[국내논문]기와층버섯 자실체의 메탄올 및 열수추출물의 항산화, 항염증 및 아세틸콜린에스테라제 저해 활성 Antioxidant, anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase activities of fruiting bodies of Phellinus xeranticus원문보기
본 연구에서는 기와층버섯의 자실체에서 메탄올과 열수를 이용해 추출한 물질의 항산화와 항염증, 항아세틸콜린에스테라제(anti-acetylcholinesterase)의 효과를 탐색하였다. DPPH 라디칼 소거능, 환원력 및 철 이온 제거능 등을 이용해 항산화 효과를 측정한 결과 양성대조군으로 사용한 BHT나 토코페롤에 비해 낮았지만 다른 종류의 버섯에 비해 효과가 우수한 것을 확인하였다. 철 이온을 제거하는 항산화 실험에서 기와층버섯의 메탄올 추출물의 효과는 양성대조군인 BHT나 토코페롤에 비해 월등하게 높아서 기와층버섯 자실체의 추출물은 높은 항산화 효과를 지닌 것으로 나타났다. 기와층버섯의 염증저해 효과 실험에서는 배양 중인 RAW 264.7 대식세포에 자실체의 메탄올과 열수추출물을 각각 전 처리 한 후 염증매개 물질인 LPS를 투여하여 추출물의 NO 생성 저해효과를 조사하였다. 실험 결과, 처리한 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양이 현저하게 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 기와층버섯의 추출물을 이용해 carrageenan에 의해 흰쥐 뒷발에 유도된 부종을 저해하는 실험에서는 투여한 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종의 용적도 농도 의존적으로 감소되었다. 따라서 기와층버섯 자실체에 함유된 항산화, 항염증 및 항아세틸콜린에스테라제 성분은 천연 항산화제, 소염제 및 알츠하이머병 치료에 이용이 가능할 것으로 사료되었다.
본 연구에서는 기와층버섯의 자실체에서 메탄올과 열수를 이용해 추출한 물질의 항산화와 항염증, 항아세틸콜린에스테라제(anti-acetylcholinesterase)의 효과를 탐색하였다. DPPH 라디칼 소거능, 환원력 및 철 이온 제거능 등을 이용해 항산화 효과를 측정한 결과 양성대조군으로 사용한 BHT나 토코페롤에 비해 낮았지만 다른 종류의 버섯에 비해 효과가 우수한 것을 확인하였다. 철 이온을 제거하는 항산화 실험에서 기와층버섯의 메탄올 추출물의 효과는 양성대조군인 BHT나 토코페롤에 비해 월등하게 높아서 기와층버섯 자실체의 추출물은 높은 항산화 효과를 지닌 것으로 나타났다. 기와층버섯의 염증저해 효과 실험에서는 배양 중인 RAW 264.7 대식세포에 자실체의 메탄올과 열수추출물을 각각 전 처리 한 후 염증매개 물질인 LPS를 투여하여 추출물의 NO 생성 저해효과를 조사하였다. 실험 결과, 처리한 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양이 현저하게 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 기와층버섯의 추출물을 이용해 carrageenan에 의해 흰쥐 뒷발에 유도된 부종을 저해하는 실험에서는 투여한 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종의 용적도 농도 의존적으로 감소되었다. 따라서 기와층버섯 자실체에 함유된 항산화, 항염증 및 항아세틸콜린에스테라제 성분은 천연 항산화제, 소염제 및 알츠하이머병 치료에 이용이 가능할 것으로 사료되었다.
Phellinus xeranticus is an medicinal mushroom belongs to Family Hymenochaetaceae of Polyporales, Basidiomycota. The purpose of this study was to investigate the antioxidant, anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase activities of methanol and hot water extracts prepared from fruiting bodies of...
Phellinus xeranticus is an medicinal mushroom belongs to Family Hymenochaetaceae of Polyporales, Basidiomycota. The purpose of this study was to investigate the antioxidant, anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase activities of methanol and hot water extracts prepared from fruiting bodies of Phellinus xeranticus. Besides measuring of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging activity, a reducing power and a chelating activity on ferrous ions were also measured to evaluate the antioxidant activity of the extracts. To measure the anti-inflammatory activities of the extracts, nitric oxide(NO) production from lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 macrophage cells and carrageenan-induced acute hind paw edema of rats were investigated. The results showed that the extracts have excellent DPPH scavenging and chelating activity on the ferrous ions compared with positive controls. The nitric oxide (NO) production in LPS-induced RAW 264.7 macrophage cells were decreased as the concentration of the mushroom extracts increased. Significant reduction of paw edema of rats were observed at 2~6 h after treatment of methanol and hot-water extracts with 50 mg/kg concentration to the rats which are induced acute hind paw edema by carrageenan administration. The anti-acetylcholinesterase activity of the methanol extract of the mushroom showed 83.34% inhibition on AcHE which is lower than that of positive control galanthamine. The experimental results suggested that methanol and hot-water extracts of Phellinus xeranticus fruiting bodies might be used for good sources of antioxidant, anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase agents.
Phellinus xeranticus is an medicinal mushroom belongs to Family Hymenochaetaceae of Polyporales, Basidiomycota. The purpose of this study was to investigate the antioxidant, anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase activities of methanol and hot water extracts prepared from fruiting bodies of Phellinus xeranticus. Besides measuring of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging activity, a reducing power and a chelating activity on ferrous ions were also measured to evaluate the antioxidant activity of the extracts. To measure the anti-inflammatory activities of the extracts, nitric oxide(NO) production from lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 macrophage cells and carrageenan-induced acute hind paw edema of rats were investigated. The results showed that the extracts have excellent DPPH scavenging and chelating activity on the ferrous ions compared with positive controls. The nitric oxide (NO) production in LPS-induced RAW 264.7 macrophage cells were decreased as the concentration of the mushroom extracts increased. Significant reduction of paw edema of rats were observed at 2~6 h after treatment of methanol and hot-water extracts with 50 mg/kg concentration to the rats which are induced acute hind paw edema by carrageenan administration. The anti-acetylcholinesterase activity of the methanol extract of the mushroom showed 83.34% inhibition on AcHE which is lower than that of positive control galanthamine. The experimental results suggested that methanol and hot-water extracts of Phellinus xeranticus fruiting bodies might be used for good sources of antioxidant, anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase agents.
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문제 정의
이 버섯의 자실체에는 항산화, 항종양, 비만억제 등을 나타내는 물질이 함유되어 있어 건강에 도움을 주는 약용버섯으로 보고되어 있다 (Park and Lee, 2003). 따라서 본 연구에서는 기와층버섯의 자실체에 함유되어있는 물질의 생리활성 효과를 알아보기 위해 국내에서 채집한 자실체에서 메탄올과 열수를 이용해 추출한 물질의 항산화, 항염증 및 아세틸콜린에스테라제 저해제에 대한 실험을 수행하고 그 결과를 보고하는 바이다.
제안 방법
Shim 등(2003)의 방법에 따라 건조한 기와층버섯 자실체의 분말에 80% 메탄올과 열수를 이용해 성분을 추출하여 실험에 사용하였다. 즉, 50 g의 기계층버섯 자실체의 분말을 80%의 메탄올 용액(덕산약품공업, Korea) 1,000 mL에 침지하여 48시간 동안 상온에서 3회 추출한 후 이 추출액을 모으고 여과지(Avantec Toyo Co., No. 2, Japan)로 여과한 후 40℃에서 회전 감압농축기(N-1000, EYELA Co., Japan)을 이용하여 감압 농축하고 농축액내의 수분을 제거하기 위해 동결건조기(FDU-8612, Operon Co., Korea)를 이용하여 메탄올 추출물을 얻었다. 열수추출물은 3차 증류수 5 l에 50 g의 자실체 분말을 넣어 95℃에서 10시간 동안 추출하였다.
총 폴리페놀 함량의 측정은 Folin-Denis을 변형한 Swain 등(1959)의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 기와층버섯의 추출물을 메탄올 1 mg/mL의 농도로 용해한 각 용매 별 추출액에 Folin-Ciocalteau 시약 및 10%의 NaCO3 용액을 각각 1 mL씩 차례로 가한 다음 실온에서 1시간 방치후 UV/VIS Spectrophotometer(Optizen POP, Korea)를 이용해 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. Gallic acid (Sigma Co.
즉, 기와층버섯의 추출물을 메탄올 1 mg/mL의 농도로 용해한 각 용매 별 추출액에 Folin-Ciocalteau 시약 및 10%의 NaCO3 용액을 각각 1 mL씩 차례로 가한 다음 실온에서 1시간 방치후 UV/VIS Spectrophotometer(Optizen POP, Korea)를 이용해 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. Gallic acid (Sigma Co., Ltd., St. Louis, MO, USA)를 0-100 g/mL의 농도로 제조한 후 시료와 동일한 방법으로 분석하여 얻은 표준 검량선을 이용하여 추출물의 총 폴리페놀 함량을 측정하였다.
3 mL를 차례로 가하여 혼합하고 실온에서 40분 간 방치한 다음 UV/VIS Spectrophotometer(Optizen POP, Korea)를 이용해 415 nm에서 흡광도를 측정하였다. Quercetin을 표준물질로 하여 얻은 표준 검량선으로부터 추출물의 총플라보노이드 함량을 측정하였다.
지수기에 도달한 세포주를 RPMI-1640 배지가 분주된 96 plate well에 2x105 cell/mL의 농도로 분주하고 24시간 배양한 후, 배지의 상층액을 제거하고 기와층버섯 추출물을 10, 100, 500, 1,000, 2,000 g/mL 농도로 새로운 배지에 200 μL 첨가하여 48시간 동안 배양하였다.
DMEM 배지가 들어있는 96 well plate 에 RAW 264.7 세포를 5x104 cell/well로 분주하고 12시간 배양 후 기와층버섯 추출물을 0, 0.5, 1.0 및 2.0 mg/mL의 농도로 1 시간 전 처리 한 다음 LPS를 1 μg/mL의 농도로 처리하여 24시간 동안 배양하였다.
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거 활성은 Blois(1958)의 방법으로 측정하였다. 시료를 메탄올로 녹여 최종 농도가 25, 125, 250, 500, 1,000, 1,500 g/mL이 되도록 정량하여 96 well plate에 각 시료를 100 mL를 주입하고. 동시에 0.
먼저 각각의 농도별로 버섯 추출물을 준비 하였다. 버섯 추출물 2.0 mL에 2 mM FeCl2 (Sigma Aldrich Co., USA) 0.05 mL를 섞은 후 5 mM의 ferrozine 0.2 mL를 첨가하여 반응시킨 뒤 메탄올 2.75 mL를 가하여 총 용량이 5 mL가 되도록한 후 vortex mixer를 이용하여 강하게 진탕한 뒤 UV/VISspectrophotometer (Optizen POP, Korea)를 이용하여 562 nm에서 반응액의 흡광도를 측정하여 다음의 계산식에 의해 철 이온 제거능을 계산하였다. 양성대조군으로는 BHT와 tocopherol을 사용하였다.
Louis, MO, USA) 100 μL를 넣어 총량이 200 μL가 되도록 하고 상온에서 10분간 반응시킨 후 생성된 NO의 양을 microplate reader (SpectraMax 340PC, California, USA)를 이용하여 540 nm 에서 흡광도를 측정하였다. NO의 농도는 아질산염의 표준 곡선을 이용하여 구하였다.
기와층버섯 자실체의 추출물이 RAW 264.7과 Melanoma B16-F10 세포의 생존율에 미치는 영향을 알아보기 위해 자실체의 메탄올과 열수추출물을 25, 50, 100, 1,000, 2,000 μg/mL의 농도로 각각의 세포에 처리하고 배양한 후 MTT 방법을 이용하여 세포의 생존율을 조사하였다.
흰쥐의 급성 부종유발은 Winter 등(1962)의 방법에 따라 수행하였다. 생리식염수에 녹인 0, 5, 15, 50 mg/kg 농도의 기와층버섯 추출물을 마리당 0.1 mL씩 오른쪽 뒷발바닥에 주사하고 30분이 지난 후 1%의 carrageenan 용액 0.1 mL를 흰쥐의 뒷발바닥에 주사하였다. 본 실험에서는 각각의 처리 당 5마리의 흰쥐를 사용하였다.
본 실험에서는 각각의 처리 당 5마리의 흰쥐를 사용하였다. 소염효과는 기와층버섯 추출물과 carrageenan 주입 후 흰쥐 뒷발바닥에 생긴 부종의 용적을 plethysmometer (MK-101P, Tokyo, Japan)로 측정하여 구하였다. 즉, 흰쥐 뒷발에 기염제인 carrageenan을 주입하기 전을 0으로 하고 주입 후 2, 4, 6시간이 지난 후 증가한 뒷발의 용적을 실험군 별로 각각 측정하여 다음의 식에 의하여 부종 증가율을 산출하였다.
소염효과는 기와층버섯 추출물과 carrageenan 주입 후 흰쥐 뒷발바닥에 생긴 부종의 용적을 plethysmometer (MK-101P, Tokyo, Japan)로 측정하여 구하였다. 즉, 흰쥐 뒷발에 기염제인 carrageenan을 주입하기 전을 0으로 하고 주입 후 2, 4, 6시간이 지난 후 증가한 뒷발의 용적을 실험군 별로 각각 측정하여 다음의 식에 의하여 부종 증가율을 산출하였다.
0 mg/ml 농도로 희석된 10 μL의 시료를 가하고 상온에서 10분 동안 진탕배양 한 후 10 μL의 10 mM DTNB와 5 μL의 100 mM acetylthiocholine을 가하여 2분 동안 반응시킨 후 microplate reader (SpectraMax 340PC, California, USA)를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 효소 대신 동량의 assay buffer를 가한 것을 control로 galanthamine을 양성대조군으로 사용하였으며, AChE의 저해활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.
기와층버섯의 추출물을 RAW 264.7 세포에 투여하고 이어서 염증 유발물질인 LPS를 투여하여 버섯 추출물이 RAW 264.7 세포내에 LPS에 의해 생성되는 NO의 저해 효과를 조사하였다. 실험 결과 RAW 264.
본 연구에서는 기와층버섯의 자실체에서 메탄올과열수를 이용해 추출한 물질의 항산화와 항염증, 항아세틸콜린에스테라제(anti-acetylcholinesterase)의 효과를 탐색하였다. DPPH 라디칼 소거능, 환원력 및 철 이온 제거능 등을 이용해 항산화 효과를 측정한 결과 양성대조군으로 사용한 BHT나 토코페롤에 비해 낮았지만 다른 종류의 버섯에 비해 효과가 우수한 것을 확인하였다.
철 이온을 제거하는 항산화 실험에서 기와층버섯의 메탄올 추출물의 효과는 양성대조군인 BHT나 토코페롤에 비해 월등하게 높아서 기와층버섯 자실체의 추출물은 높은 항산화 효과를 지닌 것으로 나타났다. 기와층버섯의 염증저해 효과 실험에서는 배양 중인 RAW 264.7 대식세포에 자실체의 메탄올과 열수추출물을 각각 전 처리 한 후 염증매개 물질인 LPS를 투여하여 추출물의 NO 생성 저해효과를 조사하였다. 실험 결과, 처리한 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양이 현저하게 감소하는 경향을 나타내었다.
대상 데이터
실험에 사용한 기와층버섯의 자실체는 인천대공원에서 채집하여 인천대학교 “버섯균주 및 DNA 은행”의 동정을 받은 후 45℃의 건조기에서 48 시간 건조하고 마쇄 후 -70℃의 저온냉동고에 보관하면서 실험에 사용하였다.
Shim 등(2003)의 방법에 따라 건조한 기와층버섯 자실체의 분말에 80% 메탄올과 열수를 이용해 성분을 추출하여 실험에 사용하였다. 즉, 50 g의 기계층버섯 자실체의 분말을 80%의 메탄올 용액(덕산약품공업, Korea) 1,000 mL에 침지하여 48시간 동안 상온에서 3회 추출한 후 이 추출액을 모으고 여과지(Avantec Toyo Co.
실험에 사용한 생쥐의 RAW 264.7 세포와 B16/F10 Melanoma 세포는 서울대학교의 한국세포주은행에서 분양받았으며 이들 세포의 배양에는 DMEM 배지와 RPMI-1640배지를 각각 기본배지로 하여 10% FBS, 100 U/mL penicillin 및 100 g/mL streptomycin을 첨가하여 조제하였고, 37℃, 5% CO2 배양기에서 3일 배양하였다.
철 이온 제거능의 실험은 Yena 등 (2002)의 방법에 준하여 수행하였다. 먼저 각각의 농도별로 버섯 추출물을 준비 하였다. 버섯 추출물 2.
75 mL를 가하여 총 용량이 5 mL가 되도록한 후 vortex mixer를 이용하여 강하게 진탕한 뒤 UV/VISspectrophotometer (Optizen POP, Korea)를 이용하여 562 nm에서 반응액의 흡광도를 측정하여 다음의 계산식에 의해 철 이온 제거능을 계산하였다. 양성대조군으로는 BHT와 tocopherol을 사용하였다.
1 mL를 흰쥐의 뒷발바닥에 주사하였다. 본 실험에서는 각각의 처리 당 5마리의 흰쥐를 사용하였다. 소염효과는 기와층버섯 추출물과 carrageenan 주입 후 흰쥐 뒷발바닥에 생긴 부종의 용적을 plethysmometer (MK-101P, Tokyo, Japan)로 측정하여 구하였다.
데이터처리
각 시료 농도군에 대한 통계적 유의검정은 대조군과 비교하여 Student’s t-test 후, p < 0.05 수준에서 통계적으로 유의성 있는 결과로 표시하였다.
이론/모형
총 폴리페놀 함량의 측정은 Folin-Denis을 변형한 Swain 등(1959)의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 기와층버섯의 추출물을 메탄올 1 mg/mL의 농도로 용해한 각 용매 별 추출액에 Folin-Ciocalteau 시약 및 10%의 NaCO3 용액을 각각 1 mL씩 차례로 가한 다음 실온에서 1시간 방치후 UV/VIS Spectrophotometer(Optizen POP, Korea)를 이용해 700 nm에서 흡광도를 측정하였다.
기와층버섯의 총 플라보노이드는 Moreno 등 (2000)의 방법에 따라 1 mg/mL 농도의 시료액에 10% aluminum nitrate 0.1 mL, 1M potassium acetate 0.1 mL 및 ethanol 4.3 mL를 차례로 가하여 혼합하고 실온에서 40분 간 방치한 다음 UV/VIS Spectrophotometer(Optizen POP, Korea)를 이용해 415 nm에서 흡광도를 측정하였다. Quercetin을 표준물질로 하여 얻은 표준 검량선으로부터 추출물의 총플라보노이드 함량을 측정하였다.
기와층버섯 추출물의 B16/F10 melanoma와 Raw 264.7 세포에 대한 생존율은 Mosmann의 방법(1983)에 따라 수행하였다. 지수기에 도달한 세포주를 RPMI-1640 배지가 분주된 96 plate well에 2x105 cell/mL의 농도로 분주하고 24시간 배양한 후, 배지의 상층액을 제거하고 기와층버섯 추출물을 10, 100, 500, 1,000, 2,000 g/mL 농도로 새로운 배지에 200 μL 첨가하여 48시간 동안 배양하였다.
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거 활성은 Blois(1958)의 방법으로 측정하였다. 시료를 메탄올로 녹여 최종 농도가 25, 125, 250, 500, 1,000, 1,500 g/mL이 되도록 정량하여 96 well plate에 각 시료를 100 mL를 주입하고.
기와층버섯 추출물의 환원력 활성에 대한 실험은 Gulcin 등 (2003)의 방법에 따라 수행하였다. 시료 2.
철 이온 제거능의 실험은 Yena 등 (2002)의 방법에 준하여 수행하였다. 먼저 각각의 농도별로 버섯 추출물을 준비 하였다.
NO 생성저해 효과는 Ryu 등(2003)의 방법을 이용하여 측정하였다. DMEM 배지가 들어있는 96 well plate 에 RAW 264.
흰쥐의 급성 부종유발은 Winter 등(1962)의 방법에 따라 수행하였다. 생리식염수에 녹인 0, 5, 15, 50 mg/kg 농도의 기와층버섯 추출물을 마리당 0.
AChE의 효소활성은 Ellman 방법 (Ellman 등, 1961)에 따라 acetylthiocholine을 기질로 사용하였으며 AChE에 의해 생성되는 thiocholine을 DTNB와 반응시켜 그 결과 생성되는 5-thio-2-nitrobenzoate 를 405 nm에서 흡광도 변화를 측정하였다. 즉, 96 well microplate에 100 μL의 AChE assay buffer (0.
성능/효과
실험결과 RAW 264.7과 Melanoma B16-F10 세포의 생존율은 100 μg/mL 농도에서 모두 79% 이상의 생존율을 보여 독성이 없었으나 1,000 μg/mL의 농도에서 열수 추출물은 50% 이상의 세포가 생존하였으나 메탄올 추출물은 42.68%만 생존하여 고농도에서 약간의 독성을 보이는 것으로 나타났다(Fig. 1).
메탄올 추출물의 총 폴리페놀 함량과 총 플라보노이드 함량은 각각 16.37μg/mg과 11.96 μg/mg으로 나타났으며, 열수추출물은 각각 2.40 μg/mg과 3.16 μg/mg으로 나타나 폴리페놀의 양은 메탄올 추출물이 열수추출물보다 약 6.8배 이상 많았으며 플라보노이드의 양도 메탄올 추출물에서 11.96 μg/mg, 열수 추출물에서 3.16 μg/mg로 나타나 메탄올 추출물에서 보다 많은 플라보노이드가 추출되었다.
2에 나타내었다. 기와층버섯 추출물의 DPPH 소거 활성은 0.125 mg/mL의 농도에서 메탄올과 열수 추출물이 각각 85.41%, 90.67%로 나타나 동일한 농도에서 양성대조군인 BHT, tocopherol 및 L-ascorbic acid의 92.05%, 89.27% 및 93.64%에 비해 낮았다. 그러나 메탄올과열수 추출물은 1 mg/mL의 농도에서의 소거활성은 93.
기와층버섯 자실체의 메탄올과 열수추출물의 0.125 mg/mL 농도에서 철 이온 제거능은 각각 23.65와 39.15로 나타나 양성 대조군으로 사용한 BHT, tochopherol 및 ascorbic acid의 14.73, 20.81, 17.97에 비해 높게 나타났다. 2.
97에 비해 높게 나타났다. 2.0 mg/mL의 농도에서는 메탄올과 열수 추출물은 73.06%과 68/11%을 나타내 BHT, tochopherol 및 ascorbic acid 등 양성 대조군의 60.36%, 68.87%, 66.67%에 비해 조금 높거나 유사하게 나타났다(Fig. 3). 특히 본 실험에서 기와층버섯의 철 이온 제거능은 Lee 등(2007)이 느티만가닥버섯의 자실체 열수 추출물 5 mg/mL 농도에서의 철 이온 제거능 75.
실험 결과 RAW 264.7 세포만 배양한 대조군의 NO 농도는 6.47 μM로 측정되었으나 LPS를 1.0 μg/mL 농도로 처리한 실험군에서의 NO 농도는 43.55 μM로 크게 증가하였다.
그러나 메탄올 추출물을 1.0 mg/mL과 2.0 mg/mL로 처리한 실험군의 NO 생성은 각각 16.84와 11.44 μM로 낮아져 메탄올 추출물을 처리한 RAW 264.7 세포에서 NO 생성의 저해효과가 높게 나타난 것을 관찰할 수 있었으며, 열수 추출물을 1.0 mg/mL와 2.0 mg/mL로 처리한 경우에도 각각 30.12와 27.33 μM의 NO가 생성되는 저해 효과가 나타났으나 메탄올 추출물에 비해서 저해 효과는 낮았다(Fig. 5).
기와층버섯의 메탄올과 열수 추출물의 환원력은 0.5 mg/mL의 농도에서 각각 1.713과 0.556으로 나타나 동일 농도에서의 양성대조군인 BHT, TOC 및 LAA의 2.513, 2.833, 2.404에 비해서 낮게 나타났다(Fig. 4). 메탄올과 열수 추출물 간의 환원력은 0.
827에 비해 매우 낮았다. 따라서 기와층버섯의 환원력은 양성대조군으로 사용한 BHT, TOC 및 LAA에 비해서는 낮았지만 잎새버섯의 환원력보다는 높은 것으로 나타났다.
Fangkrathok 등(2013)은 Lentinus polychrous의 균사체에서 추출한 물질이 NO를 생성하는 iNOS의 발현을 농도 의존적 저해하여 추출물 농도가 증가함에 따라 NO의 생성량도 감소했다고 보고하였다. 본 실험에서도 RAW 264.7 세포에 처리한 기와층버섯 추출물의 농도가 높아짐에 따라 NO의 생성도 농도 의존적으로 유의성 있게 감소하는 것이 관찰되었다.
6에 나타냈다. 기염제인 carrageenan만을 주사한 대조군의 경우 carrageenan에 의해 유도된 뒷발 부종의 용적은 주사 후 2~6시간에 42.15~66.71%로 증가했으나, carrageenan 주사 후 소염제인 indomethacin을 5 mg/kg 투여한 양성 대조군은 14.16~29.96% 증가했다. 반면에 메탄올 추출물을 5 mg/kg 투여 후 carrageenan을 주사한 실험군의 부종 용적은 30.
96% 증가했다. 반면에 메탄올 추출물을 5 mg/kg 투여 후 carrageenan을 주사한 실험군의 부종 용적은 30.52~45.21% 증가했고, 메탄올 추출물을 15 mg/kg 투여한 실험군의 부종의 용적은 29.19~38.33%로 증가했으며, 메탄올 추출물을 50 mg/kg 투여한 실험군의 부종 용적은 25.44~30.56% 증가했다. 따라서 흰쥐에 투여한 기와층버섯 추출물의 소염효과는 낮은 농도에서 높은 농도까지 실험에 사용한 모든 농도에서 나타났으나 고농도인 50 mg/kg의 메탄올 추출물을 투여한 실험군의 소염효과가 5 mg/kg을 투여한 실험군에 비해 약 1.
56% 증가했다. 따라서 흰쥐에 투여한 기와층버섯 추출물의 소염효과는 낮은 농도에서 높은 농도까지 실험에 사용한 모든 농도에서 나타났으나 고농도인 50 mg/kg의 메탄올 추출물을 투여한 실험군의 소염효과가 5 mg/kg을 투여한 실험군에 비해 약 1.36배 높게 나타났다. 특히 저농도인 5.
기와층버섯 자실체의 메탄올과 열수추출물의 AChE 저해효과를 0.063 mg/mL~1.0 mg/mL 농도에서 조사한 결과 0.063 mg/mL에서 64.19%와 51.44%, 0.125 mg/mL에서 72.35%와 55.55%, 0.25 mg/mL에서 74.36%와 56.35%, 0.5 mg/mL에서 77.61%와 62.03%, 1.0 mg/mL에서 83.34%와 77.53%의 AChE의 저해 효과가 나타나 양성대조군으로 사용한 galathamine에 비해 모든 농도에서 저해효과가 조금 낮게 나타났다(Fig. 7). 기와층버섯 메탄올 추출물의 AChE의 저해 효과는 처리 농도가 증가함에 따라 저해효과도 농도의존적으로 증가하는 경향을 보였다.
7). 기와층버섯 메탄올 추출물의 AChE의 저해 효과는 처리 농도가 증가함에 따라 저해효과도 농도의존적으로 증가하는 경향을 보였다. Lee 등(2002)은 41종의 한약제에서 AChE 저해활성을 조사한 결과 오수유와 복분자 등 7종 한약제의 25 mg/ml 농도에서 AChE의 저해 활성을 80% 이상 높게 나타낸다고 보고하여서 본 실험에 사용한 기와층버섯에 비해 AChE의 저해활성이 높게 나타났다.
본 연구에서는 기와층버섯의 자실체에서 메탄올과열수를 이용해 추출한 물질의 항산화와 항염증, 항아세틸콜린에스테라제(anti-acetylcholinesterase)의 효과를 탐색하였다. DPPH 라디칼 소거능, 환원력 및 철 이온 제거능 등을 이용해 항산화 효과를 측정한 결과 양성대조군으로 사용한 BHT나 토코페롤에 비해 낮았지만 다른 종류의 버섯에 비해 효과가 우수한 것을 확인하였다. 철 이온을 제거하는 항산화 실험에서 기와층버섯의 메탄올 추출물의 효과는 양성대조군인 BHT나 토코페롤에 비해 월등하게 높아서 기와층버섯 자실체의 추출물은 높은 항산화 효과를 지닌 것으로 나타났다.
DPPH 라디칼 소거능, 환원력 및 철 이온 제거능 등을 이용해 항산화 효과를 측정한 결과 양성대조군으로 사용한 BHT나 토코페롤에 비해 낮았지만 다른 종류의 버섯에 비해 효과가 우수한 것을 확인하였다. 철 이온을 제거하는 항산화 실험에서 기와층버섯의 메탄올 추출물의 효과는 양성대조군인 BHT나 토코페롤에 비해 월등하게 높아서 기와층버섯 자실체의 추출물은 높은 항산화 효과를 지닌 것으로 나타났다. 기와층버섯의 염증저해 효과 실험에서는 배양 중인 RAW 264.
7 대식세포에 자실체의 메탄올과 열수추출물을 각각 전 처리 한 후 염증매개 물질인 LPS를 투여하여 추출물의 NO 생성 저해효과를 조사하였다. 실험 결과, 처리한 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양이 현저하게 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 기와층버섯의 추출물을 이용해 carrageenan에 의해 흰쥐 뒷발에 유도된 부종을 저해하는 실험에서는 투여한 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종의 용적도 농도 의존적으로 감소되었다.
실험 결과, 처리한 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양이 현저하게 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 기와층버섯의 추출물을 이용해 carrageenan에 의해 흰쥐 뒷발에 유도된 부종을 저해하는 실험에서는 투여한 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종의 용적도 농도 의존적으로 감소되었다. 따라서 기와층버섯 자실체에 함유된 항산화, 항염증 및 항아세틸콜린에스테라제 성분은 천연 항산화제, 소염제 및 알츠하이머병 치료에 이용이 가능할 것으로 사료되었다.
또한 기와층버섯의 추출물을 이용해 carrageenan에 의해 흰쥐 뒷발에 유도된 부종을 저해하는 실험에서는 투여한 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종의 용적도 농도 의존적으로 감소되었다. 따라서 기와층버섯 자실체에 함유된 항산화, 항염증 및 항아세틸콜린에스테라제 성분은 천연 항산화제, 소염제 및 알츠하이머병 치료에 이용이 가능할 것으로 사료되었다.
36배 높게 나타났다. 특히 저농도인 5.0 mg/kg의 메탄올 추출물을 투여한 실험군의 소염효과는 indomethacin을 5.0 mg/kg 투여한 양성대조군에 비해 현저하게 낮았으나 고농도인 50 mg/kg의 추출물을 투여한 실험군의 소염효과는 양성대조군에 비해 조금 낮게 나타났으나 통계적인 유의성은 없었다. Fangkrathok 등(2013)은 carrageenan을 주사하여 부종이 유발된 흰쥐에 Lentinus polychrous 버섯의 균사체 열수추출물을 투여한 후 항염증 효과를 측정한 결과 투여한 추출물 농도가 증가함에 따라 소염효과도 비례해서 증가했다고 보고하였다.
후속연구
따라서 본 기와층버섯 자실체에 함유된 항산화 및 AChE 저해 물질은 Alzheimer’s disease와 같은 뇌의 퇴행성 질환의 개선에 이용이 가능할 것으로 사료된다.
Fangkrathok 등(2013)은 carrageenan을 주사하여 부종이 유발된 흰쥐에 Lentinus polychrous 버섯의 균사체 열수추출물을 투여한 후 항염증 효과를 측정한 결과 투여한 추출물 농도가 증가함에 따라 소염효과도 비례해서 증가했다고 보고하였다. 본 실험에서도 메탄올 추출물의 농도를 증가시킴에 따라 농도 의존적으로 소염효과도 증가되는 것을 관찰되어 기와층버섯의 메탄올 추출물은 앞으로 항염증 질환의 실험에 이용이 가능할 것으로 사료되었다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
활성산소가 인체에서 과다 발생하면 생체에 어떤 영향을 주는가?
활성산소가 인체에서 과다 발생하면 산화적 스트레스(oxidative stress)가 세포 대사에 심각한 이상을 초래하여 심혈관계 질환, 암 및 acetylcholine 등의 신경 전달 물질에도 영향을 미쳐 생체에 치명적 손상을 줄 수 있다. 현대의 생활에서 체내의 활성산소를 제거하여 건강한 삶을 살아가기 위해 체내의 활성산소를 효과적으로 제거하기 위해 항산화 효과를 나타내는 물질이 분리와 이용에 많은 노력이 경주되고 있다 (Weisburger, 1999).
기와층버섯은 무엇인가?
기와층버섯 [Phellinus xeranticus (Berk.) Pegler]은 담자균류 (Basidiomycota)의 구멍장이버섯목 (Polyporales), 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae), 진흙버섯속 (Phellinus)에 속하는 버섯으로 나무의 목질부를 분해하는 백색부후균이다. 이 버섯의 자실체에는 항산화, 항종양, 비만억제 등을 나타내는 물질이 함유되어 있어 건강에 도움을 주는 약용버섯으로 보고되어 있다 (Park and Lee, 2003).
기와층버섯의 자실체에는 어떤 물질이 함유되어 있는가?
) Pegler]은 담자균류 (Basidiomycota)의 구멍장이버섯목 (Polyporales), 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae), 진흙버섯속 (Phellinus)에 속하는 버섯으로 나무의 목질부를 분해하는 백색부후균이다. 이 버섯의 자실체에는 항산화, 항종양, 비만억제 등을 나타내는 물질이 함유되어 있어 건강에 도움을 주는 약용버섯으로 보고되어 있다 (Park and Lee, 2003). 따라서 본 연구에서는 기와층버섯의 자실체에 함유되어있는 물질의 생리활성 효과를 알아보기 위해 국내에서 채집한 자실체에서 메탄올과 열수를 이용해 추출한 물질의 항산화, 항염증 및 아세틸콜린에스테라제 저해제에 대한 실험을 수행하고 그 결과를 보고하는 바이다.
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