선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 국내에서도 상추 균핵병의 방제를 위한 길항세균의 선발과 방제효과에 대한 보고가 있다(Kim 등, 2004; Hwang 등, 2006). 본 연구는 상추 시설재배지 토양으로부터 상추 균핵병에 대한 길항미생물을 분리선발 하여 상추 균핵병에 대해 생물학적 방제제로서의 가능성을 탐색하고자 수행되었다.
제안 방법
- PCR 반응조건은 predenaturation을 95°C에서 5분, denaturation을 94°C에서 45초, annealing을 55°C에서 45초, elongation을 72°C에서 90초간 진행하여 30회 반복한 후 final extension을 72°C에서 10분간 실시하였다.
- PCR 반응조건은 predenaturation을 95°C에서 5분, denaturation을 94°C에서 45초, annealing을 55°C에서 45초, elongation을 72°C에서 90초간 진행하여 30회 반복한 후 final extension을 72°C에서 10분간 실시하였다. PCR 증폭 산물은 전기영동하여 확인한 후 정제하였다. 정제된 PCR 산물을 (주)Macrogen에 의뢰하여 16S rDNA 염기서열을 결정하였고, 결정된 염기서열은 NCBI의 미생물 database (BLAST)에 등록된 근연종과 비교를 통하여 계통학적인 위치를 확인하였다.
- 처리방법은 3가지로 접종 직후 1회 처리한 것과 이후 일주일 간격으로 2회 그리고 3회 처리한 실험구를 대상으로 처리 횟수에 따른 방제효과도 조사하였다. 각 균주별로 처리당 5반복으로 수행하였고, 무처리는 15반복으로 수행하였다. 실험에 사용한 균핵의 평균 발아율은 95%였으나 PDA 상에서 발아를 확인한 균핵만을 사용하였음으로 접종원의 양은 동일하다고 판단하였다.
- 균핵병에 감염된 상추에 대한 길항세균의 방제효과를 검정하기 위해 2011년 4월부터 5월까지 실험을 수행하였다. 대치배양을 통해 선발된 26개 균주를 사용하였으며, 상추는 ‘선풍포찹적축면’(권농종묘)을 사용하였다.
- nicotianae 08-3-4 등의 9개 균주가 상추 균핵병에 대해 방제효과가 있음을 확인할 수 있었다. 대조구에서는 상추에 균핵병균의 균핵을 접종한 지 7일째부터 병이 발생하기 시작하여 12일째에 80%의 발병율로 병이 진전되었다. 그러나 이들 9개 균주는 3회 처리시 6, 7일째 병이 발생하였으나 30일째까지 20%의 발병율을 나타냈다(Table 6와 Fig.
- 대치배양을 통해 선발된 26개 균주 중에서 TSA배지에서 균핵병균과의 대치배양 결과 균사생육억제력을 나타낸 균주 중 각각 다른 종 10개 균주(Bacillus megaterium DK6, B. cereus C210과 08-1-2, B. muralis 08-2-7, B. velezensis DK2, Arthrobacter nicotianae 08-3-4, A. oryzae 08-1-5, Pseudomonas fuscovaginae AK6, Stenotrophomonas maltophilia 08-2-6, Sphingobacterium faecium 08-3-3)를 선발하여 균핵의 생존 및 발아에 미치는 영향을 조사하였다. 실험에 사용한 균핵은 균핵병에 걸린 상추에서 분리한 Sclerotinia sclerotiorum을 PDA배지에서 장기간 배양하면서 형성된 2−7 mm의 다양한 크기의 균핵을 채취하여 유리병에 모아 5°C 냉장고에 보관하면서 사용하였다.
- 먼저 보관 중인 균핵을 무작위로 골라 거즈주머니 당 20개를 담은 뒤, 직경 10 cm 포트 당 균핵이 들어있는 4개의 거즈주머니를 4 cm 깊이로 묻은 후 고온고압살균처리 (auto-claved) 한 상토[에버그린, 서울바이오(주)]를 채워 준비한 후 길항 세균의 처리를 위해 tryptic soy broth(TSB) 액체배지에서 150 rpm으로 28°C, 3일간 배양 한 길항세균배양액 원액과 멸균증류수로 10배 희석한 세균배양액으로 포트 당 100 ml씩 처리하였다.
-
상추 균핵병에 대한 길항세균의 방제효과 검정.
- 대치배양을 통해 선발된 26개 균주를 사용하였으며, 상추는 ‘선풍포찹적축면’(권농종묘)을 사용하였다. 상추종자를 200공 플러그트레이에 파종하여 30일 정도 육묘한 후 유 묘를 직경 10 cm 포트에 이식하여 실험에 사용하였다. 실험에 사용한 균핵은 균핵병에 걸린 상추에서 분리한 Sclerotinia sclerotiorum을 PDA배지에서 장기간 배양하면서 형성된 균핵을 채취하여 5°C 냉장고에서 보관 중인 것을 사용하였다.
- 상추종자를 200공 플러그트레이에 파종하여 30일 정도 육묘한 후 유묘를 직경 10 cm 포트에 이식할 때 PDA배지에 발아시킨 균핵과 PDA배지를 5 mm 크기로 잘라 플러그트레이에서 뽑아낸 상추묘의 뿌리주변에 대각선 방향으로 4개를 접종한 후 살균된 상토를 조심스럽게 채운 후 온실에 보관하면서 발병과정을 조사한 결과, 접종 후 6일부터 지상부의 시들음 증상이 가시적으로 나타났으며, 접종 후 12−15일부터 일부 식물체가 시들어 죽기 시작하여 30일 전후로도 발병이 관찰되어 길항미생물에 의한 효과검정에 적절한 접종형태 및 방법이라고 판단되어 본 실험에 사용하였다.
- 상토에 있는 미생물의 영향을 제거하기 위해 상토는 고압멸균용 비닐에 담아 3일 동안 1일 간격으로 121°C에서 30분간 고온고압살균처리 하였다.
- 선발된 길항세균의 길항효과 검정을 위하여 균핵병균의 접종원의 형태 및 접종량과 접종방법에 대한 예비실험을 2010년 1월부터 5월에 걸쳐 수행하였다. 상추종자를 200공 플러그트레이에 파종하여 30일 정도 육묘한 후 유묘를 직경 10 cm 포트에 이식할 때 PDA배지에 발아시킨 균핵과 PDA배지를 5 mm 크기로 잘라 플러그트레이에서 뽑아낸 상추묘의 뿌리주변에 대각선 방향으로 4개를 접종한 후 살균된 상토를 조심스럽게 채운 후 온실에 보관하면서 발병과정을 조사한 결과, 접종 후 6일부터 지상부의 시들음 증상이 가시적으로 나타났으며, 접종 후 12−15일부터 일부 식물체가 시들어 죽기 시작하여 30일 전후로도 발병이 관찰되어 길항미생물에 의한 효과검정에 적절한 접종형태 및 방법이라고 판단되어 본 실험에 사용하였다.
- 순수분리 된 196개 균주 중 대치배양실험을 통하여 길항력효과가 인정되는 26개 균주들에 대하여 16S rDNA 염기서열분석을 통하여 균을 동정하였다. 16S rDNA증폭을 위해 universal primer 27F (5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3')와 1492R(5'- AGG GAG GTG ATC CAG CCG C-3') primer를 사용하였다.
- 상추종자를 200공 플러그트레이에 파종하여 30일 정도 육묘한 후 유묘를 직경 10 cm 포트에 이식할 때 PDA배지에 발아시킨 균핵과 PDA배지를 5 mm 크기로 잘라 플러그트레이에서 뽑아낸 상추묘의 뿌리주변에 대각선 방향으로 4개를 접종한 후 살균된 상토를 조심스럽게 채운 후 온실에 보관하면서 발병과정을 조사한 결과, 접종 후 6일부터 지상부의 시들음 증상이 가시적으로 나타났으며, 접종 후 12−15일부터 일부 식물체가 시들어 죽기 시작하여 30일 전후로도 발병이 관찰되어 길항미생물에 의한 효과검정에 적절한 접종형태 및 방법이라고 판단되어 본 실험에 사용하였다. 실험은 4회에 걸쳐 매번 30반복으로 수행하였다(자료 미제출).
- 아울러 상토에 있는 미생물의 영향을 제거하기 위해 상토는 고압멸균용 비닐에 담아 3일 동안 1일 간격으로 121°C에서 30분간 고온고압 살균처리 것을 사용하였다.
- PCR 증폭 산물은 전기영동하여 확인한 후 정제하였다. 정제된 PCR 산물을 (주)Macrogen에 의뢰하여 16S rDNA 염기서열을 결정하였고, 결정된 염기서열은 NCBI의 미생물 database (BLAST)에 등록된 근연종과 비교를 통하여 계통학적인 위치를 확인하였다. 결정된 16S rDNA 유전자 염기서열은 표준 미생물과 비교를 통해서 진화적 위치를 결정하였다.
- 준비 된 포트에 세균배양액을 처리한 뒤 4주 동안 7일 간격으로 거즈주머니를 꺼내어 균핵을 95% 에탄올에서 90초, 1% 차아염소산나트륨에 7분간 표면살균하고 streptomycin(스트렙토마이신) 100 μg이 첨가된 PDA 배지에 치상한 후 균핵의 회수율과 생존율을 조사하였다.
- 포트 당 4개의 발아된 균핵과 PDA 조각절편을 200공 플러그트레이에서 뽑아낸 유묘 주변에 대각선 방향으로 접종하고 살균된 상토를 조심스럽게 채운 후 TSB에서 3일간 배양된 세균배양액을 멸균증류수로 10배 희석하여 포트 당 100 ml을 처리한 뒤 30일간 재배하면서 상추 균핵병의 발병율을 조사하였다. 처리방법은 3가지로 접종 직후 1회 처리한 것과 이후 일주일 간격으로 2회 그리고 3회 처리한 실험구를 대상으로 처리 횟수에 따른 방제효과도 조사하였다. 각 균주별로 처리당 5반복으로 수행하였고, 무처리는 15반복으로 수행하였다.
- 1 ml씩 도말하여 3일간 배양하였다. 평판배지에서 형성된 세균 균총의 색과 형태적 특징에 따라 선발된 세균을 single colony 순수 분리하여 각 균주별로 균핵병균에 대한 길항력을 조사하였다. 분리된 196개 균주를 tryptic soy agar (TSA)배지와 NA배지에서 균핵병균과의 대치배양(dual culture)하여 균사생육억제력을 나타내는 세균을 선발하였다.
- 냉장보관 된 균핵을 PDA배지에 발아시킨 후 발아된 균핵과 PDA배지를 5 mm 크기로 잘라 접종원으로 사용하였다. 포트 당 4개의 발아된 균핵과 PDA 조각절편을 200공 플러그트레이에서 뽑아낸 유묘 주변에 대각선 방향으로 접종하고 살균된 상토를 조심스럽게 채운 후 TSB에서 3일간 배양된 세균배양액을 멸균증류수로 10배 희석하여 포트 당 100 ml을 처리한 뒤 30일간 재배하면서 상추 균핵병의 발병율을 조사하였다. 처리방법은 3가지로 접종 직후 1회 처리한 것과 이후 일주일 간격으로 2회 그리고 3회 처리한 실험구를 대상으로 처리 횟수에 따른 방제효과도 조사하였다.
대상 데이터
- 16S rDNA증폭을 위해 universal primer 27F (5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3')와 1492R(5'- AGG GAG GTG ATC CAG CCG C-3') primer를 사용하였다.
- 2007년부터 2008년에 걸쳐 매년 초봄에 균핵병이 발생한 경기도 남양주시 관내 겨울철 상추 시설재배지에서 상추 근권부 토양을 채취하여 희석평판법으로 총 196개의 세균 균주를 분리하였다(Table 1). 분리된 196개의 세균 균주를 균핵병균과 대치배양하여 효과적인 균사생장억제율을 나타내는 26개의 세균 균주를 선발하였고 선발된 26개의 세균 균주의 균사생장 억제율은 TSA배지에서는 77.
- 대치배양을 통해 선발된 26개 세균의 16S rDNA 염기서열분석 결과를 NCBI의 미생물 database(BLAST)에 등록된 근연종과 비교를 통하여 계통학적인 위치를 확인한 결과, Firmicutes/Bacillus 속에 속하는 균주들은 19개였다. Bacillus megaterium이 14개 균주(AK3-1, AK3-2, AK4-1, AK7-1, C38, C39, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, DK3, DK5, DK6), Bacillus cereus가 3개 균주 (C210, DK7-1, O8-1-2), Bacillus muralis 1개 균주(O8-2-7), Bacillus velezensis가 1개 균주(DK2)였다. Actinobacteria/ Arthrobacter 속에 속하는 균주들은 3개였으며, Arthrobacteroryzae가 2개 균주(O8-1-5, O8-2-1), Arthrobacter nicotianae 가 1개 균주(O8-3-4)였다.
- 대치배양에서 선발된 10개 세균 균주(Bacillus megaterium DK6, B. cereus C210과 08-1-2, B. muralis 08-2-7, B. velezensis DK2, Arthrobacter nicotianae 08-3-4, A. oryzae 08-1-5, Pseudomonas fuscovaginae AK6, Stenotrophomonas maltophilia 08-2-6, Sphingobacterium faecium 08-3-3)를 대상으로 여름철 토양내의 상추 균핵 병균의 균핵생존에 미치는 효과를 조사하기 위해 2011년 8월부터 9월에 걸쳐 자동 환기가 이루어지는 온실 내에서 수행하였다.
- 대치배양을 통해 선발된 26개 균주를 사용하였으며, 상추는 ‘선풍포찹적축면’(권농종묘)을 사용하였다.
- 아울러 상토에 있는 미생물의 영향을 제거하기 위해 상토는 고압멸균용 비닐에 담아 3일 동안 1일 간격으로 121°C에서 30분간 고온고압 살균처리 것을 사용하였다. 본 실험은 2011년 4월부터 5월에 걸쳐 자동 환기가 이루어지는 온실 내에서 수행되었다.
- 준비 된 포트에 세균배양액을 처리한 뒤 4주 동안 7일 간격으로 거즈주머니를 꺼내어 균핵을 95% 에탄올에서 90초, 1% 차아염소산나트륨에 7분간 표면살균하고 streptomycin(스트렙토마이신) 100 μg이 첨가된 PDA 배지에 치상한 후 균핵의 회수율과 생존율을 조사하였다. 본 실험은 2011년 8월부터 9월에 걸쳐 자동 환기가 이루어지는 온실 내에서 수행되었다.
- 평판배지에서 형성된 세균 균총의 색과 형태적 특징에 따라 선발된 세균을 single colony 순수 분리하여 각 균주별로 균핵병균에 대한 길항력을 조사하였다. 분리된 196개 균주를 tryptic soy agar (TSA)배지와 NA배지에서 균핵병균과의 대치배양(dual culture)하여 균사생육억제력을 나타내는 세균을 선발하였다. 대치배양실험은 25°C, 암조건에서 7일간 배양하였다.
- 상추 균핵병균에 대하여 길항력을 나타내는 세균을 분리하기 위해 2007년부터 2008년에 걸쳐 초봄에 경기도 남양주시 관내 상추 시설재배지에서 균핵병이 발병한 포장의 토양을 수집하였다. 수집한 토양을 희석평판법을 이용하여 총 196개의 세균을 분리하였고, 분리한 세균을 실험실에서 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum)과의 대치배양을 통해 균사생장억제율이 80% 내외로 우수한 길항력을 나타내는 26개 균주를 선발하였다.
- 상추 균핵병에 대하여 길항력을 나타내는 세균을 분리하기 위해 2007년부터 2008년에 걸쳐 매년 초봄에 균핵병이 발생한 경기도 남양주시 관내 겨울철 상추 시설재배지에서 상추 근권부 토양을 채취하였다. 채취한 토양을 그늘진 곳에서 1일간 풍건한 다음, 토양 50 g을 멸균증류수 500 ml와 혼합하여 1시간 진탕하였다.
- 상추 균핵병균에 대하여 길항력을 나타내는 세균을 분리하기 위해 2007년부터 2008년에 걸쳐 초봄에 경기도 남양주시 관내 상추 시설재배지에서 균핵병이 발병한 포장의 토양을 수집하였다. 수집한 토양을 희석평판법을 이용하여 총 196개의 세균을 분리하였고, 분리한 세균을 실험실에서 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum)과의 대치배양을 통해 균사생장억제율이 80% 내외로 우수한 길항력을 나타내는 26개 균주를 선발하였다. 선발된 26개 균주를 16S rDNA염기서열분석으로 동정한 결과 Bacillus megaterium, B.
- 실험에 사용한 균핵은 균핵병에 걸린 상추에서 분리한 Sclerotinia sclerotiorum을 PDA배지에서 장기간 배양하면서 형성된 2−7 mm의 다양한 크기의 균핵을 채취하여 유리병에 모아 5°C 냉장고에 보관하면서 사용하였다.
- 실험에 사용한 균핵은 균핵병에 걸린 상추에서 분리한 Sclerotinia sclerotiorum을 PDA배지에서 장기간 배양하면서 형성된 균핵을 채취하여 5°C 냉장고에서 보관 중인 것을 사용하였다.
이론/모형
- Neighbor-joining tree of the 26 antagonistic bacterial strains based on phylogenetic analysis of the 16S rDNA gene sequences. The tree was constructed from evolutionary distance matrix by using neighbor-joining method (Saitou and Nei, 1987). Bold circles indicate that the corresponding nodes were also recovered in the trees generated with the maximum-likelihood (Fitch, 1971) and maximum-parsimony (Felsenstein, 1981) algorithms.
- 진화적 거리는 Jukes와 Cantor(1969) 방법을 이용하여 계산하였고 neighbor-joining 방법(Saitou와 Nei, 1987) 을 이용하여 계통도를 분석하였다. 계통도내 분지의 신뢰도는 bootstrap 분석을 통해 평가하였다(Felsenstein, 1985). 또한, 계통 발생적 분지도는 maximum-likelihood 방법(Fitch, 1971)과 maximum-parsimony 방법(Felsenstein, 1981)을 추가로 분석하였다.
- 계통도내 분지의 신뢰도는 bootstrap 분석을 통해 평가하였다(Felsenstein, 1985). 또한, 계통 발생적 분지도는 maximum-likelihood 방법(Fitch, 1971)과 maximum-parsimony 방법(Felsenstein, 1981)을 추가로 분석하였다.
- 결정된 16S rDNA 유전자 염기서열은 표준 미생물과 비교를 통해서 진화적 위치를 결정하였다. 진화적 거리는 Jukes와 Cantor(1969) 방법을 이용하여 계산하였고 neighbor-joining 방법(Saitou와 Nei, 1987) 을 이용하여 계통도를 분석하였다. 계통도내 분지의 신뢰도는 bootstrap 분석을 통해 평가하였다(Felsenstein, 1985).
성능/효과
- γ-Proteobacteria에 속하는 균주들은 Pseudomonas fuscovaginae 1개 균주(AK6), Pseudomonas flavescens 1개 균주(C34), 그리고 Stenotrophomonas maltophilia 1개 균주(O8-2-6)로 총 3개 균주였다.
- Bacillus megaterium이 14개 균주(AK3-1, AK3-2, AK4-1, AK7-1, C38, C39, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, DK3, DK5, DK6), Bacillus cereus가 3개 균주 (C210, DK7-1, O8-1-2), Bacillus muralis 1개 균주(O8-2-7), Bacillus velezensis가 1개 균주(DK2)였다. Actinobacteria/ Arthrobacter 속에 속하는 균주들은 3개였으며, Arthrobacteroryzae가 2개 균주(O8-1-5, O8-2-1), Arthrobacter nicotianae 가 1개 균주(O8-3-4)였다. γ-Proteobacteria에 속하는 균주들은 Pseudomonas fuscovaginae 1개 균주(AK6), Pseudomonas flavescens 1개 균주(C34), 그리고 Stenotrophomonas maltophilia 1개 균주(O8-2-6)로 총 3개 균주였다.
- flavescens, Stenotrophomonas maltophilia, Sphingobacterium faecium으로 동정되었다. 길항세균의 균사생장억제율이 높게 나타낸 10개 균주를 대상으로 여름철 포트실험을 통해 균핵 생존에 미치는 영향을 조사한 결과 B. cereus (C210)와 B. megaterium(DK6)이 각각 20%와 35%의 균핵 생존율을 나타냈다. 겨울철에 온실 내에서 포트실험을 통해 상추 균핵병에 대해 방제효과를 조사한 결과 대조 구가 80%의 발병율을 나타냈으나, 26개 균주 중 9개 균주가 20% 정도의 발병율을 나타내 향후 상추 균핵병의 생물적 방제를 위한 길항세균으로서의 활용가치가 기대된다.
- 대치배양을 통해 선발된 26개 세균의 16S rDNA 염기서열분석 결과를 NCBI의 미생물 database(BLAST)에 등록된 근연종과 비교를 통하여 계통학적인 위치를 확인한 결과, Firmicutes/Bacillus 속에 속하는 균주들은 19개였다. Bacillus megaterium이 14개 균주(AK3-1, AK3-2, AK4-1, AK7-1, C38, C39, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, DK3, DK5, DK6), Bacillus cereus가 3개 균주 (C210, DK7-1, O8-1-2), Bacillus muralis 1개 균주(O8-2-7), Bacillus velezensis가 1개 균주(DK2)였다.
- 분리된 196개의 세균 균주를 균핵병균과 대치배양하여 효과적인 균사생장억제율을 나타내는 26개의 세균 균주를 선발하였고 선발된 26개의 세균 균주의 균사생장 억제율은 TSA배지에서는 77.41−97.21%(Table 2)로 나타났고, 대치배양 결과 억제존(inhibition zone)이 생긴 부분의 균사를 광학현미경으로 관찰한 결과 무처리 대조구의 정상적인 균사의 형태와 비교해 세포내 공포가 다수 형성되고 부풀어 오르는 등의 기형적인 형태를 띠는 것을 확인하였다(Fig. 1).
- 수집한 토양을 희석평판법을 이용하여 총 196개의 세균을 분리하였고, 분리한 세균을 실험실에서 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum)과의 대치배양을 통해 균사생장억제율이 80% 내외로 우수한 길항력을 나타내는 26개 균주를 선발하였다. 선발된 26개 균주를 16S rDNA염기서열분석으로 동정한 결과 Bacillus megaterium, B. cereus, B. muralis, B. velezensis, Arthrobacter nicotianae, A. oryzae, Pseudomonas fuscovaginae, P. flavescens, Stenotrophomonas maltophilia, Sphingobacterium faecium으로 동정되었다. 길항세균의 균사생장억제율이 높게 나타낸 10개 균주를 대상으로 여름철 포트실험을 통해 균핵 생존에 미치는 영향을 조사한 결과 B.
- 선발된 26개의 균주를 대상으로 실험한 결과 Bacillus megaterium CK6, DK3, DK5 그리고 DK6, B. cereus C210와 08-1-2, Arthrobacter oryzae 08-1-5와 08-2-1, A. nicotianae 08-3-4 등의 9개 균주가 상추 균핵병에 대해 방제효과가 있음을 확인할 수 있었다. 대조구에서는 상추에 균핵병균의 균핵을 접종한 지 7일째부터 병이 발생하기 시작하여 12일째에 80%의 발병율로 병이 진전되었다.
- 실험 균주를 TSB에서 배양한 배양액 원액과 10배 희석액을 균핵이 들어있는 포트에 처리한 후 4주 동안 7일 간격으로 균핵이 들어있는 주머니를 꺼내 회수율[(포트토양에 묻은 균핵 개수 대비 분해되지 않은 균핵 개수의 백분율(%)]과 생존율[(포트토양에 묻힌 균핵 개수 대비 발아한 균핵 개수의 백분율(%)]을 관찰한 결과 균핵의 회수율은 40−95%, 생존율은 20−85%를 나타냈다.
- cereus C210의 경우 배양액의 원액에 대해서 4주 후의 균핵 회수율은 각각 55%, 40%를 나타냈으며, 생존율은 각각 35%, 20%를 나타냈고 (Table 4), 10배 희석액에 대해서도 조사한 결과에서도 유사한 결과를 나타내(Table 5) 다른 균주들에 비해 균핵의 생존과 발아억제에 효과가 있는 것으로 나타났다. 실험에 사용된 균핵의 평균 생존율(발아율)은 95%로 TSB 용액과 물을 처리한 대조구에서 균핵의 회수율은 각각 90%와 95%이고, 생존율은 80%와 85%로 미생물처리에 의한 균핵 회수율과 생존율의 효과는 인정된다고 판단된다.
- 각 균주별로 처리당 5반복으로 수행하였고, 무처리는 15반복으로 수행하였다. 실험에 사용한 균핵의 평균 발아율은 95%였으나 PDA 상에서 발아를 확인한 균핵만을 사용하였음으로 접종원의 양은 동일하다고 판단하였다. 아울러 상토에 있는 미생물의 영향을 제거하기 위해 상토는 고압멸균용 비닐에 담아 3일 동안 1일 간격으로 121°C에서 30분간 고온고압 살균처리 것을 사용하였다.
- 실험 균주를 TSB에서 배양한 배양액 원액과 10배 희석액을 균핵이 들어있는 포트에 처리한 후 4주 동안 7일 간격으로 균핵이 들어있는 주머니를 꺼내 회수율[(포트토양에 묻은 균핵 개수 대비 분해되지 않은 균핵 개수의 백분율(%)]과 생존율[(포트토양에 묻힌 균핵 개수 대비 발아한 균핵 개수의 백분율(%)]을 관찰한 결과 균핵의 회수율은 40−95%, 생존율은 20−85%를 나타냈다. 특히, Bacillus megaterium DK6와 B. cereus C210의 경우 배양액의 원액에 대해서 4주 후의 균핵 회수율은 각각 55%, 40%를 나타냈으며, 생존율은 각각 35%, 20%를 나타냈고 (Table 4), 10배 희석액에 대해서도 조사한 결과에서도 유사한 결과를 나타내(Table 5) 다른 균주들에 비해 균핵의 생존과 발아억제에 효과가 있는 것으로 나타났다. 실험에 사용된 균핵의 평균 생존율(발아율)은 95%로 TSB 용액과 물을 처리한 대조구에서 균핵의 회수율은 각각 90%와 95%이고, 생존율은 80%와 85%로 미생물처리에 의한 균핵 회수율과 생존율의 효과는 인정된다고 판단된다.
후속연구
- megaterium(DK6)이 각각 20%와 35%의 균핵 생존율을 나타냈다. 겨울철에 온실 내에서 포트실험을 통해 상추 균핵병에 대해 방제효과를 조사한 결과 대조 구가 80%의 발병율을 나타냈으나, 26개 균주 중 9개 균주가 20% 정도의 발병율을 나타내 향후 상추 균핵병의 생물적 방제를 위한 길항세균으로서의 활용가치가 기대된다.
- 의 경우 바나나 fusarium 시들음병에 대한 방제 효과(Saravanan 등, 2003) 및 chitinase 생성에 의한 Fusarium roseum의 세포 분해에 의한 억제효과에 대한 보고가 있다(Morrissey 등, 1976). 따라서 본 연구결과 상추 균핵병균에 대하여 길항력이 인정되는 균주들을 활용한 생물학적 방제의 가능성에 대한 추가적인 실험이 기대된다.
- Fernando 등(2005)은 1차 전염원인 균핵의 토양 내 밀도가 감소할수록 균핵병을 효과적으로 방제할 수 있다고 하였고, 따라서 여름철 균핵상태로 월하하는 균핵을 대상으로 길항미생물을 처리하여 균핵의 생존율을 낮출 수 있다면 균핵병 방제에 효과적일 것으로 판단된다. 따라서 향후 상추 균핵병이 상습적으로 발생하고 있는 포장을 대상으로 효과가 인정되는 길항미생물을 여름철에 처리한 후 늦가을부터 초봄의 발생상황을 조사할 필요가 있다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.