영양보충용 식품 중 수용성비타민(Vitamin $B_1$, $B_2$, $B_3$, $B_6$ and C)의 HPLC를 이용한 동시분석법 Simultaneous Determination of Water-Soluble Vitamins (Vitamin $B_1$, $B_2$, $B_3$, $B_6$ and C) in Dietary Supplements by High-Performance Liquid Chromatography원문보기
시중에 유통 중인 영양보충용 제품의 수용성 비타민 $B_1$(thiamin), $B_2$(riboflavin), $B_3$(nicotinic acid and nicotine amide), $B_6$(pyridoxine), C(ascorbic acid)의 신속한 동시분석 방법을 확립하기 위하여 본 연구를 실시하였다. 영양보충용 제품은 정제, 연질캅셀, 분말, 액상의 4가지 제형에 대해 27종의 제품을 구입한 후, Ion-pair 분리기법을 사용하여 HPLC-UVD를 이용한 동시분석 방법을 검토하였다. 비타민 $B_1$, $B_2$, $B_3$, $B_6$, C의 HPLC에 의한 동시분석 조건을 검토한 결과, 이동상은 0.02% triethylamine, 17.5% 메탄올, $5{\mu}M$ sodium hexanesulfonic acid가 함유된 pH 3.5(acetic acid로 조절)의 수용액을 사용하였고, 용출시간은 다른 피크의 영향을 받지 않도록 30분으로 하였다. 수용성 비타민의 회수율은 96% 이상이었다. 본 연구에 의해 확립된 수용성 비타민의 동시분석 조건은 검량선의 직선성, 정밀성, 정확성, 기기적합성 등이 USP 및 ICH 기준에 적합하여 HPLC의 동시분석 방법으로 합당하였다. 수용성 비타민의 추출 용매는 제형에 따라 약간의 차이를 보이긴 했으나, 물이나 산성조건을 갖춘 HPLC의 이동상이 에탄올이나 메탄올보다 높은 추출 효율을 보였다. 초음파 추출기에 의한 추출 시간은 20분이 가장 적당하였다. 본 연구의 결과는 수용성 비타민의 신속한 추출 및 분석에 매우 효율적으로 이용될 것으로 기대된다.
시중에 유통 중인 영양보충용 제품의 수용성 비타민 $B_1$(thiamin), $B_2$(riboflavin), $B_3$(nicotinic acid and nicotine amide), $B_6$(pyridoxine), C(ascorbic acid)의 신속한 동시분석 방법을 확립하기 위하여 본 연구를 실시하였다. 영양보충용 제품은 정제, 연질캅셀, 분말, 액상의 4가지 제형에 대해 27종의 제품을 구입한 후, Ion-pair 분리기법을 사용하여 HPLC-UVD를 이용한 동시분석 방법을 검토하였다. 비타민 $B_1$, $B_2$, $B_3$, $B_6$, C의 HPLC에 의한 동시분석 조건을 검토한 결과, 이동상은 0.02% triethylamine, 17.5% 메탄올, $5{\mu}M$ sodium hexanesulfonic acid가 함유된 pH 3.5(acetic acid로 조절)의 수용액을 사용하였고, 용출시간은 다른 피크의 영향을 받지 않도록 30분으로 하였다. 수용성 비타민의 회수율은 96% 이상이었다. 본 연구에 의해 확립된 수용성 비타민의 동시분석 조건은 검량선의 직선성, 정밀성, 정확성, 기기적합성 등이 USP 및 ICH 기준에 적합하여 HPLC의 동시분석 방법으로 합당하였다. 수용성 비타민의 추출 용매는 제형에 따라 약간의 차이를 보이긴 했으나, 물이나 산성조건을 갖춘 HPLC의 이동상이 에탄올이나 메탄올보다 높은 추출 효율을 보였다. 초음파 추출기에 의한 추출 시간은 20분이 가장 적당하였다. 본 연구의 결과는 수용성 비타민의 신속한 추출 및 분석에 매우 효율적으로 이용될 것으로 기대된다.
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제안 방법
System suitability was estimated by calculating the relative standard deviation of peak area, the tailing factor of peak and resolution in chromatogram (Table 2). The relative standard deviation of peak area ranged from 0.
Ten times measurement of each vitamin standard solution were carried out using the same mobile phase and equipments to evaluate the method precision. The relative standard deviations for retention time and vitamin content in all standard solution were obtained as Table 2.
But vitamins in dietary supplements are easily extracted without specific preparation such as enzymatic or acid hydrolysis because vitamins are added as an isolation type into dietary supplements. Therefore, this study considered both resolution time of ultra sonic and the type of extraction solvent for fast and accurate extraction of vitamins, rather than extraction based on an enzymatic or acid hydrolysis. Mobile phase, ethanol, methanol and water were used as an extraction solvent.
대상 데이터
The HPLC system was operated on a Shiseido Nanospace SI-2 separation module (Tokyo, Japan) equipped with Shiseido Nanospace SI-2 UV/VIS detector controlled by Millennium 32 chromatography manager data acquisition system. The column used for the analysis was a Capcell-Pak C18 MG Column (150 × 3.
(b) Other types of samples: The Korean Food Code stipulates that the experimental method for net contents must be performed with collected twenty tablets or capsules in order to secure the representativeness of the sample (KFDA 2000). Thus this study conducted the experiment with twenty samples collected, including soft and hard capsules. Twenty sample tablets were weighed, ground to fine powder, then, sample preparations were as described for powder and liquid type samples.
성능/효과
Based upon the above mentioned results as a conclusion, when the simultaneous determination of vitamin B1, B2, B3 (nicotinic acid, nicotine amide), B6 and vitamin C from dietary supplements was carried out, even though extraction efficiencies were various by product type, water and aqueous (the same as mobile phase) prepared to mix 0.02% triethylamine, 17.5% methanol and 5 μM sodium hexane-sulfonic acid in water adjusted to pH 3.5 with acetic acid as extraction solvent were better solvent than ethanol and methanol.
The pH, the concentration of ion-pairing reagent and the proportion of methanol in mobile phase were properly proposed to determine of the water-soluble vitamins in dietary supplements. Precision, accuracy, linearity and system suitability for simultaneous determination of HPLC method were validated individually, in which showed the good results being eligible for USP and ICH standards. The procedure was applied to the determination of water-soluble vitamins in dietary supplements with great results.
참고문헌 (13)
Albala?Hurtado S, Veciana-Nogues MT, Izquierdo-Paulido M, Marine-Font A. 1997. Determination of water-soluble vitamins in infant milk by high performance liquid chromatography. J Chromatography A 778:247-253
De Beer JO, Baten P, Nsengyumva C, Smeyers-Verbeke J. 2003. Measurement uncertainty from validation and duplicate analysis results in HPLC and of multivitamin preparations and nutrients with different galenic forms. J Pharmaceutical and Biomedical Analysis 32:767-811
ICH Steering Committee. 1994. ICH harmonized tripartite guideline - text on Validation of Analytical Procedures Methodology. pp. 5-11. International Conference on Harmonization Committee
Korea Food and Drug Administration. 2000. Korean Food Code. pp.13. KFDA
Lam FL, Holcomb IJ, Fusari SA. 1984. Liquid chromatographic assay of ascorbic acid, niacinamide, pyridoxine, thiamine, and riboflavin in multivitamin-mineral preparations. J Assoc Off Ana Chem 67:1007-1011
Leklem JE, in: Shils ME, Olson JA, Shike M, Ross AC (Ed.). 1999. Modern Nutrition in Health and Disease. 9th ed. pp.413-421. Baltimore: Williams and Wilkins.
Lynch PLM, Young IS. 2000. Determination of thiamine by high-performance liquid chromatography. J Chromatography A 881:267-284
Maeda Y, Yamamoto M, Owada K, Sato F, Masui T. 1989. Simultaneous liquid chromatographic determination of watersoluble vitamins, caffeine, and preservative in oral liquid tonics. J Assoc Off Ana Chem 72:244-248
Moreno P, Salvado V. 2000. Determination of eight water-and fat-soluble vitamins in multi-vitamin pharmaceutical formulation by high-performance liquid chromatography. J Chromatography A 870:207-215
National Institutes of Health. 2001. Facts about Dietary Supplements: Vitamin $B_{12}$ . pp.12-125. National Institutes of Health Office of Dietary Supplements.
Ndaw S, Berganentxle M, Aoude-Werner D, Hasselmann C. 2000. Extraction procedures for the liquid chromatographic determination of thiamin, riboflavin and vitamin B6 in foodstuffs. Food Chem 71:129-138
Vinas P, Lopez-Erroz C, Balsalobre N, Hernandez-Cordoba M. 2003. Reversed-phase liquid chromatography on an amide stationary phase for the determination of the B group vitamins in baby foods. J Chromatography A 1007:77-84
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