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문제 정의
- 특히 영여자는 마를 생산하는 과정에서 발생하는 부산물로서 종사로서도 가치를 인정받지 못해 산업적이용에 한계를 나타내고 있다. 따라서 본 연구에서는 영여자에 대해 생리활성평가의 기초적연구라 할 수 있는 항산화 및 항돌연변이원성을 평가하여 학문적 관심과 식품으로서의 이용률을 높이고자 하였다.
- 그러나 식품원재료로 인정받지 못해 식품개발에 한계를 가지고 있을뿐만 아니라 생리활성 등 학문적 연구도 매우 미진한 실정 이다. 따라서 본 연구자는 영여자의 연구소재로서의 가치와 기능성식품소재로서의 국내에서 주로 재배되고 있는 단마와 장마 영여자에 대한 항산화 및 항돌연변이원성을 평가하였다. 그 결과 단마와 장마 영여자는 생리활성과 밀접한 관계를 갖고 있는 총폴리페놀함량에 있어서 비교적 높은 함량을 나타내었으며, 분획물 중에는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 함량을 나타냈다.
제안 방법
- 1-NP를 돌연변이원으로 한 S. typhimurium TA98에대해 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물과 에틸아세테 이트 분획물의 농도에 따른 돌연변이 억제효과를 관찰하였 으며, 그 결과는 Fig. 2와 같다.
- AFB1을 돌연변이원으로 한 S. typhimurium TA98에서 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물과 에틸아세테이트 분획물의 농도에 따른 돌연변이 억제효과를 관찰하였으며, 그 결과는 Fig. 3과 같다.
- Trp-P-1을 돌연변이원으로 한 S. typhimurium TA98에서 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물과 에틸아세테 이트 분획물의 농도에 따른 돌연변이 억제효과를 관찰하였 으며, 그 결과는 Fig. 4와 같다.
- 1 mL을 혼합하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후 분광광도계(UV-1601, Shimadzu, Japan)를 이용하여 517 nm에서 absorbance(ABS)를 측정하여 다음 식에 의하여 전자공여능을 평가하였다. 각 시료의 농도에 따른 DPPH 라디칼을 소거하여 잔존하는 DPPH라디칼을 50% 줄일 수 있는 농도(EC50)로 계산하였다.
- 이러한 결과로부터 1-NP, AFB1, Trp-P-1에 대한 단마와 장마 영여자 분획물은 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내는 것으로 판단되었다. 각돌연변이원에 대한 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물의 농도변화에 따른 돌연변이 억제효과를 평가하였다.
- 8 mL를 혼합하고, 실온에서 90분 동안 반응시킨 다음 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. 검량선은 gallic acid를 증류수에 용해시켜 위와 같은 방법으로 측정하여 작성하였다.
- 단마와 장마 영여자에 대한 항산화 및 항돌연변이원성을비교･평가하였다. 단마와 장마 영여자 80% 메탄올의 폴리 페놀함량은 2.
- 단마와 장마 영여자의 지질과산화 억제효과를 비교하기 위해 80%메탄올 추출물과 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 분획물에 대한 지질과산화 억제효과를 관찰하였으며, 그 결과는 Fig. 1과 같다.
- 단마와 장마 영여자의 항돌연변이원성을 비교하기 위해 영여자 80% 메탄올 추출물을 이용하여 1-NP, AFB1, Trp -P-1를 돌연변이원으로 한 S. typhimurium TA98에 대한 돌연변이 억제효과를 시험하였으며, 그 결과는 Table 2와같다.
- 단마와 장마 영여자의 항산화성을 비교하기 위해 80%메탄올 추출물과 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물층에 대한 폴리페놀함량과 DPPH 라디칼 소거활성, ABTS 라디칼 소거활성을 측정하였으며, 그 결과는 Table 1과 같다.
- 단마와 장마품종에서 채취한 영여자를 3～4차례 증류수로 수세하여 이물질을 제거하고 동결건조를 하여 80mesh로 분쇄하였다. 분쇄한 영여자에 10배(w/v)의 80%메탄올을 이용하여 3반복 추출한 후 메탄올을 제거하고 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물층 순으로 분획을 하여 –20℃에 보관 하면서 실험용 시료로 사용하였다.
- 85%의 돌연변이 억제효과를 나타내 장마 영여자 메탄올 추출물이 높았다. 또한 1-NP, AFB1, Trp-P-1의돌연변이원에 대한 단마와 장마 영여자의 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 분획물의 돌연변이 억제효과를관찰하였으며, 그 결과는 Table 2와 같다. 단마 영여자 분획물은 1-NP를 돌연변이원으로 하였을 경우 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물의 농도가 0.
- 배양액에 미리 준비해 둔 0.5 mM histidine과 biotin 을 함유한 top agar 2 mL를 혼합한 후 minimal glucose agar plate[agar 15 g, 멸균수 930 mL, 50 × VB salt 20mL, 40% glucose 50 mL] 상에 도포, 평판 고화시킨 다음, 37℃에서 48시간 배양하여 발생한 복귀 돌연변이주(his + revertant colony)의 수를 계수하여 항돌연변이원성을 평가하였다.
- 0) 2 mL, 증류수 1 mL를 혼합한다. 이에 일정 농도의 영자자 추출물을 혼합하여 지질과산화 반응용액을 제조한 다음, 반응용액을 40℃ 항온수조에서 보관하면서 24시간마다 시료를 채취하여 과산화물가를 측정하였다.
- 이에 일정한 농도로 용해시킨 영여자 추출물 20 μL과 980 μL ABTS 용액를 혼합 한후 이를 암실에서 37℃, 10분간 반응시켜 734nm에서 ABS 측정하였다.
- (2009)의 방법을 일부 변형하여 실시하였다. 즉, 0.15 mM 2,2-diphenyl-1-picrylhygrazyl(DPPH) 1 mL에 시료용액을 농도별로 0.1 mL을 혼합하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후 분광광도계(UV-1601, Shimadzu, Japan)를 이용하여 517 nm에서 absorbance(ABS)를 측정하여 다음 식에 의하여 전자공여능을 평가하였다. 각 시료의 농도에 따른 DPPH 라디칼을 소거하여 잔존하는 DPPH라디칼을 50% 줄일 수 있는 농도(EC50)로 계산하였다.
- 항돌연변이 효과(억제율)는 [(M-S1) / (MSo) × 100]으로 계산하였고, 돌연변이원 만을 첨가하였을때 복귀 돌연변이주의 수를 M, 자연 복귀 돌연변이주의 수를 So, 돌연변이원과 시료를 첨가했을 때의 복귀 돌연변이 주의 수를 S1으로 나타내었다.
- 항돌연변이원성 실험은 Ames test를 개량한 preincubation 방법(Ames et al., 1983)을 변형하여 실시하였다. 즉, 미리 멸균시킨 시험관에 변이원 50 μL, 0.
대상 데이터
- Louis, MO, USA)제품을 사용하였으며, 2,2'-azobis(2-aminopropane) dihydrochloride(AAPH)와 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS)는 Wako Chemical(Richmond, VA, USA) 의 제품을 사용하였다. 돌연변이원인 aflatoxin B1(AFB1), 3-amino -1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b] indole(Trp-P-1) 등은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)사 제품을, 1- nitropyrene (1-NP)은 Wako Chemical(Richmond, VA, USA)제품을 사용하였으며, Salmonella typhimurium TA98 (hisD3052)은 한국생명공학연구원 유전자은행으로 부터 분양 받아 사용하였다.
- 본 연구에 사용된 단마와 장마 영여자는 경북 안동에서 재배된 것을 실험용 재료로 사용하였다. 흡광도는 흡광도계(UV-1601, Shimaczu, Japan)을 이용하여 측정하였으며, 항산화 평가를 위한 2,2-diphenyl-1- picrylhygrazyl(DPPH), 5,7,8-tetramethychroman-2-carbosylic acid(Trolox, 97%), Folin-Ciocalteu’s phenol reagent, ferrozine, potassium ferricyanide, gallic acid, linoleic acid는 Sigma-Aldrich(St.
- 분쇄한 영여자에 10배(w/v)의 80%메탄올을 이용하여 3반복 추출한 후 메탄올을 제거하고 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물층 순으로 분획을 하여 –20℃에 보관 하면서 실험용 시료로 사용하였다.
- 흡광도는 흡광도계(UV-1601, Shimaczu, Japan)을 이용하여 측정하였으며, 항산화 평가를 위한 2,2-diphenyl-1- picrylhygrazyl(DPPH), 5,7,8-tetramethychroman-2-carbosylic acid(Trolox, 97%), Folin-Ciocalteu’s phenol reagent, ferrozine, potassium ferricyanide, gallic acid, linoleic acid는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)제품을 사용하였으며, 2,2'-azobis(2-aminopropane) dihydrochloride(AAPH)와 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS)는 Wako Chemical(Richmond, VA, USA) 의 제품을 사용하였다.
성능/효과
- 따라서 본 연구자는 영여자의 연구소재로서의 가치와 기능성식품소재로서의 국내에서 주로 재배되고 있는 단마와 장마 영여자에 대한 항산화 및 항돌연변이원성을 평가하였다. 그 결과 단마와 장마 영여자는 생리활성과 밀접한 관계를 갖고 있는 총폴리페놀함량에 있어서 비교적 높은 함량을 나타내었으며, 분획물 중에는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 함량을 나타냈다. 총폴리페놀함량이 높은 에틸아세테이트 분획물은 DPPH 라디컬 소거활성 및 ABTS 라디컬 소거능에서 가장 강한 활성을 나타내었다.
- 또한 분획물에 있어서는 장마 영여자 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 함량을 나타냈다. 그리고 DPPH과 ABTS 라디칼 소거능 및 지질과산화 억제효과에 있어서는 총폴리페놀이 높은 장마와 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 활성을 나타냈다. 한편 단마와 장마 영여자 80%메탄올 추출물 1 mg/plate의 1-NP, AFB 1 , Trp-P-1에 대한 항돌연변이원 성은 S.
- 또한 AFB1을 돌연변이원으로 하였을 경우 단마보다는 장마 영여자에서, 에틸아세테이트 보다는 클로로포름 분획물 에서 높은 항돌연변이원성을 나타냈다. 그리고 Trp-P-1에 대한 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물은 에틸아 세테이트 분획물보다 비교적 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 단마보다는 장마 영여자에서 다소 높은 돌연 변이 억제효과를 나타내었다. 현재 영여자에 대한 세균시 험계를 이용한 항돌연변이원서은 보고된 사례가 없으며, 영여자와 유사할 것으로 판단되는 마(D.
- 2%의 돌연변이 억제효과를 나타내어 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 그리고 단마와 장마 영여자 분획물의 AFB1에 대해 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물은 86.0, 89.8%와 89.5, 78.6%로 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며 부탄올과 물 분획물 에서는 낮은 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 또한 Trp-P -1에 대한 돌연변이 억제효과는 클로로포름 분획물과 에틸 아세테이트 분획물에서 84.
- 그리고 단마와 장마 영여자의 DPPH 라디칼 소거능에서 단마 영여자의 80% 메탄올 추출물 및 클로로포름, 에틸아 세테이트, 부탄올, 물 분획물은 200.8, 38.8, 14.8, 75.4, 1297 ㎍에서 EC50을 나타내었으며, 장마 영여자에서 84.0, 23.6, 9.2, 27.6, 2400 ㎍에서 EC50을 나타내었다. Ahn et al.
- 그리고 단마와 장마 영여자의 항돌연변이원 평가에 있어서 돌연변이원을 1-NP, AFB1, Trp-P-1로 하였을 때 S.typhimurium TA98에 대해서 80% 메탄올 추출물과 클로 로포름, 에틸아세테이트 분획물에서 항돌연변이원성을 나타냈다. 단마와 장마 영여자 분획물의 항돌연변이원서 비교･ 평가에 있어서 1-NP를 돌연변이원으로 하였을 경우 항산화평가와 달리 유사한 항돌연변이원성을 나타냈으며, 클로로포름 분획물이 다소 높은 항돌연변이원성을 나타냈다.
- 단마 영여자 80%메탄올 추출물의 1-NP, AFB1, TrpP-1의 돌연변이원에 대해 돌연변이 억제효과는 1 mg/plate 농도에서 37.5, 24.5, 37.9%이었으며, 장마 영여자는 31.7, 53.9, 56.85%의 돌연변이 억제효과를 나타내 장마 영여자 메탄올 추출물이 높았다. 또한 1-NP, AFB1, Trp-P-1의돌연변이원에 대한 단마와 장마 영여자의 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 분획물의 돌연변이 억제효과를관찰하였으며, 그 결과는 Table 2와 같다.
- 또한 1-NP, AFB1, Trp-P-1의돌연변이원에 대한 단마와 장마 영여자의 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 분획물의 돌연변이 억제효과를관찰하였으며, 그 결과는 Table 2와 같다. 단마 영여자 분획물은 1-NP를 돌연변이원으로 하였을 경우 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물의 농도가 0.5 mg/plate 일때 73.4, 51.5%의 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 부탄 올과 물 분획물에서는 1.0 mg/plate에서 6.4와 3.3%의 돌연변이 억제효과를 나타내 클로로포름과 에틸아세이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 또한 장마 영여자 분획물에서는 79.
- 단마 영여자 클로로포름 분회물의 농도가 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/plate일 때 1-NP에 대한 돌연변이 억제효과는 4, 47, 73, 79, 82%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 1, 24, 51, 53, 57%의 돌연변이 억제효과를 나타내 농도 의존적으로 증가하였다. 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 24, 48, 79, 86, 89%의돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물은 3, 12, 36, 48, 56%의 돌연변이 억제효과를 나타내 용량 의존적으로 증가하였다.
- 단마 영여자 클로로포름 분획물의 농도가 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/plate일 때 16, 53, 85, 85, 94, 95%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 7, 19, 75, 89, 90, 91%의 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 33, 68, 83, 89, 93, 95%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 9, 20, 54, 78, 83, 83%의 돌연변이 억제효과를 나타내 었다.
- 단마 영여자 클로로포름 분획물의 농도가 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/plate일 때 16, 55, 81, 84, 89, 91%의 돌연 변이 억제효과를 나타내었으며, 에틸아세테이트 분획물에 서는 9, 22, 57, 82, 87, 89%의 돌연변이 억제효과를 나타 내었다. 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 30, 65, 83, 90, 93, 93%의 돌연변이 억제효과를 에틸아세테이트 분획물에서는 9, 24, 78, 90, 92%의 돌연변이 억제효과를 나타내었다.
- typhimurium TA98에 대해서 80% 메탄올 추출물과 클로 로포름, 에틸아세테이트 분획물에서 항돌연변이원성을 나타냈다. 단마와 장마 영여자 분획물의 항돌연변이원서 비교･ 평가에 있어서 1-NP를 돌연변이원으로 하였을 경우 항산화평가와 달리 유사한 항돌연변이원성을 나타냈으며, 클로로포름 분획물이 다소 높은 항돌연변이원성을 나타냈다. 또한 AFB1을 돌연변이원으로 하였을 경우 단마보다는 장마 영여자에서, 에틸아세테이트 보다는 클로로포름 분획물 에서 높은 항돌연변이원성을 나타냈다.
- 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 24, 48, 79, 86, 89%의돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물은 3, 12, 36, 48, 56%의 돌연변이 억제효과를 나타내 용량 의존적으로 증가하였다. 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물은 에틸아세테이트 분획물 보다 높은 돌연변이 억제효과를 나타 내었으며, 단마와 장마 영여자 간에는 큰 차이를 나타내지 않았다.
- 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 30, 65, 83, 90, 93, 93%의 돌연변이 억제효과를 에틸아세테이트 분획물에서는 9, 24, 78, 90, 92%의 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물은 에틸아세테이트 분획물보다 비교적 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 품종간에는 유사한 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b] indole(Trp-P-1)은 심장의 모세관이나 관상동맥과 결합 하고, 신장에서는 사구체의 모세혈관 및 소동맥과 결합하며, 이는 P450A1의 BNF-inducible enzyme에 의해 활성화됨과 동시에 헤테로 고리형 아민으로 변형되어 돌연변이 원으로 작용한다(Cartwright et al.
- 또한 지질과산화 억제효과에서 단마와 장마 영여자 80% 메탄올 추출물과 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 지질과산화 억제효과를 나타냈으며, 부탄올과 물 분획 물에서는 매우 낮은 억제효과를 나타냈다. 단마와 장마 영여자의 비교에 있어서는 장마 영여자 추출물이 비교적 높은 항산화활성을 나타냈다.
- 또한 ABTS 라디칼 소거능에서 단마 영여자는 각 2.34, 0.52, 0.13, 0.93, 9.4 mg을 장마 영여자에서는 0.95, 0.32, 0.09, 0.42, 7.6 mg을 나타내어 단마보다는 장마영여자에서 강한 활성을 나타냈으며, 분획물 중에서는 에틸아세테이트 분획물에서 강한 활성을 나타내었다.
- 단마와 장마 영여자 분획물의 항돌연변이원서 비교･ 평가에 있어서 1-NP를 돌연변이원으로 하였을 경우 항산화평가와 달리 유사한 항돌연변이원성을 나타냈으며, 클로로포름 분획물이 다소 높은 항돌연변이원성을 나타냈다. 또한 AFB1을 돌연변이원으로 하였을 경우 단마보다는 장마 영여자에서, 에틸아세테이트 보다는 클로로포름 분획물 에서 높은 항돌연변이원성을 나타냈다. 그리고 Trp-P-1에 대한 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물은 에틸아 세테이트 분획물보다 비교적 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 단마보다는 장마 영여자에서 다소 높은 돌연 변이 억제효과를 나타내었다.
- 6%로 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며 부탄올과 물 분획물 에서는 낮은 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 또한 Trp-P -1에 대한 돌연변이 억제효과는 클로로포름 분획물과 에틸 아세테이트 분획물에서 84.8, 82.7%와 90.6, 78.4%로 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 부탄올과 물 분획 물에서는 낮은 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 이러한 결과로부터 1-NP, AFB1, Trp-P-1에 대한 단마와 장마 영여자 분획물은 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내는 것으로 판단되었다.
- 9 mg/g로 장마에서 높았다. 또한 분획물에 있어서는 장마 영여자 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 함량을 나타냈다. 그리고 DPPH과 ABTS 라디칼 소거능 및 지질과산화 억제효과에 있어서는 총폴리페놀이 높은 장마와 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 활성을 나타냈다.
- 9 mg/g로 장마에서 높은 함량을 나타내었다. 또한 영여자의 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 분획물별 폴리페놀함량은 단마 영여자에서 11.5, 33.9, 3.9, 2.4 mg/g을 장마 영여자에서는 19.6, 39.1, 7.4, 5.8 mg/g을나타내어 에틸아세테아트 분획물과 장마 영여자에서 높은 함량을 나타내었다. Ahn et al.
- 3%의 돌연변이 억제효과를 나타내 클로로포름과 에틸아세이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 또한 장마 영여자 분획물에서는 79.3, 36.4, 12.5, 7.2%의 돌연변이 억제효과를 나타내어 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 그리고 단마와 장마 영여자 분획물의 AFB1에 대해 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물은 86.
- 단마 영여자 클로로포름 분회물의 농도가 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/plate일 때 1-NP에 대한 돌연변이 억제효과는 4, 47, 73, 79, 82%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 1, 24, 51, 53, 57%의 돌연변이 억제효과를 나타내 농도 의존적으로 증가하였다. 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 24, 48, 79, 86, 89%의돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물은 3, 12, 36, 48, 56%의 돌연변이 억제효과를 나타내 용량 의존적으로 증가하였다. 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물은 에틸아세테이트 분획물 보다 높은 돌연변이 억제효과를 나타 내었으며, 단마와 장마 영여자 간에는 큰 차이를 나타내지 않았다.
- 단마 영여자 클로로포름 분획물의 농도가 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/plate일 때 16, 55, 81, 84, 89, 91%의 돌연 변이 억제효과를 나타내었으며, 에틸아세테이트 분획물에 서는 9, 22, 57, 82, 87, 89%의 돌연변이 억제효과를 나타 내었다. 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 30, 65, 83, 90, 93, 93%의 돌연변이 억제효과를 에틸아세테이트 분획물에서는 9, 24, 78, 90, 92%의 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 단마와 장마 영여자 클로로포름 분획물은 에틸아세테이트 분획물보다 비교적 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 품종간에는 유사한 돌연변이 억제효과를 나타내었다.
- 단마 영여자 클로로포름 분획물의 농도가 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/plate일 때 16, 53, 85, 85, 94, 95%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 7, 19, 75, 89, 90, 91%의 돌연변이 억제효과를 나타내었다. 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 33, 68, 83, 89, 93, 95%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 9, 20, 54, 78, 83, 83%의 돌연변이 억제효과를 나타내 었다. 즉 단마와 장마 영여자는 분획물 종류에 따라 유사한 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 에틸아세테이트 분획물 보다는 클로로포름 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었다.
- 총폴리페놀함량이 높은 에틸아세테이트 분획물은 DPPH 라디컬 소거활성 및 ABTS 라디컬 소거능에서 가장 강한 활성을 나타내었다. 또한 지질과산화 억제효과에서 단마와 장마 영여자 80% 메탄올 추출물과 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 지질과산화 억제효과를 나타냈으며, 부탄올과 물 분획 물에서는 매우 낮은 억제효과를 나타냈다. 단마와 장마 영여자의 비교에 있어서는 장마 영여자 추출물이 비교적 높은 항산화활성을 나타냈다.
- 0 mg/g의 폴리페놀함량을 나타내 에틸아세테이트 분획 물에서 가장 높은 함량을 나타내었다. 본 연구에 있어서 에틸아세테이트 분획물에서 높은 함량을 나타내었으며, 단마 보다는 장마에서 비교적 높은 폴리페놀함량을 나타내 유사한 결과를 나타냈다.
- 4, 1,000 ㎍/mL에서 EC50을 나타내어 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높을 활성을 나타내었다. 본 연구에 있어서는 단마보다는 장마 영여자 에서, 분획물 중에서는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 강한 활성을 나타내었다.
- 4%로 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 부탄올과 물 분획 물에서는 낮은 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 이러한 결과로부터 1-NP, AFB1, Trp-P-1에 대한 단마와 장마 영여자 분획물은 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내는 것으로 판단되었다. 각돌연변이원에 대한 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물의 농도변화에 따른 돌연변이 억제효과를 평가하였다.
- 장마와 단마 영여자는 80%메탄올 추출물에서는 유사한 지질과산화 억제효과를 나타내었으며 부탄올과 물 분획물 에서는 매우 낮은 지질과산화 억제효과를 나타냈다(data not shown). 그러나 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물 에서는 높은 지질과산화 억제효과를 나타내었다(Fig 1).
- 또한 장마 영여자 클로로포름 분획물은 33, 68, 83, 89, 93, 95%의 돌연변이 억제효과를, 에틸아세테이트 분획물에서는 9, 20, 54, 78, 83, 83%의 돌연변이 억제효과를 나타내 었다. 즉 단마와 장마 영여자는 분획물 종류에 따라 유사한 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 에틸아세테이트 분획물 보다는 클로로포름 분획물에서 높은 돌연변이 억제효과를 나타내었다.
- 그 결과 단마와 장마 영여자는 생리활성과 밀접한 관계를 갖고 있는 총폴리페놀함량에 있어서 비교적 높은 함량을 나타내었으며, 분획물 중에는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 함량을 나타냈다. 총폴리페놀함량이 높은 에틸아세테이트 분획물은 DPPH 라디컬 소거활성 및 ABTS 라디컬 소거능에서 가장 강한 활성을 나타내었다. 또한 지질과산화 억제효과에서 단마와 장마 영여자 80% 메탄올 추출물과 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에서 지질과산화 억제효과를 나타냈으며, 부탄올과 물 분획 물에서는 매우 낮은 억제효과를 나타냈다.
- 그러나 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물 에서는 높은 지질과산화 억제효과를 나타내었다(Fig 1). 특히 장마 영여자의 에틸아세테이트 분획물은 강한 억제효과를 나타났으며, 단마 영여자의 클로로포름 분획물이 가장낮은 억제효과를 나타냈다. 폴리페놀함량과 지질과산화 억제효과와의 상관관계에 있어서 폴리페놀함량이 높은 장마 영여자에 높은 억제효과를 나타내었으며, 클로로포름 분획물 보다는 에틸아세테이트 분획물에서 높은 억제효과를 나타내어 폴리페놀함량이 높은 수록 강한 억제효과를 나타낸것으로 판단된다.
- 특히 장마 영여자의 에틸아세테이트 분획물은 강한 억제효과를 나타났으며, 단마 영여자의 클로로포름 분획물이 가장낮은 억제효과를 나타냈다. 폴리페놀함량과 지질과산화 억제효과와의 상관관계에 있어서 폴리페놀함량이 높은 장마 영여자에 높은 억제효과를 나타내었으며, 클로로포름 분획물 보다는 에틸아세테이트 분획물에서 높은 억제효과를 나타내어 폴리페놀함량이 높은 수록 강한 억제효과를 나타낸것으로 판단된다.
- 그리고 DPPH과 ABTS 라디칼 소거능 및 지질과산화 억제효과에 있어서는 총폴리페놀이 높은 장마와 에틸아세테이트 분획물에서 가장 높은 활성을 나타냈다. 한편 단마와 장마 영여자 80%메탄올 추출물 1 mg/plate의 1-NP, AFB 1 , Trp-P-1에 대한 항돌연변이원 성은 S. typhimurium TA98(hisD3052)에서 37.5, 24.5, 37.9% 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, 장마 영여자는 31.7, 53.9, 56.85%의 돌연변이 억제효과를 나타냈다. 또한 분획물 중에는 단마와 장마 영여자 클로로포름과 에틸 아세테이트 분획물에서만 돌연변이 억제효과를 나타내었 으며, 농도 의존적으로 증가하였다.
후속연구
- 특히 본연구에 있어서 높은 항산화 활성 및 항돌연변이원성을 나타낸 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에 대한 유효성 분이 규명되어야 할 것으로 판단된다. 아울러 영여자를 이용한 제품개발을 추진함으로서 소비를 확대 시켜야 할 것으로 사료된다.
- 이와 같이 영여자는 암발생의 주요원인인 활성산소 소거능과 1-NP, AFB1과 같은 돌연변이원에 대한 항돌연변이원성을 갖고 있어 기능성 식품 소재로서 충분한 가치를 갖고 있다. 특히 본연구에 있어서 높은 항산화 활성 및 항돌연변이원성을 나타낸 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물에 대한 유효성 분이 규명되어야 할 것으로 판단된다. 아울러 영여자를 이용한 제품개발을 추진함으로서 소비를 확대 시켜야 할 것으로 사료된다.
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