상추재배시 문제가 되고 있는 균핵병과 시들음병에 대한 미생물 방제제 개발을 위하여 병해가 발생된 상추 포장에서 미생물을 분리하고, 길항미생물을 선발하여 균의 특성을 조사하고 균핵병에 대한 예방효과를 검정한 결과는 다음과 같다. 경기도 주요 상추 재배지에서 균핵병은 10월부터 발생하여 다음해 5월까지 발생하였으며, 12월에는 최대 40%까지 발생하여 피해를 주고 있었다. 균핵병과 시들음병에 모두 억제효과가 있는 균주를 대치배양을 통해 선발하였다. 선발됨 균주는 Vitek 2의 BCL카드를 이용한 생화학적반응과 형태적 확인, 16s rRNA 분석을 통해 동정한 결과 Bacillus subtilis로 동정되었고 B. subtilis GG95로 명명하였다. B. subtilis GG95의 배양특성을 조사한 결과 온도 $25{\sim}30^{\circ}C$, 산도 7의 배양조건에서 배양이 잘 되었으며, 배양에 적정한 영양원은 탄소원 전분, 질소원 tryptone과 yeast extract를 무기염류$MgCl_2$를 사용하였을 때 가장 잘 되었다. 영양원에 따라 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 탄소원은 fructose, maltose였고 질소원은 peptone였으며, 무기염류는 균핵병은 $CaCl_2$, $K_2HPO_4$, 시들음병은 $MgSO_47H_2O$로 병원균에 대한 길항효과가 차이가 있었다. 상추 균핵병에 대한 B. subtilis GG95의 포장검정 결과 $1{\times}10^8cfu/mL$ 농도의 길항미생물 배양액을 포기당 10 mL씩 3회 관주하고 균핵병원균을 접종한 후 균핵병의 발병정도를 조사한 결과 88% 방제효과가 나타났다.
상추재배시 문제가 되고 있는 균핵병과 시들음병에 대한 미생물 방제제 개발을 위하여 병해가 발생된 상추 포장에서 미생물을 분리하고, 길항미생물을 선발하여 균의 특성을 조사하고 균핵병에 대한 예방효과를 검정한 결과는 다음과 같다. 경기도 주요 상추 재배지에서 균핵병은 10월부터 발생하여 다음해 5월까지 발생하였으며, 12월에는 최대 40%까지 발생하여 피해를 주고 있었다. 균핵병과 시들음병에 모두 억제효과가 있는 균주를 대치배양을 통해 선발하였다. 선발됨 균주는 Vitek 2의 BCL카드를 이용한 생화학적반응과 형태적 확인, 16s rRNA 분석을 통해 동정한 결과 Bacillus subtilis로 동정되었고 B. subtilis GG95로 명명하였다. B. subtilis GG95의 배양특성을 조사한 결과 온도 $25{\sim}30^{\circ}C$, 산도 7의 배양조건에서 배양이 잘 되었으며, 배양에 적정한 영양원은 탄소원 전분, 질소원 tryptone과 yeast extract를 무기염류 $MgCl_2$를 사용하였을 때 가장 잘 되었다. 영양원에 따라 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 탄소원은 fructose, maltose였고 질소원은 peptone였으며, 무기염류는 균핵병은 $CaCl_2$, $K_2HPO_4$, 시들음병은 $MgSO_47H_2O$로 병원균에 대한 길항효과가 차이가 있었다. 상추 균핵병에 대한 B. subtilis GG95의 포장검정 결과 $1{\times}10^8cfu/mL$ 농도의 길항미생물 배양액을 포기당 10 mL씩 3회 관주하고 균핵병원균을 접종한 후 균핵병의 발병정도를 조사한 결과 88% 방제효과가 나타났다.
Sclerotinia sclerotiorum, a plant pathogenic fungus, can cause serious yield and quality losses in the winter lettuce field. For biological control of S. sclerotiorum, soil-born microorganisms that inhibit the mycelia growth of S. sclerotiorum and Fusarium oxysporum were isolated from diseased soil....
Sclerotinia sclerotiorum, a plant pathogenic fungus, can cause serious yield and quality losses in the winter lettuce field. For biological control of S. sclerotiorum, soil-born microorganisms that inhibit the mycelia growth of S. sclerotiorum and Fusarium oxysporum were isolated from diseased soil. Among the isolates, bacterial isolate, GG95, which was identified as Bacillus subtilis according to the morphological, physiological characteristics and by 16S rRNA similarity, showed the highest level of inhibitory activity. The growth conditions for B. subtilis GG95 were optimized in TSB media (pH 7) by culturing at $28^{\circ}C$ for 24 hrs. Maltose or fructose and peptone were selected as the best carbon and nitrogen sources, respectively. Greenhouse experiment was performed to test effectiveness of B. subtilis GG95 in the control sclerotinia rot. Drench application ($1{\times}10^8cfu/mL$, 3 times) of the bacterial culture broth to lettuce showed an effectiveness value of 88%, suggesting that B. subtilis GG95 would be a promising biocontrol agent for control of sclerotinia rot.
Sclerotinia sclerotiorum, a plant pathogenic fungus, can cause serious yield and quality losses in the winter lettuce field. For biological control of S. sclerotiorum, soil-born microorganisms that inhibit the mycelia growth of S. sclerotiorum and Fusarium oxysporum were isolated from diseased soil. Among the isolates, bacterial isolate, GG95, which was identified as Bacillus subtilis according to the morphological, physiological characteristics and by 16S rRNA similarity, showed the highest level of inhibitory activity. The growth conditions for B. subtilis GG95 were optimized in TSB media (pH 7) by culturing at $28^{\circ}C$ for 24 hrs. Maltose or fructose and peptone were selected as the best carbon and nitrogen sources, respectively. Greenhouse experiment was performed to test effectiveness of B. subtilis GG95 in the control sclerotinia rot. Drench application ($1{\times}10^8cfu/mL$, 3 times) of the bacterial culture broth to lettuce showed an effectiveness value of 88%, suggesting that B. subtilis GG95 would be a promising biocontrol agent for control of sclerotinia rot.
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문제 정의
본 연구는 상추 연작 재배지에서 심한 피해를 주고 있는 문제 병해인 균핵병과 시들음병(fusarium wilt)을 대상으로 친환경 및 유기재배 농가에서 농약을 대체 사용할 수 있는 미생물 방제제를 개발하기 위하여, 시설재배 상추의 근권 토양에서 미생물을 분리, 길항미생물을 선발, 동정하고 생물적 방제 가능성을 탐색하고자 수행하였다.
제안 방법
경기도 내 주요 시설채소 재배지역인 고양, 용인, 이천 등을 중심으로 2009년 1월부터 균핵병과 시들음병 발생율을 조사하였다. 겨울철에는 균핵병이 발생한 상추를 채취하고, 여름철에는 시들음병 병징을 보이는 상추의 뿌리를 채취하여 병든 조직 또는 균사 및 균핵으로부터 균행병을 분리하였고, 시들음병균은 감염된 뿌리의 절편을 분리하여 1% sodium hypochloride, 70% EtOH에 약 1분간 표면살균 후멸균수로 세척하여 potato dextrose agar(PDA, BD Co., Sparks, MD) 평판배지 위에 놓고 25℃, 암조건 하에서 2일간 배양하였다. 평판배지에서 자라는 균사절편을 PDA 평판배지에 2~3회 반복 이식하여 병원균을 순수 분리하였다.
cfu/mL 농도로 포기당 10 mL씩 일주일 간격으로 3회 관주하였다. 그 후 상추 균핵병에서 분리한 병원균을 15℃ PDA 배지에서 2주 이상 배양하여 형성된 균핵을 상추 포기당 3개씩 뿌리 부분의 토양 속에 5 cm 깊이로 접종하고, 1주 후부터 균핵병의 발병정도를 조사하면서 6주 후의 방제가를 조사하였다.
5%씩 첨가하여 배양정도와 항균활성을 조사하였다. 무기염류는 최소배지에서 무기염류인 K2HPO4 0.7%, KH2PO4 0.2%, MgSO47H2 O 0.01% 대신 MgCl2 등 각각의 무기염류를 5 mM씩 첨가하여 길항미생물의 배양과 항균활성을 비교하였다.
분리된 균핵병균과 시들음병균에 대해 상추 재배지 토양 에서 분리한 220균주를 대상으로 PDA 배지에서 1주일간 대치 배양을 통해 균사생육 억제효과가 좋은 균주 5종을 1차 선발하였다(Table 2). 그 중 두 병원균에 대해 모두 12 mm 이상의 저지대를 형성하며 길항효과를 보인 GG95 균주를 최종 선발하였다(Fig 1(B)).
비닐하우스에 상추를 정식한 후 포장 내 토양에 25℃, 180 rpm으로 TSB배지에서 24시간 배양한 길항미생물 배양액을 1×108 cfu/mL 농도로 포기당 10 mL씩 일주일 간격으로 3회 관주하였다.
상추의 균핵병과 시들음병에 대해 모두 길항력을 가진 미생물 균주의 생화학적 특성은 세균동정기 Vitek 2 compact(BioMrieux, Inc., Hazelwood, MO)의 BCL카드를 이용 하여 조사하였고, 16s rRNA 염기서열 분석을 통해 NCBI blast 검색으로 유전적 동정을 하였으며, 형태적 확인을 위해 주사전자현미경(HITACHI S-3000)으로 관찰하였다.
상추재배시 문제가 되고 있는 균핵병과 시들음병에 대한 미생물 방제제 개발을 위하여 병해가 발생된 상추 포장에서 미생물을 분리하고, 길항미생물을 선발하여 균의 특성을 조사하고 균핵병에 대한 예방효과를 검정한 결과는 다음과 같다. 경기도 주요 상추 재배지에서 균핵병은 10월부터 발생하여 다음해 5월까지 발생하였으며, 12월에는 최대 40%까지 발생하여 피해를 주고 있었다.
선발된 길항미생물에 대한 적정 배양조건 확인을 위해 온도범위 5℃ 간격으로 10~35℃ 사이에서 180 rpm 24시간 배양 후 분광광도계에서 OD 600 nm에서 값을 측정하였고, pH는 pH 3~8 사이에서 pH 1 간격으로 조사하였다. 적정한 영양원을 선발하기 위해 최소배지(K2HPO4 0.
선발된 길항미생물에 대한 적정 배양조건 확인을 위해 온도범위 5℃ 간격으로 10~35℃ 사이에서 180 rpm 24시간 배양 후 분광광도계에서 OD 600 nm에서 값을 측정하였고, pH는 pH 3~8 사이에서 pH 1 간격으로 조사하였다. 적정한 영양원을 선발하기 위해 최소배지(K2HPO4 0.7%, KH2PO4 0.2%, glucose 0.5%, (NH4)2SO4 0.1%, MgSO47H2O 0.01%)에 탄소원을 결정하기 위해 glucose를 제외하고 sucrose 등 각각의 탄소원을 전체용액에 1% 농도로 첨가하여 25℃, 180 rpm으로 24시간 배양 후 배양정도와 균핵병균과 시들음병균에 대치 배양하여 항균활성을 측정하였다. 질소원은 최소배지에서 (NH4)2SO4 0.
01%)에 탄소원을 결정하기 위해 glucose를 제외하고 sucrose 등 각각의 탄소원을 전체용액에 1% 농도로 첨가하여 25℃, 180 rpm으로 24시간 배양 후 배양정도와 균핵병균과 시들음병균에 대치 배양하여 항균활성을 측정하였다. 질소원은 최소배지에서 (NH4)2SO4 0.1% 대신 peptone 등 질소원을 0.5%씩 첨가하여 배양정도와 항균활성을 조사하였다. 무기염류는 최소배지에서 무기염류인 K2HPO4 0.
대상 데이터
경기도 내 주요 시설재배 포장에서 근권부위 토양을 채취하여 10 g의 토양을 살균수 90 mL과 혼합하고, 1 mL을 채취하여 9 mL 멸균수에 차례대로 희석한 후 nutrient agar (NA, BD co.)배지에 100 µL씩 평판희석법으로 25℃에서 3일 이상 배양하였다.
경기도 내 주요 시설채소 재배지역인 고양, 용인, 이천 등을 중심으로 2009년 1월부터 균핵병과 시들음병 발생율을 조사하였다. 겨울철에는 균핵병이 발생한 상추를 채취하고, 여름철에는 시들음병 병징을 보이는 상추의 뿌리를 채취하여 병든 조직 또는 균사 및 균핵으로부터 균행병을 분리하였고, 시들음병균은 감염된 뿌리의 절편을 분리하여 1% sodium hypochloride, 70% EtOH에 약 1분간 표면살균 후멸균수로 세척하여 potato dextrose agar(PDA, BD Co.
경기도 주요 상추 재배지에서 균핵병은 10월부터 발생하여 다음해 5월까지 발생하였으며, 12월에는 최대 40%까지 발생하여 피해를 주고 있었다. 균핵병과 시들음병에 모두 억제효과가 있는 균주를 대치배양을 통해 선발하였다. 선발됨 균주는 Vitek 2의 BCL카드를 이용한 생화학 적반응과 형태적 확인, 16s rRNA 분석을 통해 동정한 결과 Bacillus subtilis로 동정되었고 B.
분리된 균핵병균과 시들음병균에 대해 상추 재배지 토양 에서 분리한 220균주를 대상으로 PDA 배지에서 1주일간 대치 배양을 통해 균사생육 억제효과가 좋은 균주 5종을 1차 선발하였다(Table 2). 그 중 두 병원균에 대해 모두 12 mm 이상의 저지대를 형성하며 길항효과를 보인 GG95 균주를 최종 선발하였다(Fig 1(B)).
Fusarium균에 의한 시들음병은 김 등 [14]이 보고한 바와 같이 생육이 저조하고 포기 전체가 위축되며 하엽이 황화되는 증상을 보이며 줄기 기부를 절단 해보면 도관부가 원형으로 갈변되는 증상을 보였다. 본 시험에 사용된 병원균은 조사지역에서 위와 같은 병징을 보이는 식물체에서 분리된 균핵병균과 시들음병균을 이용하였다.
)배지에 100 µL씩 평판희석법으로 25℃에서 3일 이상 배양하였다. 이후 생성된 다양한 콜로니에서 분리한 220균주를 대상으로, 수집 및 분리해 보관 중인 상추 균핵병균 S. sclerotiorum와 시들음병균 Fusarium oxysporum에 대하여 7일 이상 25℃에서 대치배양 후 형성되는 병원균의 균사생육 저지대를 조사하여 길항력이 높은 균주를 선발하였다.
성능/효과
B. subtilis GG95 배양에 적정한 영양원은 전분을 탄소원으로 이용하였을 경우 배양이 가장 잘 되었으나 탄소원별 병원균에 대한 억제력은 균핵병에는 fructose, 시들음병에는 maltose를 탄소원으로 이용하였을 경우 억제대가 각각 8.5와 9.0 mm 이상으로 가장 크게 나타났다(Table 3). Table 4는 선발균에 대해 tryptone과 peptone을 질소원으로 이용하였을 때 배양이 가장 잘 되었으며, 질소원별 병원균에 대한 억제력은 peptone을 이용하였을 때 균핵병에 대한 억제대가 13 mm, 시들음병균에 대한 억제대는 tryptone 이용한 경우 7.
B. subtilis GG95에 대한 배양적 특성을 조사한 결과 Fig 3과 같이 배양온도 25℃에서 600 nm 흡광도 1.0으로 배양이 가장 우수하였으며 그 이상의 온도에서는 균 배양에 대한 흡광도가 떨어지는 것으로 나타나 35℃이상의 고온배 양은 피해야 할 것으로 판단된다. 적정한 배양 산도는 pH 7에서 흡광도 1.
subtilis GG95로 명명하였다. B. subtilis GG95의 배양특성을 조사한 결과 온도 25~ 30℃, 산도 7의 배양조건에서 배양이 잘 되었으며, 배양에 적정한 영양원은 탄소원 전분, 질소원 tryptone과 yeast extract를 무기염류 MgCl2를 사용하였을 때 가장 잘 되었다. 영양원에 따라 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 탄소원은 fructose, maltose였고 질소원은 peptone였으며, 무기염류는 균핵병은 CaCl2, K2HPO4, 시들음병은 MgSO47H2O로 병원균에 대한 길항효과가 차이가 있었다.
0 mm 이상으로 가장 크게 나타났다(Table 3). Table 4는 선발균에 대해 tryptone과 peptone을 질소원으로 이용하였을 때 배양이 가장 잘 되었으며, 질소원별 병원균에 대한 억제력은 peptone을 이용하였을 때 균핵병에 대한 억제대가 13 mm, 시들음병균에 대한 억제대는 tryptone 이용한 경우 7.5 mm로 억제대가 가장 좋았다. 이는 최적 탄소원으로 fructose, 질소원으로 peptone, yeast extract 결과를 얻은 정 등[17]의 결과와 비슷하였다.
한편, 상추 시들음병은 연작 재배한 시설 하우스에서는 3월부터 발생되기 시작하여 9월까지 꾸준히 발생하였으며, 기온이 높은 여름철엔 최대 95%까지 발생하여 큰 피해를 주었다(Table 1). 균핵병의 병징을 관찰한 결과, 상추의 지제부와 잎에 수침상의 병반이 형성되어 갈색 내지 흑갈색으로 변하다가, 습도가 높아지면서 발병부위의 무름 증상이 심해지고, 흰색 균사가 덮이면서 식물체 전체가 고사하고 잎은 종잇장처럼 마르기도 하며, 균사와 함께 흑색의 균핵이 형성되었다. 이는 Baek 등[13]이 보고한 수침상의 담갈색 병반을 나타내고, 흰색 솜모양의 균사가 자란 후 검고 둥근 균핵이 형성된다는 결구상추의 균핵병 증상과도 유사하였다.
무기염류의 경우 Table 5와 같이 MgCl2를 배지의 영양원으로 이용하였을 때 흡광도 1.0 이상으로 균의 배양이 잘되었고 균핵병에 대한 억제력은 CaCl2를 이용하였을 경우 억제대가 10.0 mm로 가장 크게 나타났으며, 시들음병균에 대한 억제력은 대체로 낮은 편이었으나 MgSO47H2O을 이용한 경우 5.0 mm로 가장 억제대가 크게 나타났다.
비닐하우스에 상추를 정식한 후 1×108 cfu/mL 농도의 길항미생물 배양액을 포기당 10 mL씩 3회 관주하고 균핵병원균을 접종한 후 1주일 이후부터 균핵병의 발병정도를 조사한 결과 GG95를 처리한 경우 평균 발병주율이 2%로 농약처리 3.4%보다 발병주율이 낮았으며 Fig. 3과 같이 무처리 대비 방제가 88%로 베노밀 처리구와 대등한 효과를 보였다(Table 6).
영양원에 따라 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 탄소원은 fructose, maltose였고 질소원은 peptone였으며, 무기염류는 균핵병은 CaCl2, K2HPO4, 시들음병은 MgSO47H2O로 병원균에 대한 길항효과가 차이가 있었다. 상추 균핵병에 대한 B. subtilis GG95의 포장검정 결과 1×108 cfu/mL 농도의 길항미생물 배양액을 포기당 10 mL씩 3회 관주하고 균핵병원균을 접종한 후 균핵병의 발병정도를 조사한 결과 88% 방제효과가 나타났다.
상추의 균핵병과 시들음병에 대해 길항력을 가진 GG95 균주를 16s rRNA 염기서열 분석을 통해 NCBI blast 검색으로 유전적 동정한 결과 Bacillus subtilis strains와 99%의상동성을 보였으며, 전자현미경 검경결과 간균 형태로 전형적인 바실러스 모양이었다(Fig 1(A)). 생화학적 특성검 사를 위한 VITEK compact의 BCL 카드의 검정결과 김 등[15]과 같이 phenylalanine 음성반응과 mannose, glucose, mannitol, xylosidase에 양성반응 등 유사한 생화학적 반응을 보임으로 B.
상추의 균핵병과 시들음병에 대해 길항력을 가진 GG95 균주를 16s rRNA 염기서열 분석을 통해 NCBI blast 검색으로 유전적 동정한 결과 Bacillus subtilis strains와 99%의상동성을 보였으며, 전자현미경 검경결과 간균 형태로 전형적인 바실러스 모양이었다(Fig 1(A)). 생화학적 특성검 사를 위한 VITEK compact의 BCL 카드의 검정결과 김 등[15]과 같이 phenylalanine 음성반응과 mannose, glucose, mannitol, xylosidase에 양성반응 등 유사한 생화학적 반응을 보임으로 B. subtilis strains으로 동정되었다(Table 3). 이에 분리된 동정균을 B.
균핵병과 시들음병에 모두 억제효과가 있는 균주를 대치배양을 통해 선발하였다. 선발됨 균주는 Vitek 2의 BCL카드를 이용한 생화학 적반응과 형태적 확인, 16s rRNA 분석을 통해 동정한 결과 Bacillus subtilis로 동정되었고 B. subtilis GG95로 명명하였다. B.
subtilis GG95의 배양특성을 조사한 결과 온도 25~ 30℃, 산도 7의 배양조건에서 배양이 잘 되었으며, 배양에 적정한 영양원은 탄소원 전분, 질소원 tryptone과 yeast extract를 무기염류 MgCl2를 사용하였을 때 가장 잘 되었다. 영양원에 따라 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 탄소원은 fructose, maltose였고 질소원은 peptone였으며, 무기염류는 균핵병은 CaCl2, K2HPO4, 시들음병은 MgSO47H2O로 병원균에 대한 길항효과가 차이가 있었다. 상추 균핵병에 대한 B.
subtilis strains으로 동정되었다(Table 3). 이에 분리된 동정균을 B. subtilis GG95로 명명하였다. Handelsman 등[16]은 Bacillus 속균은 내생 포자를 형성하여 내 열성과 내건성 특성을 가져 제형화에 많은 장점을 가지고 있다고 하였으며, 이에 선발한 B.
0으로 배양이 가장 우수하였으며 그 이상의 온도에서는 균 배양에 대한 흡광도가 떨어지는 것으로 나타나 35℃이상의 고온배 양은 피해야 할 것으로 판단된다. 적정한 배양 산도는 pH 7에서 흡광도 1.0으로 가장 잘 배양이 되었으며, pH 6이하 에서는 급격히 배양이 떨어지는 것으로 나타났다(Fig 2). 김 등[14]은 25℃에서 균의 생장이 가장 높았으며 항진균 물질 생산은 25~30℃에서 가장 높았다는 결과와 유사하였으나 최적 pH는 4.
후속연구
7%로 가장 효과적이었으며, Moon 등[18]의 Bacillus 균주를 이용한 수화제형 제제를 들깨 균핵병에 대한 적용시 예방효 과가 전반적으로 높았다. 본 연구에서도 토양병 방제를 위해 길항미생물인 B. subtilis GG95를 작물 정식 직후 관주 처리함으로써 균핵병의 발생을 예방할 수 있으며, 대량배양시 효능증진을 위한 제제화에 대한 연구와 함께 친환경 제제로써의 활용이 기대된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
Sclerotinia sclerotiorum에 의한 균핵병의 특징은?
상추에 발생하는 병은 약 28종이 국내에 보고되어 있으며[1], 그 중 Sclerotinia sclerotiorum에 의한 균핵병(sclerotinia rot)은 다범성균으로 64과 225속 383종의 식물을 침해 하고[2], 특히 겨울철 저온 다습한 환경에서 발생이 심하며 기주 범위가 매우 넓어 상추 뿐만 아니라 거의 모든 채소작물에 발생하며 경제적 피해가 심각하다[3-5]. 이러한 균핵병 등의 토양병해를 방제하기 위해 지금까지 농가에서는 프로파, 베노밀 등의 다양한 화학농약을 살포하고 있으나 그 효과가 크지 않고, 인축에 대한 독성과 잔류농약에 대한 환경오염 등의 화학적 방제의 문제를 해결하기 위한 대체수단이 절실히 요구되고 있다.
해외에서 균핵병 방제에 이용한 길항균은?
그 해결책으로 친환경 또는 유기농자재를 이용하는 생물학적 방제가 시도되고 있다[4, 6-8]. 특히 생물적 방제를 위해서 외국에서는 Coniothytium minitans [9], Trichoderma viride [10] 등 길항균을 이용한 균핵병 방제가 보고된 바 있으며, 우리나라에서도 다양한 길항균을 이용한 생물적 방제에 대한 시도가 이루 어지고 있다[11, 12].
B. subtilis GG95이 상추의 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 경우의, 탄소원과 질소원, 무기염류는?
subtilis GG95의 배양특성을 조사한 결과 온도 25~ 30℃, 산도 7의 배양조건에서 배양이 잘 되었으며, 배양에 적정한 영양원은 탄소원 전분, 질소원 tryptone과 yeast extract를 무기염류 MgCl2를 사용하였을 때 가장 잘 되었다. 영양원에 따라 균핵병과 시들음병에 대한 길항효과가 좋은 탄소원은 fructose, maltose였고 질소원은 peptone였으며, 무기염류는 균핵병은 CaCl2, K2HPO4, 시들음병은 MgSO47H2O로 병원균에 대한 길항효과가 차이가 있었다. 상추 균핵병에 대한 B.
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