바이러스성 출혈성 패혈증에 감염된 넙치의 cDNA microarray 분석 : 수온에 따른 면역 유전자 발현의 차이 cDNA microarray analysis of viral hemorrhagic septicemia infected olive flounder, Paralichthys olivaceus: immune gene expression at different water temperature원문보기
저수온기만 넙치에 대량 폐사를 일으키는 바이러스성 출혈성 패혈증을 폐사가 발생하는 $15^{\circ}C$, 폐사가 발생하지 않는 $20^{\circ}C$에서 인공감염시켜 넙치의 면역 유전자 발현 profile을 cDNA microarray 분석하였으며, 특히 저수온기에 폐사가 나타나는 원인을 면역 유전자 발현과 관련시켜 알아보고자 하였다. $15^{\circ}C$, $20^{\circ}C$의 감염 세포구에 공통으로 발현되는 유전자는 MHC class I, IL-8, myeloperoxidase 및 endonuclease G-like 유전자로 모든 세포표면에 존재하여 항원을 제시하거나 호중구주화성을 자극하는 유전자들이었다. 항원 가공 및 제시, 항체 생성에 관여하는 MHC class II, immunoglobulin (Ig)과 retinoblastoma 등의 유전자는 $20^{\circ}C$에서는 발현이 증가하였으나 $15^{\circ}C$에서는 발현이 감소되었다. 이로부터 폐사가 발생하지 않는 $20^{\circ}C$는 바이러스 감염초기의 항원 제시, MHC class I과 II에 의한 항원제시, apoptosis 및 이후의 항체 생산이 정상적으로 이루어져 폐사가 발생하지 않는 것으로 생각되었다. 그러나 폐사가 발생하는 $15^{\circ}C$에서는 MHC class I매개의 항원 제시와 탐식 작용등의 선천 면역은 이루어지나 macrophage에 의한 MHC class II매개의 항원 제시와 apoptosis저하, 항체 생산 관련 유전자의 발현저하가 관찰되어 초기 macrophage에 의한 항원제시의 실패로 적응 면역이 제대로 활성화되지 않아 폐사가 발생한 것으로 사료된다.
저수온기만 넙치에 대량 폐사를 일으키는 바이러스성 출혈성 패혈증을 폐사가 발생하는 $15^{\circ}C$, 폐사가 발생하지 않는 $20^{\circ}C$에서 인공감염시켜 넙치의 면역 유전자 발현 profile을 cDNA microarray 분석하였으며, 특히 저수온기에 폐사가 나타나는 원인을 면역 유전자 발현과 관련시켜 알아보고자 하였다. $15^{\circ}C$, $20^{\circ}C$의 감염 세포구에 공통으로 발현되는 유전자는 MHC class I, IL-8, myeloperoxidase 및 endonuclease G-like 유전자로 모든 세포표면에 존재하여 항원을 제시하거나 호중구 주화성을 자극하는 유전자들이었다. 항원 가공 및 제시, 항체 생성에 관여하는 MHC class II, immunoglobulin (Ig)과 retinoblastoma 등의 유전자는 $20^{\circ}C$에서는 발현이 증가하였으나 $15^{\circ}C$에서는 발현이 감소되었다. 이로부터 폐사가 발생하지 않는 $20^{\circ}C$는 바이러스 감염초기의 항원 제시, MHC class I과 II에 의한 항원제시, apoptosis 및 이후의 항체 생산이 정상적으로 이루어져 폐사가 발생하지 않는 것으로 생각되었다. 그러나 폐사가 발생하는 $15^{\circ}C$에서는 MHC class I매개의 항원 제시와 탐식 작용등의 선천 면역은 이루어지나 macrophage에 의한 MHC class II매개의 항원 제시와 apoptosis저하, 항체 생산 관련 유전자의 발현저하가 관찰되어 초기 macrophage에 의한 항원제시의 실패로 적응 면역이 제대로 활성화되지 않아 폐사가 발생한 것으로 사료된다.
The olive flounder, Paralichthys olivaceus is susceptible to viral hemorrhagic septicaemia virus (VHSV) at $15^{\circ}C$ but no mortality at $20^{\circ}C$ even though the virus can grow well in vitro at $20^{\circ}C$. Thus, we designed an experiment to know immune re...
The olive flounder, Paralichthys olivaceus is susceptible to viral hemorrhagic septicaemia virus (VHSV) at $15^{\circ}C$ but no mortality at $20^{\circ}C$ even though the virus can grow well in vitro at $20^{\circ}C$. Thus, we designed an experiment to know immune response of olive flounder against VHSV when the host reared at $15^{\circ}C$ or $20^{\circ}C$. cDNA microarray analysis was performed to compare the gene expression patterns of the kidney cells between the host reared at $15^{\circ}C$ or $20^{\circ}C$. The expression of MHC class I, IL-8, myeloperoxidae and endonuclease G-like having function for the antigen presentation and chemokine-factor were up-regulted both the $15^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$ during VHSV infection. MHC class II gene existing on antigen-presenting cells and B cell lymphocytes, immunoglobulin (Ig) genes and phagocytosis related genes were down-regulated at $15^{\circ}C$ but highly expressed at $20^{\circ}C$. It can be thought that innate immune related antigen presentation by MHC class I and phagocytosis reaction against VHSV are efficiently occur both the temperature but macrophage or B cell related antigen presentation via MHC class II fails to induce downstream immune reactions (adaptive immunity) to make antibody, and it can be one of the reason that causes high mortality only at $15^{\circ}C$.
The olive flounder, Paralichthys olivaceus is susceptible to viral hemorrhagic septicaemia virus (VHSV) at $15^{\circ}C$ but no mortality at $20^{\circ}C$ even though the virus can grow well in vitro at $20^{\circ}C$. Thus, we designed an experiment to know immune response of olive flounder against VHSV when the host reared at $15^{\circ}C$ or $20^{\circ}C$. cDNA microarray analysis was performed to compare the gene expression patterns of the kidney cells between the host reared at $15^{\circ}C$ or $20^{\circ}C$. The expression of MHC class I, IL-8, myeloperoxidae and endonuclease G-like having function for the antigen presentation and chemokine-factor were up-regulted both the $15^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$ during VHSV infection. MHC class II gene existing on antigen-presenting cells and B cell lymphocytes, immunoglobulin (Ig) genes and phagocytosis related genes were down-regulated at $15^{\circ}C$ but highly expressed at $20^{\circ}C$. It can be thought that innate immune related antigen presentation by MHC class I and phagocytosis reaction against VHSV are efficiently occur both the temperature but macrophage or B cell related antigen presentation via MHC class II fails to induce downstream immune reactions (adaptive immunity) to make antibody, and it can be one of the reason that causes high mortality only at $15^{\circ}C$.
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문제 정의
본 연구는 저수온기에 양식 넙치에 발생하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 감염과 질병의 진행경과에 수온이 끼치는 영향을 파악하고자 하였다. 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스를 15℃와 20℃에서 감염시키고 넙치의 면역 유전자 발현 profile을 cDNA microarray를 이용하여 분석하여 각 온도에서 바이러스에 대한 숙주 면역반응의 변화를 전체적으로 보고자 하였다.
본 연구는 cDNA microarray를 사용하여 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스에 감염된 넙치 신장의 Transcriptome 반응을 설명하였다. 15℃와 20℃에서 VHS에 의해 선천 면역 반응인 MHC class Ⅰ에 의한 항원 제시와 염증 반응에 의한 호중구 활성이 모두 이루어졌다.
, 2003). 본 연구는 저수온기에 대량 폐사를 일으키는 바이러스성 출혈성 패혈증을 수온과 관련하여 넙치의 면역 유전자 발현 profile과 면역 반응 범위를 조사하였으며, 특히 저수온기에 폐사가 나타나는 원인을 면역 유전자 발현과 관련시켜 그 원인과 병리기전, 예방을 위한 가능성을 찾아보고자 하였다.
본 연구는 저수온기에 양식 넙치에 발생하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 감염과 질병의 진행경과에 수온이 끼치는 영향을 파악하고자 하였다. 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스를 15℃와 20℃에서 감염시키고 넙치의 면역 유전자 발현 profile을 cDNA microarray를 이용하여 분석하여 각 온도에서 바이러스에 대한 숙주 면역반응의 변화를 전체적으로 보고자 하였다.
, 2007). 본 연구에서는 넙치의 유전자가 올려진 cDNA chip을 이용하여 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스에 감염된 넙치에서의 면역관련 유전자들의 발현을 시간경과별로 분석함으로써 15℃에서는 높은 폐사율을 보지만 20℃에서는 전혀 폐사하지 않는 현상에 관여하는 넙치 면역관련 유전자군의 후보를 찾아내고자 하였다.
제안 방법
15, 20℃에서 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 접종 후 3일과 10일째에 비장과 신장을 적출하였다. FHM (fathead minnow) 세포에서 50% tissue culture infectious dose (TCID50)방법으로 역가를 측정하였고, RNA는 상법에 따라 추출하여 Miller et al.
cDNA chip을 제작하기 위하여 1 kg의 건강한 넙치 2마리에 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스를 근육주사하고 20℃에서 2주간 사육한 후에 신장을 무균적으로 분리하였다. 신장에서 추출한 mRNA에서 약 1,000개의 EST 클론을 분리, sequencing하여 309개의 유전자를 선정하여 배양하였고, plasmid를 준비하여 PCR 과정을 거친 후 슬라이드에 유전자를 spotting하고 QC를 측정하였다.
cDNA probe는 3시간 동안 6 μg의 random primer(Invirtogen, USA)와 amioally-dUTP가 결합한 RNA(50 μg)를 역전사시켜 준비하였다. cDNA probe는 YM-30 column (Millipore, USA)를 이용해 정제하여 상법에 따라 혼성화(hybridized)시켰다. 슬라이드의 혼성화 이미지 (hybridization image)는 Scanarray lite (Packard Bioscience, USA)로 스캔하였다.
대조구는 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) (Gibco, USA)만 근육 주사하여 수온에 따른 병원성의 변화를 누적폐사율로 조사하였다.
수온을 15, 20℃로 조절한 사육 수조에 넙치(평균 체중 7g)를 20마리씩 넣고 수온별로 시험어에 105 TCID50/fish로 각각 근육 주사하였다. 대조구는 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) (Gibco, USA)만 근육 주사하여 수온에 따른 병원성의 변화를 누적폐사율로 조사하였다.
cDNA chip을 제작하기 위하여 1 kg의 건강한 넙치 2마리에 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스를 근육주사하고 20℃에서 2주간 사육한 후에 신장을 무균적으로 분리하였다. 신장에서 추출한 mRNA에서 약 1,000개의 EST 클론을 분리, sequencing하여 309개의 유전자를 선정하여 배양하였고, plasmid를 준비하여 PCR 과정을 거친 후 슬라이드에 유전자를 spotting하고 QC를 측정하였다.
유전자 발현 비율은 GenePix Pro 3.0 software에 의해 LOWESS (locally weighted regression and smoothing) 표준화(normalization) 하였다. 표준화한 값은 log2함수로 표현하였으며 대조구와 같은 발현을 보이는 것은 0, 대조구에 비하여 2배의 높은 발현량을 보이는 것은 1, 2배 낮은 발현량을 보이는 것은 -1로 나타내었다.
저수온기만 넙치에 대량 폐사를 일으키는 바이러스성 출혈성 패혈증을 폐사가 발생하는 15℃, 폐사가 발생하지 않는 20℃에서 인공감염시켜 넙치의 면역 유전자 발현 profile을 cDNA microarray 분석하였으며, 특히 저수온기에 폐사가 나타나는 원인을 면역 유전자 발현과 관련시켜 알아보고자 하였다. 15℃, 20℃의 감염 세포구에 공통으로 발현되는 유전자는 MHC class Ⅰ, IL-8, myeloperoxidase 및 endonuclease G-like 유전자로 모든 세포 표면에 존재하여 항원을 제시하거나 호중구 주화성을 자극하는 유전자들이었다.
접종 3, 10, 20일 경과 후 각 온도별 샘플의 신장에서 Trizol (Gibco, USA)를 사용하여 RNA를 분리 하여 -80℃에 보관하였다. 각 실험구당 2마리씩 분석하였으며 데이터는 2마리의 평균값으로 나타내었다.
슬라이드의 혼성화 이미지 (hybridization image)는 Scanarray lite (Packard Bioscience, USA)로 스캔하였다. 혼성화 이미지는 유전자 발현 비율 (각각의 실험온도에서 대조구에 대한 바이러스감염구의 비율)을 보기 위해 GenePix Pro 3.0 software (Axon Instrument, USA)로 분석하였다.
대상 데이터
cDNA probe는 3시간 동안 6 μg의 random primer(Invirtogen, USA)와 amioally-dUTP가 결합한 RNA(50 μg)를 역전사시켜 준비하였다.
이론/모형
FHM (fathead minnow) 세포에서 50% tissue culture infectious dose (TCID50)방법으로 역가를 측정하였고, RNA는 상법에 따라 추출하여 Miller et al.(1998)이 glycoprotein에서 디자인한 PCR primer (VG1-VD3/VD3-VD5) set를 사용하여 nested-PCR을 실시하였다. PCR은 95℃ 1분, 54℃ 1분, 72℃ 1분간 30 cycle을 반복하는 조건으로 증폭시켰다.
성능/효과
감염 후 시간이 경과되어 항체가 생성되면 바이러스 감염을 중화시키거나 바이러스의 숙주내 활성을 방해한다. 15℃와 20℃에서 공통으로 발현된 유전자들은 interleukine-8, myeloperoxidase, beta-2 microglobulin 및 spi-1/pu.1 transcription factor를 포함한 유전자들로 15℃와 20℃의 두 온도에서는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 감염에 대항하는 항원 제시나 호중구 자극 등 선천 면역에 의한 반응이 제대로 이루어진 것을 확인하였다. β-2 microglobulin은 세포 표면에 존재하는 MHC class Ⅰ에 의해 항원 제시 및 면역 반응을 유도하는 것으로 알려져 있으며, IL-8은 탐식작용 기능을 갖는 호중구의 주화성을 자극하는 것으로 보고되어져 있다.
309개의 면역 유전자가 부착된 cDNA chip을 활용한 분석에서 15℃, 20℃의 감염 세포구에 공통으로 발현이 증가되는 유전자는 MHC class Ⅰ, IL-8, myeloperoxidase 및 endonuclease G-like 유전자 등으로 모든 세포 표면에 존재하여 항원을 제시하거나 호중구 주화성을 자극하는 유전자들이었다 (Table 2). 항원 가공 및 제시에 관여하거나, 항체 생성 및 apoptosis의 기능을 가지는 MHC class Ⅱ, immunoglobulin (Ig)과 retinoblastoma 등의 유전자가 15℃, 20℃ 두 온도간에서 발현 차이가 났다.
또한 granzyme은 활성화된 lymphocyte의 생존 통제에 의해 면역 조절과 세포외 기질의 작용에 의해 염증 조절을 하는 중요한 역할을 한다 (Dipanjan and Lieberman 2008). Apoptosis에 관여하는 인자 중 granzyme은 15℃에서 높은 발현을 보였으나 gellatinase, collagense와 matrix metalloproteinase등의 효소는 15℃ 감염어에서 3일, 10일, 20일 모든 시간대에서 바이러스에 감염되지 않은 개체에 비하여 현저히 낮은 발현을 보여 15℃에서의 바이러스에 의한 폐사와 강한 연관성이 있다고 보여진다.
로 감염시켰을 때 15℃의 수온에서는 20일 동안의 누적 폐사율이 55%였으며, 20℃에서는 5%의 폐사율이 나타났다. 감염 후 3일과 10일에 바이러스 분리와 PCR에 의해 15℃에서는 VHSV의 증식이 어체내에서 잘 이루어지며 20℃의 온도에서는 감염 초기에 어체내에 VHSV가 존재하지만 시간이 경과함에 따라 체내에서 제거되는 것을 확인하였다. 그리고 20℃의 폐사어 1마리에서 바이러스 분리를 시도해 본 결과 VHSV가 분리되지 않아 20℃의 폐사는 VHS에 의한 폐사가 아님을 확인하였다.
감염 후 3일과 10일에 바이러스 분리와 PCR에 의해 15℃에서는 VHSV의 증식이 어체내에서 잘 이루어지며 20℃의 온도에서는 감염 초기에 어체내에 VHSV가 존재하지만 시간이 경과함에 따라 체내에서 제거되는 것을 확인하였다. 그리고 20℃의 폐사어 1마리에서 바이러스 분리를 시도해 본 결과 VHSV가 분리되지 않아 20℃의 폐사는 VHS에 의한 폐사가 아님을 확인하였다.
넙치 체내의 바이러스가 FHM 세포에서 배양되지 않은 샘플만을 감도가 더 좋은 nested-PCR로 바이러스의 유전자를 검출해 본 결과, 15℃의 3일째 3마리 중 2 마리에서 바이러스가 검출되었고, 15℃의 10일째에서 배양되지 않은 한 마리에서 바이러스가 검출되었다. 세포배양으로 바이러스가 검출되지 않았던 20℃ 실험구에서는 3일째 5마리 중 2마리에서 PCR로 추가로 검출되었고 20℃ 10일째 실험구에서는 5마리 모두에서 검출되지 않았다(Fig.
넙치에 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스를 마리당 105TCID50로 감염시켰을 때 15℃의 수온에서는 20일 동안의 누적 폐사율이 55%였으며, 20℃에서는 5%의 폐사율이 나타났다. 감염 후 3일과 10일에 바이러스 분리와 PCR에 의해 15℃에서는 VHSV의 증식이 어체내에서 잘 이루어지며 20℃의 온도에서는 감염 초기에 어체내에 VHSV가 존재하지만 시간이 경과함에 따라 체내에서 제거되는 것을 확인하였다.
바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스의 감염 경과일에 따른 유전자 발현 패턴을 분석해 본 결과 MHC class Ⅱ α, β antigen은 15℃의 3일과 10일에서 감소되어 감염 후기인 20일에는 정상 범위로 회복되었다.
이 유전자는 두 온도에서 모두 발현이 증가되었으나, 20℃에서는 감염 초기에, 15℃에서는 감염 후기에 증가하였다. 본 결과를 통해 20℃에서는 VHS에 대해 macrophage 와 B세포가 발현되어 항원 제시, 항체 생산 그리고 식작용이 이루어져 감염 초기에 선천 및 적응 면역 반응이 유도되지만, 15℃에서는 유전자의 발현이 감염 후기에 일어남으로써 VHS에 대한 면역 반응이 지연되거나 억제되는 것 같다.
바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스의 감염 경과일에 따른 유전자 발현 패턴을 분석해 본 결과 MHC class Ⅱ α, β antigen은 15℃의 3일과 10일에서 감소되어 감염 후기인 20일에는 정상 범위로 회복되었다. 이러한 결과는 세포 표면에 MHC class Ⅱ 분자가 존재하여 항원 가공 및 제시에 관여하는 macrophage가 감염 초기에 VHS에 감염되는 것을 의미하며 또한 macrophage의 항원 제시 실패로 항체 생산에 관여하는 Ig 분자들이 감염초기와 중반에 발현이 감소되는 것을 확인하였다. 이에 반해 20℃에서는 MHC class Ⅱ가 초기에 감소되었지만, 시간이 지남에 따라 증가되어 항원 제시 등의 면역 반응이 이루어졌고, 또한 항체 생성이 제대로 형성되는 시점인 10일에는 Ig 관련 분자 들이 증가되어 VHS를 중화시키거나 숙주내 활성을 방해하며, 항원-항체 복합체의 phagocytosis 반응으로 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스를 제거하는 것으로 사료된다.
15℃, 20℃의 감염 세포구에 공통으로 발현되는 유전자는 MHC class Ⅰ, IL-8, myeloperoxidase 및 endonuclease G-like 유전자로 모든 세포 표면에 존재하여 항원을 제시하거나 호중구 주화성을 자극하는 유전자들이었다. 항원 가공 및 제시, 항체 생성에 관여하는 MHC class Ⅱ, immunoglobulin (Ig)과 retinoblastoma 등의 유전자는 20℃에서는 발현이 증가하였으나 15℃에서는 발현이 감소되었다. 이로부터 폐사가 발생하지 않는 20℃는 바이러스 감염초기의 항원 제시, MHC class I과 II에 의한 항원제시, apoptosis 및 이후의 항체 생산이 정상적으로 이루어져 폐사가 발생하지 않는 것으로 생각되었다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
바이러스성 출혈성 패혈증에 의한 경제적 영향은?
넙치는 생장 속도가 매우 빠르고, 보통 육상 수조에서 양식되어지나 밀폐된 공간에서 집약적으로 양식되어지는 조건이 유지되면서 스트레스, 면역력 약화와 병원체 노출로 인한 대량 폐사가 발생해오고 있다. 바이러스성 출혈성 패혈증(viral hemorrhagic septicemia: VHS)은 유럽 양식 무지개송어, Oncorhynchus mykiss를 비롯한 담수산 연어과 어류에 감수성이 높은 것으로 알려져 왔지만 최근에는 감염 대상의 범위가 확대되어 담수 및 해수 어류의 약 50종에 질병을 유발하며(Mortensen et al., 1999; Smail, 1999), 우리나라와 일본의 넙치에서 저수온기에 발생하여 양식 산업의 경제적 손실을 일으키고 있다 (Takano et al., 2000; Issiki et al.
넙치 양식의 폐사 발생이유는?
넙치는 국내 전체 해수 양식 어류 생산량의 40% 이상을 점유하며 그 수요가 꾸준히 증가하고 있다. 넙치는 생장 속도가 매우 빠르고, 보통 육상 수조에서 양식되어지나 밀폐된 공간에서 집약적으로 양식되어지는 조건이 유지되면서 스트레스, 면역력 약화와 병원체 노출로 인한 대량 폐사가 발생해오고 있다. 바이러스성 출혈성 패혈증(viral hemorrhagic septicemia: VHS)은 유럽 양식 무지개송어, Oncorhynchus mykiss를 비롯한 담수산 연어과 어류에 감수성이 높은 것으로 알려져 왔지만 최근에는 감염 대상의 범위가 확대되어 담수 및 해수 어류의 약 50종에 질병을 유발하며(Mortensen et al.
일교차가 큰 봄의 저수온기에 넙치가 폐사하는 경향이 있는 이유는?
바이러스성 출혈성 패혈증의 발병은 일교차가 큰 봄의 저수온기(10-15℃)에 집중되는 경향이 있다. 변온 동물에 속하는 넙치는 생리적 적온의 범위를 가지며, 환경수온이 적온 범위보다 낮거나 높을 경우 신진 대사율의 감소, 성장 저하, 면역성 감퇴의 현상을 보이고 심한 경우에는 폐사하게 된다. 이렇듯이 수온은 수서환경에서 어류와 병원체의 성장 및 어류의 스트레스 원인 요소 중 하나로 중요하며, 병원체에 의한 어류의 폐사율은 수온에 크게 의존된다고 알려져 있다.
참고문헌 (26)
Avunje, S., Kim, W.S., Park, C.S., Oh, M,J, and Jung, S,J.: Toll-like receptors and interferon associated immune factors in viral haemorrhagic septicaemia virus- infected olive flounder (Paralichthys olivaceus). Fish Shellfish Immunol., 31: 407-414, 2011.
Avunje, S., Oh, M.J. and Jung, S.J.: Impaired TLR2 and TLR7 response in olive flounder infected with viral haemorrhagic septicaemia virus at host susceptible $15^{\circ}C$ but high at non-susceptible $20^{\circ}C$ . Fish Shellfish Immunol., 34: 1236-1243, 2013.
Brudeseth, B.E., Castric, J. and Evensen, O.: Studies on pathogenesis following single and double infection with viral hemorrhagic septicemia virus and infectious hematopoietic necrosis virus in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Vet Pathol 39: 180-189, 2002.
Byon, J.Y., Ohira, T., Hirono, I. and Aoki, T.:Use of a cDNA microarray to study immunity against viral hemorrhagic septicemia (VHS) in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) following DNA vaccination. Fish Shellfish Immunol., 18: 135-147, 2005.
Dang, T.L., Yasuike, M., Hirono, I., Kondo, H. and Aoki, T.: Transcriptional profile of red seabream iridovirus in a fish model as revealed by viral DNA microarrays. Virus Genes, 35: 449-461, 2007.
Friend, S.H., Bernards, R., Rogeij, S., Weinberg, R.A., Rapaport, J.M., Alberts, D. M. and Dryja R.P.: A human DNA segment with properties of the gene that predisposes to retinoblastoma and osteosarcoma. Nature, 323: 643-646, 1986.
Hass-Kogan, D.A., Kogan, S. C., Levi, D., Dazin, P., Ang, A.T., Fung, Y.K. and Israel, M.A.: Inhibition of apoptosis by the retinoblastoma gene product. J EMBO., 14: 461-472, 1995.
Heinecke, J.W., Li, W., Daenke H.L. 3rd and Goldstein J.A.: Dityrosine, a specific marker of oxidation, is synthesized by the myeloperoxidase hydrogen peroxide system of human neutrophils and macrophage. J Biol Chem., 268: 4069-4077, 1993.
Hung, C.H., Huang, H.R., Huang, C.J., Huang, F.L. and Chang G.D.: Purification and cloning of carp nephrosin, a secreted zinc endopeptidase of the astacin family. J Biol Chem., 272: 13772-13778, 1997.
Isshiki, I., Nishizawa, T., Kobayashi, T., Nagano, T. and Miyazaki T.: An outbreak of VHSV (viral haemorrhagic septicemia) infection in farmed Japanese flounder Paralichthys olivaceus in Japan. Dis Aquat Org., 47: 87-99, 2001.
Kim, S.M., Lee, J.I., Hong, M.J., Park, H.S. and Park S.I.: Genetic relationship of the VHSV (viral hemorrhagic septicemia virus) isolated from cultured olive flounder, Paralichthys olivaceus in Korea. J Fish Pathol., 16: 1-12, 2003.
Levine, T.P. and Chain, B.M.: The cell biology of antigen processing. Crit Rev Biochem Mol Biol., 26: 439-473, 1991.
Miller, T.A., Rapp, J., Wastlhuber, U., Hoffmann, R.W. and Enzmann, P.J. Rapid and sensitive reverse transcriptase-polymerase chain reaction based detection and differential diagnosis of fish pathogenic rhabdoviruses in organ samples and cultured cells. Dis Aquat Org., 34: 13-20, 1998.
Mortensen, H.F., Heuer, O.E., Lorenzen, N., Otte, L. and Olesen, N.J.: Isolation of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) from wild marine fish species in the Baltic Sea, Kattegat, Skagerrak and the North Sea. Virus Res., 63: 95-106, 1999.
Praveen, K., Evans, D.L. and Jaso-Friedmann L.: Evidence for the existence of granzyme-like serine proteinases in teleost cytotoxic cell. J Mol Evol., 58: 449-459, 2004.
Roitt, I.M, Brostoff, J. and Male D.K. Immunology. London, Mosby., 225. 1998
Sano, M., Ito, T., Matsuyama, T., Nakayasu, C. and Kurita J.: Effect of water temperature shifting on mortality of Japanese flounder Paralichthys olivaceus experimentally infected with viral hemorrhagic septicemia virus. Aquaculture, 286: 254-258, 2009.
Smail, D.A. Viral haemorrhagic septicaemia. In: Fish disease and disorders, vol. 3, Viral, bacterial and fungal infections. P.T.K. Woo, D.W. Bruno (ed), CABI Publishing, New York, 123-147,1999.
Takano, R., Nishizawa, T., Arimoto M. and Muroga K. Isolation of viral haemorragic septicemia (VHSV) from wild Japanese flounder, Paralichthys olivaceus. Bull Eur Assoc Fish Pathol., 20: 186-193, 2000.
Thompson, C.B.: Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science, 267: 1456-1462, 1995.
Uehara, A., Muramoto, K. Takada, H. and Sugawara, S.: Neutrophil serine proteinases activate human nonepithelial cells to produce inflammatory cytokines through protease-activated receptor 2. J Immunol., 70: 5690-5696, 2003.
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