[논문]RAW 264.7 세포에서 Euryale ferox Salisbury 추출물의 항산화기전을 통한 산화적 스트레스.염증반응 억제효과 규명

김영환; 이민자; 이혜숙; 김정국; 박원환

RAW 264.7 세포에서 Euryale ferox Salisbury 추출물의 항산화기전을 통한 산화적 스트레스.염증반응 억제효과 규명
Suppressive Effect of Euryale ferox Salisbury Extracts on Inflammatory Response in LPS-stimulated RAW 264.7 Cells through the Antioxidative Mechanism 원문보기

동의생리병리학회지 = Journal of physiology & pathology in Korean Medicine, v.25 no.2, 2011년, pp.202 - 211

김영환 (동국대학교 한의과대학 진단학교실) , 이민자 (동국대학교 한의과대학 한의학연구소) , 이혜숙 (동국대학교 한의과대학 진단학교실) , 김정국 (동국대학교 한의과대학 진단학교실) , 박원환 (동국대학교 한의과대학 진단학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

The stems and branchs of Euryale ferox Salisbury (EF), are used in Chinese herbal medicine for latent-heat-clearing, antipyretic, detoxicant and anti-inflammatory ailments. This plant is used worldwide for the treatment of many types of inflammatory disease including respiratory infections, diabetes mellitus, rheumatoid arthritis and play an important role in the immune reaction. Topical natural antioxidants are a useful strategy for the prevention of oxidative stress mediated inflammatory disease. Plants produce significant amounts of antioxidants to prevent the oxidative stress caused by photons and oxygen, therefore they represent a potential source of new compounds with antioxidant activity. This study was designed to evaluate whether EFEA (ethylacetate fraction of EF) may ameliorate oxidative stress and inflammatory status through the antioxidative mechanism in LPS-stimulated RAW 264.7 murine macrophage cell line. Treatment of RAW 264.7 cells with EFEA significantly reduced LPS-stimulated inflammatory response in a dose-dependent manner. In conclusion, the EF extracts have anti-inflammatory effects in vitro system, which can be used for developing pharmaceutical drug against oxidative stress and chronic inflammatory disease.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서, 본 연구에서는 LPS로 자극된 RAW 264.7 macrophage cell line을 이용하여 검인의 산화적 스트레스 및 염증반응 억제효과를 탐색함으로써 검인의 산화적 스트레스에 기인한 염증성 질환의 예방 및 치료에의 응용 가능성을 검토하였다.

제안 방법

Anti-mouse TNFα와 Anti-mouse IL-1β로 precoating된 96 well plate에 각각 배양액 50 μL 혹은 standard reagent를 넣은 후 Biotinlylated antibody reagent 50 μL씩을 첨가하여 2시간 반응시켰다.
1% Tween 20을 함유한 TBST 용액으로 3회 세척한 다음, secondary antibody를 실온에서 1시간 동안 반응시키고 TBST로 3회 세척한 후, ECL (Amersham, Buckinghamshire, UK)로 반응시켜 X-ray flim 상에서 단백질의 발현을 확인하였다. Band density 정량은 VisionWorks Image Software (UVP, Cambridge, UK)를 이용하여 분석하였다. β-actin monoclonal antibody (mAb), COX-2 polyclonal antibocy (pAb)는 Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA)에서 구입하였으며, HO-1 pAb는 Millipore (Temecula, CA, USA)에서 구입하였다.
Commercial competitive enzyme immunoassay kit (R&D system, Minneapolis, USA)를 이용하여 PGE2의 양을 측정하였다.
EFEA 추출물을 농도별(0～400 μg/mL)로 처리하여 37℃, 5% CO2에서 1시간 배양한 다음 1 μg/mL의 LPS를 처리하여 18시간 후 세포를 수확하여 각각 nuclear fraction과 total cell fraction을 추출하는데 사용하였다.
EFEA가 RAW 264.7 cell에서 LPS에 의한 proinflammatory cytokine의 생성을 억제하는지를 알아보기 위해 ELISA kit를 이용하여 tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin-1β (IL-1β) 및 interleukin-6 (IL-6)의 발현을 측정하였다.
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (Pierce Biotechnology, Rockford, USA)를 이용하여 TNFα와 IL-1β의 양을 측정하였다.
LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7 cell에서 EFEA 추출물이 heme oxygenase-1 (HO-1) 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 EFEA 추출물을 농도별로 처리하여 1시간 배양한 다음 LPS (1 μg/mL)를 첨가하여 각각 8시간 배양한 후 HO-1의 protein 발현을 관찰하였다.
LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7에서 EFEA 가 NO 생성에 미치는 영향을 알아보기 위해 LPS 처리에 의해 활성화된 cell에서 생성되어 배양액 중으로 유리된 NO의 농도를 NO_2^-의 형태로 Griess 시약을 사용하여 정량하였다. 이는 NO가 매우 불안정하며 NO2- 형태로 즉시 변환되기 때문이다.
LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7에서 EFEA 추출물이 ROS 생성에 미치는 영향을 DCFH-DA assay를 통해 알아보았다. DCFH-DA는 세포에 전처리하면 세포 안으로 쉽게 들어가고, H₂O₂와 만나면 형광을 띠는 DCF를 생성하게 되므로 DCF의 형광강도를 측정하면 세포 내의 ROS 생성량을 측정할 수 있다¹⁷⁾.
Well 당 20 μL의 MTS solution을 첨가하여, 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 4시간 동안 반응 시킨 후 microplate reader (Molecular Device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다. 각 농도별 EFEA가 갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 함께 배양하여 대조군과 실험군의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율을 백분율로 나타내었다.
따라서 EFEA가 RAW 264.7 cell의 세포 생존율에 영향을 주지 않는 400 μg/mL의 농도로 이후 실험을 진행하였다(Fig. 1).
. 따라서 본 실험에서는 LPS로 산화적 스트레스를 유발한 RAW 264.7에서 EFEA 추출물이 iNOS protein 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 LPS 처리 1시간 전에 EFEA 추출물을 농도별로 전처리하여 배양한 후, iNOS의 protein 발현 변화를 immunoblotting으로 확인하였다.
따라서, LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7 cell에서 EFEA 추출물이 NFκB 활성에 미치는 영향을 알아보기 위해 EFEA 추출물을 농도별로 처리하여 1시간 배양한 다음 LPS (1 μg/mL)를 첨가하여 18시간 배양한 후, 세포질에서의 IκBα 발현과 핵에서의 NFκB 발현을 western blotting으로 확인하였다.
마우스 대식세포인 RAW 264.7 cell에 대한 EF EA분획물 (EFEA)의 세포독성을 알아보기 위하여 MTS assay를 수행하였다. EFEA 추출물을 단독으로 농도별(0, 10, 25, 50, 100, 200, 400, 800 μg/mL)로 19시간 처리하였을 때 모든 농도에서 세포독성이 관찰되지 않았다.
마우스 대식세포인 RAW 264.7에서 EFEA가 LPS에 의해 유도되는 염증성 인자인 PGE2 생성에 미치는 영향을 알아보기 위해 ELISA kit를 이용하여 PGE2를 정량하였다. 그 결과 PGE2 생성이 EFEA 농도의존적으로 유의성 있게 감소하였으며, 특히 400μg/mL의 농도에서는 LPS 단독 처리군에 비해 74%까지 PGE2생성을 억제하는 것으로 나타났다(Fig.
배양 마지막 30분 동안 10μM DCFH-DA (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA)를 배지에 첨가하여 37℃, 5% CO2에서 배양한 후 PBS (pH 7.4)로 DCFH-DA를 3회 씻어낸 후 fluorescence microplate reader (Molecular Device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 excitation 485 nm, emission 530 nm에서 형광을 측정하여 아무것도 처리하지 않은 대조군에 대한 ROS 생성을 비교하여 나타내었다.
상등액 (cytoplasmic fraction)을 제거하고 남은 침전물에 75 μL의 NucBuster Extraction Reagent 2와 100 mM DTT 및 100X Protease Inhibitor Cocktail을 각각 1 μL 씩 첨가한 후 vortex하여 4℃에서 5분간 13,000 rpm으로 원심분리 하여 얻은 상등액 (nuclear fraction)을 모아 동일한 양의 단백질로 정량하였다.
1% Tween 20을 함유한 TBS 용액)에서 1시간 동안 반응시킨 후, 각 검증 단백질에 대한 항체를 가하여 4℃에서 overnight시켰다. 이어서 0.1% Tween 20을 함유한 TBST 용액으로 3회 세척한 다음, secondary antibody를 실온에서 1시간 동안 반응시키고 TBST로 3회 세척한 후, ECL (Amersham, Buckinghamshire, UK)로 반응시켜 X-ray flim 상에서 단백질의 발현을 확인하였다. Band density 정량은 VisionWorks Image Software (UVP, Cambridge, UK)를 이용하여 분석하였다.
0)으로 세포를 씻은 후, PRO-PREPTM Protein Extraction Solution (Intron Biotechnology, Seoul, Korea) 200 μL를 넣어 -20℃에서 30분 간 반응 시킨 후 4℃에서 5분간 13,000 rpm (SORVALL, Langenselblod, Germany)으로 원심분리하고 얻은 상층액은 Bradford protein assay kit (Bio-Rad Laboratoriess, Hercules, CA, USA)를 사용하여 595 nm에서 흡광도를 측정하여 동일한 양의 단백질로 정량하였다. 한편, NucBusterTM Protein Extraction Kit (Novagen, Darmstadt, Germany)를 이용하여 cytoplasmic 및 nuclear fraction에서 단백질을 추출하였다. 즉, 냉각 TBS로 씻은 세포에 150 μL의 NucBuster Extraction Reagent 1을 첨가하여 voltex한 후 4℃에서 5분 간 13,000 rpm으로 원심분리하였다.

대상 데이터

Dihydrorhodamine 123 (DHR 123)와 6-carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)는 Molecular Probes (Eugene, OR, USA)에서 구입하였으며, peroxynitrite는 Cayman Chemical 사(Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다. CellTiter96 colorimetric assay kit는 Promega (Madison, WI, USA)에서, NucBusterTM PRO-PREPTM Protein extraction kit는 Novagen (Darmstadt, Germany)에서, Protein extraction solution은 Intron Biotechnology (Gyeonggi-do, Korea)에서 각각 구입하였다. Polyvinylidene fluoride membrane과 ECL kit Amersham Pharmacia Biotech (Buckinghamshire, UK)에서, mouse PGE2, TNFα, IL-1β 및 IL-6 ELISA kit는 Endogen (Thermo Fishen Scientific Inc.
Dihydrorhodamine 123 (DHR 123)와 6-carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)는 Molecular Probes (Eugene, OR, USA)에서 구입하였으며, peroxynitrite는 Cayman Chemical 사(Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다.
Naphthylethylenediamine dihydrochloride (NED), ethanol (E), hexane (H), dichloromethane (DCM), ethylacetate (EA), butanol (B) 및 methanol (M)은 Merck (Merck KGaA, Darmstadt, Germany)에서 구입하였다. Sodium nitroprusside (SNP), ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), sodium phosphate monobasic (NaH2PO4), sodium phosphate dibasic (Na2HPO4), 4,5-diaminofluorescein (DAF-2), dimethyl sulfoxide (DMSO), diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA), tris base, glucose와 gelatin은 Sigma (Sigma Chemical Co.
Polyvinylidene fluoride membrane과 ECL kit Amersham Pharmacia Biotech (Buckinghamshire, UK)에서, mouse PGE2, TNFα, IL-1β 및 IL-6 ELISA kit는 Endogen (Thermo Fishen Scientific Inc., Rockford, IL, USA)에서 구입하였다.
Naphthylethylenediamine dihydrochloride (NED), ethanol (E), hexane (H), dichloromethane (DCM), ethylacetate (EA), butanol (B) 및 methanol (M)은 Merck (Merck KGaA, Darmstadt, Germany)에서 구입하였다. Sodium nitroprusside (SNP), ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), sodium phosphate monobasic (NaH2PO4), sodium phosphate dibasic (Na2HPO4), 4,5-diaminofluorescein (DAF-2), dimethyl sulfoxide (DMSO), diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA), tris base, glucose와 gelatin은 Sigma (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Dihydrorhodamine 123 (DHR 123)와 6-carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)는 Molecular Probes (Eugene, OR, USA)에서 구입하였으며, peroxynitrite는 Cayman Chemical 사(Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다.
iNOS mAb, NFκB p65 mAb, IκBα pAb, Nrf2 pAb, goat anti-rabbit IgG-HRP 및 goat anti-mouse IgG-HRP는 Santa Cruz Biotechology (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입해 사용하였다.
iNOS mAb, NFkB p65 mAb, IkB-α pAb, Nrf2 pAb, goat anti-rabbit IgG-HRP 및 goat anti-mouse IgG-HRP는 Santa Cruz Biotechology (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입해 사용하였다.
대식세포 계열(murine macrophage cell line)인 RAW 264.7 cell은 한국세포주은행 (KCLB; Seoul, Korea)으로부터 분양 받아 1% penicillin-streptomycin과 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 DMEM 배지(GIBCO, Grand Island, NY, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 조건 하에서 배양하였다.
본 실험의 시료로 사용한 검인(芡仁Euryale ferox Salisbury, EF)는 2008년산 중국산 제품을 (주)옴니허브 (경북 영천, 한국)에서 구입한 후 정선수치하여 사용하였다.
1% naphthylethylenediamine dihydrochloride (Merck KGaA, Darmstadt,Germany) 50 μL를 첨가하여 10분 간 반응시킨 후 microplate reader (Molecular Device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준곡선은 sodium nitrite (NaNO₂)를 농도별로 조제하여 사용하였다.

데이터처리

통계 분석은 SPSS version 18.0 for Windows (SPSS, Chicago, IL, USA) program을 이용하여 각 군의 평균과 표준편차를 산출하고 군 간의 차이 유무를 one-way ANOVA로 분석한 뒤 p< 0.05에서 유의한 차이가 있는 경우 Tukey test를 이용하여 검정하였다.

이론/모형

7 cells. Cell viability was evaluated by MTS assay. RAW 264.
EFEA (Euryale ferox Salisb.의 ethyl acetate fraction)의 세포에 대한 독성은 CellTiter 96Ⓡ AQueous One Solution (Promega, Madision, WI, USA)을 이용하여, 5-(3-caroboxymethoxyphenyl)-2H-tetra-zolium inner salt (MTS) assay 방법으로 분석하였다. 이는 mitochondrial dehydrogenases에 의하여 MTS가 formazan으로 전환되는 것을 측정하는 방법으로 96 well plate에 1×10⁴cell/well의 RAW 264.
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (Pierce Biotechnology, Rockford, USA)를 이용하여 IL-6의 양을 측정하였다. Anti-mouse IL-6로 precoating된 96 well plate에 배양액 50 μL를 넣어 2시간동안 반응시킨 후 Washing buffer로 3회 세척하였다.

성능/효과

한편, HO-1 발현을 유도하는 전사인자인 NF-E2-related factor 2(Nrf2) 발현에 미치는 EFEA의 영향을 western blotting으로 살펴본 결과, HO-1의 발현 결과와 비슷한 경향을 보였다. LPS 처리시 Nrf2 발현이 현저히 증가하였으며 LPS와 EFEA를 함께 처리했을 때 농도-의존적인 발현 증가를 나타내어 Nrf2에 의해 HO-1의 발현이 증가한 것으로 사료되었다(Fig. 8B).
LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7 macrophage cell line에서 EFEA 추출물의 산화적 스트레스 및 염증 반응 억제효과를 살펴 본 결과, EFEA는 intracellular ROS의 생성을 농도의존적으로 감소시켰고, iNOS 및 COX-2의 발현을 억제시킴으로써 염증인자인 NO 및 PGE2 생성을 유의적으로 감소시켰으며, pro-inflammatory cytokine인 TNFα, IL-1β 및 IL-6의 발현을 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났다.
그 결과 Fig. 7에 나타난 바와 같이 세포질에서의 IκBα 발현은 LPS를 처리하지 않은 무처리군에 비해 LPS 처리 시 유의적으로 낮게 나타났고, LPS와 함께 EFEA를 처리하였을 때 LPS 처리군과 비교하여 현저히 높은 IκBα 발현을 나타내었다(Fig. 7A).
7 cell에서 EFEA 추출물이 heme oxygenase-1 (HO-1) 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 EFEA 추출물을 농도별로 처리하여 1시간 배양한 다음 LPS (1 μg/mL)를 첨가하여 각각 8시간 배양한 후 HO-1의 protein 발현을 관찰하였다. 그 결과 LPS 처리 시 HO-1의 발현이 유의적으로 증가하였으며 이는 세포의 자가 보호반응으로 여겨진다. 또한 EFEA를 농도별로 처리하였을 때 protein 수준에서 HO-1의 발현이 농도-의존적으로 증가하였으며 특히, 400 μg/mL에서는 현저한 발현 증가 양상을 보였다(Fig.
그 결과 PGE2 생성이 EFEA 농도의존적으로 유의성 있게 감소하였으며, 특히 400μg/mL의 농도에서는 LPS 단독 처리군에 비해 74%까지 PGE2생성을 억제하는 것으로 나타났다(Fig. 4A).
그 결과, TNFα는 LPS와 함께 EFEA를 처리하였을 때 발현이 유의적으로 감소하였다(Fig. 5).
따라서 in vitro 상에서의 항산화 활성이 세포 내에서도 유효함을 확인할 수 있었다. ROS와 같은 free radical로부터 생체내 물질을 보호할 수 있는 항산화제 및 항산화 방어계는 활성산소 라디칼의 발생을 미연에 방지하는 시스템과 생성된 라디칼을 포착·제거하는 시스템, 손상된 조직의 회복과 신생 기전에 관여하는 세 가지 시스템으로 분류할 수 있다¹⁹⁾.
따라서, EFEA는 염증단계에 중추적 역할을 하고 있는 pro-inflammatory cytokine인 TNFα, IL-1β 및 IL-6의 발현을 유의적으로 저해함으로써 pro-inflammatory factor의 증가를 수반하는 산화적 스트레스에 의한 염증성 병변 과정을 효과적으로 조절할 수 있을 것으로 사료된다(Fig. 5-6).
따라서, RAW 264.7 세포에서 EFEA가 LPS로 유도된 COX-2의 protein 발현에 미치는 영향을 알아본 결과, LPS를 처리하지 않은 무처리군에 비해 LPS를 처리한 군에서 iNOS protein 발현이 유의적으로 증가하였고, LPS와 함께 EFEA를 처리한 군에서 protein 발현이 현저히 감소되었으며 400 μg/mL 농도에서는 무처리군 보다 오히려 더 낮은 수준을 보였다(Fig. 4B).
따라서, 본 실험에서 EFEA 추출물은 RAW 264.7 세포에서 LPS로 산화적 스트레스를 유발 상황에서 COX-2의 발현을 효과적으로 억제함으로써 PGE2 생성을 감소시키고, 항산화·항염증 효과를 나타내는 것으로 사료된다.
따라서, 본 실험에서 EFEA 추출물은 RAW 264.7 세포에서 LPS로 산화적 스트레스를 유발한 상황에서 iNOS 발현을 효과적으로 억제함으로써 NO 생성을 감소시키고, 항산화·항염증 효과를 나타내는 것으로 사료된다.
또한 EFEA는 IκBα의 인산화 및 NFκB의 핵 내로의 translocation을 유의적으로 억제하였고, Nrf2의 발현에 영향을 미쳐 HO-1의 발현을 유도함으로써 산화적 스트레스에 대해 강력한 보호작용을 나타낼 것으로 여겨진다.
또한 EFEA를 농도별로 처리하였을 때 protein 수준에서 HO-1의 발현이 농도-의존적으로 증가하였으며 특히, 400 μg/mL에서는 현저한 발현 증가 양상을 보였다(Fig. 8A).
또한 IL-1β는 EFEA 추출물 100, 200, 400 μg/mL 처리 시 control군에 비해 100 μg/mL 이상에서 농도-의존적으로 현저히 감소하는 경향을 나타내었으며(Fig. 6A), IL-6도 EFEA 100 μg/mL 농도에서부터 유의적으로 감소되는 경향을 나타내어 400 μg/mL에서는 무처리군과 유사한 수준을 보였다(Fig. 6B).
또한 핵에서의 NFκB p65의 발현은 LPS 처리군에서 가장 높게 나타났으며, EFEA 100 μg/mL 이상에서는 유의적인 발현 감소를 보였다(Fig. 7B).
본 실험 결과, EFEA 추출물을 처리한 군에서 LPS 단독으로 처리한 control군에 비해 농도-의존적으로 ROS 생성이 유의적으로 억제되었고, 400 μg/mL 농도에서 ROS 생성이 control군에 비해 83% 이상 감소하였다(Fig. 2).
본 실험 결과, LPS를 처리하지 않은 무처리군에 비해 LPS를 처리한 군에서 iNOS protein 발현이 유의적으로 증가하였고, LPS와 함께 EFEA를 처리한 군에서 protein 발현이 유의성 있게 감소되었으며 400 μg/mL 농도에서는 무처리군 보다 더 낮은 protein 발현 수준을 보였다(Fig. 3B).
7 cell에서 NO 생성을 저해한다고 보고한 바 있고, Suh 등²⁶⁾의 보고에서는 천연에 존재하는 biflavonoid인 ochnaflavone이 LPS로 유도되는 NO 생성을 ERK1/2와 NFκB regulation에 의해 효과적으로 억제시키는 것으로 나타났다. 본 실험에서 EFEA는 NO 생성 억제능이 뛰어난 것으로 나타났으며, 이는 EFEA에 함유된 페놀물질에 의한 것으로 보인다(Fig. 3).
산화적 스트레스 유발 상황에서 EFEA는 10 μg/mL 농도 이상에서 NO 생성을 농도-의존적으로 억제하였고, 특히, 400 μg/mL 농도에서 LPS 단독 처리군에 비해 79%까지 NO 생성이 억제되었다(Fig. 3A).

후속연구

따라서, COX-2에 의한 PGE2 생성은 염증반응을 매개하는 것으로 여겨진다. 본 연구에서 EFEA는 COX-2 발현을 저해하여 PGE2 생성을 효과적으로 억제하였으므로 동맥경화를 비롯한 고혈압, 당뇨, 암, 관절염과 같은 만성 염증성 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 적용 가능할 수 있을 것으로 사료된다(Fig. 4).
ROS와 같은 free radical로부터 생체내 물질을 보호할 수 있는 항산화제 및 항산화 방어계는 활성산소 라디칼의 발생을 미연에 방지하는 시스템과 생성된 라디칼을 포착·제거하는 시스템, 손상된 조직의 회복과 신생 기전에 관여하는 세 가지 시스템으로 분류할 수 있다¹⁹⁾. 이상의 실험결과로 미루어 보아 플라보노이드, 폴리페놀을 함유하고 있는 EFEA는 위에 언급한 세 가지 시스템 모두를 통해 산화적 스트레스를 효과적으로 억제할 수 있을 것으로 기대된다(Fig. 2).
이상의 실험결과로부터 본 실험에 사용된 EF는 산화적 스트레스와 염증에 의해 유발되는 만성 염증관련 질환을 항산화·항염증 기작을 통해 예방 및 치료할 수 있을 것으로 기대된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	산화적 스트레스는 어떤 문제를 초래하는가?	그러나 세포 내 항산화 방어계와 ROS 및 RNS 간의 불균형이 초래될 때 ‘산화적 스트레스’가 생성되어 수많은 질환의 생리/병리학적 현상에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다2). 이러한 산화적 스트레스는 생체 내 단백질, 지질, DNA, 당질, 고도불포화지방산과 같은 거대분자를 불활성화 시켜 파괴시키고, 세포 구조를 빠른 속도로 붕괴시킴으로써 결국 세포를 사멸시키는 염증 반응에 관여한다2,3). 염증반응은 생체나 조직에 물리적 작용이나 화학적 물질, 세균감염 등의 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상 부위를 수복, 재생하기 위한 생체 방어 반응과정이고, 이 과정에는 국소 혈관, 체액의 각종 조직세포 및 면역세포 등이 작용한다.
	산화적 스트레스는 언제 생성되는가?	생체 내에서는 정상적인 생리상태에서 활성산소종(reactive oxygen species; ROS) 및 활성질소종(reactive nitrogen species; RNS)을 포함하는 유리기(free radical)가 생성되며 이러한 유리기와 이를 제거하는 항산화 방어계(antioxidant defense system)가 균형을 이루고 있다1). 그러나 세포 내 항산화 방어계와 ROS 및 RNS 간의 불균형이 초래될 때 ‘산화적 스트레스’가 생성되어 수많은 질환의 생리/병리학적 현상에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다2). 이러한 산화적 스트레스는 생체 내 단백질, 지질, DNA, 당질, 고도불포화지방산과 같은 거대분자를 불활성화 시켜 파괴시키고, 세포 구조를 빠른 속도로 붕괴시킴으로써 결국 세포를 사멸시키는 염증 반응에 관여한다2,3).
	단핵식균세포 중 macrophage는 무엇인가?	일반적으로 단핵식균세포들은 면역계를 구성하는 세포이며 식균작용을 나타낸다. 특히 macrophage는 항원에 대한 면역작용의 중추적인 역할을 하는 세포로, 활성화된 macrophage는 항원제시세포(antigen presenting cell; APC)로써 lymphocyte의 증식 및 활성화에 필요한 cytokine의 분비 등 비특이적 면역작용(non-specific immune response)을 한다. 또한, macrophage는 산화적 스트레스 상황에서 pro-inflammatory cytokine을 증가시키게 되는데 이러한 pro-inflammatory cytokine에는 inducible nitric oxide synthase (iNOS)에 의해 만들어지는 nitric oxide(NO)와 cyclooxygenase-2 (COX-2)에 의해 만들어지는 prostaglandin E2 (PGE2), interleukin-1 beta (IL-1β), interleukin-6 (IL-6) 및 TNFα 등이 있다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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