선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
제안 방법
- 본 연구에서는 Agrobacterium 방법을 이용한 YLC 형질 전환을 시도하였다. 특히 NaOH를 처리하여 YLC 세포에 상해를 유발한 후 무처리 YLC와의 형질전환 효율을 비교하였다. 현재까지 YLC 형질전환을 위하여 원형질체법(Guo et al.
- , 2008)이 보고된 바 있다. 한편, 형질전환 YLC의 methanol 추출액을 난소암 세포에 처리하여 세포활성의 차이를 비교함으로써 T-DNA삽입에 따른 생리활성 변화도 비교하였다. 결과적으로, NaOH 처리는 Agrobacterium 이용법의 효율을 증대시킬 수 있었으며 PCR로 확인한 형질전환체들은 비형질전환체에 비해 세포독성에서의 차이를 나타내었다.
- YLC 상해 유발을 위하여 멸균수로 현탁시킨 YLC에 적정 농도의 NaOH 용액을 혼합(1 min) 후 MS 배지로 2회 세척하였으며 최종적으로 MS 배지로 현탁(1×106 cells/ml)하여 형질전환을 수행하였다. Hygromycin저항성을 보이는 YLC colony의 형질전환 확인을 위하여 PCR을 실시하였다. Genomic DNA 분리는 yeast DNA 추출방법(Hoffman and Winston, 1987)에 의하였다.
- 강알칼리인 NaOH가 YLC 생육에 미치는 영향을 관찰하였다. 멸균수 현탁시킨 YLC에 NaOH용액을 처리(최종 0~1%, 1 min) 후 PDB로 재현탁하여 PDA배지에 도말 또는 점적하여 생장을 관찰하였다.
- 흰목이 YLC에 대한 Agrobacterium 이용 형질전환을 실시하였다. 그 결과, hygromycin 저항성 colony의 출현은 전혀 관찰되지 않았는데(Fig.
- 이는 hygromycin 무첨가 배지에서도 유사한 결과를 보였다. 생장속도가 비교적 정상적인 것을 최종 선발하여 PCR 및 전기영동에 의하여 DNA 삽입을 조사하였다. 그 결과 모든 형질전환체로부터 hph 유전자 내의 0.
- Agrobacterium 이용 형질전환은 T-DNA 삽입변이에 따른 기능성 유전체학 연구에 중요한 수단으로서 기능의 손실과 획득 및 관련 유전 정보의 확인이 가능하다. 본 연구에서는 최종 선발된 형질전환체들의 생리활성 관련 변화를 비교분석하였다. 무작위로 42종을 선택하여 액체 배양 후 YLC의 methanol 추출액을 준비하였다.
- , 2007)를 감안하면 형질전환을 이용한 유전체 기능분석이나 생리활성 조절 및 개발이 보다 수월할 것으로 추측할 수 있다. 이를 위하여서는 효율적인 Agrobacterium 형질전환법이 필수적인데 본 연구에서는 흰목이 YLC를 대상으로 NaOH 처리에 의한 효율적 형진전환법을 제시할 수 있었다.
대상 데이터
- T. fuciformis는 농업유전자원연구센터(KACC 43259)로부터 제공받았으며 potato dextrose agar(PDA) 또는 potato dextrose broth(PDB) 배지를 이용하여 25℃에서 정치 또는 진탕(120 rpm)하여 실험에 이용하였다. YLC 형질전환을 위하여 hygromycin phosphotransferase 유전자(hph)를 지닌 pCambia1300(CAMBIA, Canberra, Australia) vector를 이용하였다.
- 난소암 세포주인 SKOV-3(ATCC HTB-77)는 10% fetal bovine serum 포함 RPMI 1640 배지를 이용하여 5% CO2및 37℃ 조건에서 배양하였다. 96-well flat bottom microplates에 세포를 분주(1×105 cells/well)하여 24시간 배양시킨 후 각 well에 methanol 추출액 10 µl를 첨가하여 배양(48 hr)을 지속한 후 배양액을 제거하고 PBS(pH 7.
이론/모형
- 본 연구에서는 Agrobacterium 방법을 이용한 YLC 형질 전환을 시도하였다. 특히 NaOH를 처리하여 YLC 세포에 상해를 유발한 후 무처리 YLC와의 형질전환 효율을 비교하였다.
- YLC 형질전환을 위하여 hygromycin phosphotransferase 유전자(hph)를 지닌 pCambia1300(CAMBIA, Canberra, Australia) vector를 이용하였다. pCambia1300을 freeze-thaw 방법(Chen et al., 1994)으로 Agrobacterium tumefaciens LBA4404에 도입하여 선발 후 LB 배지(kanamycin 및 streptomycin 각 50µg/ml 포함)에서 배양(18 hr, 28℃, 180 rpm)하였다. 원심분리(5 min, 10,000 rpm)로 수집한 균체는 MS 배지(Murashige and Skoog, 1962)로 재현탁(OD600=0.
- 무작위로 42종을 선택하여 액체 배양 후 YLC의 methanol 추출액을 준비하였다. 이를 SKOV-3(ovarian cancer cell line)의 세포활성에 미치는 영향을 MTT assay에 의하여 분석하였다. 그 결과, 비형질전환 YLC methanol 추출액의 경우 암세포활성에 영향이 없었으나 형질전환체에서는 다양한 변화가 나타났다(Fig.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.