[논문]k-ras와 c-myc, wnt 억제에 의한 NKG2D 리간드의 발현변화

허웅; 이영신; 배재호

doi:10.5352/jls.2013.23.10.1216

k-ras와 c-myc, wnt 억제에 의한 NKG2D 리간드의 발현변화
Inhibition of Oncogenes Affects the Expression of NKG2D Ligands in Cancer Cells 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.23 no.10 = no.162, 2013년, pp.1216 - 1222

허웅 (부산대학교 의학전문대학원 생화학교실) , 이영신 (부산대학교 의학전문대학원 생화학교실) , 배재호 (부산대학교 의학전문대학원 생화학교실)

초록
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자연살상세포(NK cells)은 림프구계의 세포로서 외부 침임 병원균을 막고 체내 형질변환세포를 제거하는데 참여하고 있다. 이러한 자연살상세포의 활성은 특정한 항원이 필요 없고 활성화 신호와 억제성 신호의 균형에 의해 조절되고 있다. 자연살상세포의 중요한 활성화 신호 중의 하나는 NKG2D 수용체를 통한 것인데, 이 NKG2D 수용체를 통해 자연살상세포는 암세포에 있는 NKG2D 리간드를 인식할 수 있다. 지금까지 인간에서는 여덟개의 NKG2D 리간드가 밝혀져 있고 이러한 리간드의 발현은 다양한 기전을 엄격하게 조절되고 있다. 암세포는 암유전자(oncogenes)에 의해 세포내 다양한 유전자의 발현이 정상세포와 확연히 달라지는데, 이러한 암유전자에 의해서 NKG2D 리간드의 발현이 영향을 받을 것으로 생각되어 진다. 이 연구는 인간의 암세포에서 가장 자주 발현되는 세가지 암유전자 k-ras와 c-myc, wnt의 억제를 통해 NKG2D 리간드의 발현이 어떻게 변화되는 지를 알아보았다. k-ras와 c-myc의 억제는 NKG2D 리간드의 발현을 효과적을 증가시켰고 암세포가 자연살상세포에 더욱 잘 죽게 변화되었다. 그러나 wnt 억제는 MICA와 ULBP1의 전사를 감소시켰다. wnt 억제에 의한 NKG2D 리간드의 전사억제에도 불구하고 세포막의 단백질 발현은 변하지 않아서 암세포의 자연살상세포에 대한 감수성은 별다른 변화를 보이지 않았다. 따라서 k-ras와 c-myc, wnt 억제는 각각 다른 반응을 보였으며 최종적인 자연살상세포에 대한 감수성은 NKG2D 리간드의 세포표면단백질 발현정도에 의해 결정됨을 알 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

NK cells are lymphoid immune cells that participate in innate immunity to protect against foreign pathogens and transforming cells. It is known that the activity of NK cells is regulated by a balance between activating and inhibitory signals rather than specific antigens. One important activating signal is mediated by the NKG2D receptor, which recognizes NKG2D ligands on cancer cells. Therefore, tumor cells that express sufficient amounts of NKG2D ligands could be eliminated by NKD2D+ cells, including NK cells. Oncogenes drive tumor cells to apoptosis resistant and uncontrolled proliferation by altered expression of many critical genes. Therefore, the expression of NKG2D ligands may be affected by oncogenes. This study focused on increasing the susceptibility of cancer cells to NK cells by regulating the expression of NKG2D ligands influenced by three oncogenes: k-ras, wnt, and c-myc. We demonstrated that inhibition of k-ras and c-myc increased the expression of NKG2D ligands and enhanced the susceptibility of cancer cells to NK cells. On the contrary, inhibition of the wnt pathway decreased MICA and ULBP1 transcripts. Although the decreased transcription of NKG2D ligands by inhibition of the wnt pathway, surface proteins of NKG2D ligands were not changed, and the susceptibility of HCT-116 cells was unaffected. The results demonstrate that the transcription of NKG2D ligands are regulated deferentially by the k-ras, c-myc, and wnt pathways and that the cytotoxicity of NK cells solely depends on the amount of surface NKG2D ligands.

주제어

AI 본문요약
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가설 설정

Therefore it was thought that there might be unknown regulation mechanisms to prevent the sufficient expression of NKG2D ligands in cancer cells to evade immune systems. In this study we studied whether three most frequently founded oncogenes, k-ras, wnt and c-myc, affect the expression of NKG2D ligands. We showed that inhibition of k-ras and c-myc increased the expression of NKG2D ligands and enhanced susceptibility of cancer cells to NK cells.
Therefore, it will be needed to investigate to effect on immune systems by these inhibition of oncogenes. In this study, we investigated whether three oncogenes, k-ras, c-myc and wnt, affect the expression of NKG2D ligands and susceptibility of cancer cells to NK cells.

제안 방법

Seven pairs of primer sets were used to investigate the expression of genes including ribosomal protein L19 (RPL19), MICA, MICB, ULBP1-3 and β-actin (ACTB).
The analysis was performed on the FACS Sort® (Becton Dickinson, Mountain View, CA., USA) using CellQuest software (Becton Dickinson) and the cell surface expression was quantified by the value of the mean fluorescence intensities (MFI) obtained with the specific mAbs.

대상 데이터

A549 human non-small cell lung cancer cell lines, K562 chronic myeloid leukemia and HCT116 human colon cancer cell lines were used in this study which were obtained from the Korean Cell Line Bank (Seoul, Korea). These cell lines were maintained in RPMI media supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) (Gibco, Grand Island, NY, USA), 2 mM L-glutamine, 100 μg/ml streptomycin, and 100 U/ml penicillin.
In the blocking experiments, the blocking anti-NKG2D mAb (R&D systems) was added to suspension of the NK-92 cells and incubated for 30 min before they co-cultured with the target cells. All experiments were done in triplicate.

데이터처리

For comparison of groups, the paired Student’s t-test was performed.

성능/효과

Approximately 85%of all sporadic and hereditary colorectal tumors show loss of APC function, resulting in stabilization of β-catenin [12]. These study showed that the transcription of NKG2D ligands were regulated deferentially by k-ras, c-myc and wnt pathways, and the cytotoxicity of NK cells solely depend on the amount of surface NKG2D ligands. Because NKG2D ligands was regulated complex and multi-level of gene expression and could be induced by variety of cell stresses, the oncogene-targeted therapy should be considered whether the susceptibility of cancer cells to NK cells were suppressed through the altered expression of NKG2D ligands.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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