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문제 정의
- 최근 들어 천년 초 선인장에 대한 건강기능식품 소재로서의 국내외 사용 빈도가 점차 높아지고 있는 실정이나 천년초 선인장의 식품 소재화를 위한 연구는 아직 초기 단계에 있다. 따라서 본연구에서는 천년초 선인장의 건강기능식품 소재화시 기초자료를 제공하고자 천년초 열수 추출물 및 80% 에탄올 추출물의 항산화 및 항비 만 활성을 비교, 분석하고자 하였다. 천년초 추출물에 대한 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 분석한 후, 항산화 활성을 DPPH 라디칼 소거 능 및 환원력으로 평가하였다.
- 알려져 있다. 본 연구에서는 식품에 사용할 수 있는 용매인 물과 에탄올을 이용하여 천년초 열수 주줄 물 및 80% 에반음 주춤물을 제조하여 이들 추출물의 항산화 및 항비만 활성을 비교, 분석하고자 하였다. 천년초 80% 에탄올 추출물은 분쇄한 천년초 분말에 80% 에탄올을 가한 뒤 상온에서 24시간 교반하면서(150 rpm, HY-HS11, Hanyang Science, Seoul) 유용 성분들을 주줄하였고 Whatman No.
제안 방법
- 3T3-L1 지방세포의 배 양방법은 Blumberg 등(25)의 방법에 따라 고농도의 포도당을 함유한 DMEM에 10% BCS 및 1% P/S 를함유한 배지로 배양한 3T3-L1 전구지방서포(preadipocyte) 가 100% confluence 하게 되면 이로부터 2일 후에, 분화유도물질 (5 ㎍/mL insulin, 1 pM DEX, 0.5 mM IBMX) 및 천년초추출물들을 처리하여 지방세포로 분화 유도하였다. 분화유도 물질을 처리한 후, 2일마다 지속적으로 여러 농도의 천년초 추출물 및 5 pg/mL insulin, 1% P/S, 10% FBS가 함유된배지로 배양시키면서 분화과정 중의 지방축적 량의 변화를모니터링 하였다.
- DPPH radical 소거활성은 Kim 등(23)의 방법을 변형하여 측정하였다. 시료 200 μL에 0.
- 발현정도를 측정하였다. RT-PCR 산물은 2% 한천 (agarose) 겔에서 전기영동 후 EtBr (ethidiumbromide)5- 염색하여 UV에서 증폭된 DNA bzmd를 확인하였다.
- 4), 천년초 추출물의 400 pg/mL 농도까지 세포 생장에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났디, . 따라서 천년초 열수 추출물과 80% 에탄올 추출물을 50, 100, 200 및 400 ug/mL 농도로 하여 항비만 활성을 평가하였다.
- 농죽된 추출물은 동결건조기 (Modulyod-115, Thermo Electron Co, Waltham, MA, USA)를 이용하여 건조된 분말을 제조하였다. 또한 열수 추출물은 분쇄된 천년초 추출물에 10배 (w/w)의 물을 가한 후 100℃ 수욕상에서 3시간동안 환류 냉각(GLHMP-F200, Global Lab, Seoul)하면서 추출하여 조여 과(WittiMn No 2)한 후 40℃에서 감압농축하여 동결건조하였다. 건조된 천년초 추출물들은 무게를 측정하여 추출 수율을 측정한 후, -2O℃ 냉동고에 보관하면서 실험에 사용하였다.
- 천년초 추출물에 대한 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 분석한 후, 항산화 활성을 DPPH 라디칼 소거 능 및 환원력으로 평가하였다. 또한, 3T3-L1 지방세포를 이용하여 지방세포 분화단계에서의 지방축적 및 이와 연관된 전사인자(PPARy 및 aP2)의 발현 정도를 측정하여 천 년 초 추출물의 항비만 활성도 조사하였다.
- 있다. 본 연구에서는 천년초 열수 및 80% 에탄올추출물의 총 페놀 및 총 플라보노이드 함량, 항산화 활성 (DPPH 라디칼 소거능 및 환원력) 및 항비만 활성을 평가하였다. 총 페놀 함량은 천년초 열수 추출물 및 80% 에탄올추출물에서 각각 16.
- 5 mM IBMX) 및 천년초추출물들을 처리하여 지방세포로 분화 유도하였다. 분화유도 물질을 처리한 후, 2일마다 지속적으로 여러 농도의 천년초 추출물 및 5 pg/mL insulin, 1% P/S, 10% FBS가 함유된배지로 배양시키면서 분화과정 중의 지방축적 량의 변화를모니터링 하였다.
- 시료 200 μL에 0.2 mM DPPH 용액 800 μL를 가한 후, 520 nm에서 정확히 30분 후에 분광광도계 (UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japan)를 이용하여 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 전자공여능(EDA, Electron Donating activity)은 시료 첨가구와 비첨가구의 흡광도 차이를 백분율(%)로 구하였다.
- 1시간 후, 세포에서 formalin을제거하고 60% isqxopanol 용액 500 pL로 세척한 후 완전히건조시켰다. 완전히 건조된 세포들은 미리 제조해 둔 Oil red O working solution으로 세포 내 죽적된 지빙성분들을충분히 염색 시킨 후, 증류수를 이용하여 34회 세척하였고 100% iscpupanol을 이용하여 세포 내 염색된 Oil red O들을 모두 용출 시켜 UV-Vis spectrophotometer (Milton Roy, Inc., Rochester, NY, USA)를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다 (25).
- 2 mM DPPH 용액 800 μL를 가한 후, 520 nm에서 정확히 30분 후에 분광광도계 (UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japan)를 이용하여 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 전자공여능(EDA, Electron Donating activity)은 시료 첨가구와 비첨가구의 흡광도 차이를 백분율(%)로 구하였다.
- 즉, 천년초 추출물들을 일정한 농도를 DMSO에 녹인 후, 2% Na2CO3 용액 2 mL를 가하고 3분간 방치시킨 후, 50% Folin-Ciocalteu reagent 100 pL를 첨가하였다. 30분 동안반응시킨 후, 750 nm에서 흡광도 값을 측정하여 gallic acid 를 표준물질로 한 표준 검 량선에 대 입하여 mg GAE (gaHic acid equivalent)/g으로서 천년초 주줄물들의 총 폴리페놀함량을 나타내었다.
- 본 연구에서는 식품에 사용할 수 있는 용매인 물과 에탄올을 이용하여 천년초 열수 주줄 물 및 80% 에반음 주춤물을 제조하여 이들 추출물의 항산화 및 항비만 활성을 비교, 분석하고자 하였다. 천년초 80% 에탄올 추출물은 분쇄한 천년초 분말에 80% 에탄올을 가한 뒤 상온에서 24시간 교반하면서(150 rpm, HY-HS11, Hanyang Science, Seoul) 유용 성분들을 주줄하였고 Whatman No. 2 (Whatman Ltd, Maidstone, Kent, UK) 여과지를 이용하여 여과한 후, 회 전진공농축기(EYELA N-1000, Tokyo, Jagn)를 사용하여 40K에서 감압 농축하였다. 농죽된 추출물은 동결건조기 (Modulyod-115, Thermo Electron Co, Waltham, MA, USA)를 이용하여 건조된 분말을 제조하였다.
- 천년초 추출물들의 항비만 활성 평가를 위한 3T34J 지방세 포의 세포독성 평가는 XTTJ2, 3-bis (2-methooxy-4- nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carbox-anilide innersalt} assay kit를 이용하여 측정하였다. XTT에 election coupling agent 역할을 하는 PMS (phenazine methosulfate) 를첨가하여 bioreduction을 증가시키게 한 후 세포에 XTT와 PMS를 첨가하여 살아있는 세포의 mitochondrial dehydrogenase 에 의한 XTT의 tetrazolium ring 이 분해시켜 fbnnazan crystal 을 형성하게 되면, fcmiazan crystale 수용액에 녹아 노란색을 나타나게 된다.
- 따라서 본연구에서는 천년초 선인장의 건강기능식품 소재화시 기초자료를 제공하고자 천년초 열수 추출물 및 80% 에탄올 추출물의 항산화 및 항비 만 활성을 비교, 분석하고자 하였다. 천년초 추출물에 대한 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 분석한 후, 항산화 활성을 DPPH 라디칼 소거 능 및 환원력으로 평가하였다. 또한, 3T3-L1 지방세포를 이용하여 지방세포 분화단계에서의 지방축적 및 이와 연관된 전사인자(PPARy 및 aP2)의 발현 정도를 측정하여 천 년 초 추출물의 항비만 활성도 조사하였다.
- 30분 동안반응시킨 후, 750 nm에서 흡광도 값을 측정하여 gallic acid 를 표준물질로 한 표준 검 량선에 대 입하여 mg GAE (gaHic acid equivalent)/g으로서 천년초 주줄물들의 총 폴리페놀함량을 나타내었다. 총 플라보노이드 함량은 Jia 등(22)의방법을 변형하여 사용하였다. 즉, 각 천년초 주줄물에 증류수 L25 mL를 가하고 5% NaNO2 용액 75 μL를 넣고 5분간방치하였다.
- 한편, 지방세포에서 분화에 영향을 미치는 주요 관련 유전자들의 발현 변화를 검토하기 위하여 지방세포에 존재하는 total RNA를 추출한 후, 역전사중합효소(reverse transcriptase) 를 사용하여 complementary DNA (cDNA) 를만들고 합성된 cDNA와 primer로 RT-PCR을 이용하여 유전자의 발현정도를 측정하였다. RT-PCR 산물은 2% 한천 (agarose) 겔에서 전기영동 후 EtBr (ethidiumbromide)5- 염색하여 UV에서 증폭된 DNA bzmd를 확인하였다.
- 그 후에 보관중인 XTT 및 PMS leagent를 37℃에서 완전히 해동시킨 후, 1 mL의 XTT reagent와 20 pL PMS reagent를 혼합하여 working solution을 준비하여놓고, pipet을 이용하여 medium 부피의 20%되는 양 만큼 취하여 각 well 에 조심스럽 게 첨가하고 plate를 바닥에 붙인 상태로 전후좌우로 가볍 게 흔들면서 혼합하였다. 혼합 후 4시간 동안 37℃, 5% CCh incubator에서 배양한 후, EUSA 로 450 nm 흡광도 값에서 690 nm의 흡광도 값을 빼서 결과값으로 계산하였다.
대상 데이터
- 본 연구에 사용된 천년초(Opuntia humifusa) 선인장의줄기는 충남 아산 소재 천년초 농장에서 2009년에 수확한것을 구입하여 사용하였다. 천년초 선인장의 줄기는 물로잘 씻어 흙이 나 먼지 등의 이물질을 제거하고 2~3 cm 크기로 절편 하여 동결건조 한 후, 분쇄기(IKA M20, IKA, Germany)로 20~30 mesh로 조분쇄하여 시료로 사용하였디.
- 본 연구에서 사용한 주줄용매는 식품으로 사용가능한에탄올 및 물을 사용하였다. 추출용매별 천닌초 추출물의추출 수율은 열수 추출물에서 44.
- . 본 연구에서 항산화성분 분석 및 항비만 활성 측정 에사용된 시 약은 Folin-Ciocalteu reagent, gallic acid, (+)-catechin hydrate, L-ascorbic acid, DPPH (1, 1 -diphenyl-2-piaylhydrazyl), insulin, Oil Red O, Dexamethasone (DEX), 3-isobutyl-l- methylxanthine (IBMX), N-acetyl cystein (NAC)은 Sigma (Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, USA)로부터 구입하였고, Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), bovine serum (BS), fetal bovine serum (FBS), penicillin-stteptomycin (P/S), phosphate-buffered saline (PBS) 및 trypsirvEDTA는 Gibco (Gaithersburg, MD, USA)로부터 구입하여 사용하였다.
- 천년초 추출물의 항비만 활성 평가를 위해 사용된 마우스 유래 3T3-L1 세포주는 American Type Culture Collection (ATCC, CL-173)으로부터 분양 받아 사용하였다. 3T3-L1 지방세포의 배 양방법은 Blumberg 등(25)의 방법에 따라 고농도의 포도당을 함유한 DMEM에 10% BCS 및 1% P/S 를함유한 배지로 배양한 3T3-L1 전구지방서포(preadipocyte) 가 100% confluence 하게 되면 이로부터 2일 후에, 분화유도물질 (5 ㎍/mL insulin, 1 pM DEX, 0.
데이터처리
- Cells were divided into a control group and the hot water (A) and 80% ethanolic extracts (B) obtained from Cheomymicho groups at concentration indicate A each value is the mean ±standard deviation of the results from six different plates(n=6) and is representative of results from at least three different experiments. Statistical analysis was performed using the (me-way ANOVA (p<0.05).
- 모든 실험결과는 SAS package (release 8.01)를 이용하여 one-way ANOVA 분석 및 student t-test를 수행하였고 평균값의 통계적 유의성은 p<Q05 수준에서 검정하였다.
이론/모형
- Cell viability was measured by XTT assay. The exponentially growing cells were plated into 96-well micro plates at a density of 1 x 105 cells/well in DMEM/BS medium and incubated for 24 h prior to treatment at 37℃ in 5% CO2.
- 5와 같다. 세포분화 8일째 에 축적 된 지 방의 함량은 Oil red O staining 방법 을이용하여 측정하였고, 지방세포 분화에 연관된 주요 유전자(PPARy 및 aP2)의 발현은 semi-quantitative RT-PCR을이용하여 조사하였다. 천년초 추줄물을 처리한 지방세포는모든 농도 범위 에서 대조군과 비교하여 Oil red O 시 약에의하여 염색된 지방구는 유의적으로 적은 것으로 나타났다.
- XTT에 election coupling agent 역할을 하는 PMS (phenazine methosulfate) 를첨가하여 bioreduction을 증가시키게 한 후 세포에 XTT와 PMS를 첨가하여 살아있는 세포의 mitochondrial dehydrogenase 에 의한 XTT의 tetrazolium ring 이 분해시켜 fbnnazan crystal 을 형성하게 되면, fcmiazan crystale 수용액에 녹아 노란색을 나타나게 된다. 이 노란색을 ELISA로 측정하여 세포독성 평가에 이용하였다. 즉 3T3-L1 세포는 실험전날 IxlO'cell 농도로 96-well plate에 seeding하여 24시간 동안 배양하였다.
- 천년초 열수 추출물 및 80% 에탄올 추출물의 총 폴리페놀 함량은 Velioglu 등(21)의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 천년초 추출물들을 일정한 농도를 DMSO에 녹인 후, 2% Na2CO3 용액 2 mL를 가하고 3분간 방치시킨 후, 50% Folin-Ciocalteu reagent 100 pL를 첨가하였다.
- 항비만 활성 평가에 이용된 3T3-L1 세포에 대한 천 년 초 추출물들의 세포독성은 XTT시험법으로 측정하였다. 천년 초 열수 및 80% 에탄올 추출물의 50, 100, 200 및 400 ygetiiL 농도범위에서 세포독성을 측정한 결과(Fig.
- 환원력은 Mau 등(24)의 방법에 따라 측정하였다’ 즉, 250 11L 천년초 추출물에 250 μL의 0.2 M sodium phosphate buffer (pH 6.6), 250 μL의 1% potassium ferricyanide 를 각각가하고 이 혼합물을 50℃에서 20분간 반응시킨 후 250 11L 의 1% trichloroacetic acid (TCA, w/v) 용액을 가하였다. 위반응액을 1,000 rpm에서 10분간 원심 분리 하여 상징 액 500 μL와 증류수 500 yL, 100 11L 0.
성능/효과
- DPPH 라디칼소거능 및 환원력과 같은 항산화 활성은 80% 에탄올 추출물이 열수 추출물에 비하여 높게 나타났다. 3T3-L1의 분화과정 중의 천년초 추출물들은 50, 100, 200 및 400 ug/mL 농도범위에서 세포독성을 보이지 않았으며, 세포 내 지방의축적 량을 유의적으로 감소시키는 것으로 나타났다. 특히천년초 80% 에탄올 추출물은 열수 추출물에 비해 세포내지방축적을 억제하는 효과가 큰 것으로 나타났다.
- 80% 에탄올 추출물에 비해 높은 총 페놀 함량을 보인열수 추출물에서 항산화 활성(DPPH 라디칼 소거능 및 환원력)이 높게 나타날 것이라는 예상과는 달리 80% 에탄올추출물에서 높은 항산화 활성을 보인 이유는, 총 페놀 및총 플라보노이드 화합물의 상승작용에 기인된 것으로 사료되었다. Fig 1과 같이 80% 에탄올 추출물에서는 총 페놀및 총 플라보노이드 함량이 높게 검출된 반면, 열수 추출물에서는 총 플라보노이드가 미량 검출 되었다.
- DPPH radical 소거능을 이용한 천년초 추출울들의 항산화 활성은 Fig. 2와 같이 80% 에탄올 추출물의 1000, 500 및 250 題/niL의 농도에서 각각 19.17, 12.02 및 4.00%를 나타내었으며 동일한 농도의 열수 추출물에서는 각각 6.03, 4.09 및 2.50%의 DPPH 라디칼 소거능을 보여 80% 에탄올 추출물에서의 DPPH 라디칼 소거능이 열수 추출물에 비해 높게 나타났다. 또한, 80% 에탄올과 열수 추출물의 농도별 환원력을 측정한 결과 Fig.
- 08 ug CE/g의 수준으로 검출되었다. DPPH 라디칼소거능 및 환원력과 같은 항산화 활성은 80% 에탄올 추출물이 열수 추출물에 비하여 높게 나타났다. 3T3-L1의 분화과정 중의 천년초 추출물들은 50, 100, 200 및 400 ug/mL 농도범위에서 세포독성을 보이지 않았으며, 세포 내 지방의축적 량을 유의적으로 감소시키는 것으로 나타났다.
- Fig 1과 같이 80% 에탄올 추출물에서는 총 페놀및 총 플라보노이드 함량이 높게 검출된 반면, 열수 추출물에서는 총 플라보노이드가 미량 검출 되었다. 곡물에서의항산화 성분과 항산화 활성 간의 상관관계에 대하여 보고한 Seo 등(32) 및 Choi 등(33)의 연구에서와 같이 천년초에존재하는 taxifolin과 같은 플라보놀(flavonol) 화합물들은강력한 항산화 성분으로 알려져 있다.
- 50%의 DPPH 라디칼 소거능을 보여 80% 에탄올 추출물에서의 DPPH 라디칼 소거능이 열수 추출물에 비해 높게 나타났다. 또한, 80% 에탄올과 열수 추출물의 농도별 환원력을 측정한 결과 Fig. 3과 같이 1000 ng/mL의 농도에서 80% 에탄올 추출물과 열수 추출물의 환원력이 각각 0.157(A700), 0.069(A700)로 나타나 80% 에탄올 추출물의환원력이 열수 추출물에 비하여 약 2배정도 높게 나타났다.
- 천년초 추줄물을 처리한 지방세포는모든 농도 범위 에서 대조군과 비교하여 Oil red O 시 약에의하여 염색된 지방구는 유의적으로 적은 것으로 나타났다. 또한, 천년초 80% 에탄올 추출물의 지방축적 억제 효과는 열수 추출물에 비해 더욱 효과적인 것으로 관찰되었다.
- 지방세포 분화에 관련된 전사인자(PPARx) 및 타깃 유전자인 aP2 의 발현율도 천년초 추출물에 의해 유의적으로 감소하였다. 이들의 결과로 비추어 볼 때, 천년초 추출물에 함유된페놀성 화합물 및 플라보노이드 화합물들은 PPARY의 유전자 발현을 억제하여 지 방세포 분화를 억제하거나 항산화활성이 연계된 항비만 활성을 갖는 것으로 나타났다.
- 곡물에서의항산화 성분과 항산화 활성 간의 상관관계에 대하여 보고한 Seo 등(32) 및 Choi 등(33)의 연구에서와 같이 천년초에존재하는 taxifolin과 같은 플라보놀(flavonol) 화합물들은강력한 항산화 성분으로 알려져 있다. 이상의 결과로 비추어 볼 때, 추출 용매별 천년초 추출물들에 함유된 총 페놀및 총 플라보노이드의 조성 및 함량의 차이가 이들 추출물의 항산화 활성에 주요한 영향을 미치는 것으로 판단되었다.
- 지방세포 분화 및 지방축적과 연관된 주요 전사인자 (PPARy) 및 타깃 유전자(aP2)의 발현 정도는 Fig. 6에서보는바와 같이 대조군과 비교하여 천년초 추출물 처리군에서 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다. 지방의 축적 량을 평가한 QQ md O의 결과에서와 같이, &)% 에탄올 추출물에 의한 PPARy 및 aP2 mRNA의 억제효과는 열수 추출물에의한 억제효과 보다 유의적으로 큰 것으로 나타내었다.
- 6에서보는바와 같이 대조군과 비교하여 천년초 추출물 처리군에서 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다. 지방의 축적 량을 평가한 QQ md O의 결과에서와 같이, &)% 에탄올 추출물에 의한 PPARy 및 aP2 mRNA의 억제효과는 열수 추출물에의한 억제효과 보다 유의적으로 큰 것으로 나타내었다. 지방조직에서 주로 나타나는 PPARx는 발현이 증가할수록세포의 인슐린에 대한 감수성 및 전구지방세포에서 지방세포로 분화를 크게 증가시키는 것으로 알려져 있어(34, 35), 본 연구에서 관찰된 천년초 추출물의 3T3-L1 세포 지방생성 억제 효과는 PPAR?의 발현과 크게 연관되어 있다고 판단되었다.
- 천년 초 열수 및 80% 에탄올 추출물의 50, 100, 200 및 400 ygetiiL 농도범위에서 세포독성을 측정한 결과(Fig. 4), 천년초 추출물의 400 pg/mL 농도까지 세포 생장에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났디, . 따라서 천년초 열수 추출물과 80% 에탄올 추출물을 50, 100, 200 및 400 ug/mL 농도로 하여 항비만 활성을 평가하였다.
- 세포분화 8일째 에 축적 된 지 방의 함량은 Oil red O staining 방법 을이용하여 측정하였고, 지방세포 분화에 연관된 주요 유전자(PPARy 및 aP2)의 발현은 semi-quantitative RT-PCR을이용하여 조사하였다. 천년초 추줄물을 처리한 지방세포는모든 농도 범위 에서 대조군과 비교하여 Oil red O 시 약에의하여 염색된 지방구는 유의적으로 적은 것으로 나타났다. 또한, 천년초 80% 에탄올 추출물의 지방축적 억제 효과는 열수 추출물에 비해 더욱 효과적인 것으로 관찰되었다.
- 본 연구에서는 천년초 열수 및 80% 에탄올추출물의 총 페놀 및 총 플라보노이드 함량, 항산화 활성 (DPPH 라디칼 소거능 및 환원력) 및 항비만 활성을 평가하였다. 총 페놀 함량은 천년초 열수 추출물 및 80% 에탄올추출물에서 각각 16.52±3.87와 13.44+0.85 mg GAE/g로 나타난 반면, 총 플라보노이 드 함량은 80% 에탄올 추출물에서만 778.08 ug CE/g의 수준으로 검출되었다. DPPH 라디칼소거능 및 환원력과 같은 항산화 활성은 80% 에탄올 추출물이 열수 추출물에 비하여 높게 나타났다.
- 및 물을 사용하였다. 추출용매별 천닌초 추출물의추출 수율은 열수 추출물에서 44.70%로 80% 에탄올 추출물의 17.17%에 비하여 높은 수율을 나타내었다. Lee 등(26) 의 결과에서도 물 추출물(64.
- 3T3-L1의 분화과정 중의 천년초 추출물들은 50, 100, 200 및 400 ug/mL 농도범위에서 세포독성을 보이지 않았으며, 세포 내 지방의축적 량을 유의적으로 감소시키는 것으로 나타났다. 특히천년초 80% 에탄올 추출물은 열수 추출물에 비해 세포내지방축적을 억제하는 효과가 큰 것으로 나타났다. 지방세포 분화에 관련된 전사인자(PPARx) 및 타깃 유전자인 aP2 의 발현율도 천년초 추출물에 의해 유의적으로 감소하였다.
- 4976%로서 48시간동안 80% 메탄올로 추출하였다고 보고하였다. 한편, 천년초 추출물들의 총 플라보노이드 함량은 80% 에탄올 추출물에서 만 778.08 ug CE/g의 함량을 나타내었을 뿐, 열수 추출물에서는 총 플라보노이드가 검출되지 않았다.
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