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제안 방법
- White blood cell(WBC), red blood cell(RBC), henatocrit (Hct), hemoglobin(Hb) 및 mean corpuscular volume(MCV), mean corpuscular hemoglobin(MCH), mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC)는 자동분석기(Advia 120, Bayer, Japan)를 이용하여 분석하였고, lymphocyte는 Turk solution을 이용하여 염색하여 수를 카운트한 후 percentage로 표시하였다.
- 고지방식이로 비만 및 고지혈이 유발된 실험동물에서 체중, 혈중지질, 혈청생화학적 검사 및 장기 무게를 측정하여 숙성더덕추출물 투여로 인한 혈중지질 개선 및 숙성더덕추출물의 간기능 및 장기 무게 변화에 미치는 영향에 대해 조사하였다. 체중 및 사료 이용 효율은 고지방식이에 의해 고지방군에서 증가 현상을 보였으며, 숙성더덕추출물 투여군인 HF10S과 HF20S군에서 숙성더덕추출물 투여로 인한 체중 증가량 감소와 식이효율 감소 현상을 보였다.
- 고지방식이로 유발된 고지혈증과 숙성더덕추출물 투여로 인한 간, 비장, 신장, 폐, 심장의 장기 무게 변화를 관찰하였다(Table 3). 일반적으로 지방 또는 콜레스테롤의 섭취에 의해 간 조직에서 지질대사 이상이 초래되어 지질의 침착에 의해 간의 무게가 증가하고, 간에서의 지질과 콜레스테롤 함량이 증가한다(Kwag & Baek 2003).
- 그리고 신장에 이상이 있으면 혈액 중으로 유출되어 이상치가 나오는 γ-GT 변화도 관찰하였다.
- 즉, 기본식이군(Basal diet group, BDG), 고지방군(High fat diet control group, HFDCG)과 고지방식이에 숙성더덕 추출분말을 10%를 첨가한 군(High fat diet+10% 숙성더덕분말, HF10S), 고지방식이에 숙성더덕 추출분말을 20%를 첨가한 군(High fat diet+20% 숙성더덕분말, HF20S)으로 나누었고, 실험식이는 Table 1에 정리하였다. 동물 사육실에서 해당식이로 10주간 스테인레스 케이지(M.J. Ltd., Korea)에서 한 마리씩 분리 사육하였다. 사육실 내의 온도는 23±1℃, 습도는 50±5%로 유지하였으며, 12시간 간격으로 점등(07:00～19:00)과 소등(07:00～19:00)을 실시하였고, 환기, 조도를 자동으로 조절하였다.
- 또한, 신장 기능을 평가하는 중요한 지표가 되는 creatinine 양을 조사하고, 간과 신장의 건강 유무를 가늠할 수 있는 혈청 총 단백을 측정하였다(Cha et al 2001). 그리고 신장에 이상이 있으면 혈액 중으로 유출되어 이상치가 나오는 γ-GT 변화도 관찰하였다.
- 본 실험에서는 숙성더덕추출물이 지질대사에 어떠한 영향을 미치는 알아보기 위하여 5주령의 Sprague-Dawley 수컷 흰쥐에 추출물 식이를 10%, 20% 수준으로 10주간 급여한 후 혈청 내 지질함량의 변화를 측정하였다.
- 사육실 내의 온도는 23±1℃, 습도는 50±5%로 유지하였으며, 12시간 간격으로 점등(07:00～19:00)과 소등(07:00～19:00)을 실시하였고, 환기, 조도를 자동으로 조절하였다.
- 시험개시 체중은 평균체중이 294.1±15 g으로 기본식이군, 고지방군, 10% 숙성더덕추출물 투여군(HF10S), 20% 숙성더덕추출물 투여군(HF20S) 4개 군으로 분리 배치하였다.
- 체중 증가량 및 식이 섭취량은 실험 개시일을 시작으로 충분한 양의 사료와 물을 급여하면서 일주일 간격으로 측정하였으며, 식이 섭취량은 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이효율(food efficiency ratio: FER)은 실험 기간 동안 체중 증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다.
- 숙성더덕 추출물의 in vivo 실험을 위하여 5주령 SpragueDawley(SD)계 수컷 흰쥐를 폴라스인터내셔날(Korea)에서 구입하였다. 일반 사육용 사료(Harlan Teklad, USA)로 예비 사육하여 환경에 적응시키며, 예비 사육 기간 동안의 무게에 따라 난괴법에 의해 나누어 각 군당 10마리씩 총 4군으로 분류하였다. 즉, 기본식이군(Basal diet group, BDG), 고지방군(High fat diet control group, HFDCG)과 고지방식이에 숙성더덕 추출분말을 10%를 첨가한 군(High fat diet+10% 숙성더덕분말, HF10S), 고지방식이에 숙성더덕 추출분말을 20%를 첨가한 군(High fat diet+20% 숙성더덕분말, HF20S)으로 나누었고, 실험식이는 Table 1에 정리하였다.
- 일반 사육용 사료(Harlan Teklad, USA)로 예비 사육하여 환경에 적응시키며, 예비 사육 기간 동안의 무게에 따라 난괴법에 의해 나누어 각 군당 10마리씩 총 4군으로 분류하였다. 즉, 기본식이군(Basal diet group, BDG), 고지방군(High fat diet control group, HFDCG)과 고지방식이에 숙성더덕 추출분말을 10%를 첨가한 군(High fat diet+10% 숙성더덕분말, HF10S), 고지방식이에 숙성더덕 추출분말을 20%를 첨가한 군(High fat diet+20% 숙성더덕분말, HF20S)으로 나누었고, 실험식이는 Table 1에 정리하였다. 동물 사육실에서 해당식이로 10주간 스테인레스 케이지(M.
- 체중 증가량 및 식이 섭취량은 실험 개시일을 시작으로 충분한 양의 사료와 물을 급여하면서 일주일 간격으로 측정하였으며, 식이 섭취량은 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이효율(food efficiency ratio: FER)은 실험 기간 동안 체중 증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다.
- 혈중지질 성분의 주요 지표가 되는 대사산물로 총콜레스테롤, triglyceride, low density lipoprotein cholesterol(LDL-콜레스테롤), high density lipoprotein cholesterol(HDL-콜레스테롤)을 측정하고, 시료 투여로 인한 간 및 신장 기능에 미치는 영향을 알아보기 위해 간 기능 지표인 aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), γ-glutamyl transferase(γ-GT), creatinine을 측정하였다.
대상 데이터
- 구입한 더덕은 선별 후 깨끗이 세정하여 물기를 제거한 후 가열 숙성기를 통하여 온도조절 공정을 거쳐서 제조된 숙성더덕을 시료로 사용하였으며, 숙성더덕추출물은 중량 대비 20배(v/w)의 증류수를 가하여 90℃ 수욕상에서 환류냉각시키면서 5시간씩 2회 반복 추출한 다음 여과한 여액을 회전식 진공농축기를 이용하여 농축시킨 후 동결건조기(PVTFA 10AT, ILSIN, Korea)를 사용(Won & Oh 2007)하여 분말 상태로 준비하여 실험에 사용하였으며, 추출수율은 41.3%였다.
- 본 실험에 사용한 생더덕은 강원도 횡성 지역에서 2010년 9월에 채취한 것을 시료로 사용하였다. 구입한 더덕은 선별 후 깨끗이 세정하여 물기를 제거한 후 가열 숙성기를 통하여 온도조절 공정을 거쳐서 제조된 숙성더덕을 시료로 사용하였으며, 숙성더덕추출물은 중량 대비 20배(v/w)의 증류수를 가하여 90℃ 수욕상에서 환류냉각시키면서 5시간씩 2회 반복 추출한 다음 여과한 여액을 회전식 진공농축기를 이용하여 농축시킨 후 동결건조기(PVTFA 10AT, ILSIN, Korea)를 사용(Won & Oh 2007)하여 분말 상태로 준비하여 실험에 사용하였으며, 추출수율은 41.
- 숙성더덕 추출물의 in vivo 실험을 위하여 5주령 SpragueDawley(SD)계 수컷 흰쥐를 폴라스인터내셔날(Korea)에서 구입하였다. 일반 사육용 사료(Harlan Teklad, USA)로 예비 사육하여 환경에 적응시키며, 예비 사육 기간 동안의 무게에 따라 난괴법에 의해 나누어 각 군당 10마리씩 총 4군으로 분류하였다.
데이터처리
- 실험 성적은 SAS package를 이용하여 실험군당 평균±표준편차로 표시하였으며, 각 군강의 평균치의 통계적 유의성은 p<0.05 수준에서 Duncan's multiple test(Sendecor & Cochrane 1967)에 의해 검정하였다.
이론/모형
- AST, ALT는 modified IFCC without pyridoxal phosphate법, γ-GT는 IFCC법, creatinine은 modified Jaff-1 reagent method법에 의해 제조된 kit(Asanpharm Co.)를 이용하여 생화학 자동분석기(KONELAB 20XT, Vantaa, Finland)를 이용하여 분석하였다.
- 혈중지질 성분의 주요 지표가 되는 대사산물로 총콜레스테롤, triglyceride, low density lipoprotein cholesterol(LDL-콜레스테롤), high density lipoprotein cholesterol(HDL-콜레스테롤)을 측정하고, 시료 투여로 인한 간 및 신장 기능에 미치는 영향을 알아보기 위해 간 기능 지표인 aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), γ-glutamyl transferase(γ-GT), creatinine을 측정하였다. 총콜레스테롤 측정은 CHOD, Trinder법, triglyceride는 Enzymatic-Trinder법, LDL콜레스테롤, HDL-콜레스테롤은 Direct method에 의해 제조된 kit(Asanpharm Co., Seoul, Korea)를 사용하였다. AST, ALT는 modified IFCC without pyridoxal phosphate법, γ-GT는 IFCC법, creatinine은 modified Jaff-1 reagent method법에 의해 제조된 kit(Asanpharm Co.
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