에 전기영동을 실시하고 UV 상에서 증폭 여부를 확인하였다. PCR-RFLP 분석은 PCR반응물 5 ul에 제한효소 1～1.
- 5 mM dNTPs, 10 pmol primer, 1 unit Taq polymerase(G&P, Korea)를 사용하여 총 반응액 15 ul로 보정 후 PTC-240 DNA Engine Tetrad 2 Cycler(MJ reserch, USA)를 이용하여 반응을 수행하였다. 합성 반응은 95℃에서 10분 간 최초 변성(pre-denaturation) 시킨 후, 95℃에서 40초 동안 변성(denaturation), 61℃에서 40초간 접합(annealing), 그리고 72℃에서 1분 간 합성(extension)반응의 3단계를 35회 반복한 후 72℃에서 마지막 합성(final extension)을 10분간 수행하였다. PCR이 끝난 후 3 ul의 PCR 산물을 1.
- 본 연구는 농촌진흥청 국립축산과학원에서 2002년 4월 부터 2004년 4월까지 사양 실험한 한우 90두에 대해서 도축 후 냉도체로부터 등심조직으로부터 조직을 확보하였고, 확보된 조직은 곧바로 액체질소에서 동결하여 -70℃에 보관하여 실험하였다. 확보된 조직으로부터 DNA 추출은 Genomic DNA Prep kit(Solgent, Korea)를 이용하여 추출하였으며, 조사된 형질로는 도축후 등지방두께, 불가식지방무게(내장 및 신장지방), 근내지방함량(%), 지방산조성을 측정하였다. 본 연구에서 사용된 공시축 표현형자료에 대한 기초 통계량은 Table 1에 정리하였다.
대상 데이터
- 본 실험을 위하여 제작된 프라이머는 기존에 Zhang 등(2007)이 보고한 프라이머 서열을 이용하여 제작하였다(Table 2). 유전자형결정은 PCR-RFLP법을 이용하여 유전자형 분석을 실시하였다(Fig.
- 본 연구는 농촌진흥청 국립축산과학원에서 2002년 4월 부터 2004년 4월까지 사양 실험한 한우 90두에 대해서 도축 후 냉도체로부터 등심조직으로부터 조직을 확보하였고, 확보된 조직은 곧바로 액체질소에서 동결하여 -70℃에 보관하여 실험하였다. 확보된 조직으로부터 DNA 추출은 Genomic DNA Prep kit(Solgent, Korea)를 이용하여 추출하였으며, 조사된 형질로는 도축후 등지방두께, 불가식지방무게(내장 및 신장지방), 근내지방함량(%), 지방산조성을 측정하였다.
데이터처리
- 본 연구에서 조사된 한우 표현형에 대한 유전자형의 효과를 분석하기 위해 ASReml package(Gilmour 등, 2006)를 이용하여 아래와 같은 혼합선형모형(Linear Mixed Model)으로 분석을 실시하였으며, 유전자형에 따른 각 표현형형가의 최소제곱평균(least square mean)과 표준오차를 추정하여 평균간 최소유의차 검정을 실시하였다.
이론/모형
- 본 실험을 위하여 제작된 프라이머는 기존에 Zhang 등(2007)이 보고한 프라이머 서열을 이용하여 제작하였다(Table 2). 유전자형결정은 PCR-RFLP법을 이용하여 유전자형 분석을 실시하였다(Fig. 1). FASN 유전자변이(g.
성능/효과
- A →G)의 효과를 한우의 지방 및 지방산조성과 분석한 결과, 한우의 지방산조성에서는 효과가 없는 것으로 분석되었다.
- 16024 A→G)는 한우의 불가식지방량에 대해서 통계적 유의성을 확인하였다. 특히, GG 유전자형은 AA유전자형에 비해서 1.5kg 불가식지방함량이 적은 것으로 분석되었다. Berndt 등(2007)은 FASN유전자가 사람에 있어서 체지방을 결정하는 하나의 주요한 인자로 보고하였다.
후속연구
- A →G)를 기반으로 분자육종가를 추정이 가능하며, 향후 한우 선발시 지방산함량의 변화없이 불가식지방함량을 줄 일 수 있는 유용한 DNA 마커임이 사료된다.
- 특히, 새로운 형질을 측정하여 육종프로그램에 추가하는 것은 많은 시간 및 비용이 소요된다. 따라서, 다양한 형질에 대한 QTL 및 유전자검색을 통하여 원인유전자를 검출할 수 있다면, 원인유전자의 변이의 분자육종가(molecular breeding value)를 활용하여 육종목표에 부합되지 않는 형질에 대해서 선발반응을 낮출 수 있을 것이다. 따라서, 본 연구에서 분석한 FASN 유전변이(g.
- 한우 비육에 있어서 근내지방도 증가를 위한 비육기간연장 및 고에너지 사료급여는 근내지방도의 증가와 더불어 불가식지방량의 증가로 도축시 육량지수를 떨어뜨릴 가능성이 있다. 따라서, 육종목표에 부합하지 않는 형질에 대해서 선발반응을 낮출수 있는 방안이 연구가 되어야 할 것이다. 특히, 새로운 형질을 측정하여 육종프로그램에 추가하는 것은 많은 시간 및 비용이 소요된다.
- 최근 Lee 등(2006)은 지방합성이 왕성하게 진행되는 비육후기의 근육 내 지방합성에 있어서, 지방산(fatty acid) 및 당과 같은 에너지원을 세포내로 전달하는 FABP4, GLUT4 및 근육 내 지방합성의 주요 유전자 4개에 대하여 유전자 발현양상을 분석하였다. 지방산합성 및 체내지방합성을 조절하는 유전자변이를 알 수 있다면, 유전변이의 효과를 개량프로그램에 이용 할 수 있을 것이다.
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