선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- , 2011). 따라서 이번 연구에서는 틸라피아를 대상으로 IMP의 첨가함량을 달리한 사료를 공급하였을 때 성장, 사료효율 및 비특이적 면역반응에 미치는 영향을 알아보고자 수행하였다.
제안 방법
- 2주간의 예비사육 후, 틸라피아(초기 평균 무게: 7.4±0.04 g)는 총 12개의 30 L 원형 플라스틱 수조에 각 수조 당 40마리씩 무작위로 배치하였다.
- 사료유인성 실험은(사료공급 9주 후) 동일한 환경조건에서 3분동안 실험 사료를 만복공급하여 실험어가 섭취한 사료의 양을 측정하였다. 3번의 반복실험을 통하여 10 g의 실험어가 먹은 양으로 계산하였다.
- 4개의 실험사료는 35%의 조단백질과 7%의 조지방이 되도록 제조하였다(Table 1). IMP의 첨가효과를 조사하기 위해 대조사료에 alanine 양을 감소시켜 (주)CJ 제일제당에서 제공받은 제품을 농도별로 첨가하였다(0%, 0.
- Hematocrit은 혈액진단원심분리기(Micro hematocrit VS-12000, Korea)에서 10분간 원심분리하여 값을 측정하였고, hemoglobin, total protein, glucose 및 total cholesterol은 각각의 시판 kit시약과 반응시킨 후 혈액생화학분석기(Express plus system, USA)로 분석하였다.
- 4개의 실험사료는 35%의 조단백질과 7%의 조지방이 되도록 제조하였다(Table 1). IMP의 첨가효과를 조사하기 위해 대조사료에 alanine 양을 감소시켜 (주)CJ 제일제당에서 제공받은 제품을 농도별로 첨가하였다(0%, 0.05%, 0.1%, 0.2%). 실험에 사용된 제품은 46% 이상의 IMP와 그외 다른 NT를 함유하였다.
- 혈청 내 lysozyme 분석은 Sankaran and Shanto (1972)의 방법으로 분석하였다. Sodium citrate buffer (0.02 M, pH 5.52) 에 동결건조된 Microccus lysodeikticus (Sigma, USA)를 첨가하여 0.2 mg/mL 농도의 현탁액을 제조한 후, 현탁액과 혈청을 10:1의 비율로 혼합하여 24℃에서 한시간 반응시킨 후, 450nm에서 흡광도 값을 측정하였다. Hen egg white lysozyme (HEWL; sigma, USA)을 이용하여 standard curve을 구하고 ug/mL로 표시하였다.
- 남은 3마리의 혈액은 헤파린이 처리되지 않은 주사기로 채혈하였고 채혈된 전혈은 상온에서 60분간 방치시킨 후 원심분리기로(5000×g) 혈청을 분리하여 면역분석을 실시하였다.
- 어분은 단백질 함량이 높고 사료섭이에 대한 기호성을 향상시키지만, 증가하는 수요에 비해 불안정한 공급으로 가격이 상승하고 있다(Hardy and Tacon, 2002; Tacon and Metian, 2009). 따라서 사료 내 어분함량을 줄임과 동시에 실험사료의 섭이율을 유지하기 위해 최소한의 어분을 첨가하였다. 사료유인성 실험결과, 모든 그룹에서 유의적인 차이는 없었지만 성장률과 동일하게 0.
- 따라서, 우수성이 보고된 물질이라도 적정량 이상으로 사용하였을 때에는 오히려 역효과가 나타날 수 있을 것으로 판단된다(Shiau and Yu, 1999). 본 연구에서는 대조사료에 포함된 사료원으로부터 NT 함량을 최소화하였고, 최근 틸라피아에서의 저어분사료(low fish meal feeds)에 근접하기 위해 어분함량을 6%로 조절하여 실험사료를 제작하였다. 어분은 단백질 함량이 높고 사료섭이에 대한 기호성을 향상시키지만, 증가하는 수요에 비해 불안정한 공급으로 가격이 상승하고 있다(Hardy and Tacon, 2002; Tacon and Metian, 2009).
- 용존산소 유지를 위하여 에어스톤을 설치하였고, 사육수온은 전기히터를 이용하여 28-29℃ 범위로 유지하였다. 사료공급은 1일 6회(08:30, 10:30, 12:30, 14:30, 16:30, 18:30)에 걸쳐 13주 동안 만복공급을 하였다.
- 04 g)는 총 12개의 30 L 원형 플라스틱 수조에 각 수조 당 40마리씩 무작위로 배치하였다. 사료공급은 순환여과시스템에서 실험구당 3반복구를 두었으며, 환수율은 일간 전체 수량의 50%로 하였다. 용존산소 유지를 위하여 에어스톤을 설치하였고, 사육수온은 전기히터를 이용하여 28-29℃ 범위로 유지하였다.
- 실험종료 후 실험어의 최종무게, 마리수와 사료공급량을 측정하여 사료전환효율(feed conversion ratio), 단백질이용효율(protein efficiency ratio) 및 생존율을 계산하였다. 사료유인성 실험은(사료공급 9주 후) 동일한 환경조건에서 3분동안 실험 사료를 만복공급하여 실험어가 섭취한 사료의 양을 측정하였다. 3번의 반복실험을 통하여 10 g의 실험어가 먹은 양으로 계산하였다.
- 실험에 사용된 제품은 46% 이상의 IMP와 그외 다른 NT를 함유하였다. 실험사료 제조는 파쇄기로 모든 사료원을 분말형태로 일정하게 만든 후, 각 사료원을 사료조성표에 따라 정확히 무게를 측정하고 혼합하였다. 혼합 후 사료원 총량의 30%에 해당하는 증류수를 첨가하여 사료혼합기(NVM-14-2P, Gyeonggido, Korea)로 혼합하였다.
- 실험종료 후 실험어의 최종무게, 마리수와 사료공급량을 측정하여 사료전환효율(feed conversion ratio), 단백질이용효율(protein efficiency ratio) 및 생존율을 계산하였다. 사료유인성 실험은(사료공급 9주 후) 동일한 환경조건에서 3분동안 실험 사료를 만복공급하여 실험어가 섭취한 사료의 양을 측정하였다.
- 2%)을 각각 50 μL씩 유리튜브에 옮긴 후, formazon 생성을 감소시키기 위해 1 mL의 dimethyl formamide를 첨가하여 2000×g 에서 5분동안 원심분리하였다. 이때 형성된 상층액을 수집하여 spectrophotometer (Genesys 10UA, USA)로 540 nm에서 NBT의 감소 범위를 측정하였다. Blank는 dimethyl formamide를 사용하였다.
- 전혈과 NBT solution (0.2%)을 각각 50 μL씩 유리튜브에 옮긴 후, formazon 생성을 감소시키기 위해 1 mL의 dimethyl formamide를 첨가하여 2000×g 에서 5분동안 원심분리하였다.
- 채혈된 전혈은 hematocrit, hemoglobin 및 대식세포활성(nitroblue-tetrazolium) 분석에 이용되었고 분석이 끝난 후, 원심분리기로(5000×g) 혈장을 분리하여 혈장성분 분석을 실시하였다.
- 최종무게 측정 후, 각 수조당 6마리의 실험어를 무작위로 선별하여 2-phenoxyethanol 용액(100 ppm)으로 마취시킨 후 6마리 중 3마리는 헤파린이 처리된 주사기로 꼬리 미병부에서 채혈하였다. 채혈된 전혈은 hematocrit, hemoglobin 및 대식세포활성(nitroblue-tetrazolium) 분석에 이용되었고 분석이 끝난 후, 원심분리기로(5000×g) 혈장을 분리하여 혈장성분 분석을 실시하였다.
- 혈청 내 superoxide dismutase (SOD)활성은 SOD assay kit (Sigma, 19160)로 분석하였다.
- 실험사료 제조는 파쇄기로 모든 사료원을 분말형태로 일정하게 만든 후, 각 사료원을 사료조성표에 따라 정확히 무게를 측정하고 혼합하였다. 혼합 후 사료원 총량의 30%에 해당하는 증류수를 첨가하여 사료혼합기(NVM-14-2P, Gyeonggido, Korea)로 혼합하였다. 혼합물은 소형초파기(SMC-12, Busan, Korea)를 이용하여 직경 2-3 mm 크기로 압출 성형하였다.
대상 데이터
- 이때 형성된 상층액을 수집하여 spectrophotometer (Genesys 10UA, USA)로 540 nm에서 NBT의 감소 범위를 측정하였다. Blank는 dimethyl formamide를 사용하였다.
- 따라서, 상업제품을 이용한 연구에서는 NT 농도와 함량에 대한 정확한 정보를 제시하기 어렵고, 농도에 따라 어류가 이용할 수 있는 활성이 달라질 것으로 판단된다. 본 실험에 사용된 제품은 46%의 IMP를 포함하고 있어 1 kg 실험사료에는 0 (대조구), 0.23 (0.05%), 0.46 (0.1%), 0.92 g (0.2%)의 IMP가 각각 함유되었다. 이번 연구결과를 종합해 볼 때, 치어기 틸라피아에서 저어분 사료를 사용할 경우에는 사료 1 kg 당 약 0.
- 2%). 실험에 사용된 제품은 46% 이상의 IMP와 그외 다른 NT를 함유하였다. 실험사료 제조는 파쇄기로 모든 사료원을 분말형태로 일정하게 만든 후, 각 사료원을 사료조성표에 따라 정확히 무게를 측정하고 혼합하였다.
- 틸라피아는 전라북도 군산에 위치한 종묘장에서 구입하여 제주대학교 해양과학대학 어류사육실로 운송하였다. 2주간의 예비사육 후, 틸라피아(초기 평균 무게: 7.
데이터처리
- 0)프로그램을 이용하여 One-way ANOVA로 통계분석하였다. 데이터 값의 유의차는 LSD (least significant difference)로 비교하였다. 데이터는 평균값±표준편차(mean±SD)로 나타내었다.
- 데이터는 평균값±표준편차(mean±SD)로 나타내었다.
- 데이터는 평균값±표준편차(mean±SD)로 나타내었다. 백분율 데이터는 arcsine 변형값으로 계산하여 통계 분석하였다.
- 실험사료의 배치는 완전확률계획법(Completely randomized design)으로 실시하였고, 성장 및 분석결과는 SPSS (Version 11.0)프로그램을 이용하여 One-way ANOVA로 통계분석하였다. 데이터 값의 유의차는 LSD (least significant difference)로 비교하였다.
이론/모형
- 실험사료의 일반성분 분석은 AOAC (1995) 방법에 따라 수분은 상압가열건조법(125℃, 3 h), 조회분은 직접회화법(550℃, 12h), 조단백질은 자동조단백질 분석기(Kejltec system 2300, Sweden)로 분석하였고, 지방은 Folch et al. (1957)의 방법에 따라 Soxhelt 추출장치(Soxhlet heater system C-SH6, Korea)로 분석하였다.
- 혈액 내 대식세포 활성은 Kumari and Sahoo (2005)의 분석 방법을 토대로 Nitro-blue tetrazolium (NBT)분석방법을 통해 호중구의 oxidative radical 생성량을 측정하였다. 전혈과 NBT solution (0.
- 혈청 내 lysozyme 분석은 Sankaran and Shanto (1972)의 방법으로 분석하였다. Sodium citrate buffer (0.
- 혈청 내 myeloperoxidase (MPO)활성은 Kumari and Sahoo (2005)의 방법을 기초로 분석하였다. 먼저 HBSS (Hanks balanced salt solution)용액을 96-well plates에 80 μL씩 분주한 다음 혈청 20 μL을 넣고 20 mM TMB (3,3’5,5’-tetramethylbenzidine hydrochloride)용액과 5 mM H2O2용액을 넣었다.
성능/효과
- 혈액학적 분석결과는 Table 3에 나타내었다. Hematocrit, hemoglobin, glucose, cholesterol 값은 모든 실험구에서 유의적인 차이가 없었다. Total protein 함량은 0.
- 실험사료 급이에 따른 틸라피아의 비특이적 면역반응 결과는 Table 4에 나타내었다. MPO 활성에서는 0.1% IMP그룹이 대조구와 0.2% IMP그룹에 비해 유의적으로 높은 활성을 보였다. 대식세포, lysozyme 및 SOD 활성에서는 모든 실험구에서 유의적인 차이가 없었다.
- Hematocrit, hemoglobin, glucose, cholesterol 값은 모든 실험구에서 유의적인 차이가 없었다. Total protein 함량은 0.05% IMP그룹이 대조구와 0.2% IMP그룹에 비해 유의적으로 높은 값을 보였다. Total protein은 면역반응을 유지하기 위한 필수 구성요소이다(Kumar et al.
- , 2007). 따라서 증가된 total protein은 어류의 비특이적 면역반응에 연관이 있을 것으로 사료되며 본 실험에서도 증가된 total protein (0.05-0.10%)은 어류의 비특이적 면역반응에 관여한 것으로 판단된다.
- 따라서 사료 내 어분함량을 줄임과 동시에 실험사료의 섭이율을 유지하기 위해 최소한의 어분을 첨가하였다. 사료유인성 실험결과, 모든 그룹에서 유의적인 차이는 없었지만 성장률과 동일하게 0.1% IMP가 첨가된 그룹이 높은 경향을 보였다(Table 2). 이는 사료 내 IMP의 첨가에 의해 사료섭이율이 증진되어 틸라피아의 성장률을 향상시킨 것으로 사료된다.
- 13주간의 성장실험 결과는 Table 2에 나타내었다. 생존율은 모든 실험구에서 유의적인 차이가 없었지만 대조구가 73%로 가장 낮았고 IMP가 첨가된 그룹은 80-93%의 높은 수치를 보였다. 사망개체의 외형적인 형태를 보면 눈과 지느러미 부분이 다른 개체로부터 공격 당한 것으로 보여 공식현상에 의한 결과라 판단된다.
- 이는 사료 내 IMP의 첨가에 의해 사료섭이율이 증진되어 틸라피아의 성장률을 향상시킨 것으로 사료된다. 성장결과를 바탕으로 0.1% IMP의 첨가는 치어기 틸라피아 사료에 적정 첨가함량이라고 판단된다.
- 2%)의 IMP가 각각 함유되었다. 이번 연구결과를 종합해 볼 때, 치어기 틸라피아에서 저어분 사료를 사용할 경우에는 사료 1 kg 당 약 0.5 g 의 IMP 첨가가 적정할 것으로 판단된다. 또한, 성장과 사료 효율 및 비특이적 면역력을 위한 적정 첨가함량은 사료의 어분 함량 및 영양소 조성과 더불어 어종에 따라 달라질 수 있을 것으로 사료된다.
- 따라서, 1일 4회의 사료공급을 2주째부터는 1일 6회로 늘려 공식에 의한 폐사량을 감소시켰다. 최종무게와 사료효율은 0.1% IMP 그룹이 대조구에 비해 유의적으로 높았으나 고농도인 0.2% IMP 그룹은 대조구와 유의적인 차이가 없었다. 무지개송어를 대상으로 사료 내 상업적 NT 제품인 Optimun (Chemoforma, Augst, Switzerland)을 0%, 0.
후속연구
- 5 g 의 IMP 첨가가 적정할 것으로 판단된다. 또한, 성장과 사료 효율 및 비특이적 면역력을 위한 적정 첨가함량은 사료의 어분 함량 및 영양소 조성과 더불어 어종에 따라 달라질 수 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.