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문제 정의
- 국가공정서인「대한민국약전외 의약품 기준 (Korean Pharmaceutical Codex, KPC)」수재 의약품 중에는 개발된 지 오래되어 붕해시험이 설정된 의약품이 다수 포함되어 있어 용출규격의 설정이 필요한 실정이다.1) 이에 본 연구에서는 「대한민국약전외 의약품 기준」 수재 의약품 중 용출규격이 미설정된 제제의 용출규격을 설정함으로써 경구용 고형제제의 적절한 품질관리를 도모하고자 하였다.1) 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정은 용출규격이 미설정된 의약품이며, 아세브로필린(Acebrophylline, 1,2,3,6-tetrahydro-1,3-dimethyl-2,6-dioxo7H-Purine-7-acetic acid compd.
제안 방법
- − 용출시험 분석법의 밸리데이션 결과 포토다이오드어레이(PDA)를 이용하여 주성분 피크의 단일성 여부를 확인하였다(Fig. 5).
- − 용출시험분석법의 밸리데이션 결과 포토다이오드어레이(PDA)를 이용하여 주성분 피크의 단일성 여부를 확인하였다(Fig. 6).
- − 특이성은 표준액 및 용출시험액을 검액으로 하여 이들의 크로마토그램 및 포토다이오드어레이(PDA)를 이용하여 첨가제에 의한 주성분 피크의 간섭여부를 확인하였다.
- 8 시험액 및 물)에 대한 용출시험을 수행하였다.2) 그 중 예비시험 결과를 바탕으로 용출액을 아세브로필린 캡슐은 물을 시험액으로 정하였고, 브롬헥신염산염 정은 pH 1.2를 시험액으로 선정하였다. 선정된 용출액으로 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정의 용출시험의 분석방법을 설정하기 위해 "의약품등 시험방법 밸리데이션 가이드라인"에 따라 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 정량 한계를 확인하였으며,5) 용출규격 설정에 적합한 용출시험법을 개발하였다.
- 6) "의약품동등성시험기준"에 따른 용출액 4가지(pH 1.2, pH 4.0, pH 6.8 시험액 및 물)를「대한민국약전」 10개정에 명시된 규정에 따라 제조하여 900 ml씩 사용하였고,4) 용출액 채취간격(5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120분)과 회전속도(50 rpm) 조건도 고려하였다.
- 7-9) 브롬헥신염산염의 HPLC 분석조건은 Capcell Pak C18(5 µm, 150×4.6 mm) 칼럼을 사용하여 0.02 mol/l 인산이수소칼륨시액에 인산을 넣어 pH 3.5로 조정한 액과 메탄올의 혼합액을 500 : 500의 비율로 조제한 이동상으로 유량 1.0 ml/min로 하여 자외부흡광광도계의 측정파장을 250 nm로 하여 분석하였다.
- 본 연구에서는 예비시험에서 선정된 용출조건에서의 분석법을 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 정량한계 측정을 통해 조건을 확립하였다. 아세브로필린의 HPLC 분석조건은 Capcell Pak C18 (5 µm, 150×4.
- 선정된 용출액으로 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정의 용출시험의 분석방법을 설정하기 위해 "의약품등 시험방법 밸리데이션 가이드라인"에 따라 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 정량 한계를 확인하였으며,5) 용출규격 설정에 적합한 용출시험법을 개발하였다.
- 선정된 용출액으로 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정의 용출시험의 분석방법을 설정하기 위해 "의약품등 시험방법 밸리데이션 가이드라인"에 따라 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 정량 한계를 확인하였으며,5) 용출규격 설정에 적합한 용출시험법을 개발하였다. 시험결과를 토대로 용출시험 규격을 설정하고 실험실 간 교차시험을 통해 검증하였다.12-14) 또한 국내유통 의약품 중에서 대조약 이외의 제품을 시험약으로 이용하여 확립된 시험법과 규격을 적용해 보았다.
- 식약처의 "경구용 의약품의 용출규격 설정 가이드라인"과 "의약품동등성시험기준"을 참고하여 용출규격 설정시험을 실시하고,2,4) 용출시험 분석방법을 설정하기 위해서는 기존에 보고된 분석방법 등을 참고하여 예비시험을 거쳐 확정하였다.
- 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정의 용출시험조건 설정을 위해 시험약을 선정하여 "경구용의약품의 용출규격 설정 가이드라인"에 따라 각 용출액(pH 1.2, pH 4.0, pH 6.8 시험액 및 물)에 대한 용출시험을 수행하였다.
- 아세브로필린의 HPLC 분석조건은 Capcell Pak C18 (5 µm, 150×4.6 mm) 칼럼을 사용하여 탄산암모늄 1g을 물 1000 ml에 녹이고 이 액 430 ml에 아세토니트릴 570 ml를 넣어 조제한 이동상으로 유량 1.0 ml/min로 하여 자외부흡광광도계의 측정파장을 244 nm로 하여 분석하였다.
- 예비시험 및 HPLC의 분석조건을 바탕으로 설정된 용출시험액 및 용출조건(Table II, Table III)으로 아세브로필린 캡슐은 대조약 A-1, A-2, A-3, 시험약 B-1, C-에 대하여, 브롬헥신염산염 정은 대조약 D-1, D-2, D-3, 시험약 E-1, F-1에 대하여 한 품목당 검체 12개에 대하여 본시험 및 실험실간 교차시험(실험실 B)을 실시하였다.10,11)
- 고성능 액체크로마토그래프(HPLC) 이동상 제조에 사용한 아세토니트릴 및 메탄올 등의 시약은 Merck사(Darmstadt, Germany)의 HPLC 등급을 사용하였다. 용출기는 DISTEK사(North Brunswick, NJ, USA)의 Autosampler가 장착된 DISTEK EVOLUTION 6300을 사용하였고, HPLC는 Waters사(Milford, MA, USA)의 Alliance 2695 Separations Module, 2998 Photodiode Array Detector로 분석하였다.
- 8, 물)에서는 용해도가 낮아 물질의 석출이 일어났다. 이에 따라 농도 별 직선성이 떨어지는 것을 확인하여 브롬헥신염산염 정의 예비시험은 pH 1.2, pH 4.0 시험액에서만 실시하였다(Fig. 3). 대한민국약전 일반정보 "경구용의약품의 용출규격 설정 가이드라인" 예비시험 조건에 따라 DISTEK, US/210C 용출기를 사용하여 용출양상을 비교 검토한 결과 pH 1.
- 0 µg/ml)을 가지고 분석법의 전 조작을 6회 반복 측정한 결과로부터 상대표준편차(%)를 계산하여 정밀성을 평가하였다. 정량한계는 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법에 따라 구하였다.
- 정밀성은 브롬헥신염산염 표준품(99.7%) 16 mg을 정밀히 취하여 80% 메탄올에 녹여 정확하게 100 ml로 한 것을 표준원액(0.16 mg/ml)으로 하고, 표준원액 5ml를 취하여 시험액(pH 1.2)을 가하여 100 ml로 한 정밀성 시험용액(8.0 µg/ml)을 가지고 분석법의 전 조작을 6회 반복 측정한 결과로부터 상대표준편차(%)를 계산하여 정밀성을 평가하였다.
- 정밀성은 아세브로필린 표준품(99.3%) 100mg을 정밀히 취하여 50% 에탄올에 녹여 정확하게 50ml로 한 것을 표준원액(2.0mg/ml)으로 하고, 표준원액 5ml를 취하여 시험액(물)을 가하여 100 ml로 한 정밀성시험용액(100.0 µg/ml)을 가지고 분석법의 전 조작을 6회 반복 측정한 결과로부터 상대표준편차(%)를 계산하여 정밀성을 평가하였다.
- 직선성은 브롬헥신염산염 표준품(99.7%)을 80% 메탄올에 녹인 후 시험액(물)에 녹여 각각 약 0.8, 4.8, 6.4, 8.0, 9.6 µg/ml 해당액을 표준액 I, II, III, IV, V로 하여 분석법의 전 조작을 3회 수행하여 각각 직선식을 구하고, 각 직선식 결정계수(R2)로부터 직선성을 평가하였다.
- 직선성은 아세브로필린 표준품(99.3%)을 50% 에탄올에 녹인 후 시험액(물)에 녹여 각각 약 10.0, 60.0, 80.0, 100.0, 120.0 µg/ml 해당액을 표준액 I, II, III, IV, V로 하여 분석법의 전 조작을 3회 수행하여 각각 직선식을 구하고, 각 직선식 결정계수(R2)로부터 직선성을 평가하였다.
- 표준원액 및 제제 희석액을 취하여 시험액(pH 1.2)을 넣어 만든 각각 약 6.0, 8.0, 10.0 µg/ml 해당액을 정확성 시험용액으로 하여 각 농도의 정확성시험용액 I, II, III 용액에 대해서 분석법의 전 조작을 각 농도당 3회씩 반복 측정한 결과로부터 회수율(%)을 계산하여 정확성을 평가하였다.
- 표준원액 및 제제 희석액을 취하여 시험액(물)을 넣어 만든 각각 약 80.0, 100.0, 120.0 µg/ml 해당액을 정확성 시험용액으로 하여 각 농도의 정확성시험용액 I, II, III 용액에 대해서 분석법의 전 조작을 각 농도당 3회씩 반복 측정한 결과로부터 회수율(%)을 계산하여 정확성을 평가하였다.
대상 데이터
- 실험에 사용된 시험약은 임의적으로 선택한 아세브로필린 150 mg을 함유한 품목과 브롬헥신염산염 8 mg을 함유하는 품목을 선정하였다. 「대한민국약전외 의약품 기준」의 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정의 정량법에 따라 함량시험을 하였을 때, 품목별로 함량 차가 5% 이내인 롯트를 검체로 선정하였다 (Table I).1)
- 실험에 사용된 시험약은 임의적으로 선택한 아세브로필린 150 mg을 함유한 품목과 브롬헥신염산염 8 mg을 함유하는 품목을 선정하였다. 「대한민국약전외 의약품 기준」의 아세브로필린 캡슐과 브롬헥신염산염 정의 정량법에 따라 함량시험을 하였을 때, 품목별로 함량 차가 5% 이내인 롯트를 검체로 선정하였다 (Table I).
- 표준품은 아세브로필린은 현대약품(주)로부터 분양받아 사용하였으며, 브롬헥신염산염 표준품(Sigma, 17343, USA)은 구입하여 사용하였다. 고성능 액체크로마토그래프(HPLC) 이동상 제조에 사용한 아세토니트릴 및 메탄올 등의 시약은 Merck사(Darmstadt, Germany)의 HPLC 등급을 사용하였다.
이론/모형
- 각 제품의 검체 6개를 가지고「대한민국약전」일반시험법 중 용출시험법 제 2법(Paddle법)에 따라 예비시험을 실시하였다.6) "의약품동등성시험기준"에 따른 용출액 4가지(pH 1.
- 식약처의 "의약품등 시험방법 밸리데이션 가이드라인"에 따라 분석법 밸리데이션을 통하여 용출시험 분석법을 확립하였다.
- 8 시험액 및 물)를「대한민국약전」 10개정에 명시된 규정에 따라 제조하여 900 ml씩 사용하였고,4) 용출액 채취간격(5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120분)과 회전속도(50 rpm) 조건도 고려하였다. 용출률은 각 시험액에서의 안정성, 특이성을 확인한 후 HPLC 법으로 분석하여 계산하였다.
성능/효과
- 3%이었다. 동일 대상품목에 대한 실험실간 교차 시험와 각 개체 용출률 사이의 편차를 고려할 때 75%를 기준규격으로 설정하는 것이 타당하다고 사료된다.
- 브롬헥신염산염은 정확성 시험용액 I, II, III (각각 6.0, 8.0, 10.0 µg/ml)을 가지고 분석법 전 조작을 각 농도 3회씩 반복 측정한 결과 평균 회수율 100.79%, 표준편차 1.170%의 결과를 나타내었다(Table IX).
- 아세브로필린은 10.0~120.0 µg/ml의 범위에서 결정계수(R2) 0.999 이상을 나타내었고(Table IV), 정확성은 아세브로필린의 경우 표준액 I, II, III 용액(각각 80.0, 100.0, 120.0 µg/ml)을 가지고 분석법 전 조작을 각 농도 3회씩 반복 측정한 결과 평균 회수율 100.47%, 표준편차 0.607%의 결과를 나타내었다(Table V).
- 용출개시 30분 후 대조약 세 롯트에 대한 평균용출률은 각각 95.7±1.7%, 87.5±3.9%, 90.9±1.8%로 전체에 대한 평균용출률은 91.4±2.5%였다.
- 용출개시 45분 후 대조약 세 롯트에 대한 평균 용출률은 각각 89.9±5.4%, 89.4±6.9%, 91.5±5.4%로 전체에 대한 평균용출률은 90.3±5.9%였다.
- 정밀성시험용 표준액을 가지고 분석법의 전 조작을 6회 반복 측정한 결과로부터 구한 상대표준편차는 0.07%의 결과를 나타내었고(Table X), 정량한계는 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법에 따라 측정하였을 때 정량한계는 0.572 µg/ml로 나타났다 (Table XI).
- 정밀성은 정밀성 시험용액을 가지고 분석법의 전 조작을 6회 반복 측정한 결과로부터 구한 상대표준편차는 0.23%였으며(Table VI), 정량한계는 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법에 따라 측정하였을 때 6.374 µg/ml로 나타났다(Table VII).
후속연구
- 12-14) 또한 국내유통 의약품 중에서 대조약 이외의 제품을 시험약으로 이용하여 확립된 시험법과 규격을 적용해 보았다.15,16) 이는 신속하고 재현성 있는 시험법의 설정으로 의약품의 품질관리 수준을 향상시킬 수 있으며, 본 연구에서 제안하는 용출규격은 식품의약품안전처고시「대한민국약전외 의약품 기준」개정 시 기초자료로 활용 가능하며, 국내 유통의약품의 품질 향상 및 의약품 규격의 국제화에도 부합할 수 있을 것으로 기대된다.1)
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