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문제 정의
- 또한 한반도 내륙에서 성장하는 겨우살이보다 울릉도나 제주도에서 성장하는 겨우살이가 항암활성이 강하다는 민간의 주장에 대해서도 그 근거가 희박하다는 사실이 확인되었다. 다만 제주도나 울릉도 등 도서지역에서 자라는 다른 종의 겨우살 이와는 성분의 차이가 나타나는 것을 확인하였으므로 다음 논문에서 이에 대하여 논하고자 한다.
- 15-18) 겨우살이는 기주로부터 생존에 필요한 물과 영양분을 흡수하는 기생식물이기 때문에 기주의 종류에 따라 주요 함유성분의 함량이 어떻게 변화하는 지를 연구하는 것은 항암 등 약리 효과가 높은 개체를 대량으로 생산할 수 있는 자료를 제공할 뿐만 아니라 새로운 농가 소득원을 개발하는 일이 될 수 있다. 본 연구에서는 기주 식물에 따른 겨우살이의 주요성분 함량 변화를 분석할 목적으로 다양한 지역과 기주식물 등 성장 환경이 다른 32 종의 겨우살이를 채집하여 이들을 대상으로 (Table I) 겨우살이의 성장 환경에 따른 지표성분의 차이를 분석하였다. 먼저 각 성분의 효율적인 추출 조건을 검토하여 최적 조건에서 추출된 겨우살이 추출물을 대상으로 항암 활성을 나타내는 것으로 보고된 lectin과 세포독성을 나타내는 것으로 보고된 저분자 polypeptides viscotoxin이 단백질인 것을 감안하여 총 단백질 함량을 분석하였으며 항암활성을 나타내는 것으로 보고된 glycoprotein인 lectin과 항산화 활성을 나타내는 flavonoid 배당체인 homoflavoyadorinin-B, 또 다른 항암활성성분으로 보고된 triterpenoids인 oleanolic acid를 지표성분으로 정하고 HPLC를 이용하여 이 성분들의 함량 분석법을 개발하였으며 이 방법을 이용하여 같은 추출조건에서 조제한 32종 겨우살이의 지표성분 함량을 분석 하였다.
제안 방법
- Chromatographic Method를 이용한 Lectin 함량 분석 − 각 시료 중에 함유된 lectin의 함량이 극미량이어서 시료의 원액에서도 그 peak 확인이 어려웠으므로 모든 시료에 내부표준물질로 lectin 일정량을 첨가한 시료 검액을 조제하여 위와 같은 조건에서 chromatography를 시행하여 각 시료의 추출물에 존재하는 lectin의 함량을 정량하였다.
- Chromatographic Method를 이용한 Lectin 함량 분석 − 각 시료 중에 함유된 lectin의 함량이 극미량이어서 시료의 원액에서도 그 peak 확인이 어려웠으므로 모든 시료에 표준물질 일정량을 내부표준물질로 첨가하고 같은 조건에서 chromatography를 시행하였다.
- Column: C18, 5 µm, 4.6×250 mm; Detector: 210 nm; Flow rate: 1.0 ml/min; Injection Volume: 10 µl; Solvent: Acetonitrile/DW(90:10); Column temperature: 40o C. 검액을 각각 10 µl씩 주입하고 위에서와 같은 조건으로 HPLC를 실시하여 얻은 chromatogram 중 표준물질과 같은 retention time에 나타나는 peak의 면적을 적분하여 정량곡선으로부터 그 함량을 구하였다.
- Column: C18, 5 µm, 4.6×250 mm; Detector: 250 nm; Flow rate: 1.0 ml/min; Injection Volume: 10 µl; Solvent: Acetonitrile/DW (33:67); Column temperature: 40o C. 검액을 10 µl씩 주입하고 위에서와 같은 조건으로 HPLC를 실시하여 얻은 chromatogram 중 표준물질과 같은 retention time에 나타나는 peak의 면적을 적분하여 정량곡선으로부터 그 함량을 구하였다.
- HPLC를 이용한 Homoflavoyadorinin-B의 정량 분석법 −정량곡선을 작성하기 위하여 homoflavoyadorinin-B 3 mg을 정확히 평량하여 메탄올 300 µl에 녹여 10 mg/ml용액으로 만들고 이를 적절히 희석하여 3.125~50 µg/ml 농도의 표준액을 조제한 후 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을 10 µl씩 주입하고 다음의 조건에서 분석을 실시하여 정량곡선을 작성하였다(y=40.284x-23.346, r2=0.9983)(Fig. 2c).
- HPLC를 이용한 Oleanolic Acid의 정량 분석법 − HPLC를 이용하여 oleanolic acid를 지표물질로 하여 정량분석법을 개발하였다.
- 겨우살이 추출물에 존재하는 Homoflavoyadorinin-B의 함량 분석 − 위에서 조제한 시료 1~33 원액을 5-20배 적절히 희석한 후 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을검액으로 하여 다음의 조건에서 분석을 실시하였다.
- 겨우살이 추출물에 존재하는 Oleanolic Acid의 함량 분석 −위에서 조제한 시료 원액을 5-10배 적절히 희석한 후 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을 검액으로 하여 다음의 조건에서 분석을 실시하였다.
- 겨우살이 추출물에 존재하는 Oleanolic acid의 함량 분석 − 최적 추출 조건에 따라 조제한 시료 원액을 HPLC 검 액용 filter로 여과한 후 그 여액을 검액으로 표준물질을 분석한 조건과 같은 조건에서 분석을 실시하여 chromatogram을 얻었다.
- 겨우살이 추출물에 존재하는 homoflavoyadorinin-B의 함량 − 추출 조건에 따라 조제한 시료 원액을 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을 검액으로 표준 물질을 분석한 조건과 같은 조건에서 분석을 실시하여 chromatogram을 얻었다.
- 다양한 지역과 숙주 등 성장 환경 별로 채집된 겨우살이를 대상으로 겨우살이의 성장 환경에 따른 성분의 차이를 확인하고자 겨우살이로부터 활성을 나타내는 것으로 알려진 몇 가지 성분을 지표로 하여 함량을 비교 분석하였다. 항암활성을 나타내는 것으로 보고된 glycoprotein인 lectin과 세포독성을 나타내는 것으로 보고된 저분자 polypeptides인 viscotoxin이 단백질인 것을 감안하여 최적 조건에서 추출된 겨우살이 추출물을 대상으로 총 단백질 함량을 분석하였고 lectin 함량과 항산화활성을 나타내는 flavonoid 배당체인 homoflavoyadorinin-B와 항암활성성분으로 보고된 triterpenoids인 oleanolic acid를 지표성분으로 정하고 함량 분석을 시도하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 본 연구에서는 기주 식물에 따른 겨우살이의 주요성분 함량 변화를 분석할 목적으로 다양한 지역과 기주식물 등 성장 환경이 다른 32 종의 겨우살이를 채집하여 이들을 대상으로 (Table I) 겨우살이의 성장 환경에 따른 지표성분의 차이를 분석하였다. 먼저 각 성분의 효율적인 추출 조건을 검토하여 최적 조건에서 추출된 겨우살이 추출물을 대상으로 항암 활성을 나타내는 것으로 보고된 lectin과 세포독성을 나타내는 것으로 보고된 저분자 polypeptides viscotoxin이 단백질인 것을 감안하여 총 단백질 함량을 분석하였으며 항암활성을 나타내는 것으로 보고된 glycoprotein인 lectin과 항산화 활성을 나타내는 flavonoid 배당체인 homoflavoyadorinin-B, 또 다른 항암활성성분으로 보고된 triterpenoids인 oleanolic acid를 지표성분으로 정하고 HPLC를 이용하여 이 성분들의 함량 분석법을 개발하였으며 이 방법을 이용하여 같은 추출조건에서 조제한 32종 겨우살이의 지표성분 함량을 분석 하였다. Lee 등19)은 한국산 겨우살이에서 항암활성을 나타내는 주성분으로 lectin을 분리하여 보고 하였으며 최 등은 한국산 겨우살이로부터 Homoflavoyadorinin-B를 분리하여 겨우살이의 항산화 활성을 나타내는 주성분이며 이 성분이 겨우살이에서만 특이적으로 생합성되는 flavonoid로서 식물학적 의미가 크다고 보고하였다.
- 겨우살이 추출물에 존재하는 Oleanolic acid의 함량 분석 − 최적 추출 조건에 따라 조제한 시료 원액을 HPLC 검 액용 filter로 여과한 후 그 여액을 검액으로 표준물질을 분석한 조건과 같은 조건에서 분석을 실시하여 chromatogram을 얻었다. 미리 작성한 검량선과 같은 retention time에서 peak이 확인되었으며 검량선으로부터 그 함량을 구하였다. Oleanolic acid는 5% 메탄올을 용매로 할 경우 거의 추출되지 않았으며 80% 메탄올을 용매로 할 경우 실온 보다는 가열하는 조건에서 잘 추출되었다.
- 겨우살이 추출물에 존재하는 homoflavoyadorinin-B의 함량 − 추출 조건에 따라 조제한 시료 원액을 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을 검액으로 표준 물질을 분석한 조건과 같은 조건에서 분석을 실시하여 chromatogram을 얻었다. 미리 작성한 정량곡선과 같은 retention time에서 peak이 확인되었으며 정량곡선으로부터 그 함량을 구하였다. Fig.
- 성장지역에 따른 겨우살이의 Lectin 함량 분석 − Fig. 5에서는 겨우살이를 채집한 지역을 한반도 남부와 중부 이북, 그리고 도서지방으로 나누어 성장한 지역에 따라 lectin 함량이 변화하는지를 검토하였다.
- 9940). 위에서 추출한 시료 32종을 적절한 용매로 1000배 희석하고 Lowry 시약으로 발색하여 750 nm에서의 흡광도를 측정하여 미리 작성한 정량곡선으로부터 각 시료의 추출물에 존재하는 총 단백질함량을 정량 하였다. 이 실험은 7회 반복 실험하여 평균값을 구하였다.
- 3에서 겨우살이에 존재하는 lectin의 함량은 다양한 분포를 나타내는 것을 확인한 바 있다. 이 결과에서 기생하는 숙주나무에 따라 현저한 함량의 차이를 나타내는 것을 알 수 있으므로 참나무과 식물 23 종과 장미과 식물 2 종, 자작나무과 4 종, 느릅나무과 2 종인 숙주 나무의 종류에 따른 lectin의 함량을 분석해 보았다(Fig. 4). 먼저 참나무과 식물 중 신갈나무 5 종(1, 3, 6, 9, 29), 갈참나무 6 종(15, 16, 18, 22, 24, 25), 너도밤나무 3 종(10, 11, 40), 졸참나무 2 종(13, 14), 상수리 나무 3 종(19, 20, 30), 밤나무(5), 산밤나무(23), 바늘참나무(26) 각각 1 종씩으로부터 겨우살이가 채집되었다.
- 정량곡선을 작성하기 위하여 적절한 농도로 희석한 시료 19번과 lectin 6.25~100 µg/ml 농도의 표준액을 각각 20 µl씩 주입하여 위에서와 같은 조건에서 분석을 실시하였다.
- Lowry Method를 이용한 총 단백질 분석 − 겨우살이의 항암활성이 lectin 단백질뿐 아니라 viscotoxin 류의 단백질이 그 활성 물질인 것으로 보고되고 있어 총 단백질 함량은 중요한 지표분석이 될 수 있다. 표준물질인 lectin을 phosphate buffered saline(PBS, pH 6)에 녹여 이를 표준용액으로 정량 곡선을 작성하고 위에서 추출한 시료 32 종의 추출물에 존재하는 총 단백질 함량을 정량 하였다. 최적 추출 조건에서 추출된 단백질 함량을 분석한 결과는 Table II와 같다.
- 표준물질인 lectin을 평량하여 phosphate buffered saline (PBS, pH 6)에 녹여 1 mg/mL용액으로 만들고 이를 적절히 희석하여 6.25~100 µg/mL농도의 표준액을 조제하고 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을 20 µl씩 주입하여 chromatography를 수행하였다.
- 다양한 지역과 숙주 등 성장 환경 별로 채집된 겨우살이를 대상으로 겨우살이의 성장 환경에 따른 성분의 차이를 확인하고자 겨우살이로부터 활성을 나타내는 것으로 알려진 몇 가지 성분을 지표로 하여 함량을 비교 분석하였다. 항암활성을 나타내는 것으로 보고된 glycoprotein인 lectin과 세포독성을 나타내는 것으로 보고된 저분자 polypeptides인 viscotoxin이 단백질인 것을 감안하여 최적 조건에서 추출된 겨우살이 추출물을 대상으로 총 단백질 함량을 분석하였고 lectin 함량과 항산화활성을 나타내는 flavonoid 배당체인 homoflavoyadorinin-B와 항암활성성분으로 보고된 triterpenoids인 oleanolic acid를 지표성분으로 정하고 함량 분석을 시도하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 연구 결과에서 4 종의 지표성분 함량은 기주식물의 수종에 따라 변화하는 일정한 경향을 나타내지 않았고 성장 지역에 따라 homoflavoyadorinin-B의 함량 분포가 다른 것으로 나타났으나 lectin과 oleanolic acid의 경우에는 지역에 따른 함량 차이는 크지 않은 것을 알 수 있었다.
대상 데이터
- 미리 작성한 정량곡선과 같은 retention time에서 peak이 확인되었으며 정량곡선으로부터 그 함량을 구하였다. Fig. 3에서 보는 바와 같이 17, 21번의 겨우살이에서 다른 시료에 비하여 현저히 많은 함량의 flavonoid가 검출 되었으며(7.23, 6.74 mg/g 건조시료중량), 이 시료들은 광릉과 울진에서 산벗나무와 자작나무에 각각 기생하는 겨우살이들이다. 울릉도와 광릉에서 너도밤나무와 두메오리나무에 기생하는 겨우살이(10, 11, 12, 40)의 경우와 터어키산(27) 겨우살이는 다른 겨우살이에 비해 flavonoid 함량이 적은 것으로 나타났으며(0.
- 식물재료 및 추출물 검액조제 − 실험에 사용한 겨우살이 32종은 국립수목원 자원관리과에서 분양받았으며 표준품은 덕성여대 식물표본실에 별도로 보관하였다(수08-1~33).
- 식물재료 및 추출물 검액조제 − 실험에 사용한 겨우살이 32종은 국립수목원 자원관리과에서 분양받았으며 표준품은 덕성여대 식물표본실에 별도로 보관하였다(수08-1~33). 지표 성분으로 사용한 lectin(Sigma, USA)은 시약용으로 구입 하여 사용하였고 homoflavoyadorinin-B와 oleanolic acid는 경북대학교 약학대학 송경식 교수 연구실에서 분리한 것을 일정량씩 분양 받아 사용하였다. 지표성분이 여러 종류이므로 우선적으로 각 지표 성분의 최적 추출 조건을 확립하는 것이 중요한 일이다.
데이터처리
- Column: C18, 5 µm, 4.6×250 mm; Detector: 210 nm; Flow rate: 1.0 ml/min; Injection Volume: 10 µl; Solvent: Acetonitrile/DW(90:10); Column temperature: 40o C. Oleanolic acid는 7.8~7.9 min의 retention time에서 peak이 확인되었으며 이 실험은 7회 반복 실험하여 평균값을 구하였다.
- Column: C18, 5 µm, 4.6×250 mm; Detector: 250 nm; Flow rate: 1.0 ml/min; Injection Volume: 10 µl; Solvent: Acetonitrile/DW (33:67); Column temperature: 40o C. Homoflavoyadorinin-B의 peak는 6.7~6.8분의 retention time에서 확인되었으며 이 실험은 7회 반복 실험하여 평균값을 구하였다.
- 9905). 이 실험은 5회 반복 실험하여 평균값을 구하였다. 겨우살이 추출물에 존재하는 Homoflavoyadorinin-B의 함량 분석 − 위에서 조제한 시료 1~33 원액을 5-20배 적절히 희석한 후 HPLC 검액용 filter로 여과한 후 그 여액을검액으로 하여 다음의 조건에서 분석을 실시하였다.
- 위에서 추출한 시료 32종을 적절한 용매로 1000배 희석하고 Lowry 시약으로 발색하여 750 nm에서의 흡광도를 측정하여 미리 작성한 정량곡선으로부터 각 시료의 추출물에 존재하는 총 단백질함량을 정량 하였다. 이 실험은 7회 반복 실험하여 평균값을 구하였다.
- 위에서 추출한 시료 32종을 적절한 용매로 1000배 희석하고 Lowry 시약으로 발색하여 750 nm에서의 흡광도를 측정하여 미리 작성한 정량곡선으로부터 각 시료의 추출물에 존재하는 총 단백질함량을 정량 하였다. 이 실험은 7회 반복 실험하여 평균값을 구하였다.
- 통계분석 − 실험 결과는 Origin 41 통계프로그램을 이용하여 분석하였으며22) Student's t-test를 사용하여 유의차 검정을 하였다.
이론/모형
- 최적 추출 조건에서 추출된 단백질 함량을 분석한 결과는 Table II와 같다. 단백질 함량은 lectin을 표준물질로 하는 Lowry 방법으로 측정하였다. 시료의 건조 중량을 기준으로 시료 1g당 22.
- 총 단백질 정량 분석법 − 동물 조직과 식물 조직에 존재하는 단백질의 함량을 정량 하는 Lowry method를 이용하여 겨우살이 추출물의 총 단백질 함량을 분석하였다.
성능/효과
- Chromatographic Method를 이용한 Lectin 함량 분석 − 각 시료 중에 함유된 lectin의 함량이 극미량이어서 시료의 원액에서도 그 peak 확인이 어려웠으므로 모든 시료에 내부표준물질로 lectin 일정량을 첨가한 시료 검액을 조제하여 위와 같은 조건에서 chromatography를 시행하여 각 시료의 추출물에 존재하는 lectin의 함량을 정량하였다. Fig. 3에서 보는 바와 같이 시료 중에 존재하는 lectin의 함량은 다양한 분포를 나타냈으며 16번 시료인 광릉에서 채집한 갈참나무에 기생하는 겨우살이가 가장 많은 4.21 mg/g의 lectin을 함유하는 것으로 확인되었고 대부분의 시료에서 lectin의 함량은 1-2 mg/g 존재하는 것으로 확인되었다. 겨우살이로부터 lectin을 분리하여 보고한 논문에서도23) 그 함량을 1 mg/g dry weight 미만 정도인 것으로 보고하고 있어 이 실험 결과는 문헌과 일치하는 것으로 확인되었고 더욱 중요한 점은 겨우살이의 성장환경과 기주에 따라 lectin 단백질의 함량이 다양하게 변화한다는 것을 확인한 점이다.
- 7d는 성장지역이 서로 다른 겨우살 이들의 평균 oleanolic acid함유량을 비교한 그림이다. Homoflavoyadorinin-B와는 다르게 oleanolic acid는 육지에서 자생하는 식물과 도서 지역에서 자생하는 겨우살이의 함유량이 비슷한 것으로 확인되었다. 지역별 평균 함유량은 남부지역 5.
- 미리 작성한 검량선과 같은 retention time에서 peak이 확인되었으며 검량선으로부터 그 함량을 구하였다. Oleanolic acid는 5% 메탄올을 용매로 할 경우 거의 추출되지 않았으며 80% 메탄올을 용매로 할 경우 실온 보다는 가열하는 조건에서 잘 추출되었다. Fig.
- 먼저 참나무과 식물 중 신갈나무 5 종(1, 3, 6, 9, 29), 갈참나무 6 종(15, 16, 18, 22, 24, 25), 너도밤나무 3 종(10, 11, 40), 졸참나무 2 종(13, 14), 상수리 나무 3 종(19, 20, 30), 밤나무(5), 산밤나무(23), 바늘참나무(26) 각각 1 종씩으로부터 겨우살이가 채집되었다. 너도밤나무를 비롯한 밤나무류에 기생하는 겨우살이의 경우 lectin 단백질의 함량이 적게 함유되어 있는 것으로 나타났으며 신갈이나 갈참, 졸참나무 등의 참나무류에서는 평균(1.638 mg/g)이상의 lectin 함량(평균, 1.713 mg/g)이 고루 확인되었다.
- 6d는 성장지역이 서로 다른 겨우살이들의 평균 homoflavoyadorinin-B함유량을 비교한 그림이다. 다른 두 지표성분과는 다르게 homoflavoyadorinin-B는 육지에서 자생하는 식물에 비해 도서 지역에서 자생하는 겨우살이에서 현저히 그 함유량이 낮은 것을 확인하였다. 지역별 평균 함유량은 남부지역 4.
- 지표성분이 여러 종류이므로 우선적으로 각 지표 성분의 최적 추출 조건을 확립하는 것이 중요한 일이다. 따라서 임의로 정한 각 추출 조건에서 추출된 각 지표 성분의 함량을 분석하여 pattern 분석을 먼 시도한 결과 실온에서 80% 메탄올을 이용하여 7일간 추출하는 방법이 3가지 성분에 공통적으로 추출 효율이 가장 양호하다는 사실을 확인(unpublished data) 하고 추말로 분쇄한 32 종의 겨우살이 시료 5g에 80% 메탄올 용액 50 mL 를 가하고 밀봉하여 실온의 shaking incubator에서 100 rpm으로 흔들면서 7일 동안 추출하고 여과한 후 80% 메탄올을 가하여 50 mL 되도록 하였다. 이 액을 원액으로 적절히 희석하여 분석 시 시료용 filter로 여과한 후 분석용 검액으로 사용하였다.
- 민간에서는 참나무에 기생하고 있는 겨우살이가 다른 나무에 기생하는 겨우살이에 비해 항암활성이 강하다는 주장이 일반적으로 받아들여지고 있으나 이번 연구결과에 따르면 기주식물에 따른 항암활성 지표성분들의 함량에는 일정한 경향을 나타내는 차이가 없는 것으로 확인되었다. 또한 한반도 내륙에서 성장하는 겨우살이보다 울릉도나 제주도에서 성장하는 겨우살이가 항암활성이 강하다는 민간의 주장에 대해서도 그 근거가 희박하다는 사실이 확인되었다. 다만 제주도나 울릉도 등 도서지역에서 자라는 다른 종의 겨우살 이와는 성분의 차이가 나타나는 것을 확인하였으므로 다음 논문에서 이에 대하여 논하고자 한다.
- 5c는 울릉도와 제주도 등 우리나라의 주요 섬 지역에서 자생하는 겨우살이의 lectin 함유량을 나타낸 그림이다. 모든 겨우살이에서 비슷한 정도의 lectin이 검출되었으며(평균 1.808 mg/g) 수종이나 성장지역이 lectin의 함유량에 큰 영향을 미치지는 않는 것으로 생각된다. Fig.
- 겨우살이 추출물이 지구력을 개선하는 활성을 나타낸다고 보고 하는 등 겨우살이에 대한 학계와 일반인들의 관심이 높아져 있다. 민간에서는 참나무에 기생하고 있는 겨우살이가 다른 나무에 기생하는 겨우살이에 비해 항암활성이 강하다는 주장이 일반적으로 받아들여지고 있으나 이번 연구결과에 따르면 기주식물에 따른 항암활성 지표성분들의 함량에는 일정한 경향을 나타내는 차이가 없는 것으로 확인되었다. 또한 한반도 내륙에서 성장하는 겨우살이보다 울릉도나 제주도에서 성장하는 겨우살이가 항암활성이 강하다는 민간의 주장에 대해서도 그 근거가 희박하다는 사실이 확인되었다.
- 30 mg/g). 비슷한 지역에서 같은 수종에 기생하는 경우에도 함유량의 차이가 약간씩은 나타날 수 있지만 이번의 실험 결과로 보면 겨우살이의 oleanolic acid 함유량은 성장지역이나 수종에는 크게 영향을 받지 않는 것으로 보인다. 장미과 식물인 살구나무와 산벗나무를 숙주로 하여 기생하고 있는 겨우살이에서는 많은 양의 oleanolic acid가 검출되었다(4, 17; 6.
- 6a에서는 한반도 남부지역인 적성산, 가지산, 지리산, 대구, 울진 등지에서 채집한 겨우살이들의 homoflavoyadorinin-B 함유량을 그림으로 정리하였다. 살구나무, 밤나무, 신갈나무, 팽나무, 풍게나무, 물갬나무, 박달나무 등 기생하는 숙주나무의 수종이 다양하지만 homoflavoyadorininB의 함유량은 수종에 의존적이지 않으며 중부이북이나 도서 지역에서 서식하는 겨우살이에 비해 많은 양의 homoflavoyadorinin-B가 검출되었다(평균 4.47 mg/g). Fig.
- 단백질 함량은 lectin을 표준물질로 하는 Lowry 방법으로 측정하였다. 시료의 건조 중량을 기준으로 시료 1g당 22.52~59.03 mg에 이르는 단백질 함유량 분포를 나타냈으나 Fig. 3에서 나타난 바와 같이 시료 간 단백질 함유량의 차이는 통계적으로 유의성을 나타내지 않으며 지역별, 기주 별로 겨우살이에 함유된 총 단백질의 함유량이 비교적 균일하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
- 항암활성을 나타내는 것으로 보고된 glycoprotein인 lectin과 세포독성을 나타내는 것으로 보고된 저분자 polypeptides인 viscotoxin이 단백질인 것을 감안하여 최적 조건에서 추출된 겨우살이 추출물을 대상으로 총 단백질 함량을 분석하였고 lectin 함량과 항산화활성을 나타내는 flavonoid 배당체인 homoflavoyadorinin-B와 항암활성성분으로 보고된 triterpenoids인 oleanolic acid를 지표성분으로 정하고 함량 분석을 시도하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 연구 결과에서 4 종의 지표성분 함량은 기주식물의 수종에 따라 변화하는 일정한 경향을 나타내지 않았고 성장 지역에 따라 homoflavoyadorinin-B의 함량 분포가 다른 것으로 나타났으나 lectin과 oleanolic acid의 경우에는 지역에 따른 함량 차이는 크지 않은 것을 알 수 있었다. 후속연구를 통해 겨우살이가 품종에 따라 지표성분의 함량이 서로 다르다는 것을 확실히 확인할 수 있다면 겨우살이를 이용하여 건강기능식품이나 천연물 신약을 개발하는 연구에도 중요한 정보가 될 수 있으며 겨우살이를 신소재로 활용하는 산업화에도 많은 기여를 할 수 있을 것으로 기대한다.
- 52 mg/g). 울릉도, 광릉, 대구 울진 등에서 서식하는 자작나무과 식물을 숙주로 하는 경우(12, 21, 28, 42; 5.25, 6.35, 5.61, 5.24 mg/ g) 수종이나 성장지역에 크게 영향을 받지 않고 일정한 정도의 oleanolic acid를 함유하고 있는 것으로 확인되었으며 (평균 5.61 mg/g) 터어키 겨우살이의 경우 많은 양의 oleanolic acid가 함유된 것으로 나타났다(27, 6.35 mg/g). 이상의 결과로부터 겨우살이의 oleanolic acid함유량은 개체차이가 큰 것으로 나타났으나 참나무과 식물에 기생하는 겨우살이와 장미과, 느릅나무과, 자작나무과 등 참나무가 아닌 나무에 기생하는 겨우살이의 oleanolic acid함유량은 기주식물에 따라 현저히 다르지 않은 것으로 확인되었다.
- 16 mg/g이다. 이 그림에서 보는 바와 같이 겨우살이에 함유된 homoflavoyadorininB의 함유량은 개체별로 차이는 큰 편이지만 중부 이북지방이나 도서지역보다는 남부지역에서 자생하는 경우에 그 함유량이 현저히 증가하는 것으로 나타났다. 반면 숙주로 이용하는 수종이 영향을 미치는 일정한 경향은 발견되지 않았다.
- 35 mg/g). 이상의 결과로부터 겨우살이의 oleanolic acid함유량은 개체차이가 큰 것으로 나타났으나 참나무과 식물에 기생하는 겨우살이와 장미과, 느릅나무과, 자작나무과 등 참나무가 아닌 나무에 기생하는 겨우살이의 oleanolic acid함유량은 기주식물에 따라 현저히 다르지 않은 것으로 확인되었다.
- 11 mg/g). 이상의 결과를 살펴보면 겨우살이의 homoflavoyadorininB함유량은 개체차이가 큰 것으로 나타났으나 참나무과 식물에 기생하는 겨우살이와 장미과, 느릅나무과, 자작나무과등 참나무가 아닌 나무에 기생하는 겨우살이의 homoflavoyadorinin-B 함유량은 기주식물에 따라 현저히 다르지 않은 것으로 확인되었다.
- 324 mg/g) 이상의 lectin이 함유되어 있었다. 이상의 결과를 살펴보면 겨우살이의 lectin 함유량은 개체차이가 큰 것으로 나타났으나 참나무과 식물에 기생하는 겨우살이와 장미과, 느릅나무과, 자작나무과 등 참나무가 아닌 나무에 기생하는 겨우살이의 lectin 함유량은 기주식물에 따라 현저히 다르지 않은 것으로 확인되었다.
- 7a에서는 한반도 남부지역인 적성산, 가지산, 지리산, 대구, 울진 등지에서 채집한 겨우살이들의 oleanolic acid 함유량을 그림으로 정리하였다. 적성산에서 신갈나무에 기생하는 겨우살이(1, 3)의 oleanolic acid의 함유량은 3.35, 2.82 mg/ g으로 남부지역에서 자생하는 겨우살이의 평균 함유량 5.16 mg/g에 미치지 못하는 것으로 나타났으며 밤나무, 팽나무, 풍게나무, 물갬나무, 박달나무 등을 숙주로 기생하는 경우는 수종에 의존적이지 않으며 중부이북이나 도서 지역에서 서식하는 겨우살이와 비슷한 양의 oleanolic acid가 검출되었다. Fig.
- 7b는 한반도의 중부 이북인 광릉부근에서 자생하는 겨우살이들의 oleanolic acid 함유량을 나타낸 그림이다. 졸참나무, 갈참나무, 산벗나무, 상수리나무, 베르코사자작나무, 산밤나무, 바늘참나무 등 다양한 나무를 수주로 이용하고 있는 것으로 나타났지만 oleanolic acid의 함유량은 숙주로 이용하는 식물의 수종에 의존적이지 않은 것을 알 수 있다. 평균 함유량은 5.
- 5a는 한반도 남부지역인 적성산, 가지산, 지리산, 대구, 울진 등지에서 채집한 겨우살이들의 lectin 함유량을 나타낸 그림이다. 지리산과 가지산에서 살구나무, 밤나무, 신갈나무, 팽나무, 풍게나무(4, 5, 6, 7, 8; 1.223, 0.321, 0.937, 0.398, 0.901 mg/g) 등에 기생하는 겨우살이에서 적은 양의 lectin이 검출되었으며 숙주 나무의 수종에 lectin의 함량은 의존적이지 않은 것으로 판단된다. Fig.
- 4b는 기주식물에 따른 겨우살이의 homoflavoyadorinin-B 함유량을 나타낸 그림이다. 참나무류를 숙주로 하는 겨우살이는 너도밤나무(10, 11, 40; 1.10, 0.46, 1.03 mg/g)를 숙주로 하는 경우를 제외하면 많은 양의 flavonoid를 함유하고 있는 것으로 확인되었고(평균 3.10 mg/ g). 성장지역이나 숙주나무에는 크게 영향을 받지 않는 것으로 보인다.
- 4c는 기주식물에 따른 겨우살이의 oleanolic acid 함유량을 나타낸 그림이다. 참나무류를 숙주로 하는 겨우살이는 적성산에 서식하는 신갈나무로부터 채집한 겨우 살이(1, 3; 3.35, 2.82 mg/g)를 제외하면 공통적으로 비슷한 양을 함유하고 있는 것으로 확인되었다(평균 5.30 mg/g). 비슷한 지역에서 같은 수종에 기생하는 경우에도 함유량의 차이가 약간씩은 나타날 수 있지만 이번의 실험 결과로 보면 겨우살이의 oleanolic acid 함유량은 성장지역이나 수종에는 크게 영향을 받지 않는 것으로 보인다.
- 같은 지역에서 서식하는 경우에도 homoflavoyadorinin-B의 함유량은 숙주로 이용하는 식물의 수종에 의존적이지 않은 것을 알 수 있다. 평균 함유량은 3.71 mg/g으로 남부 지역에서 채집된 겨우살이에 비해 20% 정도 낮은 함량으로 검출되었다. Fig.
- 졸참나무, 갈참나무, 산벗나무, 상수리나무, 베르코사자작나무, 산밤나무, 바늘참나무 등 다양한 나무를 수주로 이용하고 있는 것으로 나타났지만 oleanolic acid의 함유량은 숙주로 이용하는 식물의 수종에 의존적이지 않은 것을 알 수 있다. 평균 함유량은 5.40 mg/g으로 남부 지역에서 채집된 겨우살이에 비해 10% 정도 높은 함량으로 검출되었다. Fig.
후속연구
- Homoflavoyadorinin-B는 겨우살이의 항산화활성을 나타내는 주성분으로 보고되었고 겨우살이에서만 특이적으로 생합성 되는 flavonoid로서 식물학적 의미가 있다고 알려져 있으므로 겨우살이의 지표성분으로서 중요한 성분이다. 이 결과는 겨우살이의 품질관리를 위한 방법으로도 활용이 가능할 것으로 기대한다.
- 18) Oleanolic acid는 두릅나무과 식물을 비롯하여 여러 식물에서 다양한 활성을 갖는 것으로 보고되고 있는 triterpenoids 로 겨우살이에서도 암세포증식효과를 나타내는 활성 성분으로 보고되었으므로 이들 세 종류의 활성성분은 겨우살이의 지표성분으로서 중요한 의미가 있다. 이 연구 결과는 겨우살이를 건강기능식품이나 천연물신약의 신소재로 개발할 경우 품질관리를 위한 중요한 지표로 활용이 가능할 것으로 기대한다.
- 연구 결과에서 4 종의 지표성분 함량은 기주식물의 수종에 따라 변화하는 일정한 경향을 나타내지 않았고 성장 지역에 따라 homoflavoyadorinin-B의 함량 분포가 다른 것으로 나타났으나 lectin과 oleanolic acid의 경우에는 지역에 따른 함량 차이는 크지 않은 것을 알 수 있었다. 후속연구를 통해 겨우살이가 품종에 따라 지표성분의 함량이 서로 다르다는 것을 확실히 확인할 수 있다면 겨우살이를 이용하여 건강기능식품이나 천연물 신약을 개발하는 연구에도 중요한 정보가 될 수 있으며 겨우살이를 신소재로 활용하는 산업화에도 많은 기여를 할 수 있을 것으로 기대한다.
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