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문제 정의
- 따라서 본 실험에서는 아직까지 알려지지 않은 음양곽 물 추출물이 사염화탄소투여로 유발된 간독성의 회복에 미치는 영향뿐만 아니라 간손상에 따른 관련 조직의 변화에 어떠한 영향을 미치는지를 관찰하고자 하였다.
제안 방법
- 1주일간 환경적응(온도: 20 ± 2℃, 습도: 60 ± 10%, 명암주기: 12-12시간)을 시켰으며, 사료와 음수는 자유급식 하였다.
- 간 실질 중 섬유조직의 비율, 간소엽의 직경, 신장 실질 중 변성부위의 비율, 변성사구체 및 세뇨관의 수, 고환내 변성 정세관의 수, 부고환내 정소세관의 수, 비장 임파소절 (백색수질) 의 수와 직경의 변화를 현미경 상에서 자동영상분석장치 (DMI image processing, DMI, Korea)를 이용하여 평가하였다.
- 간, 비장, 신장(좌), 고환(좌), 부고환(좌), 전립선(좌) 및 정낭선(좌) 실질조직의 일부를 10% 중성 포르말린 용액에 고정시킨 후 일반적인 방법으로 탈수 및 포매를 실시하고, 3-4 µm의 절편을 제작하여 hematoxylin-eosin 염색을 실시한 후 광학현미경하에서 관찰하였다.
- 1주일간 환경적응(온도: 20 ± 2℃, 습도: 60 ± 10%, 명암주기: 12-12시간)을 시켰으며, 사료와 음수는 자유급식 하였다. 간손상 유발을 위하여 24두의 rat에 사염화탄소와 olive oil을 1:1로 희석한 후 체중 kg 당 1 ml를 1일 1회 9주간 경구투여 하였으며, AST 수치가 500 IU/L이상인 rats를 선별하여 각각 간손상 대조군(n =10)과 음양곽 투여군(n = 10)으로 나누었다. 이후 생리식염수 (10 ml/kg)와 음양곽 물추출물 (500 mg/kg) 을 각각 1일 1회 4주간 경구투여 하였다.
- 간손상 유발을 위하여 24두의 rat에 사염화탄소와 olive oil을 1:1로 희석한 후 체중 kg 당 1 ml를 1일 1회 9주간 경구투여 하였으며, AST 수치가 500 IU/L이상인 rats를 선별하여 각각 간손상 대조군(n =10)과 음양곽 투여군(n = 10)으로 나누었다. 이후 생리식염수 (10 ml/kg)와 음양곽 물추출물 (500 mg/kg) 을 각각 1일 1회 4주간 경구투여 하였다. 정상대조군(n = 10)의 경우 13주간 생리식염수를 경구투여 하였다.
- 혈액채취는 마취(zoletil 50®, Virbac, USA) 후 후대정맥에서 채혈하였으며, 채혈한 혈액은 혈액검사를 위하여 항응고제(EDTA-2Na)가 처리된 microfuge tube에 넣어 검사하였으며, 혈청검사를 위하여 상온에 방치 후 원심분리 후 혈청을 채취하여 검사하였다. 장기(간, 비장, 신장, 고환, 부고환, 전립선, 정낭선)를 적출하여 무게를 측정 후 10% 중성 포르말린 용액에 고정하였다.
- 혈액검사 항목인 총적혈구(RBC), 혈색소(Hb), 혈구용적 (PCV), 평균적혈구혈색소량(MCH), 평균적혈구용적(MCV), 평균적혈구혈색소농도(MCHC), 백혈구(WBC), 혈소판은 자동혈구분석기(MS9-5, Kubota, Japan)로 분석하였다.
- 혈액채취는 마취(zoletil 50®, Virbac, USA) 후 후대정맥에서 채혈하였으며, 채혈한 혈액은 혈액검사를 위하여 항응고제(EDTA-2Na)가 처리된 microfuge tube에 넣어 검사하였으며, 혈청검사를 위하여 상온에 방치 후 원심분리 후 혈청을 채취하여 검사하였다.
- 혈청생화학 검사 항목인 aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), total bilirubin (T-bil), blood urine nitrogen (BUN), Creatinine은 dry chemistry analyzer (SP4410, Jeil Chem, Japan)로 측정하였다.
대상 데이터
- 실험동물로는 생후 20주령의 수컷 SD rat (찰스리버, 일본) 34두(평균체중 438 ± 54 g)를 사용하였다.
- 한약 건재상에서 구입한 음양곽 잎을 음건 후 분쇄하여 사용하였다. 음양곽 잎 분쇄물 100 g에 증류수 1L의 비율로 37℃, 140 rpm으로 4시간 동안 진탕 후 이를 4℃, 3000 rpm으로 20분간 원심분리 후 상층액을 여과(No.
데이터처리
- 장기무게, 혈액학적 검사, 혈액생화학적 검사 결과는 Student t test로 유의성을 검정하였으며, 유의성은 P < 0.05, P < 0.01로서 나타내었다.
- 01로서 나타내었다. 조직학적 검사는 One-way ANOVA test로 유의성을 검증한 후 Mann-Whitney U-Wilcox Rank Sum W test로서 유의성을 확증하였다.
성능/효과
- 9주간 사염화탄소 투여 후 각각 생리식염수 (간손상 대조 군)와 음양곽 물추출물 (음양곽 투여군)을 투여하는 동안 체중변화는 정상대조군에 비하여 각각 88g, 79.5 g으로 약 2배 가량 증가하였으며, 이러한 체중 증가변화는 간손상에 의한복수의 증가로 인한것으로 추측된다. 사염화탄소의 간 독성작용으로 인하여 부종 및 간이 팽대되어 중량이 커지게 되며, 이러한 작용이 지속되면 염증으로 인한 기능의 저하로 서서히 중량이 감소되고 간섬유화, 간경화로 진행된다.
- 9주간의 사염화탄소 투여로 간손상 대조군의 AST, ALT, ALP 활성치는 정상대조군에 비하여 1043.77, 614.78, 521.21%, 음양곽 투여군은 958.22, 546.96, 617.83%로서 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었다.
- 01) 감소를 나타내었다(Table 6, Figs 3,4). 9주간의 사염화탄소투여로 비장의 전형적인 심각한 위축성 변화와 림프낭 직경의 감소가 관찰되었으나, 간손상 대조군과 비교하여서는 유의한 변화가 인정되지 않았다(Table 7). 전립선과 정낭선의 변화는 관찰되지 않았다.
- 간 실질의 섬유성 변화에서 간손상 대조군은 정상대조군에 비하여 462.34%의 유의한(P < 0.01) 간 실질의 섬유성 변화를 나타내었으나, 음양곽 투여군은 정상대조군에 비하여 200.00%의 유의한(P < 0.01) 간실질의 섬유성 변화를 나타내었으며, 간손상 대조군에 비하여는 −46.65%의 유의한(P < 0.01) 간 실질의 섬유성 감소를 나타내었다.
- 간소엽의 평균지름은 간손상 대조군이 정상대조군에 비하여 −61.17%의 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었으나, 음양곽 투여군은 간손상 대조군에 비하여 94.65%의 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었다(Table 4, Fig 1).
- 간손상 대조군에서 사염화탄소 투여로 유의한(P < 0.01) 정세관과 부고환세관의 정자감소가 관찰되었으나, 음양곽 투여군에서는 유의한(P < 0.01) 감소 억제가 관찰되었다.
- 간손상 대조군에서 사염화탄소 투여로 인한 전형적인 국소적 세뇨관괴사와 혈관확장성 사구체위축이 관찰되었으며, 퇴행성 변화에 있어서는 간손상 대조군은 정상대조군에 비하여 4144.94%의 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었으나, 음양곽 투여군은 간손상 대조군에 비하여는 −39.82%의 유의한(P <0.01) 감소를 나타내었다.
- 간손상 대조군에서 위축성 정세뇨관의 수는 정상대조군에 비하여 유의한(P <0.01) 증가를 나타내었으나, 음양곽 물추출물에서는 간손상대조군에 비하여 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었다.
- 간손상 대조군의 RBC, Hb, PCV, MCH, MCV는 정상대조군에 비하여 각각 −6.40, −12.71, −11.75, −6.21, −6.38%로 유의한(P < 0.01, P < 0.05) 감소를 나타내었으나, 음양곽 투여군의 PCV, MCV, MCHC는 간손상 대조군에 비하여 0.07, 0.05, −0.07%로서 유의한(P < 0.01 또는 P < 0.05) 변화를 나타내었다(Table 2).
- 간손상 대조군의 변성 사구체와 세뇨관의 수는 정상대 조군에 비하여 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었으나 음양곽 투여군에서는 간손상 대조군에 비하여 −45.71%와 −26.57%로 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었다.
- 간손상 대조군의 섬유화 변성영역이 정상대조군에 비하여 462.34% 증가하였으나 음양곽 투여군은 간손상 대조군에 비하여 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었으며, 간손상 대조군에서는 간소엽 직경이 유 의한(P < 0.01) 감소하였으나, 음양곽 물추출물 투여군에서는 간손상 대조군에 비하여 간소엽 직경이 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었다.
- 또한 간손상 대조군에서 정자감소증을 나타내는 부고환세관의 수가 정상대조군에 비하여 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었으나 음양곽 투여군에서는 현저한 변성감소를 나타내었다.
- 본 실험에서 간손상으로 인한 면역기관인 비장과 생식기 중량 (고환, 부고환)의 유의한(P < 0.01, P < 0.05) 감소가 나타났으나 음양곽 물추출물의 투여로 이러한 감소가 유의하게 억제되었다.
- 본 실험에서 음양곽 투여군의 AST, ALT, ALP의 수치가 간손상 대조군에 비하여 유의한(P < 0.05, P < 0.01) 감소를 나타내었으며, 이러한 결과는 음양곽 물추출물이 사염화탄소 투여로 인한 세포의 스트레스를 감소시키거나, 기능의 활성화를 유발하는 것으로 추측된다(15,22,23,35).
- 부고환세관에서의 정자감소를 보이는 부고환세관의 수는 간손상 대조군이 정상대조군에 비하여 1833.33%의 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었으나, 음양곽 투여군에서는 정상대조군에 비하여 1206.67%의 유의한(P <0.01) 증가를 나타내었으며, 간손상 대조군에 비하여 −32.41%의 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었다(Table 6, Figs 3,4).
- 상대적 중량에서는 간, 비장, 고환에서 13.74, 66.15, −11.24%로서 유의한(P < 0.05, P < 0.01) 변화를 나타내었으며, 고환과 부고환이 간손상 대조군에 비하여 20.72, 34.08%의 유의한(P < 0.05) 증가를 보였다(Table 1).
- 위축성 정세관수에서 간손상 대조군은 정상대조군에 비하여 2133.33%의 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었나, 음양곽 투여군은 정상대조군에 비하여 977.78%의 증가를 나타내었으며, 간손상 대조군에 비하여 −51.74%로 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었다.
- 음양곽 투여 후 AST, ALT, ALP 활성치가 간손상 대조군에 비하여 −42.46, −51.35, −30.13%로서 유의한(P < 0.05, P < 0.01) 감소를 나타내었다 (Table 3).
- 음양곽 투여군의 비장, 고환, 부고환 (절대적 중량)이 정상대조군에 비하여 66.33, −12.04, −8.46%로 유의한 변화를 나타내었으며, 전립선의 절대적 중량의 경우 간손상 대조군에 비하여 14.84%로 유의한 증가를 나타내었다.
- 이상의 결과를 종합하여 볼 때 음양곽 물추출물은 사염화 탄소 투여로 유발된 간손상에서 간을 보호하는 직접적인 효과 또는 변성억제효과를 나타내었고, 다른 장기 즉 신장 및 수컷 생식기에서도 손상을 비교적 효과적으로 억제 또는 치료하는 것으로 관찰되었으나, 비장 손상에는 별다른 영향을 미치지 않는 것으로 판단되었다.
- 퇴행성 신세뇨관 수에서 간손상 대조군은 정상대조군에 비하여 2156.25%의 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었으나, 음양곽 투여군은 간손상 대조군에 비하여는 −45.71%의 유의한(P < 0.01) 감소를 나타내었다.
- 혈관 확장성 위축성 사구체수에서는 간손상 대조군이 정상대조군에 비하여 472.00%의 유의한(P < 0.01) 증가를 나타내었으나, 음양곽 투여군에서는 간손상 대조군에 비하여는 −26.57%의 유의한(P < 0.05) 감소를 나타내었다(Table 5, Fig 2).
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