선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 대나무 추출물의 아토피 피부염 치료 효과를 갖는 천연염료로서의 적용 가능성을 알아보기 위하여 DNCB로 유발된 아토피 피부질환에 대한 대나무 추출물의 효과를 살펴보았다.
- 따라서 본 연구에서는 NC/Nga 마우스에 DNCB (2.4-Dinitrochlorbenzene)를 도포하여 아토피 피부염을 유발시킨 다음, 저비용으로 손쉽게 얻을 수 있을 뿐만 아니라 Staphyloccous aureus에 대한 항균성을 갖고 있는 대나무 추출물을 도포함으로써 피부병변의 중증도 측정, 혈청 IgE 측정(ELISA), 마우스 피부 표피 두께 변화, Mast cell 변화를 측정하여, 대나무 추출물의 아토피 피부염 치료 효과를 갖는 천연염료로서의 적용 가능성에 대해 검증하고자 하였다.
- . 따라서 본 연구에서는 아토피피부염 연구의 모델로 NC/Nga 마우스를 사용하는 경우, 보통의 환경에서 피부 병변이 유발되지 않을 때, 다른 화학적 항원보다는 DNCB의 도포를 이용하면 피부 병변의 유발이 가능하다고 판단되어 실험을 진행하였다. Figure 2와 같이 실험 기간 동안 DCNB 자극을 받은 모든 마우스에서 아토피피부염과 유사한 피부 발진이 발생하였고.
제안 방법
- 15마리의 6주령 수컷 NC/Nga 마우스를 충남대학교의과대학 피부과학교실을 통해 일본의 SLC(Hamamatsu Shi, Shizuoka Ken, Japan) 에서 구입하였다. 모든 마우스는 3군으로 나누어 각 군 별로 우리에 5마리 씩 격납하였고 25℃, 30% RH 습도 조건에서 일반 실험 사육 환경 하에 약 2주 동안 적응 시킨 후 실험을 실시하였다. 실험동물의 사육과 보관은 동물실험실의 지침에 의거하였으며, 본 실험은 충남대학교 공동동물 실습관의 동물실험윤리위원회의 규정을 준수하여 설계 수행하였다.
- 본 연구에서는 인체 아토피피부염과 유사한 피부병변을 유발시킨 NC/Nga 마우스에 대나무 추출물을 피부에 도포했을 때, 피부 병변 및 혈청 내 총 IgE 농도변화, 표피 (epidermis)의 두께변화, 비만세포(mast cell)의 개수를 확인하여 대나무 추출물의 아토피 피부염 치료 효과를 확인하였다. 대나무 추출물을 처리한 군이 단독 DNCB만 처리한 군에 비하여 NC 마우스 score 등급이 낮게 나타나 아토피피부염 유사 병변의 발현 억제 효과를 나타내었다.
- 마우스의 안와에서 헤파린이 도포된 주사기를 이용하여 혈액을 채취하여 8000rpm에서 10분간 원심 분리로 얻은 혈청을 모아 -70℃의 냉동고에 보관하였다. 상용화된 ELISA set(BD OptEIATM, BD Biosciences, USA를 이용하여 혈청 IgE를 측정하였다.
- 실험 종료 후 NC/Nga 마우스의 등 쪽 부분의 피부를 적출하여 포르말린에 고정 후 파라핀에 넣어 5㎛두께의 연속 절편 조직을 만들어 비만세포염색법 (H&E stain)을24) 이용하여 조직염색을 한 후 광학현미경에서 피부의 전반적인 상태를 관찰하였다.
- 첫 번째 . 실험군은 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군 (Control), 두 번째 실험군은 DNCB(2.4-Dinitrochlorben- zene)만 도포한 군(DNCB), 세 번째 실험군은 대나무추출물과 DNCB 0.5%를 도포한 군(DNCB+Bamboo)으로 나누어 실험을 진행하였다.
- 5%와 1%로 희석한 다음 사용하였다. 실험시작 4일 전에 모든 마우스의 등에 1% DNCB 용액 150㎕를 도포하였고 4일 동안 면역반응을 유발한 후, 모든 마우스에 1주일에 2~3회씩 2주 동안 0.5% DNCB 용액 150㎕를 등 부위에 도포하여 접촉성 피부염을 유발하였다. 아토피 피부염을 2주간 유도한 다음 3주간 주 5회 첫 번째 실험군은 미처리 두 번째 실험군은 0.
- 5% DNCB 용액 150㎕를 등 부위에 도포하여 접촉성 피부염을 유발하였다. 아토피 피부염을 2주간 유도한 다음 3주간 주 5회 첫 번째 실험군은 미처리 두 번째 실험군은 0.5% DNCB, 세 번째 실험군은 대나무 추출물과 DNCB 0.5% 를 각각 등 부위에 도포하였다 처리과정은 Figure 1에 나타내었다.
- 피부 병변의 측정은 아토피 피부염을 2주간 유도한 다음 1회, 3주간의 대나무 추출물 처리 종료 후 1회 총 2회 측정하였다. 측정은 NC/Nga 마우스의 등에 도포한 부분을 관찰하여 NC 마우스 score를 이용하여 육안 평가를 실시하였다. 아토피피부염염의 중증도에 대한 평가로는 SCORAD Index가 아토피 피부염의 임상적인 경과를 평가하기 위하여 현재까지 개발된 등급 체계 중에서 가장 객관적이고 널리 사용되는 임상평가 방법이나22) 복잡하고 시간이 많이 소모되는 단점이 있고, 아토피피부염 환자를 대상으로 하는 평가이므로23), NC/Nga 마우스 모델에서 사용이 가능한 평가 방법인 NC 마우스 score를 이용하였다.
- 피부 병변의 측정은 아토피 피부염을 2주간 유도한 다음 1회, 3주간의 대나무 추출물 처리 종료 후 1회 총 2회 측정하였다. 측정은 NC/Nga 마우스의 등에 도포한 부분을 관찰하여 NC 마우스 score를 이용하여 육안 평가를 실시하였다.
- 혈청 IgE의 측정은 시험시작 전, 아토피 피부염을 2주간 유도한 다음, 3주간의 대나무추출물 처리 종료 후 3회 측정하였다.
대상 데이터
- 15 마리의 NC/Nga 마우스를 다음과 같은 3개의 실험군으로 나누어 5주간 실험이 진행되었다. 첫 번째 .
- 15마리의 6주령 수컷 NC/Nga 마우스를 충남대학교의과대학 피부과학교실을 통해 일본의 SLC(Hamamatsu Shi, Shizuoka Ken, Japan) 에서 구입하였다. 모든 마우스는 3군으로 나누어 각 군 별로 우리에 5마리 씩 격납하였고 25℃, 30% RH 습도 조건에서 일반 실험 사육 환경 하에 약 2주 동안 적응 시킨 후 실험을 실시하였다.
- 쇄하여 사용하였고 분쇄한 대나무 잎과 줄기 200g당 메탄올 800ml와 증류수 200ml를 가하여 48시간 침지 후 침지액을 Rotary vacuum evaporator(RV10, IKAⓇ, Germany)를 이용하여 온도 40 ~60℃, 회전속도 180rpm에서 감압 농축하여 사용하였다. 대나무 추출물은 1% 농도로 제조하여 실험에 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 2.4-Dinitrochlorbenzene( DNCB)이하는 씨그마알리드리치코리아(유)(Korea)에서 구입하였으며, 아세톤과 올리브오일이 4:1로 혼합된 용액에 0.5%와 1%로 희석한 다음 사용하였다. 실험시작 4일 전에 모든 마우스의 등에 1% DNCB 용액 150㎕를 도포하였고 4일 동안 면역반응을 유발한 후, 모든 마우스에 1주일에 2~3회씩 2주 동안 0.
- 본 연구에 사용된 대나무(Phyllostachys bambusoides)는 충남 금산군에서 2009년 8월에 채집하여 사용하였다. 채집한 대나무 잎과 줄기는 수세 및 건조 후 분 .
데이터처리
- 각 데이터는 평균, ± 표준편차로 나타내었으며, 평균치간의 유의성은 paired t-test를 이용한 후 p값이 05미만일 때 유의한 것으로 판정하였다.
이론/모형
- 측정은 NC/Nga 마우스의 등에 도포한 부분을 관찰하여 NC 마우스 score를 이용하여 육안 평가를 실시하였다. 아토피피부염염의 중증도에 대한 평가로는 SCORAD Index가 아토피 피부염의 임상적인 경과를 평가하기 위하여 현재까지 개발된 등급 체계 중에서 가장 객관적이고 널리 사용되는 임상평가 방법이나22) 복잡하고 시간이 많이 소모되는 단점이 있고, 아토피피부염 환자를 대상으로 하는 평가이므로23), NC/Nga 마우스 모델에서 사용이 가능한 평가 방법인 NC 마우스 score를 이용하였다. NC 마우스 score는 마우스 판정사진을 기준으로 관찰자가 육안으로 관찰하여 등급을 매기는 방법으로, 최소는 0에서 최대는 13이다.
성능/효과
- 그래프를 살펴보면 DNCB 자극 후 혈청내 IgE 농도는 증가하여 대조군의 혈청 내 IgE 농도는 2.60±0.41 ng/ml 에 비하여 약 3배 정도 높은 9.02±0.52 ng/ml 로 측정되었으나, 대나무 추출물로 처리한 군에서는 7.89±0.74 ng/ml 로 DNCB군에 비해 유의하게 낮게 나타나 대나무 추출물 처리군의 혈청 내 IgE농도 감소에 영향을 미치는 것을 확인할 수 있었다.
- 본 연구에서는 인체 아토피피부염과 유사한 피부병변을 유발시킨 NC/Nga 마우스에 대나무 추출물을 피부에 도포했을 때, 피부 병변 및 혈청 내 총 IgE 농도변화, 표피 (epidermis)의 두께변화, 비만세포(mast cell)의 개수를 확인하여 대나무 추출물의 아토피 피부염 치료 효과를 확인하였다. 대나무 추출물을 처리한 군이 단독 DNCB만 처리한 군에 비하여 NC 마우스 score 등급이 낮게 나타나 아토피피부염 유사 병변의 발현 억제 효과를 나타내었다.
- 아토피 피부염을 2주간 유도한 다음 1회 측정에서는 정상 대조군 (Control)을 제외한 두 그룹의 Total clinical skin score는 11.25±2.36을 나타내었으나 3주간의 대나무 추출물 처리 종료 후에는 DNCB 만 도포한 군 (DNCB)은 10.75±2.06을 나타내었고 대나무 추출물을 처리한 군은 4.75±1.26으로 DNCB만 도포한 군의 측정값보다 낮아 p< .05에서 아토피피부염 유사 병변의 발현 억제 효과가 있는 것을 보여 주었다.
- 알레르기의 주역 중 하나인 비만세포의 개수는 DNCB를 감작시킨 군에서 87.34±11.43으로 정상대조군의 10.17±1.72 보다 기하급수적인 증가를 보였으나, 대나무 추출물 처리 후 50.17±11.94로 약 40%정도 그 수가 감소한 것으로 미루어보아 대나무 추출물 처리가 아토피 피부염의 완화에 긍정적인 영향을 미치는 것을 알 수 있다.
- 아토피 피부염 환자는 일반적으로 다른 피부염 환자에 비해 세균의 침입, 바이러스, 곰팡이에 대한 피부염이 잘 발생하는 것으로 알려져 있다. 특히 Staphyloccous aureus에 의한 세균성 피부염이 자주 발생하고 이들 균이 아토피 피부에서는 배양이 되지만 95% 정상인은 에서만 배양이 되는 차이를 보여 세균이 5% 아토피 피부염의 발생에 관계가 있음을 알 수 있다. 이에 대한 해석으로 아토피 피부염 환자에서는 피부에 존재하는 Natural antimicrobial peptide가 정상인에 비해 적거나 기능을 하지 못하기 때문에 세균의 번식을 막을 수 없고, 세균이 증가하면 이들 세균이 내는 독소가 피부 단백질과 결합하여 새로운 항원으로 작용하여 항원-항체 반응을 유발하고 이에 따라서 알레르기 반응이 발생할 수 있다는 가설이 있어 왔다12).
- 피부 병변의 형태는 홍반, 인설, 부종뿐만 아니라 소양증으로 외부 마찰에 의해 발생한 찰과상도 확인할 수 있었다.
- 혈청 IgE 농도에 미치는 영향에 대해서는 대나무 추출물을 처리한 실험군에서는 단독 DNCB만 처리한 군에 비하여 유의한 IgE의 감소를 유도하였다. 피부 조직 변화에 미치는 영향은 대나무 추출물을 처리한 군이 단독 DNCB만 처리한 군에 비하여 표피의 두께가 얇게 측정되었고 비만세포의 개수가 감소하였다.
후속연구
- 이러한 결과로 부터 인체 아토피피부염과 유사한 피부 병변을 유발시킨 NC/Nga 마우스에 대나무 추출물을 피부 도포 했을 때 아토피피부염의 피부 병변을 호전시킬 수 있는 가능성이 있음을 확인하였으므로 대나무 추출물은 아토피 피부염 치료 효과를 갖는 천연염료로서의 적용이 가능할 것으로 판단된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.